专利名称：一种新的药物组合物及制备方法
技术领域：
本发明涉及一种高效、谱广的一种新的抗癌药物组合物及制备方法。利用本发明 制备的药物组合物对肺癌等癌症治疗效果更明显。
背景技术：
目前尚未发现抗肿瘤效果较高、副作用较低的药物。现代采用细胞工程技术生产 的巨噬细胞、细胞毒、T淋巴细胞、自然杀伤细胞、分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞、白细胞介 素、干扰素、肿瘤坏死因子、免疫球蛋白等细胞毒活性细胞和细胞因子，它们的共同作用主 要是过继免疫，以达到抗肿瘤的目的。癌细胞的DNA聚合酶和RNA聚合酶活性都比正常细胞高，所以癌细胞合成核酸增 强。与此相反，癌细胞核酸的分解过程明显降低，具体表现在从核酸降解为核苷核酸，以及 由核苷酸分解为最终产物。核酸酶(RNaSe、DNaSe)可使核酸(RNA、DNA)降解、对抗DNA和 RNA的聚合酶的作用，使癌细胞合成核酸(RNA、DNA)的活性降低，速度减慢，纠正癌细胞代 谢失调，停止恶性生长和繁殖。许多研究工作证实，人体结肠、胃、胰、乳腺、肝、皮肤、淋巴结、肺等实质性肿瘤细 胞膜中、唾液酸含量增加。唾液酸存在于细胞膜外表面，带负电荷。其含量增加的生物学作 用是减少细胞间粘合，促进细胞增殖。扩散和转移，增高细胞膜通透性，并与细胞的抗原性 有关。唾液酸在肿瘤细胞周围起着遮盖和阻挡肿瘤相关移植抗原，逃脱免疫淋巴细胞的攻 击作用。神经氨酸酶(NA)能去除肿瘤细胞表面的唾液酸，从而增强淋巴细胞攻击癌细胞的 作用。中国专利“CN89108848. 2”抗肿瘤生物制剂的制造方法(申请人张炳团)提供 一种抗肿瘤谱广、治疗作用显著，且无明显毒副作用；又有免疫作用，而且对癌细胞有直接 杀伤作用的药物组合物的制备方法。中国专利“CN89108848. 2”制备方法是将鸡新城疫病 毒、神经氨酸酶、唾液酸酶、核酸酶、生物素、磷脂、胆固醇、岩藻糖和糖蛋白&、糖蛋白G2、尿 嘧啶、维生素C、三磷酸腺苷(ATP)、氯化钾、半乳糖、吐温-80，硫酸镁等配制而成。中国专利“CN89108848. 2”所述制备抗肿瘤组合物(该药物命名为BC369)副作用 小，临床效果明显。但长期大剂量使用也有一些副作用，如发热及流感样综合征，其常见的 不良反应为畏寒、发热、四肢关节酸痛、鼻塞等流感样表现，。有的患者体重减轻、脱发、情绪 激动，骨髓抑制致血细胞、血小板减少，轻度贫血，偶可发生神经系统损伤，影响内分泌系统 功能，亦有产生鸡新城疫病毒抗体者。为了增强疗效和减少用药剂量，我们在临床前研究中 发现，在BC369中加入一定量的黄芪多糖，可以增加BC369的抗癌效果，同时还可以降低BC369 的使用剂量。理论推测，临床应用很可能降低BC369的副作用。黄芪多糖是从中药黄芪中提取、分离、纯化所得有效部位。临床前实验表明黄芪 多糖具有刺激骨髓造血和增强免疫功能的作用。免疫方面1、体外实验表明黄芪多糖能 够刺激小鼠脾脏细胞的增殖和人外周血单核细胞分泌多种细胞因子。2、体内实验表明黄 芪多糖可增强正常小鼠、受免疫抑制小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能；促进血清溶血素形成；提高空斑形成细胞的溶血能力及碳粒廓清作用；增强DNFB诱发的小鼠迟发型变态反应；增 强小鼠NK细胞的活性和IL-2的产生。造血方面体外实验表明，黄芪多糖可促进小鼠骨髓 基质细胞的增殖；促进小鼠骨髓中性粒细胞和骨髓巨噬细胞的增殖和成熟；对受5-氟尿嘧 啶或丝裂霉素C化疗或X光辐射的小鼠，黄芪多糖可促进去骨髓造血祖细胞或脾脏前体细 胞的增殖和成熟，并促进其外周血白细胞、红细胞和血小板的回升。新城疫病毒是较好的干扰素诱导剂，新城疫病毒属副粘液病毒，自然宿主是鸡和 鸭，对人无致病性，诱导干扰素能力很强。我国最早用新城疫病毒作为诱导剂用于人白细胞 干扰素的生产。黄芪多糖、真菌多糖等都可以作为干扰素诱导剂。单用黄芪多糖能诱导内 源性干扰素的产生，但诱导能力较弱；新城疫病毒诱导干扰素-a效果显著；黄芪多糖与新 城疫病毒合用诱生能力更强，产生协同效应，远高于各自单独使用。在BC369中加入黄芪多 糖的水溶液，使黄芪多糖的重量百分浓度为10克/L，可以增加BC369的抗癌效果。推测黄芪 多糖对BC369抗癌的协同效果可能是起到免疫佐剂的作用。
发明内容
本发明的设计思想和抗肿瘤药物组合物的主要成份作用机制为由于鸡新城疫病 毒缺乏自身所需的完整酶系统，增殖时必须靠宿主细胞合成核酸和蛋白质，甚至直接利用 宿主细胞的某些成份，这就决定了它在细胞内专性寄生的特性，而人和动物的肿瘤组织恰 好为其所寄生的活细胞组织，所以该病毒直接破坏癌细胞。同时，该病毒对肿瘤还有以下四 种作用1、机体产生抗病毒免疫反应时，该病毒能使机体或致敏淋巴结与感染病毒的肿瘤 细胞表面抗原起反应，破坏靶细胞；2、该病毒在机体内能产生干扰素，抑制肿瘤细胞增殖、 引起细胞行为的改变、影响肿瘤细胞因子的产生、引起恶性变型逆转；3、间接和直接干扰肿 瘤病毒；4、增强机体对肿瘤的非特异性免疫力。此外，当病毒进入癌细胞后，溶酶体膜的通 透性增高，溶酶体渗出干细胞浆内，引起癌细胞自溶。黄芪多糖的功能是益气补虚。用于倦怠乏力，少气懒言，自汗，气短，食欲不振属气 虚症因后白细胞减少，生活质量降低，免疫功能低下的肿瘤患者。常常用于肿瘤患者的辅助 治疗。新城疫病毒、黄芪多糖、真菌多糖等都可以作为干扰素诱导剂。单用黄芪多糖能诱导 内源性干扰素的产生，但诱导能力较弱；新城疫病毒诱导干扰素-a效果显著；黄芪多糖与 新城疫病毒合用诱生能力更强，产生协同效应，远高于各自单独使用。本发明的抗肿瘤药物组合物的组份为效价1 640的鸡新城疫病毒尿囊液 1500mL,神经氨酸酶2毫克，核酸酶2毫克，糖蛋白G1. 08克，半乳糖10克，生物素1. 0毫克， 岩藻糖5克、黄芪多糖15克，唾液酸酶2. 0毫克，磷脂2毫克，尿嘧啶10毫克，VitC 5毫克， 胆固醇4. 0毫克，ATP200毫克，10% KC1 22毫升，MgS04 7H20 3. 6克，凝血素10毫克 。本发明的制备方法包括下列步骤1、鸡新城疫病毒的培养和选择首先选择出呼吸道紊乱，伴有罗音、气喘和咳嗽、抑郁、虚脱和严重腹泻、排出绿色 稀粪的患鸡瘟的病鸡。然后，从病鸡呼吸道分泌物或肺组织中分离出鸡新城疫病毒。选择健康母鸡孵育的鸡胚，最好为9-11日龄的鸡胚，将上述分离的鸡新城疫病毒 接种于鸡胚的尿囊腔中。置于37-38°C下培养48-72小时，至胚内含大量病毒，呈现较高血 凝性。
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从鸡胚中抽出尿囊液，利用血凝集抑制试验方法，进行病毒定性。2、鸡新城疫病毒的扩大种植，培养和鸡新城疫病毒尿囊液的收集先用抗菌素处理病料(即上述鸡新城疫病毒尿囊液)，使病料中的抗菌素浓度分 别为每毫升青霉素1000单位和链霉素1000毫克。也可以用静脉滴注金霉素处理，浓度为 每毫升1毫克，处理的病料置于4°c中感作1-2小时。选择10-12日龄的活鸡胚，画出气室和胚位，在气室接近胚位处涂3%的碘酒和 75 %的酒精消毒，用无菌钢锥穿一小孔，随后将注射器沿小孔插入0. 5-1. 0厘米处，注入 0. 1-0. 2毫升接种物(即上述采用抗菌素处理过的鸡新城疫病毒尿囊液)。用石蜡封口，在 孵育箱中孵育48-72小时。将孵育好的鸡胚冻死，用碘酒和酒精消毒后，除去气室端的孵壳或人工卵窗的封 盖物，撕去内层壳膜和绒毛尿囊膜，直接吸收尿囊液。以上各项操作必须在无菌条件下进行。3、鸡新城疫病毒尿囊液效价测定及效价调整利用红细胞凝集法测定效价，然后将测定的鸡新城疫病毒尿囊液的效价调整到 1 640，方法是取鸡新城疫病毒尿囊液10毫升测定其效价，若效价低干1 640，则滴加 无菌高效价1 1280鸡新城疫病毒尿囊液，使抽样10毫升的效价达1 640为止。算出滴 加无菌高效价的毫升数。利用公式计算生产总量中加无菌高效价毫数=总量数(毫升)X 高价毫升数+低价10毫升。4、鸡新城疫病毒尿囊液除菌方法用0. 22 y m滤膜过滤。5、抗肿瘤药物组合物的配制将效价1 640的鸡新城疫病毒尿囊液1500mL，神经氨酸酶2毫克，核酸酶2毫 克，糖蛋白G1. 08克，半乳糖10克，生物素1. 0毫克，岩藻糖5克、黄芪多糖15克，唾液酸酶 2.0毫克，磷脂2毫克，尿嘧啶10毫克，VitC 5毫克，胆固醇4.0毫克，ATP 200毫克，10% KC1 22毫升，MgS04*7H20 3. 6克，凝血素10毫克按一定比例配制，得到抗肿瘤药物组合物。本发明具有如下的优点和效果中国专利“ CN89108848. 2 ”所述制备BC369对 Ehrlich(EAC)腹水癌，小鼠原发性肝癌，S⑶瘤，Lewis肺癌，L■淋巴细胞白血病，MA-737 乳腺癌，LA-795肺腺癌等均有较好的治疗效果，而且毒副作用小，安全可靠。经过我们临床 研究证实，本发明的药物组合物在动物试验中可以增加BC369的抗肺癌效果，同时还可以降 低BC369的使用剂量。疗效显著，安全可靠，无毒副作用，治疗成本低。
具体实施例方式以下结合实施例，对依据本发明提供的具体实施方式
详述如下具体实施例1 (1)鸡新城疫病毒的选择和培养选用鸡新城疫病毒，在10-12日龄活鸡胚尿囊液中37_38°C培养48_72小时，然后 收取含该病毒的尿囊液。利用红细胞凝集法测定效价，然后将测定的鸡新城疫病毒尿囊液的效价调整到 1 640。经过封闭式双层府绸袋和0. 22pm微孔滤膜的滤菌器除去鸡胚尿囊液的杂质、蛋白、污染的杂菌及部分尿酸盐。(2)制剂组分的配制A 糖蛋白GA 72克 糖蛋白G20. 36克按顺序溶于160毫升0. 075NHCL溶液中，置水浴中半小时。B:生物素1.0毫克先溶于7. 5毫升去离子水中，再加人0. 1毫升IN HCI，再加去离子水至10毫升。C 磷脂2. 0毫克 胆固醇4. 0毫克将磷脂溶于4毫升95%酒精中，然后加人胆固醇，用力 振荡使之溶化，再加入5% 吐温-80水溶液10毫升。D 唾液酸酶2毫克，溶于10毫升去离子水中。E 尿嘧啶10毫克溶于100毫升去离子水中，予先在瓶内加0. 35毫升的浓NH40H。F 神经氨酸酶2毫克溶于20毫升去离子水中，4°C冰箱中避光保存备用。G :VitC 5毫克溶于10毫升去离子水中。H:核酸酶2毫克。溶于10毫升去离子水中，4°C冰箱中避光保存备用。K 凝血素10毫克溶于去离子水中，室温保存。L 95% ATP 200毫克溶于10mL去离子水中。J 鸡新城疫病毒尿囊液1500毫升去菌备用。(3)合成在1500毫升鸡新城疫病毒尿囊液中顺序加入下列物质和溶液。1、先加160毫升A溶液。2、加B溶液2毫升。3、加F溶液20毫升。4、加 10% KC1 22 毫升。5、加 MgS04 7H20 3. 6 克。6、加半乳糖水溶液25毫升。7、加岩藻糖水溶液10毫升。8、加唾液酸酶水溶液10毫升。9、加C溶液14毫升。10、加H溶液10毫升。11、加1溶液10毫升。12、加E溶液54毫升。13、加G溶液10毫升。14、加K溶液20毫升。15、上述溶液中加入黄芪多糖的水溶液，使黄芪多糖的重量百分浓度为8克/L。配制好的注射液进行灌封，上述操作在室温4°C以下，严格的无菌操作条件下进 行。
具体实施例2 (1)鸡新城疫病毒的选择和培养选用鸡新城疫病毒，在10-12日龄活鸡胚尿囊液中37_38°C培养48_72小时，然后 收取含该病毒的尿囊液。利用红细胞凝集法测定效价，然后将测定的鸡新城疫病毒尿囊液的效价调整到 1 640。经过封闭式双层府绸袋和0. 22pm微孔滤膜的滤菌器除去鸡胚尿囊液的杂质、蛋 白、污染的杂菌及部分尿酸盐。(2)制剂组分的配制A 糖蛋白GA 72克 糖蛋白G20. 36克按顺序溶于160毫升0. 075NHCL溶液中，置水浴中半小时。B:生物素1.0毫克先溶于7. 5毫升去离子水中，再加人0. 1毫升IN HCI，再加去离子水至10毫升。C 磷脂2. 0毫克 胆固醇4. 0毫克将磷脂溶于4毫升95%酒精中，然后加人胆固醇，用力振荡使之溶化，再加入5% 吐温-80水溶液10毫升。D 唾液酸酶2毫克，溶于10毫升去离子水中。E 尿嘧啶10毫克溶于100毫升去离子水中，予先在瓶内加0. 35毫升的浓NH40H。F 神经氨酸酶2毫克溶于20毫升去离子水中，4°C冰箱中避光保存备用。G :VitC 5毫克溶于10毫升去离子水中。H:核酸酶2毫克。溶于10毫升去离子水中，4°C冰箱中避光保存备用。K 凝血素10毫克溶于去离子水中，室温保存。L 95% ATP200毫克溶于10mL去离子水中。J 鸡新城疫病毒尿囊液1500毫升去菌备用。(3)合成在1500毫升鸡新城疫病毒尿囊液中顺序加入下列物质和溶液。1、先加200毫升A溶液。2、加B溶液3毫升。3、加F溶液25毫升。4、加 10% KC1 25 毫升。5、力口 MgS04 7H20 4. 2 克。6、加半乳糖水溶液30毫升。7、加岩藻糖水溶液8毫升。8、加唾液酸酶水溶液10毫升。9、加C溶液10毫升。10、加H溶液12毫升。
11、加I溶液12毫升。12、加E溶液56毫升。13、加G溶液12毫升。14、加K溶液12毫升。(4)上述溶液中加入黄芪多糖的水溶液，使黄芪多糖的重量百分浓度12克/L。配制好的注射液进行灌封，上述操作在室温4°C以下，严格的无菌操作条件下进 行。本发明的药物组合物的动物试验结果如下(一)本发明的药物组合物抗癌的动物试验结果(1)实验材料和方法1、动物739纯系小鼠30只，5-8周龄，雌雄各半，由军事医学科学院实验动物中心 提供；2、瘤种LewiS肺癌细胞由中国军事医学科学院毒理药理研究所提供；3、药品按照具体实施例1中制备药物组合物，每支为10mg/lmL，批号08053603。 BC369 注射液，每支为 10mg/lmL，批号07042806。4、实验分组及给药方法将48只小鼠分为6组，每组8只，分别为对照组(生理盐水NS 20mL/kg)，BC369治 疗组(低剂量组为2. 4mg/kg,高剂量组为4. 8mg/kg)，药物组合物组(按照具体实施例1中 制备药物组合物低剂量组为1. 2mg/kg,中剂量组为2. 4mg/kg，高剂量组为4. 8mg/kg)；以 腹腔注射方式给药；每天一次，连用6次；在接种肿瘤第4天后给药。5、接种与观察方法测定生命延长率和瘤重抑制率的接种方法和观察方法按照常 规方法进行。分别于小鼠右侧腋窝皮下接种肿瘤。给药6天后，观察其生命延长率和称取 瘤重。(2)结果不同剂量的本发明药物经腹腔给药后对肺癌有较强的抑制作用(P < 0.001)，见 表1。黄芪多糖与BC369联合应用抗动物肺癌作用强于BC369药物单独使用。表1本发明的药物组合物抗癌的动物试验结果 本发明的药物组合物诱生内源性干扰素试验结果(1)实验材料和方法1、动物SPF级小鼠24只，5-8周龄，雌雄各半，由军事医学科学院实验动物中心提 供；2、药品按照具体实施例2中制备药物组合物，每支为10mg/lmL，批号08053603。 BC369注射液，每支为10mg/lmL，批号07042806。黄芪多糖(华北制药有限公司出品)。小 鼠干扰素_ a定量检测试剂盒购自北京博奥森科技发展有限公司。4、实验分组及给药方法将24只小鼠分为3组，每组8只，分别为对照组(生理盐水NS 20mL/kg)，BC369治 疗组(剂量为2. 4mg/kg)，药物组合物组(按照具体实施例2中制备药物组合物剂量为 2. 4mg/kg)；以腹腔注射方式给药；每天一次，连用10次。5、诱生内源性干扰素实验方法于给药后14天摘眼球采血，离心(4000r/min)，取上清。用小鼠干扰素-a ELISA 试剂盒测定各组小鼠血清中干扰素的含量。(2)结果各组小鼠血液中内源性干扰素-a含量见表2。表2结果显示，本发明的药物组合 物诱生的全身性内源性干扰素(262. 55士26. 91)为小鼠血清干扰素-a基础值的50倍以 上，高于BC369治疗组(81. 31 士27. 59)，证实了黄芪多糖与BC369联合应用产生的协同效应。表2本发明的药物组合物诱生内源性干扰素试验结果 本发明的药物组合物主要对移植性肿瘤有较好的抑制和杀伤作用。研究证实本 发明的药物组合物在动物试验中可以增加BC369的抗肺癌效果，同时还可以降低BC369的使 用剂量。疗效显著，安全可靠，无毒副作用，治疗成本低。黄芪多糖具有刺激骨髓造血和增强免疫功能的作用，能诱导内源性干扰素的产 生；新城疫病毒是较好的干扰素诱导剂，诱导干扰素效果显著；黄芪多糖与新城疫病毒 合用诱生能力更强，产生抗癌的协同效应，远高于各自单独使用。上述参照实施例对该药物组合物的制备方法和应用进行的详细描述，是说明性的 而不是限定性的，因此在不脱离本发明总体构思下的变化和修改，应属本发明的保护范围 之内。
权利要求
一种新的药物组合物及制备方法，其特征在于该药物组合物的组成包括效价1∶640的鸡新城疫病毒尿囊液1500mL、神经氨酸酶1-3毫克、核酸酶1-3毫克、糖蛋白G 0.5-2克、半乳糖5-10克、生物素0.5-2毫克、岩藻糖3-10克、黄芪多糖5-25克；唾液酸酶1-3毫克、磷脂1-3毫克、尿嘧啶5-15毫克；VitC 4-8毫克、胆固醇3-8毫克、ATP 100-300毫克、10％KCl 10-30毫升、MgSO4·7H2O 3.6克、凝血素5-20毫克。
2.如权利要求1所述的新的药物组合物及制备方法，其特征在于所说的药物组合物的 组份为效价1 640的鸡新城疫病毒尿囊液1500mL，神经氨酸酶2毫克，核酸酶2毫克， 糖蛋白G1. 08克，半乳糖10克，生物素1. 0毫克，岩藻糖5克、黄芪多糖15克，唾液酸酶2. 0 毫克，磷脂2毫克，尿嘧啶10毫克，VitC5毫克，胆固醇4.0毫克，ATP 200毫克，10%KC1 22 毫升，MgS04 7H203. 6克，凝血素10毫克。
3.如权利要求1或2所述的新的药物组合物及制备方法，其特征在其制备方法是(1)选用鸡新城疫病毒，在10-12日龄活鸡胚尿囊液中37-38°C培养48-72小时，然后 收取含该病毒的尿囊液；(2)取步骤(1)中效价为1 640的鸡新城疫病毒尿囊液加入下列各种物质及溶液 A 含糖蛋白(Gi+G2)的0. 075N的稀盐酸溶液；B 含生物素的0. 1N的盐酸溶液； C 含神经氨酸酶的水溶液； D 10% KC1 ； E :MgS04 7H20 ； F 含半乳糖的水溶液； G 含岩藻糖的水溶液； H 含唾液酸酶的水溶液；I 含磷脂、胆固醇、95%酒精和5%吐温-80的混合液； J 含核酸酶的水溶液； K 95% ATP的水溶液；L 含尿嘧啶和0. 35毫升的浓NaOH溶液54毫升； M 含VitC的水溶液； N 含凝血素无离子水液；(3)取步骤(2)中制备的溶液加入黄芪多糖的水溶液，使黄芪多糖的重量百分浓度 3-18 克 /L。将配制好的药物组合物进行灌封，灌封在同一室内进行，间隔不超过6小时，上述操作 在严格的无菌条件和室温4°C以下进行。
全文摘要
本发明涉及一种以提高机体免疫功能、抗肿瘤的新的药物组合物及制备方法，达到标本兼治。这种药物组合物的组份为效价1∶640的鸡新城疫病毒尿囊液1500mL，神经氨酸酶2毫克、核酸酶2毫克、糖蛋白G 1.08克、半乳糖10克、生物素1.0毫克、岩藻糖5克、黄芪多糖15克；唾液酸酶2.0毫克、磷脂2毫克、尿嘧啶10毫克；VitC 5毫克、胆固醇4.0毫克、ATP200毫克、10％KCl 22毫升、MgSO4·7H2O 3.6克、凝血素10毫克。经药效学、药理学等试验研究表明，本发明的药物组合物对小鼠移植性肿瘤如Lewis肺癌有较好的抑制和杀伤作用。与原发明的药物相比，该药物组合物对小鼠Lewis肺癌的生长抑制作用差异更显著。该药物组合物效果明显，为社会和经济效益好的一种新型生物抗癌制剂。
文档编号A61K38/46GK101850110SQ20091006829
公开日2010年10月6日 申请日期2009年3月30日 优先权日2009年3月30日
发明者古长庆, 张炳团 申请人:天津泽世德生物医药有限公司