一种抗肝纤维化的中药组合物及其制备方法与药物制剂的制作方法

专利名称：一种抗肝纤维化的中药组合物及其制备方法与药物制剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种中成药及其制备方法，特别涉及一种抗肝纤维化药物组合物及其 制备方法。
背景技术：
据有关资料报道，我国是肝病高发国家，目前约有3,000万的慢性乙型肝炎患者 以及1.2亿乙肝病毒携带者，分别占全国总人口的10%以上。近年来病毒性肝炎、肝 纤维化、脂肪肝、酒精性肝病变、药物性肝损害及肝癌等肝病越来越成为威胁国人健 康的主要疾病。
肝纤维化(hepatic fibrosis)是现代医学的一个病理学概念，是指肝脏内弥漫性细 胞外基质(特别是胶原纤维)过度增生、沉积。它不是一个独立的疾病，而是许多慢性 肝脏疾病均可引起肝纤维化，其病因大致可分为感染性(慢性乙型、丙型和丁型病毒 性肝炎，血汲虫病等)，先天性代谢缺陷(肝豆状核变性、血色病、al-抗胰蛋白酶缺 乏症等)及化学代谢缺陷(慢性酒精性肝病、慢性药物性肝病)及自身免疫性肝炎、 原发性肝汁性肝硬化和原发性硬化性胆管炎等。肝纤维化临床以胁部胀痛、黄疽、胁 下积块等为主要临床表现。
在临床上，西医抗肝纤维化的药物主要为a干扰素、拉米夫定和阿德福韦。临床 研究显示a干扰素对在治疗后能产生持续病毒学应答的丙型肝炎患者来说可以减轻 其肝纤维化的程度。干扰素和利巴韦林联合应用能清除半数以上丙型肝炎病毒，抗病 毒治疗也能改善肝纤维化进程，并可能逆转肝硬化。a干扰素治疗乙型肝炎也能改善 肝纤维化，肝纤维化的指标明显下降(P〈0.05)。
拉米夫定能有效抑制HBV DNA的复制，并有部分患者HBeAg/anti HBe的血 清转换。治疗2年后肝纤维化有不同程度的减轻，或延缓肝纤维化的进程，但是拉米 夫定主要的局限性是变异，1年和5年的发生率分别为15~32%和67~69%。在变异 以后，组织学改变可能会加重。阿德福韦也能改善慢性乙肝纤维化程度。近年来，肝纤维化基因治疗取得较大进展，但目前存在的主要问题是基因导入 的靶向性、表达效率。可调控性及安全性尚未完全解决，因此要将基因治疗真正用于 临床以逆转或治愈肝纤维化可能还需要一个较长的过程。
近年来，中医药治疗肝纤维化研究取得了较大的成就，也显示出较为明显的优 势。虽然传统的中医学中无肝纤维化病名的记载，但结合临床表现可将其归属"胁痛"、 "黄疽"、"鼓胀"等病范畴，另外亦可参考"庙积"、"癖血"、"积聚"等病证。传统中医 理论认为，肝纤维化的形成与"正气不足"亦密切相关。初期肝络阻塞，气滞血瘀，继 则肝病传脾，脾气虚弱， 一方面气血生化无源，正气不足，邪气易踞，加重血瘀；另 一方面，气为血帅、气虚则鼓动无力，血行滞涩而瘀血内生。在治疗上，以活血化瘀 为主、益气养阴为辅，并结合辨证论治的治疗原则，活血化瘀、扶正固本为中医药抗 肝纤维化的基本治法。
目前治疗肝纤维化的单味中药主要有丹参、桃仁、当归、冬虫夏草、黄芪、柴 胡、姜黄、田三七以及汉防己甲素、丹酚酸A、桃仁提取物、葫芦素B、齐墩果酸、 甘草皂甙、甘草次酸、苍术酮等；复方中药组合物有扶正化瘀方(上海中医药大学)、 复方861 (北京友谊医院)、复方鳖甲软肝片(解放军302医院)、强肝胶囊(山西省 中医研究所)、肝纤宁颗粒(湖南中医学院)、软坚糖浆(湖北中医学院)等。目前治 疗肝纤维化的中药作用疗效不显著，作用单一，针对性较差，用量偏大，价格昂贵等。

发明内容
本发明的首要目的是针对上述现有技术存在的问题提供一种用于治疗肝纤维化 的药物组合物及其制备方法，该组合物针对肝纤维化的病因和病机，利用多种中 药的活性成分的相互协同作用，通过清热解毒，活血化瘀，扶正固本抗肝纤维化， 疗效显著。
为实现本发明的目的，本发明一方面提供一种抗肝纤维化的中药组合物，主 要包括如下原料制成熊胆粉、丹参、姜黄、黄芪。
其中，所述抗肝纤维化的中药组合物原料的重量份配比为 熊胆粉1-10、丹参10-50、姜黄20-100、黄芪30-200。
特别是，所述原料的重量份配比为熊胆粉l-5、丹参10-30、姜黄30-60、黄芪 50-80。尤其是，所述原料的重量份配比优选为熊胆粉l、丹参20、姜黄40、黄芪60。
本发明抗肝纤维化的中药组合物选择熊胆粉、丹参、姜黄、黄芪进行组合制备而 成，活血化瘀、扶正固本、清热解毒，将这些中药材组合使用，使得各药材中的活性 成分产生协同作用，相互增进保肝、护肝的功效，从而能够有效地抑制、阻止肝脏组 织的纤维化。
其中，选用的熊胆为君药，具有清热解毒，利胆明目的功效，辅以丹参、姜黄活
血化瘀、行气止痛；佐以黄芪扶正固本，共奏活血化瘀、扶正益气、清热解毒之功效。 熊胆为熊科动物黑熊、东北马熊或棕熊的干燥胆汁，性寒、味苦，归肝、胆、心、 胃经，具有清热解毒、平肝明目、杀虫止血、止痉的功效，主要用于治疗湿热黄疸； 暑湿泻痢；热病惊痫；目赤翳障；喉痹；鼻蚀；疔疮；痔漏；疳疾；蛔虫，多种出血 症。
熊胆中主要含有胆汁酸类的碱金属盐、胆甾醇及胆色素。熊胆中可得约20%的牛 磺熊脱氧胆酸，牛磺熊脱氧胆酸被水解则生成牛磺酸与熊脱氧胆酸。熊胆还含有少量 的鹅脱氧胆酸及胆酸。熊脱氧胆酸为鹤脱氧胆酸的立体异构物，是熊胆的特殊成分。
现代药理研究表明熊胆具有利胆作用，胆酸能促使胆汁的流量增大；解痉作用， 熊胆对以乙酰胆碱造成的痉挛，具有强效的解痉效果；熊胆中的熊脱氧胆酸钠对士的 宁引起的小鼠中毒有解毒作用，与鹅脱氧胆酸钠及胆酸钠合用能增强其解毒作用熊 胆对松节油致热有一定的解热作用；对流感嗜血杆菌、大肠杆菌、肺炎球菌、甲型链 球菌、绿脓假单胞菌、卡他奈瑟菌等均有抑制作用。
丹参为唇形科植物丹参的干燥根及根茎，性微寒、味苦，归心、肝经，具有祛瘀 止痛，活血通经，清心除烦的作用，主要用于月经不调，经闭痛经，症瘕积聚，胸腹 刺痛，热痹疼痛，疮疡肿痛，心烦不眠；肝脾肿大，心绞痛等。
丹参中含有脂溶性成分丹参酮I、 IIA、 IIB、异丹参酮I、 IIA、隐丹参酮、 异隐丹参酮、甲基丹参酮、羟基丹参酮IIA、丹参新醌A、 B、 C、 二氢异丹参酮I、 新隐丹参酮、去羟新隐丹参酮等；水溶性的酚性酸化合物丹参酸A、 B、 C，丹参 酚酸A、 B、 C、 D、 E、 G,迷迭香酸，迷迭香酸甲酯，紫草酸单甲酯，紫草酸二甲 酯，紫草酸乙酯，紫草酸，原儿茶醛，咖啡酸，异阿魏酸等。
丹参对肝细胞损伤具有保护作用，(1)丹参可使肝再生度，肝脏再生受到多种 激素的调节，尤其是胰岛素和胰高血糖素具有明显促进肝再生的作用。丹参使肝细胞再生的作用机理与丹参改善血液循环的作用有关。丹参在全身及局部组织血液循环改 善的基础上，使门脉血流增加，改善肝脏供血和营养，同时带来较多的胰岛素和胰高 血糖素，促进肝再生，丹参注射液能够促进肝脏再生时的DNA的合成和细胞分裂增 殖，促进肝再生；(2)丹参对急性肝损伤的作用，丹参治疗肝损伤，谷丙转氨酶(SGPT) 活力明显降低；肝内甘油三酯含量明显降低；丹参明显减轻肝坏死和炎症反应；(3) 丹参对肝硬变的防治作用，丹参通过增加胶原酶含量、增强胶原酶的活性促进胶原纤 维的降解，明显降低肝脏硬化过程中的胶原蛋白含量及血清r球蛋白含量。羟脯氨酸 是胶原降解的产物，经尿排出，尿中羟脯氨酸含量提高；(4)丹参对肝纤维重吸收 的作用，丹参使动物的肝纤维化明显减轻，且肝脏胶原蛋白含量显著降低。说明药物 丹参有促进肝纤维重吸收的作用，丹参抑制纤维增生与丹参促迸坏死肝细胞的修复和 及时再生有关；。
学者研究表明丹参可以刺激血浆纤维联结蛋白(PFN)水平的升高，从而提高其 网状内层系统的吞噬功能及调理素活性，防止肝脏的免疫损伤，达到保护肝细胞和促 进肝细胞再生的作用，丹参不单纯是改善肝脏微循环，供给肝脏有益因子，更重要的 是丹参可以提高PFN水平，增强网状内皮系统吞噬功能和调理素活性，避免肝脏免 疫损伤，最终起到保护肝细胞和促进肝细胞的再生作用。
姜黄为姜科植物姜黄或郁金的干燥根茎，性温，味苦、辛，归脾、肝经，具有破 血行气，通经止痛之功效，用于胸胁剌痛，闭经，癥瘕，风湿肩臂疼痛，跌扑肿痛等 病症。
姜黄的主要化学成分有(1)姜黄素类化合物姜黄素、双去甲氧基姜黄素、去 甲氧基姜黄素、二氢姜黄素等；(2)倍半萜类化合物姜黄新酮、姜黄酮醇A、 B， 大牴牛儿酮-13醛，原莪术二醇，莪述双环烯酮，去氢莪述二酮、a-姜黄酮等；(3)
酸性多糖姜黄多糖A、 B、 C、 D; (4)挥发油姜黄酮、姜油烯、水芹烯、1， 8-桉叶素、香桧烯、龙脑、去氢姜黄酮等；
现代药理研究表明姜黄煎剂及浸剂能增加犬的胆汁分泌，使胆汁成分恢复正常， 并增加胆囊收縮；姜黄素或其钠盐有利胆作用，静脉注射可减少固体成分的含量、增 加胆汁分泌量，胆盐、胆红素、胆甾醇分泌量均增加，脂肪酸成分保持恒定。姜黄醇 或醚提取物、姜黄素和挥发油灌胃，对实验性高脂血症大鼠和家兔都有明显的降血浆 总胆固醇和B-脂蛋白的作用，并能降低肝胆固醇，纠正a-和B-脂蛋白比例失调，对降血浆甘油三酯的作用更为显着，能使血浆中甘油三酯降低至正常水平以下。灌胃姜 黄素能降低肝重，减少肝中甘油三酯、游离脂肪酸、磷脂含量及血清总甘油三酯、极 低密度脂蛋白(VLDL) +低密度脂蛋白(LDL)甘油三酯，高密度脂蛋(HDL)白 甘油三酯、VLDL+LDL胆固醇和血中游离脂肪酸的含量，也能提高血清总胆固醇和 HDL胆固醇含量。姜黄还具有抗氧化作用，姜黄素对脂质过氧化作用都有明显对抗 作用，其抗氧化作用高于维生素E。
黄芪为豆科植物蒙古黄芪或膜荚黄芪的干燥根，性温、味甘，归肺、脾经，具有 补气固表，利尿托毒，排脓，敛疮生肌的功能，主要用于气虚乏力，食少便溏，中气 下陷，久泻脱肛，便血崩漏，表虚自汗，气虚水肿，痈疽难溃，久溃不敛，血虚痿黄， 内热消渴；慢性肾炎蛋白尿，糖尿病等。
黄芪的化学成分为黄酮及黄酮甙如毛蕊异黄酮、2'，4'二羟基-5， 6-二甲氧基异 黄酮、3-羟基-9， 10- 二甲氧基紫檀烷，黄芪皂甙I、 V、 III;还含有大量的黄芪 多糖以及P-谷甾醇、亚油酸、亚麻酸、胆碱、甜菜碱、氨基酸、蔗糖、葡萄糖醛酸及 微量的叶酸等。
黄芪的药理研究表明黄芪能加强正常心脏收縮，对衰竭的心脏有强心作用；能使 管状血管和肾脏血管扩张，并使全身末梢血管扩张，皮肤循环畅盛，使高血压患者血 压下降；黄芪还有中等利尿、阻抑肾炎和抑制病菌的作用。
本发明另一方面提供一种抗肝纤维化的中药组合物的制备方法，包括如下步骤
1) 制备黄芪干浸膏
首先:采用水或质量百分比浓度为10-60%的乙醇溶液为提取溶剂对黄芪进行加热 提取2-3次，接着合并并浓縮提取液，然后将浓縮后的提取液进行干燥，得黄茛干 浸膏；
2) 制备姜黄干浸膏
首先:采用质量百分比浓度为20-80%的乙醇溶液为提取溶剂对姜黄进行加热回流
提取2-3次，接着合并并浓縮提取液，然后将浓縮后的姜黄提取液进行千燥，得姜
黄干浸膏；
3) 制备丹参干浸膏
首先采用水或质量百分比浓度为20-50%的乙醇溶液为提取溶剂对丹参进行加热 提取2-3次，接着合并并浓縮提取液，然后向浓縮后的丹参提取液中加入乙醇进行沉淀，过滤，最后滤液浓縮后进行干燥，得丹参干浸膏； 4)制备中药组合物
将黄芪、姜黄和丹参干浸膏混合，粉碎后加入熊胆粉，混合均匀，制得本发明药 物组合物。
其中，步骤1)中每次进行所述加热提取时所采用提取溶剂(即水或质量百分比 浓度为10-60%的乙醇溶液)的体积与黄芪的重量之比为8-10: 1，提取时间为l-3小 时/次，优选为1-2.5小时/次；
特别是，采用质量百分比浓度为10-60%的乙醇溶液加热回流提取黄芪； 特别是，黄芪提取液在相对压力为-0.07 -0.095MPa(即以一个大气压为0，控制 减压浓縮时的压力相对于一个大气压为-0.07 -0.095MPa)，温度为50-7(TC的条件下 进行所述的浓缩；浓缩后黄芪提取液的体积与黄芪药材的重量之比为0.5-1.5: 1，优
选为l: 1，即黄疾药材的重量与浓縮后黄宾提取液的体积之比为1: 0.5-1.5;
特别是，所述黄芪浓缩提取液干燥的温度为40-60°C，相对压力为-0.07 -0.095MPa (即以一个大气压为0，控制干燥时的压力相对于一个大气压为-0.07 -0.095MPa);黄芪干浸膏的含水率为0.5-2%。
其中，步骤2)中每次进行所述加热回流提取时所采用的提取溶剂的体积与姜黄
的重量之比为10-12: 1，提取时间为0.5-3小时/次；
特别是，姜黄提取液在相对压力为-0.07 -0.095MPa(即以一个大气压为0，控制 浓縮时的压力相对于一个大气压为-0.07 -0.095MPa)，温度为40-60"C的条件下进行 所述的浓縮；浓縮后姜黄提取液的体积与姜黄药材的重量之比为0.5-1.5: 1,优选为
1: 1，即姜黄药材的重量与浓縮后姜黄提取液的体积之比为1: 0.5-1.5;
特别是，所述姜黄浓缩提取液的干燥温度为40-60°C，相对压力为-0.07 -0.095MPa(即以一个大气压为0,控制减压浓縮时的压力相对于一个大气压为-0.07 -0.095MPa);姜黄干浸膏的含水率为0.3-1%。
其中，步骤3)中每次进行所述加热提取时所采用的提取溶剂的体积与丹参的重
量之比为8-10: 1，提取时间为1-3小时/次；
特别是，采用质量百分比浓度为20-50%的乙醇溶液加热回流提取丹参； 特别是，丹参提取液在相对压力为-0.07 -0.095MPa(即以一个大气压为0，控制 浓缩时的压力相对于一个大气压为-0.07 -0.095MPa)，温度为50-70'C的条件下进行
9所述的浓縮；浓縮后的丹参提取液的体积与丹参药材的重量之比为0.5-1.5: 1，优选 为0.6-1: 1;
特别是，向浓縮后的丹参提取液中加入乙醇，使得浓縮后的丹参提取液中乙醇的
质量百分比含量为40-80%，然后静置，进行所述的沉淀，沉淀时间212小时； 尤其是，所述沉淀用乙醇选用无水乙醇、质量百分比浓度为70-95的乙醇； 特别是，滤液在相对压力为-0.07 -0.095MPa (即以一个大气压为0，控制浓縮时 的压力相对于一个大气压为-0.07 -0.095MPa)，温度为50-70。C的条件下进行所述的 浓縮；浓縮后的丹参滤液的体积与丹参药材的重量之比为0.3-1.5: 1，优选为0.3-1: 1;所述干燥温度为50-70°C，相对压力为-0.07 -0.095MPa (即以一个大气压为0， 控制干燥时的压力相对于一个大气压为-0.07 -0.095MPa);丹参干浸膏的含水率为 0.1-1%。
本发明又一方面提供一种由上述任一所述中药组合物和药剂学上可接受的辅料 组合制成的预防和/或治疗肝纤维化的药物制剂。
其中，本发明的药物组合物可以和药剂学上可接受的辅料按传统或现代生产工艺
制程临床可以接受的口服机型。如胶囊剂、片剂、颗粒剂、、丸剂、口服液等。所用
的药物辅料可以是淀粉、糊精、乳糖、微晶纤维、明胶、蔗糖、硬脂酸镁等。临床上
需要长期用药，制成固体制剂贮存方便，患者服用便利，也更适应市场需求。优选的
剂型是胶囊剂、颗粒剂、片剂。
本发明再一方面提供一种上述任一所述中药物组合物在制备治疗和/或预防肝纤
维化的药物的应用。
本发明药物组合为具有如下优点
1、 本发明药物组方配伍科学，疗效确切，安全性高，质量可控；
2、 本发明药物组合物具有活血化瘀、扶正益气、清热解毒的功效，具有优异的 抗肝纤维化作用，能有效延缓肝纤维化进程；
3、 本发明药物组合物作用途径多，药物作用靶点多，作用机制独特，药物针对 关键病理环节，药物抗肝纤维化的疗效显著。
4、 本发明药物用药量低，成本低廉。
具体实施方式
以下通过试验例来进一步阐述本发明所述药物的有益效果，这些试验例包括了本 发明药物的药效学试验。
试验例1本发明药物对四氯化碳致大鼠肝纤维化的质量作用 试验材料
本发明药物胶囊剂，0.5g/粒(每粒含生药10g);复方鳖甲软肝片，批号20070516，
内蒙古福瑞中蒙药科技股份有限公司出品。
试验方法
取清洁级雄性SD大鼠62只，体重150-200g,全雄，取10只作为正常对照组(不 造模)，其余52只采用四氯化碳制备大鼠肝纤维化模型以15%四氯化碳溶液(以分 析纯四氯化碳溶于植物油中，配成150ml/L溶液备用)lml/100g体重灌胃，2次调， 连续7周。造模7周后随机处死2只大鼠，取肝脏做病理组织学检査，证实己造成肝 纤维化模型。将造模成功的大鼠随机分为5组，即模型组、阳性药组、给药高剂量组、 中剂量组、低剂量组，停止造模并开始灌胃给药。
给药高、中、低剂量组分别灌胃给予本发明药液，每日一次，给药高剂量组灌胃 给予本发明胶囊剂12g生药/kg;给药中剂量组灌胃给予本发明胶囊剂6g生药/kg;给
药低剂量组灌胃给予本发明胶囊剂3g生药/kg;阳性药组则灌胃给予复方鳖甲软肝片
0.55g/kg，正常组及模型组均灌胃给予等容积的蒸馏水，所有大鼠灌胃容积均为 10ml/kg，连续灌胃给药8周，每天观察动物一般情况，于末次给药后次日空腹采血， 分离血清，以全自动生化分析仪检测血清中AST、 ALT指标(检测结果件表l);以 放免法检测血清中肝纤维化指标HA、 PIIINP (检测结果件表2);采血后处死动物并 取肝脏，进行病理组织学检査取出肝脏组织，标本经常规10%福尔马林液固定，石 蜡切片，H-E染色，光镜下观察各组大鼠肝组织的病理改变情况，并采用Masson染 色观察肝组织内纤维化程度。
正常组大鼠肝脏颜色深红，表面光滑，边缘锐利，质地较软。模型组大鼠肝脏肿 大，边缘钝，质地硬，颜色较浅，但边缘尚好，整个肝脏与周围器官粘连广泛。各给 药组大鼠肝脏形态与正常组接近，明显好于模型组。
表l对四氯化碳所致肝纤维化大鼠肝功能及羟脯氨酸含量的影响(^±S)
组别 剂量 动物数 AST ALT 羟脯氨酸含量(g/kg)(n)(U/L)(U/L)
正常组/1085.2±19.4**30.5±9.6**201.3±18.9**
模型组/10154.3±25.4102.3±20.1547.9±102.7
阳性药组0.551090.2±25.7**53.6±12.5**399.6±85.2**
给药高剂量组121088,7±30.2**55.6土20.3"305,7±79.5**
给药中剂量组61099.8士17.9"63.1±26.7*401.2±113.2**
给药低剂量组310137.8±34.291.4±33.4498.5±132.1
注与模型组比较，*P<0.05， **P<0.01
表l检测结果说明-
1、 由四氯化碳所诱导的肝纤维化模型大鼠的肝功能有明显损伤，模型组大鼠血
清中AST、 ALT水平均极显著地高于正常对照组(PO.Ol)。而本发明药物治疗后的大 鼠肝功能则有明显恢复，其高、中剂量组大鼠血清中AST、 ALT水平与模型组相比均 有显著降低(P0.05 0.01)。试验结果说明，本发明中药组合物对四氯化碳所诱导的肝 纤维化模型大鼠的肝功能有明显的改善作用。
2、 模型组大鼠肝组织中羟脯氨酸含量显著高于正常组(PO.Ol)，而本发明药物 高、中剂量组大鼠的肝组织中羟脯氨酸含量与模型组相比较则有显著的降低 (PO.Ol)。表明本发明药物组合物对于肝纤维化大鼠肝组织中异常增高的羟脯氨酸 含量有明显的降低作用。
表2对四氯化碳所致肝纤维化模型大鼠血清屮肝纤维化指标的影响(^士S)
组别剂量 (g/kg)动物数 (n)HA (ng/ml)PI詩 (ng/ml)肝纤维化评分
正常组/1065.8±21.2**32.2±6.6**1.00±0.00**
模型组/10165.3±32.155.4±7.83.60±0.70
阳性药组0.551066.3±20.3**36.6±9.9**2.67±0.82*
给药高剂量组121071.4±26.7**38.0±7.1**2.67±0.82*
给药中剂量组61099,5±20,3*40.9±7.2*2.70+0.82*
给药低剂量组310142.6±33.752.7±7.92.卯±0.88
注与模型组比较，*P<0.05， **P<0.01
由表2结果可见，肝纤维化模型大鼠血清中HA、 PIIINP水平均显著高于正常大鼠(PO.Ol)，本发明高、中剂量均能明显降低血清中的HA和PIIINP水平 (P<0.05~0.01)。实验结果表明，本方对四氯化碳所致肝纤维化大鼠血清中相关肝纤维 化指标均有一定的改善作用。
病理组织学检査结果表明，正常对照组大鼠肝组织均未见明显的病理改变，肝小 叶结构存在，肝板排列整齐，个别例结构稍紊乱，以中央静脉为中心向周围放射状排 列，肝细胞多边形，浆丰富，核大而圆，少见双核，Masson染色见肝组织内除中心 静脉及小胆管周围见环形的胶原纤维外，其余处未见胶原纤维。而模型组10只大鼠 中有9例病变非常显著，肝组织小叶结构被破坏，可见大量纤维组织增生、穿插，将 肝组织分割为大小不等的圆形或椭圆形假小叶，Masson染色显示肝组织内大量纤维 组织增生。阳性药给药组病变情况比模型组有一定减轻，个别例与正常组基本相似， 其余各例与模型组改变类似，但肝组织内纤维化及肝细胞脂肪变性均较模型组明显好 转。本发明药物组合物高、中剂量组各例与模型组相比，肝组织内纤维化程度均明显 减轻，肝组织改变与正常组基本相似。
病理组织学检査表明大鼠肝纤维化模型造模成功，模型组大鼠肝组织内可见大 量增生的胶原纤维呈网状分布。本处方高、中、低剂量对肝纤维化大鼠肝纤维组织增 生有显著的改善作用，说明本方具有明显的抗肝纤维化作用。
试验结果表明本发明中药组合物对于四氯化碳所诱导的肝纤维化大鼠的肝功能有 明显的保护作用，能显著降低肝纤维化大鼠血清中AST、 ALT水平(P0.05 0.01)，能 显著降低肝纤维化大鼠肝组织中羟脯氨酸含量(PO.Ol)，且呈现剂量依赖性；能显著 降低肝纤维化大鼠血清中异常升高的HA和PIIINP水平(P<0.05~0.01)。病理组织学 检查结果表明本发明中药组合物对肝纤维化大鼠肝纤维组织增生有显著的改善作用， 说明本发明中药具有明显的治疗肝纤维化作用。
试验例2小鼠急性肝损伤试验
实验方法清洁级KM小鼠60只，体重18-20 g，雌雄各半，随机分为6组，即 正常对照组、模型组、阳性药组及给药高、中、低剂量组。正常及模型组均灌胃给予 等容积的蒸熘水，高、中、低剂量组分别灌胃给予本发明药物组合为24g生药/kg， 12g生药/kg， 6g生药/kg，阳性药组灌胃给予复方鳖甲软肝片l.lg/kg。每天灌胃给药 一次，连续灌胃7天。末次给药后lh，除正常对照组外，其余小鼠均腹腔注射D-氨
13空腹采血，分离血清， 以日立7060型全自动生化分析仪检测血清中AST、 ALT指标，采血后处死动物并取 肝脏，肝脏组织标本经常规10%福尔马林液固定，石蜡切片，H-E染色，光镜下观察 各组大鼠肝组织的病理改变情况。试验结果见表3。
表3组合物对D-氨基半乳糖所致急性肝损伤小鼠血清生化指标的影响(y±S)
组别剂量动物数ALTAST
(g/kg)(n)(U/L)(U/L)
正常组/1022.7±5.1"101.3±22.5**
模型组/10551.3±109.2399.5±85.6
阳性药组1.1102卯.6±80.6**
给药高剂量组2410303.2±88.7**280.6±90.7**
给药中剂量组1210387.1±97.6**322.4±78.8**
给药低剂量组610502.6±105.4387.6±99.5
注与模型组比较，*P<0.05， **P<0.01
由表3可见，腹腔注射D-氨基半乳糖可造成小鼠肝功能明显损伤，模型组小鼠 血清中AST、 ALT水平均极显著地高于正常对照组(PO.Ol)。而给予本发明高、中、 低剂量的小鼠肝功能则有明显恢复，其血清中AST、 ALT水平与模型组相比均有极 显著降低(PO.Ol)。
小鼠肝脏病理组织学检査结果表明由D-氨基半乳糖所造成的小鼠急性肝功能 损伤模型造模成功，模型组小鼠肝细胞呈凝固性坏死并伴有少量炎细胞浸润，肝组 织病变明显，而本处方各给药组小鼠肝脏组织病变程度均较模型组有明显改善，尤 其以给药高、中、低剂量组小鼠病变改善作用更为显著。
本发明药物。此结果提示本方对D-氨基半乳糖所引起的小鼠急性肝功能损伤有 明显的防治作用。
试验结果说明小鼠预防给药给予本发明药物，并经腹腔注射D-氨基半乳糖造 成急性肝损伤模型，本发明药物对于腹腔注射D-氨基半乳糖所造成的急性肝功能损 伤小鼠血清中异常升高的AST、 ALT水平均有极显著的降低作用(PO.Ol)，对腹腔 注射D-氨基半乳糖所引起的小鼠急性肝功能损伤有明显的防治作用；病理组织学检 査结果表明本方预防给药对D-氨基半乳糖所造成的急性肝功能损伤小鼠的肝脏有明显的保护作用，其肝脏组织病理学改变与模型组相比有显著的改善，说明本发明药 物具有明显的保肝作用。
实验例3本发明中药组合物对小鼠的护肝作用试验
实验方法清洁级KM小鼠60只，体重18-20g，雌雄各半，随机分为6组，即正常 对照组、模型组、阳性药组及高、中、低剂量给药组。正常及模型组均灌胃给予等容 积的蒸馏水，高、中、低剂量组分别灌胃给予本发明药物24g生药/kg、 12g生药/kg、 6g生药/kg，阳性药组灌胃给予复方鳖甲软肝片l.lg/kg。每天灌胃给药一次，连续灌 胃7天。末次给药后lh，除正常对照组外，其余小鼠均腹腔注射0.iy。四氯化碳0.1ml/10g 造成小鼠急性肝损伤模型。于造模后16h空腹采血，分离血清，以日立7060型全自动 生化分析仪检测血清中AST、 ALT指标，采血后处死动物并取肝脏，肝脏组织标本经 常规10%福尔马林液固定，石蜡切片，H-E染色，光镜下观察各组大鼠肝组织的病理 改变情况。试验结果见表4。 1血液生化指标的变化
表4组合物对四氯化碳所致急性肝损伤小鼠血清生化指标的影响(Z士S)
组别剂量动物数ALTAST
(g/kg)(n)(U/L)(U/L)
正常组/1024.6±5.1**85.8士18.1^
模型组/101133.2±105.9526.5±101.8
阳性药组1.110410.3±85.6**371.2士99.6"
给药高剂量组2410523.6±88.1**331.2±74.6**
给药中剂量组1210694.7±102.2**357.7±96.7**
给药低剂量组6101025.3±301.1511.6±105.8
注-与模型组比较，*P<0.05， **P<0.01。
由表4可见，腹腔注射四氯化碳可造成小鼠肝功能明显损伤，模型组小鼠血清中 AST、 ALT水平均极显著地高于正常对照组(PO.Ol)。而给予本发明高、中剂量药物 的小鼠肝功能则比模型组有明显改善，其血清中AST、 ALT水平与模型组相比均有 极显著降低(PO.Ol)。
由病理组织学检査结果可知由四氯化碳所造成的小鼠急性肝功能损伤的模型组小鼠肝细胞水肿、变性明显，而本发明的高、中、低剂量给药组小鼠肝脏组织病变程 度均较模型组有明显改善，尤其以给药高、中剂量组小鼠病变改善作用更为显著。
实验结果表明小鼠预防给药给予本发明药物组合物后经腹腔注射四氯化碳造成急 性肝损伤模型，本发明高、中剂量给药组对于腹腔注射四氯化碳所造成的急性肝功能 损伤小鼠血清中异常升高的AST、 ALT水平均有极显著的降低作用(PO.Ol)，说明本 发明药物对腹腔注射四氯化碳所引起的小鼠急性肝功能损伤有明显的防治作用；理组 织学检查结果表明本发明药物预防给药对四氯化碳所造成的急性肝功能损伤小鼠的肝 脏有明显的保护和预防作用，其肝脏组织病理学改变与模型组相比有显著的改善，说 明本方具有明显的保肝作用。
本发明实施例中熊胆粉由福建归真堂药业股份有限公司提供；丹参、姜黄、黄芪 购自南京市医药有限公司。 实施例1本发明药物的胶囊剂制备
1、 按照如下重量配比准备原料(kg): 熊胆粉l、丹参20、姜黄40、黄芪60
2、 制备黄芪干浸膏
2-1)将黄芪加入到水中，加热煎煮提取，共提取2次，合并两次的黄芪提取液， 其中，第一次提取时加入的水的体积与黄芪的重量之比为10: 1，即lkg黄芪加入10L 水，第二次提取时加入的水的体积与黄芪的重量之比为8: 1，即lkg黄芪加入8L水， 提取时间为2h/次；
2-2)将黄芪提取液进行减压浓縮，得到黄芪浓縮提取液，其中，黄芪浓縮提取液 的体积为60L，相当于每毫升黄芪浓縮提取液中含1.0 g黄芪生药，或每升黄芪浓縮 提取液中含有lkg黄芪生药，即生药黄芪的重量与黄芪浓縮提取液的体积之比为1: 1，然后进行真空干燥，制得黄芪干浸膏，其中，减压浓缩时的相对压力为-0.09MPa (即以一个大气压为0，控制减压浓縮时的压力相对于一个大气压为-0.09MPa)，浓 縮温度为50'C;真空干燥温度为5(TC，干燥时的相对压力为-0.07MPa (即以一个大 气压为0，控制真空干燥时的压力相对于一个大气压为-0.07MPa)，黄芪干浸膏的含 水率为2%;
3、 制备姜黄干浸膏3-1)将姜黄加入到质量百分比浓度为80%的乙醇中，加热回流提取，共提取3次，
合并三次的姜黄提取液，其中，第一次提取时的乙醇的体积与姜黄的重量之比为12: 1，即lkg姜黄加入12L乙醇；第二次提取时的乙醇的体积与姜黄的重量之比为10: 1，即lkg姜黄加入10L乙醇；第三次提取时乙醇的体积与姜黄的重量之比为10: 1， 即lkg姜黄加入10L乙醇；提取时间为3h/次；
3- 2)姜黄提取液进行减压浓縮，得到姜黄浓縮提取液，其中，姜黄浓縮提取液的
体积为40L，相当于每毫升姜黄浓缩提取液中含1.0g姜黄生药，或每升姜黄浓縮提取
液中含有lkg姜黄生药，即生药姜黄的重量与姜黄浓縮提取液的体积之比为1: 1;
然后进行真空干燥，制得姜黄干浸膏，其中，减压浓縮时的相对压力为-0.09MPa (即 以一个大气压为0，控制减压浓縮时的压力相对于一个大气压为-0.09MPa)，浓縮温 度为60'C;真空干燥温度为5(TC，干燥时的相对压力为-0.09MPa (即以一个大气压 为0，控制减压浓缩时的压力相对于一个大气压为-0.09MPa)，姜黄干浸膏的含水率 为1%;
4、制备丹参干浸膏
4- 1)将丹参加入到水中，加热提取，共提取3次，合并三次的丹参提取液，其中， 第一次提取时的水的体积与丹参的重量之比为10: 1，即lkg丹参加入10L水；第二
次提取时水的体积与丹参的重量之比为8: 1， S卩lkg丹参加入8L水；第三次提取时 水的体积与丹参的重量之比为8: 1， B卩lkg丹参加入8L水；提取时间为lh/次；
4-2)将丹参提取液进行减压浓縮，得到丹参浓縮提取液，其中，丹参浓縮提取液 的体积为15.4L，相当于每毫升丹参浓縮提取液中含1.3g丹参生药，或每升丹参浓縮 提取液中含有1.3kg丹参生药，即生药丹参的重量与丹参浓縮提取液的体积之比为 1.3: 1，接着加入无水乙醇使丹参浓縮提取液中乙醇的质量百分比浓度为80%，搅匀， 放置12小时，沉淀，过滤，滤液进行减压浓缩，得到丹参浓縮液，其中，减压浓縮 时的相对压力为-0.09MPa (即以一个大气压为O，控制减压浓縮时的压力相对于一个 大气压为-0.09MPa),浓缩温度为60'C;丹参浓縮液的体积为20L，相当于每毫升丹 参浓縮液中含有lg丹参生药，每升丹参浓縮液中含lkg丹参生药，即生药丹参的重 量与丹参浓縮液体积之比为1: 1;
4-3)将丹参浓缩液进行真空干燥，制得丹参干浸膏，其中真空干燥温度为5(TC， 千燥时的相对压力为-0.09MPa (即以一个大气压为O，控制减压浓缩时的压力相对于一个大气压为-0.09MPa)，丹参干浸膏的含水率为0.5%; 5、制备胶囊剂
将黄芪干浸膏、姜黄干浸膏和丹参干浸膏混合，粉碎成粒度为80目的粉末后加入 熊胆粉，混合均匀，制得药物混合粉末；
将药物混合粉末与辅料蔗糖粉、硬脂酸镁混合后，装入明胶硬胶囊即得。
实施例2本发明药物的颗粒剂制备
1、 按照如下重量配比准备原料(kg): 熊胆粉2、丹参IO、姜黄30、黄芪60
2、 制备黄芪干浸膏
2-1)将黄芪加入到质量百分比浓度为10%的乙醇中，加热回流提取，共提取3次， 合并三次的提取液，其中，第一次提取时的乙醇的体积与黄芪的重量之比为10: 1，
即lkg黄芪加入10L乙醇；第二次提取时的乙醇的体积与黄芪的重量之比为8: 1， 即lkg黄芪加入8L乙醇；第三次提取时乙醇的体积与黄芪的重量之比为8: 1，即lkg 黄芪加入8L乙醇；提取时间为1.5h/次；
2- 2)将提取液进行浓縮，得到黄芪浓缩提取液，其中，黄芪浓縮提取液的体积为 75L,相当于每毫升浓縮提取液中含0.8g黄芪生药，或每升黄芪浓縮液中含0.8kg黄
芪生药，即生药黄芪的重量与黄芪浓缩提取液的体积之比为0.8: 1，然后进行真空干
燥，制得黄芪干浸膏，其中，减压浓縮时的相对压力为-0.07MPa (即以一个大气压为 0，控制减压浓縮时的压力相对于一个大气压为-0.07MPa)，浓縮温度为7(TC;真空 干燥温度为4(TC，干燥时的相对压力为-0.09MPa (即以一个大气压为O，控制干燥时 的压力相对于一个大气压为-0.09MPa)，黄芪干浸膏的含水率为2%;
3、 制备姜黄干浸膏
3- l)将姜黄加入到质量百分比浓度为70%的乙醇中，加热回流提取，共提取2次， 合并2次的提取液，其中，第一次提取时的乙醇的体积与姜黄的重量之比为12: 1， 即lkg姜黄加入12L乙醇；第二次提取时的乙醇的体积与姜黄的重量之比为10: 1，
即lkg姜黄加入10L乙醇；提取时间为2.5h/次；
3-2)姜黄提取液进行减压浓縮，得到姜黄浓縮提取液，其中，姜黄浓縮提取液的 体积为22L，相当于每毫升姜黄浓縮提取液中含1.4g姜黄生药，或每升姜黄浓縮提取液中含有1.4kg姜黄生药，即生药姜黄的重量与姜黄浓缩提取液的体积之比为1.4: 1;
然后进行真空干燥，制得姜黄干浸膏，其中，减压浓縮时的相对压力为-0.07MPa (即 以一个大气压为0，控制减压浓縮时的压力相对于一个大气压为-0.07MPa);浓縮温 度为50。C;真空干燥温度为5(TC，干燥时的相对压力为-0.095MPa，姜黄干浸膏的含 水率为0.5%;
4、 制备丹参干浸膏
4-1)将丹参加入到水中，加热提取，共提取3次，合并三次的提取液，其中，第
一次提取时的水的体积与丹参的重量之比为10: 1，即lkg丹参加入10L水；第二次 提取时水的体积与丹参的重量之比为8: 1，即lkg丹参加入8L水；第三次提取时水 的体积与丹参的重量之比为8: 1，艮卩lkg丹参加入8L水；提取时间为1.5h/次；
4-2)将丹参提取液进行减压浓縮，得到丹参浓缩提取液，其中，丹参浓缩提取液 的体积为IOL，相当于每毫升丹参浓縮提取液中含1.0g丹参生药，或每升丹参浓縮提
取液中含有l.Okg丹参生药，即生药丹参的重量与丹参浓缩提取液的体积之比为1.0:
1，接着加入无水乙醇使丹参浓縮提取液中乙醇的质量百分比浓度为40%，搅匀，放 置12小时，沉淀，过滤，滤液进行减压浓縮，得到丹参浓缩液，其中，减压浓縮时 的相对压力为-0.07MPa (即以一个大气压为O，控制减压浓縮时的压力相对于一个大 气压为-0.07MPa)，浓縮温度为70'C;丹参浓缩液的体积为5L，相当于每毫升丹参浓 縮液中含有2g丹参生药，或每升丹参浓缩液中含2kg丹参生药，即生药丹参的重量 与丹参浓縮液体积之比为2: 1;
4-3)将丹参浓縮液进行真空干燥，制得丹参干浸膏，其中真空干燥温度为7(TC， 干燥时的相对压力为-0.07MPa (即以一个大气压为O，控制真空干燥时的压力相对于 一个大气压为-0.07MPa)，丹参干浸膏的含水率为0.8%;
5、 制备颗粒剂
将黄芪干浸膏、姜黄干浸膏和丹参干浸膏混合，粉碎成粒度为60目的粉末后加入 熊胆粉，混合均匀，制得药物混合粉末；
将药物混合粉末与辅料糊精混合后，压制成颗粒剂。
实施例3本发明药物的片剂制备
1、按照如下重量配比准备原料(kg):
19熊胆粉1.5、丹参20、姜黄30、黄芪50
2、 制备黄芪干浸膏
2-l)将黄芪加入到质量百分比浓度为30%的乙醇中，加热回流提取，共提取2次， 合并2次的提取液，其中，第一次提取时的乙醇的体积与黄芪的重量之比为10: 1， 即lkg黄芪加入10L乙醇；第二次提取时的乙醇的体积与黄疾的重量之比为8: 1,
即lkg黄芪加入8L乙醇；提取时间为2.5h/次；
2- 2)将黄芪提取液进行浓縮，得到黄芪浓缩提取液，其中，黄芪浓縮提取液的体 积为41.7L，相当于每毫升黄芪浓缩提取液中含1.2g黄芪生药，或每升黄芪浓縮提取 液中含有1.2kg黄芪生药，即生药黄芪的重量与黄芪浓縮提取液的体积之比为1.2: 1， 然后进行真空干燥，制得黄芪干浸膏，其中，减压浓縮时的相对压力为-0.08MPa (即 以一个大气压为0，控制减压浓縮时的压力相对于一个大气压为-0.08MPa)，浓縮温 度为60'C;真空干燥温度为50。C，干燥时的相对压力为-0.08MPa (即以一个大气压 为0，控制减压浓縮时的压力相对于一个大气压为-0.08MPa)，黄芪干浸膏的含水率 为1%;
3、 制备姜黄干浸膏
3- l)将姜黄加入到质量百分比浓度为60%的乙醇中，加热回流提取，共提取2次， 合并2次的提取液，其中，第一次提取时的乙醇的体积与姜黄的重量之比为12: 1， 即lkg姜黄加入12L乙醇；第二次提取时的乙醇的体积与姜黄的重量之比为10: 1，
即lkg姜黄加入10L乙醇；提取时间为2.0h/次；
3- 2)姜黄提取液进行减压浓縮，得到姜黄浓缩提取液，其中，姜黄浓縮提取液的 体积为24L，相当于每毫升姜黄浓缩提取液中含1.25g姜黄生药，或每升姜黄浓縮提 取液中含有1.25kg姜黄生药，即生药姜黄的重量与姜黄浓縮提取液的体积之比为 1.25: 1;然后进行真空干燥，制得姜黄干浸膏，其中，减压浓縮时的相对压力为 -0.08MPa (即以一个大气压为0，控制减压浓縮时的压力相对于一个大气压为 -0.08MPa)，浓縮温度为5(TC;真空干燥温度为5(TC，干燥时的相对压力为-0.08MPa
(即以一个大气压为0，控制真空干燥时的压力相对于一个大气压为-0.08MPa)，姜 黄干浸膏的含水率为0.5%;
4、 制备丹参干浸膏
4- 1)将丹参加入到质量百分比浓度为20%的乙醇中，加热提取，共提取2次，合并2次的提取液，其中，第一次提取时的乙醇的体积与丹参的重量之比为10: 1，即 lkg丹参加入10L乙醇；第二次提取时乙醇的体积与丹参的重量之比为8: 1，即lkg 丹参加入8L乙醇；提取时间为3.0h/次；
4-2)将丹参提取液进行减压浓縮，得到丹参浓縮提取液，其中，丹参浓縮提取液 的体积为13.3L，相当于每毫升丹参浓縮提取液中含1.5g丹参生药，或每升丹参浓縮 提取液中含有1.5kg丹参生药，即生药丹参的重量与丹参浓縮提取液的体积之比为 1.5: 1，接着加入无水乙醇使丹参浓縮提取液中乙醇的质量百分比含量为60%，搅匀， 放置12小时，沉淀，过滤，滤液进行减压浓缩，得到丹参浓缩液，其中，减压浓縮 时的相对压力为-0.09MPa (即以一个大气压为O，控制减压浓縮时的压力相对于一个 大气压为-0.09MPa)，浓縮温度为5(TC;丹参浓縮液的体积为20L,相当于每毫升丹 参浓縮液中含有lg丹参生药，或每升丹参浓縮液中含lkg丹参生药，即生药丹参的 重量与丹参浓縮液体积之比为1: 1;
4-3)将丹参浓缩液进行真空干燥，制得丹参干浸膏，其中真空干燥温度为6(TC， 干燥时的相对压力为-0.08MPa (即以一个大气压为O，控制真空干燥时的压力相对于 一个大气压为-0.08MPa)，丹参干浸膏的含水率为0.6%;
5、制备片剂
将黄芪干浸膏、姜黄干浸膏和丹参干浸膏混合，粉碎成粒度为100目的粉末后加 入熊胆粉，混合均匀，制得药物混合粉末；
将药物混合粉末与辅料淀粉混合后，压制成片剂。
实施例4本发明药物的丸剂制备
1、 按照如下重量配比准备原料(kg): 熊胆粉l、丹参20、姜黄40、黄芪80
2、 制备黄芪干浸膏
2-1)将黄芪加入到质量百分比浓度为40%的乙醇中，加热回流提取，共提取2次， 合并2次的提取液，其中，第一次提取时的乙醇的体积与黄芪的重量之比为10: 1， 即lkg黄芪加入10L乙醇；第二次提取时的乙醇的体积与黄芪的重量之比为8: 1，
即lkg黄芪加入8L乙醇；提取时间为1.0h/次；
2-2)将黄芪提取液进行浓縮，得到黄芪浓縮提取液，其中，黄芪浓缩提取液的体积为88.9L,相当于每毫升黄芪浓縮提取液中含0.9g黄芪生药，或每升黄芪浓縮提取 液中含有0.9kg黄茛生药，即生药黄芪的重量与黄芪浓縮提取液的体积之比为0.9: 1， 然后进行真空干燥，制得黄芪干浸膏，其中，减压浓縮时的相对压力为-0.095MPa(即 以一个大气压为O，控制减压浓縮时的压力相对于一个大气压为-0.095MPa)，浓縮温 度为50°C;真空干燥温度为60'C，干燥时的相对压力为-0.09MPa，黄芪干浸膏的含 水率为1%;
3、 制备姜黄干浸膏
3-1)将姜黄加入到质量百分比浓度为60%的乙醇中，加热回流提取，共提取3次， 合并3次的提取液，其中，第一次提取时的乙醇的体积与姜黄的重量之比为12: 1， 即lkg姜黄加入12L乙醇；第二次提取时的乙醇的体积与姜黄的重量之比为10: 1，
即lkg姜黄加入10L乙醇；第三次提取时的乙醇的体积与姜黄的重量之比为10: 1， 即lkg姜黄加入10L乙醇；提取时间为1.0h/次；
3- 2)姜黄提取液进行减压浓縮，得到姜黄浓縮提取液，其中，姜黄浓縮提取液的 体积为40L，相当于每毫升姜黄浓縮提取液中含lg姜黄生药，或每升姜黄浓縮提取
液中含有lkg姜黄生药，即生药姜黄的重量与姜黄浓縮提取液的体积之比为1: 1;
然后进行真空干燥，制得姜黄干浸膏，其中，减压浓缩时的相对压力为-0.09MPa，浓 縮温度为6(TC;真空干燥温度为4(TC，干燥时的相对压力为-0.095MPa，姜黄干浸膏 的含水率为0.3%;
4、 制备丹参干浸膏
4- 1)将丹参加入到质量百分比浓度为30%的乙醇中，加热提取，共提取3次，合 并3次的提取液，其中，第一次提取时的乙醇的体积与丹参的重量之比为10: 1，即 lkg丹参加入10L乙醇；第二次提取时乙醇的体积与丹参的重量之比为8: 1，即lkg
丹参加入8L乙醇；第三次提取时乙醇的体积与丹参的重量之比为8: 1，即lkg丹参 加入8L水；提取时间为1.0h/次；
4-2)将丹参提取液进行减压浓縮，得到丹参浓縮提取液，其中，丹参浓缩提取液 的体积为15.4L，相当于每毫升丹参浓縮提取液中含1.3g丹参生药，或每升丹参浓縮 提取液中含有1.3kg丹参生药，即生药丹参的重量与丹参浓縮提取液的体积之比为 1.3: 1，接着加入无水乙醇使丹参浓縮提取液中乙醇的质量百分比含量为70%，搅匀， 放置12小时，沉淀，过滤，滤液进行减压浓縮，得到丹参浓縮液，其中，减压浓縮时的相对压力为-0.095MPa (即以一个大气压为0，控制减压浓縮时的压力相对于一 个大气压为-0.095MPa)，浓缩温度为6(TC;丹参浓縮液的体积为20L，相当于每毫升 丹参浓縮液中含有lg丹参生药，或每升丹参浓縮液中含lkg丹参生药，即生药丹参 的重量与丹参浓縮液体积之比为1: 1;
4-3)将丹参浓缩液进行真空干燥，制得丹参干浸膏，其中真空干燥温度为6(TC， 干燥时的相对压力为-0.095MPa，(即以一个大气压为O，控制真空千燥时的压力相对 于一个大气压为-0.095MPa)丹参干浸膏的含水率为0.3%;
5、制备丸剂
将黄芪、姜黄和丹参干浸膏混合，粉碎成粒度为100目的粉末后加入熊胆粉，混 合均匀，制得混合粉末；
将混合粉末和辅料加入到制丸机中，制成丸剂。
实施例5本发明药物的胶囊剂制备
1、 按照如下重量配比准备原料(kg): 熊胆粉3、丹参30、姜黄60、黄芪30
2、 制备黄芪干浸膏
2-l)将黄芪加入到质量百分比浓度为50%的乙醇中，加热回流提取，共提取3次， 合并3次的提取液，其中，第一次提取时的乙醇的体积与黄芪的重量之比为10: 1， 即lkg黄芪加入10L乙醇；第二次提取时的乙醇的体积与黄芪的重量之比为8: 1，
即lkg黄芪加入8L乙醇；第三次提取时的乙醇的体积与黄芪的重量之比为8: 1，即 lkg黄芪加入8L乙醇；提取时间为1.5h/次；
2-2)将黄芪提取液进行浓縮，得到黄芪浓縮提取液，其中，黄芪浓縮提取液的体 积为25L，相当于每毫升黄芪浓縮提取液中含1.2§黄芪生药，或每升黄芪浓縮提取液
中含有1.2kg黄芪生药，即生药黄芪的重量与黄芪浓縮提取液的体积之比为1.2: 1，
然后进行真空干燥，制得黄芪干浸膏，其中，减压浓縮时的相对压力为-0.08MPa (即 以一个大气压为0，控制减压浓縮时的压力相对于一个大气压为-0.08MPa)，浓縮温 度为6CTC;真空干燥温度为50°C，干燥时的相对压力为-0.09MPa (即以一个大气压 为0，控制真空干燥时的压力相对于一个大气压为-0.09MPa)，黄芪干浸膏的含水率 为1%;
233、 制备姜黄干浸膏
3-l)将姜黄加入到质量百分比浓度为50%的乙醇中，加热回流提取，共提取3次， 合并得提取液，其中，第一次提取时的乙醇的体积与姜黄的重量之比为12: 1，即lkg 姜黄加入12L乙醇；第二次提取时的乙醇的体积与姜黄的重量之比为10: 1,即lkg 姜黄加入10L乙醇；第三次提取时的乙醇的体积与姜黄的重量之比为10: 1，即lkg 姜黄加入10L乙醇；提取时间为2.0h/次；
3- 2)姜黄提取液进行减压浓縮，得到姜黄浓縮提取液，其中，姜黄浓縮提取液的 体积为30L，相当于每毫升姜黄浓縮提取液中含2g姜黄生药，或每升姜黄浓縮提取
液中含有2kg姜黄生药，即生药姜黄的重量与姜黄浓縮提取液的体积之比为2: 1;
然后进行真空干燥，制得姜黄干浸膏，其中，减压浓縮时的相对压力为-0.09MPa (即 以一个大气压为0，控制减压浓缩时的压力相对于一个大气压为-0.09MPa)，浓缩温 度为6(TC;真空干燥温度为4(TC，干燥时的相对压力为-0.095MPa (即以一个大气压 为0，控制真空干燥时的压力相对于一个大气压为-0.095MPa)，姜黄干浸膏的含水率 为0.5%;
4、 制备丹参干浸膏
4- 1)将丹参加入到质量百分比浓度为40%的乙醇中，加热提取，共提取2次，合 并得提取液，其中，第一次提取时的乙醇的体积与丹参的重量之比为10: 1，即lkg
丹参加入10L乙醇；第二次提取时乙醇的体积与丹参的重量之比为8: 1，即lkg丹 参加入8L乙醇；提取时间为1.0h/次；
4-2)将丹参提取液进行减压浓缩，得到丹参浓縮提取液，其中，丹参浓缩提取液 的体积为23.1L，相当于每毫升丹参浓缩提取液中含1.3g丹参生药，或每升丹参浓縮 提取液中含有1.3kg丹参生药，即生药丹参的重量与丹参浓缩提取液的体积之比为 1.3: 1，接着加入无水乙醇，使丹参浓缩提取液中乙醇的质量百分比含量为50%，搅 匀，放置12小时，沉淀，过滤，滤液进行减压浓縮，得到丹参浓縮液，其中，减压 浓縮时的相对压力为-0.08MPa (即以一个大气压为O，控制减压浓縮时的压力相对于 一个大气压为-0.08MPa)，浓缩温度为60。C;丹参浓縮液的体积为IOL，相当于每毫 升丹参浓縮液中含有3g丹参生药，或每升丹参浓縮液中含3kg丹参生药，即生药丹 参的重量与丹参浓缩液体积之比为3: 1;
4-3)将丹参浓缩液进行真空干燥，制得丹参干浸膏，其中真空干燥温度为5(TC，
24干燥时的相对压力为-0.095MPa (即以一个大气压为0，控制真空干燥时的压力相对 于一个大气压为-0.095MPa)，丹参干浸膏的含水率为0.1%; 5、制备胶囊剂
将黄芪干浸膏、姜黄干浸膏和丹参干浸膏混合，粉碎成粒度为80-100目的粉末后 加入熊胆粉，混合均匀，制得药物混合粉末；
将药物混合粉末与辅料淀粉混合后，装入明胶硬胶囊，制成胶囊剂。
实施例6本发明药物的胶囊剂制备
1、 按照如下重量配比准备原料(kg):
熊胆粉5、丹参50、姜黄20、黄芪80
2、 制备黄芪干浸膏
2-l)将黄芪加入到质量百分比浓度为60%的乙醇中，加热回流提取，共提取2次， 合并2次的提取液，其中，第一次提取时的乙醇的体积与黄芪的重量之比为10: 1，
即lkg黄芪加入10L乙醇；第二次提取时的乙醇的体积与黄芪的重量之比为8: 1， 即lkg黄芪加入8L乙醇；提取时间为1.5h/次；
2- 2)将黄芪提取液进行浓縮，得到黄芪浓縮提取液，其中，黄芪浓缩提取液的体 积为53.3L，相当于每毫升黄芪浓縮提取液中含1.5g黄芪生药，或每升黄芪浓縮提取 液中含有1.5kg黄芪生药，即生药黄芪的重量与黄芪浓縮提取液的体积之比为1.5: 1， 然后进行真空干燥，制得黄芪干浸膏，其中，减压浓缩时的相对压力为-0.09MPa (即 以一个大气压为0，控制减压浓縮时的压力相对于一个大气压为-0.09MPa)，浓縮温 度为50。C;真空干燥温度为50。C，干燥时的相对压力为-0.095MPa (即以一个大气压 为0，控制真空干燥时的压力相对于一个大气压为-0.095MPa)，黄芪干浸膏的含水率 为0.5%;
3、 制备姜黄干浸膏
3- l)将姜黄加入到质量百分比浓度为30%的乙醇中，加热回流提取，共提取2次， 合并2次的提取液，其中，第一次提取时的乙醇的体积与姜黄的重量之比为12: 1，
即lkg姜黄加入12L乙醇；第二次提取时的乙醇的体积与姜黄的重量之比为10: 1， 即lkg姜黄加入10L乙醇；提取时间为1.0h/次；
3-2)姜黄提取液进行减压浓縮，得到姜黄浓縮提取液，其中，姜黄浓縮提取液的体积为22.2L，相当于每毫升姜黄浓縮提取液中含0.9g姜黄生药，或每升姜黄浓縮提 取液中含有0.9kg姜黄生药，即生药姜黄的重量与姜黄浓縮提取液的体积之比为0.9: 1;然后进行真空干燥，制得姜黄干浸膏，其中，减压浓縮时的相对压力为-0.08MPa (即以一个大气压为0，控制减压浓縮时的压力相对于一个大气压为-0.08MPa)，浓 縮温度为6(TC;真空干燥温度为5(TC，干燥时的相对压力为-0.08MPa，姜黄干浸膏 的含水率为0.8%;
4、 制备丹参干浸膏
4-1)将丹参加入到质量百分比浓度为50%的乙醇中，加热提取，共提取3次，合 并3次的提取液，其中，第一次提取时的乙醇的体积与丹参的重量之比为10: 1，即
lkg丹参加入10L乙醇；第二次提取时乙醇的体积与丹参的重量之比为8: 1，即lkg 丹参加入8L乙醇；第三次提取时乙醇的体积与丹参的重量之比为8: 1， S卩lkg丹参 加入8L水；提取时间为1.5h/次；
4-2)将丹参提取液进行减压浓縮，得到丹参浓縮提取液，其中，丹参浓縮提取液 的体积为38.5L，相当于每毫升丹参浓縮提取液中含1.3g丹参生药，或每升丹参浓縮 提取液中含有1.3kg丹参生药，即生药丹参的重量与丹参浓縮提取液的体积之比为 1.3: 1，接着加入无水乙醇使诞生浓縮提取液中乙醇的质量百分比含量为50%，搅匀， 放置12小时，沉淀，过滤，滤液进行减压浓缩，得到丹参浓縮液，其中，减压浓縮 时的相对压力为-0.09MPa (即以一个大气压为O，控制减压浓縮时的压力相对于一个 大气压为-0.09MPa)，浓縮温度为6CTC;丹参浓縮液的体积为50L，相当于每毫升丹 参浓縮液中含有lg丹参生药，或每升丹参浓縮液中含lkg丹参生药，即生药丹参的 重量与丹参浓縮液体积之比为1: 1;
4-3)将丹参浓缩液进行真空干燥，制得丹参干浸膏，其中真空干燥温度为7(TC， 干燥时的相对压力为-0.08MPa (即以一个大气压为O，控制真空干燥时的压力相对于 一个大气压为-0.08MPa)，丹参干浸膏的含水率为0.6%;
5、 制备胶囊剂
将黄芪干浸膏、姜黄干浸膏和丹参干浸膏混合，粉碎成粒度为100目的粉末后加 入熊胆粉，混合均匀，制得药物混合粉末；
将药物混合粉末与辅料微晶纤维混合后，装入明胶硬胶囊，制成胶囊剂。实施例7本发明药物的颗粒剂制备
1、 按照如下重量配比准备原料(kg): 熊胆粉IO、丹参IO、姜黄IOO、黄芪200
2、 制备黄芪干浸膏
2-l)将黄芪加入到质量百分比浓度为40%的乙醇中，加热回流提取，共提取3次， 合并3次的提取液，其中，第一次提取时的乙醇的体积与黄芪的重量之比为10: 1，
即lkg黄芪加入10L乙醇；第二次提取时的乙醇的体积与黄芪的重量之比为8: 1， 即lkg黄芪加入8L乙醇；第三次提取时的乙醇的体积与黄芪的重量之比为8: 1，即 lkg黄芪加入8L乙醇；提取时间为1.5h/次；
2- 2)将黄芪提取液进行浓縮，得到黄芪浓縮提取液，其中，黄芪浓縮提取液的体 积为200L，相当于每毫升黄芪浓缩提取液中含1.0g黄芪生药，或每升黄芪浓縮提取
液中含有lkg黄芪生药，即生药黄芪的重量与黄芪浓缩提取液的体积之比为1: 1，
然后进行真空干燥，制得黄芪干浸膏，其中，减压浓縮时的相对压力为-0.07MPa (即 以一个大气压为0，控制减压浓縮时的压力相对于一个大气压为-0.07MPa)，浓縮温 度为60°C;真空干燥温度为50°C，干燥时的相对压力为-0.09MPa (即以一个大气压 为0，控制真空干燥时的压力相对于一个大气压为-0.09MPa)，黄芪干浸膏的含水率 为1%;
3、 制备姜黄千浸膏
3- 1)将姜黄加入到质量百分比浓度为20%的乙醇中，加热回流提取，共提取3次， 合并3次的提取液，其中，第一次提取时的乙醇的体积与姜黄的重量之比为12: 1， 即lkg姜黄加入12L乙醇；第二次提取时的乙醇的体积与姜黄的重量之比为10: 1，
即lkg姜黄加入10L乙醇；第三次提取时的乙醇的体积与姜黄的重量之比为10: 1， 即lkg姜黄加入10L乙醇；提取时间为1.0h/次；
3-2)姜黄提取液进行减压浓縮，得到姜黄浓縮提取液，其中，姜黄浓縮提取液的 体积为100L，相当于每毫升姜黄浓縮提取液中含lg姜黄生药，或每升姜黄浓縮提取
液中含有lkg姜黄生药，即生药姜黄的重量与姜黄浓縮提取液的体积之比为1: 1，
然后进行真空干燥，制得姜黄干浸膏，其中，减压浓縮时的相对压力为-0.09MPa (即 以一个大气压为0，控制减压浓縮时的压力相对于一个大气压为-0.09MPa)，浓縮温 度为50°C;真空干燥温度为50°C，干燥时的相对压力为-0.09MPa (即以一个大气压
27为0，控制真空干燥时的压力相对于一个大气压为-0.09MPa)，姜黄干浸膏的含水率 为0.6%;
4、 制备丹参干浸膏
4-1)将丹参加入到水中，加热提取，共提取3次，合并3次的提取液，其中，第 一次提取时的水的体积与丹参的重量之比为10: 1，即lkg丹参加入10L水；第二次
提取时水的体积与丹参的重量之比为8: 1，即lkg丹参加入8L水；第三次提取时水 的体积与丹参的重量之比为8: 1，艮卩lkg丹参加入8L水；提取时间为1.0h/次；
4-2)将丹参提取液进行减压浓縮，得到丹参浓縮提取液，其中，丹参浓縮提取液 的体积为7.7L,相当于每毫升丹参浓缩提取液中含1.3g丹参生药，或每升丹参浓縮 提取液中含有1.3kg丹参生药，即生药丹参的重量与丹参浓缩提取液的体积之比为 1.3: 1，接着加入无水乙醇使丹参浓縮提取液中乙醇的质量百分比含量为80%，搅匀， 放置12小时，沉淀，过滤，滤液进行减压浓縮，得到丹参浓縮液，其中，减压浓縮 时的相对压力为-0.09MPa (即以一个大气压为O,控制减压浓缩时的压力相对于一个 大气压为-0.09MPa)，浓縮温度为60'C;丹参浓縮液的体积为10L,相当于每毫升丹 参浓縮液中含有lg丹参生药，或每升丹参浓縮液中含lkg丹参生药，即生药丹参的 重量与丹参浓縮液体积之比为h 1;
4-3)将丹参浓縮液进行真空干燥，制得丹参干浸膏，其中真空干燥温度为6(TC， 干燥时的相对压力为-0.09MPa (即以一个大气压为O,控制真空干燥时的压力相对于 一个大气压为-0.09MPa),丹参干浸膏的含水率为0.5%;
5、 制备颗粒剂
将黄芪干浸膏、姜黄干浸膏和丹参干浸膏混合，粉碎成粒度为150目的粉末后加 入熊胆粉，混合均匀，制得药物混合粉末；
将药物混合粉末与辅料淀粉、糊精混合后，压制成颗粒剂。
权利要求
1、一种抗肝纤维化中药组合物，其特征是包括如下原料熊胆粉、丹参、姜黄、黄芪。
2、 如权利要求1所述的中药组合物，其特征是所述原料的重量份配比为熊胆粉1-10、丹参10-50、姜黄20-100、黄萬30-200。
3、 如权利要求2所述的中药组合物，其特征是所述原料的重量份配比选择熊胆粉1-5、丹参10-30、姜黄30-60、黄茛50-80。
4、 如权利要求3所述的中药组合物，其特征是所述原料的重量份配比选择为熊胆 粉l、丹参20、姜黄40、黄芪60。
5、 一种如权利要求1-4任一所述抗肝纤维化中药组合物的制备方法，包括如下进行 的步骤1) 制备黄芪干浸膏首先采用水或质量百分比浓度为10-60%的乙醇溶液为提取溶剂对黄芪进行加热提取2-3次，接着合并并浓縮提取液，然后将浓縮后的提取液进行干燥，得黄芪干浸2) 制备姜黄干浸膏首先采用质量百分比浓度为20-80%的乙醇溶液为提取溶剂对姜黄进行加热回流 提取2-3次，接着合并并浓縮提取液，然后将浓縮后的姜黄提取液进行干燥，得姜黄 干浸膏；3) 制备丹参干浸膏首先采用水或质量百分比浓度为20-50%的乙醇溶液为提取溶剂对丹参进行加热 提取2-3次，接着合并并浓縮提取液，然后向浓縮后的丹参提取液中加入乙醇进行沉 淀，过滤，最后滤液浓縮后进行干燥，得丹参干浸膏；4)制备中药组合物将黄芪、姜黄和丹参干浸膏混合，粉碎后加入熊胆粉，混合均匀，制得本发明药 物组合物。
6、 如权利要求5所述的制备方法，其特征是步骤1)中每次所述加热提取所采用提 取溶剂的体积与黄芪的重量之比为8-10: 1，提取时间为1-3小时/次。
7、 如权利要求5或6所述的制备方法，其特征是步骤2)中每次所述加热提取所采 用的提取溶剂的体积与姜黄的重量之比为10-12: 1，提取时间为0.5-3小时/次。
8、 如权利要求5或6所述的制备方法，其特征是步骤3)中每次所述加热提取所采 用的提取溶剂的体积与丹参的重量之比为8-10: 1，提取时间为1-3小时/次。
9、 如权利要求5或6所述的制备方法，其特征是步骤l)中浓縮后黄芪提取液的体 积与黄芪药材的重量之比为0.5-1.5: 1;步骤2)中浓縮后姜黄提取液的体积与姜黄 药材的重量之比为0.5-1.5: 1;步骤3)中浓縮后的丹参提取液的体积与丹参药材的 重量之比为0.5-1.5: 1。
10、 如权利要求1至4任一所述中药物组合物在制备治疗和/或预防肝纤维化的药物的应用。
全文摘要
本发明公开一种抗肝纤维化的中药组合物及其制备方法，该抗肝纤维化的中药组合物由如下原料制成熊胆粉、丹参、姜黄和黄芪。本发明制备的抗肝纤维化的组合物，可以被制备成任何一种常用的内服剂型，对肝纤维化、肝炎、脂肪肝、肝硬化等的疗效显著，具有明显的保肝、护肝，降低转氨酶和抑制干细胞纤维化的药理作用。
文档编号A61K36/88GK101632829SQ20091009216
公开日2010年1月27日 申请日期2009年9月3日 优先权日2009年9月3日
发明者陈志鸿 申请人:福建归真堂药业股份有限公司