专利名称：：一种单克隆抗体的水针制剂的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种抗-EGFR单克隆抗体的水针制剂。
背景技术：
：表皮生长因子受体(印idermalgrowthfactorrec印tor，EGi7R)在调节肿瘤细胞的生长、修复和生存、新生血管生成、侵袭和转移中具有重要的作用，同时在相当一部分的人类肿瘤中都有表达。此外，在很多恶性肿瘤中，EGFR的表达往往与较差的愈后和较低的生存率相关。因此可以推测，如果有药物能阻断EGFR的活性，那将会抑制其磷酸化和信号传导，从而起到多重途径的抗肿瘤作用，同时也能增加化疗和放疗的抗肿瘤疗效。与天然的配体相比，抗表皮生长因子受体(EGFR)的单克隆抗体与EGFR结合时，具有更高的亲和力，因此阻断EGFR介导的细胞通路是一种具有极高特异性的作用方式。抗EGFR的单克隆抗体是针对于胞外域ETOR的靶向性抗体，临床应用显示了良好的抗肿瘤活性，而且并不产生严重副反应。抗-EGFR单克隆抗体抗癌原理正基于此。现有的抗-EGFR抗体制剂专利德国S·马瑟斯和H-C·马勒通过沉淀试剂和晶体得到抗-EGFR抗体的固体形式制剂(申请号/专利号200480034587)。其缺点是沉淀试剂得到的蛋白有时无法复溶。默克专利有限公司的H-C·马勒；R·米勒；U·马丁尼-马尔；U·哈斯；C·巴赫曼发明包含西妥昔单抗(Cetuximab)的稳定的液体药物制剂(申请号=02814105.9)，所述Cetuximab是一种抗表皮生长因子受体(EGF受体)的嵌合单克隆抗体。所检测方法纯度检测高效液相色谱法，柱子用TSK3000SWXl。流动相20mmol磷酸盐缓冲液0.4mol/LNa2S04。等电点根据《中国药典》2005年版等点聚焦电泳法。内毒素检测根据《中国药典》2005年版细菌内毒素检测方法。外观根据《中国药典》2005年版可见异物检查法。活性根据A418检测方法以市售爱必妥(默克公司)做为对照品。设定其活性为100%，水针对比溶液、溶液A、溶液B采用与其活性的比较值。加速稳定性实验结果(25°C)<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>根据稳定性试验结果表明氨基酸缓冲体系组成的制剂贮存稳定性明显优于磷酸盐体系组成的制剂。具体实施例方式以下通过实施例、实验例详细说明本发明的内容，但这些实施例并不构成对本发明的限制。实施例1水针对比溶液<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>实施例3稳定性考察，采用药品加速稳定性实验考察以上3种配方的贮存稳定性，温度25°C。述制剂的贮藏稳定性增强并且可经胃肠外途径用于治疗肿瘤。S·马瑟斯和H-C马勒又通过超滤制备抗-EGFR抗体的高浓缩液体，发明了抗-EGFR抗体液体制剂的方法(申请号/专利号200580004883)。这两项发明很大程度缓解了以往因蛋白药物浓度低而带来的不便，但是也有不足之处，首先其专利以磷酸盐或醋酸盐等盐为缓冲体系，液体制剂的形式存在的蛋白在盐浓度稍高时就会产生乳光或沉淀，容易发生理化反应，从而失去活性，其次当蛋白在水溶液中浓度过高又没有保护剂保护时容易聚集，注入人体后易产生免疫反应。
发明内容抗EGFR-单克隆抗体包括鼠源的、人鼠嵌合的、完全人源化的抗EGFR-单克隆抗体。本发明制剂配方简单，蛋白体系稳定。便于大规模生产，贮存和运输。以酸性氨基酸和碱性氨基酸组成的体系具有很强的缓冲能力和对蛋白的保护能力。本制剂配方不存在药理不可接受的试剂，从而具有良好的安全性和耐受性。本发明是一种含有抗EGFR-单克隆抗体的水针制剂，制剂的组成包括抗EGFR-单克隆抗体、缓冲盐、表面活性剂。抗EGFR-单克隆抗体水针制剂蛋白含量为2-lOOmg/mL，更优选为5_75mg/mL。这种高浓度的蛋白制剂可以大大减轻患者用药注射量大的痛苦。本发明缓冲体系包括人体可接受的缓冲体系，更优选为精氨酸、组氨酸体系和精氨酸、甘氨酸体系。其浓度为0-200mM，更优选为10mM-100mM。缓冲pH范围在6.0-9.O之间。更优选pH6.5-7.5。本发明的表面活性剂为PEG类，更优选PEG400，PEG4000,PEG6000，表面活性剂浓度为0.001%-5%，更优选0.005%-4%。权利要求一种含有抗EGFR-抗体的水针制剂，其特征是在制剂配方中利用酸性氨基酸与碱性氨基酸即作为缓冲体系又作为保护剂，利用PEG代替吐温作为表面活性剂。2.根据权利要求1，其特征在于抗EGFR-抗体含量为1-lOOmg/mL，更优选为2_60mg/mLo3.根据权利要求1，其特征在于缓冲盐体系包括人体可接受的缓冲体系，更优选为精氨酸、组氨酸体系和精氨酸、甘氨酸体系。4.根据权利要求3，其特征在于缓冲体系的浓度为0-200mM，更优选为10mM-100mM。5.根据权利要求3，其特征在于缓冲体系的缓冲pH范围在6.0-9.0之间。更优选pH6.5-7.5。6.根据权利要求1，其特征在于表面活性剂为PEG类，更优选PEG400，PEG4000,PEG6000。7.根据权利要求6，其特征在于表面活性剂浓度为0.001%-10%，更优选0.005%-4%。全文摘要本发明提供了抗EGFR-抗体的水针制剂的制备方法。所述抗EGFR-抗体的水针制剂是由抗EGFR-抗体蛋白，缓冲盐，表面活性剂组成，其优点在于所选的缓冲盐既起到缓冲pH的效果，又作为蛋白的保护剂存在于溶液中。同时利用PEG代替有溶血性的吐温作为表面活性剂，使配方更加安全。本发明提供的抗EGFR-抗体蛋白水针制剂稳定性好，有效期延长，节省成本。文档编号A61K47/16GK101797383SQ20091007138公开日2010年8月11日申请日期2009年2月5日优先权日2009年2月5日发明者冷国庆,刘高波,李会成,李郑武,王晴,王莹,程广伟,赵华南,陈玉军申请人:哈药集团生物工程有限公司