专利名称：：甘草苷制剂及应用的制作方法
技术领域：
：本发明属药物用途，涉及甘草苷药物制剂及用途，具体涉及甘草苷在制备治疗咳嗽和痰多药物中的应用。
背景技术：
：随着全球经济的发展，工业与民用污染源不断增加，加之环境治理不力等因素，呼吸系统疾病的发病率呈明显上升趋势，其引起的死亡率也逐年上升，目前呼吸系统疾病已成为人类几大"杀手"之一。不过，这也给生产呼吸系统疾病药物的企业创造了更广阔的市场空间。作为呼吸系统药物的重要组成部分，祛痰镇咳药物的市场也逐年递增。咳嗽和痰多是呼吸系统疾病的主要症状，应用祛痰和镇咳药是对症治疗的重要手段。合理应用祛痰镇咳药不仅可以减轻病人的痛苦，并可防止并发症的发生和原发疾病的进一步恶化。在中国药品市场中，祛痰和镇咳药每年的市场份额约为200亿元。因此，从中药中寻找和提取镇咳、祛痰和平喘药具有良好的社会效益和经济效益。甘草苷(Liquiritin)是从甘草总黄酮中分离纯化获得的一个天然药物，属于二氢黄酮类，其化学结构见图l。至今为止尚未见有它制备成药品和治疗任何疾病或症状的报道。
发明内容本发明的目的是提供一种甘草苷制剂，以甘草苷为主要活性成分，加入常规的赋形剂、调味剂、防腐剂、润滑剂、湿润剂、粘合剂、增稠剂、增溶剂等药物辅料，具体组成以制成IOOO粒计，甘草苷40g，氢氧化钠3.2g，聚维酮15g，葡甲胺10g，微晶纤维素115g，乳糖20g。所述甘草苷英文名liquiritin，分子式C26H3()013，分子量550，结构式-HO本发明所述的制剂剂型有胶囊剂、片剂、口服液体剂等。本发明的另一个目的是提供甘草苷制剂在制备治疗急、慢性咳嗽和痰多症状药物中的应用。本发明提供的甘草苷经过初步的药理实验证实，具有镇咳和祛痰作用，因此，将甘草苷单独或与其它活性组份或辅料配合制成药剂，可用于咳嗽和痰多症状的改善。本发明提供的甘草苷用了2种动物镇咳试验模型，即枸橼酸引起的豚鼠咳嗽模型和电剌激喉上神经引起的咳嗽反射模型。证实甘草苷抑制枸橼酸引起的豚鼠咳嗽反应和辣椒苷引起的小鼠咳嗽反应，提示甘草苷具有很强的镇咳作用。本发明还用了2种动物祛痰试验模型，小鼠气道酚红排泄模型和蛙上腭和食道纤毛运动模型。证实甘草苷促进小鼠气道酚红排泄，增强蛙上腭和食道纤毛运动，提示甘草苷具有很强的祛痰作用。本发明提供的甘草苷均具有治疗或改善急、慢性咳嗽和祛痰的作用，其药效明显强于甘草黄酮，作用强度是甘草黄酮的10倍以上。本发明的甘草苷来源于天然植物，因此，可以将甘草苷制成保健品。本发明为临床治疗提供了毒副作用较小、疗效显著的天然镇咳和祛痰药物。图1为本发明胶囊制剂制备工艺流程。具体实施例方式本发明结合附图和实施例作进一步的说明。实施例1一、甘草苷胶囊制剂组成及制备工艺1.组成制成1000粒甘草苷40g氢氧化钠3.2g聚维酮15g葡甲胺10g微晶纤维素115g乳糖20g共203.2g2.制剂组成依据及筛选过程2.1制剂组成依据根据药效学试验制订甘草苷胶囊，规格甘草苷含量40mg/粒。辅料在处方中的作用氢氧化钠增溶剂；聚维酮粘合剂；葡甲胺增溶剂；微晶纤维素稀释剂、崩解剂；乳糖稀释剂。将甘草苷用氢氧化钠乙醇溶液溶解，预试验表明在甘草苷完全成盐的理论值(甘草苷:氢氧化钠=40:3.1)时并不完全溶解，稍过量的氢氧化钠即甘草苷:氢氧化钠=40:3.2时能正好完全溶解。然后将溶液浓縮干燥至浓溶液，加入不同的稀释剂搅拌使分散均匀，制湿颗粒，6(TC干燥，整粒，加入润滑剂混合均匀，压片即得。根据我们在开发甘草苷片剂时的结果，聚维酮和葡甲胺分别为15mg和10mg时较适宜。赋形剂采用的是乳糖和微晶纤维素，在预试验的基础上采用不同处方及试验结果见表5-1。结果表明，处方1虽然制软材较容易，但制得的产品溶出度(按实际含药量计算)略低。处方2、3和4三个处方的溶出度均较好，但从加入稀释剂后软材的湿润程度看处方2较好。且处方2制得的颗粒流动性良好，胶囊装量差异完全符合规定，因此，采用处方2作为本品的处方。_表l甘草苷胶囊的处方筛选__][_^_3_^_甘草苷40404040氢氧化钠3.23.23.23.22.5光照取胶囊除去外包装置于表面皿中，在45001x光照条件下放置10天，分别于第5、IO天取样，检查外观、内容物性状、溶出度、降解产物并测定含量，与O天比较，检査方法见资料含量测定资料。表2样品光照IO天的试验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>2.2制备工艺2.2.1操作步骤1.在适量的乙醇中加入甘草苷和氢氧化钠，搅拌使溶解；2.将溶液浓縮至浓溶液；3.取乳糖、聚维酮、葡甲胺和微晶纤维素混合均匀，加入上述溶液搅拌制软材，20目筛制湿颗粒，6(TC干燥；4.整粒装填入胶囊，打光；5.包装、质检即得。2.3工艺流程，参见图1。2.4试制一批样品的影响因素试验结果40mg/粒除去外包装，裸露放置080428格装号规包批000光滑胶囊白色粉末99.0199.710.178042光滑胶囊白色粉末97.4398.520.19o10光滑胶囊白色粉末98.5799.030.22样品光照10天的试验结果见表2。由结果可以看出光照10天样品降解产物、性状、溶出度和含量未发生明显改变。8.4.2高温取胶囊除去外包装裸露置于表面皿中，在40°C、60。C条件下放置10天，分别于第5、IO天取样，检査外观、内容物性状、溶出度、降解产物并测定含量，与O天比较。表3高温10天的试验结果(批号080428)条件时间(天)外观内容物性状溶出度(%)含量(%)降解产物(％)0光滑胶囊白色粉末99.0199.710.17。CJo寸光滑胶囊白色粉末97.79100.120.2010光滑胶囊白色粉末97.6399.340.220光滑胶囊白色粉末99.0199.710.17po。光滑胶囊白色粉末98.1998.950.2110光滑胶囊白色粉末98.5199.380.21样品高温10天的试验结果见表3。由结果可以看出样品高温放置10天，降解产物、性状、溶出度和含量未发生明显改变。8.4.3高湿取胶囊，除去外包装，裸露置于表面皿中，分别在25。CRH75%、RH92.5n/。条件下放置10天，分别于第5、IO天取样，检査外观、内容物性状、溶出度、降解产物并测定含量，与O天比较。试验结果见表4。表4样品高湿10天的试验结果(批号080428)内容物吸湿增重(％)溶出含量性状度(％)(%)降解产物(%)7<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>由结果可以看出高湿条件下样品有吸湿现象，RH75。/。湿度下放置10天，样品吸湿5.23°/。，RH92.5。/。湿度下放置10天，样品吸湿增重26.01%。降解产物、溶出度和含量未发生明显改变。实施例2药效学研究参照国家食品药品监督管理局《新药(西药)临床前研究指导原则汇编(药学药理学毒理学)》，设计了本实验方案。选用2种镇咳药实验动物模型、2种祛痰药实验动物模型和3种平喘试验方法，对甘草苷胶囊或片剂进行了平喘、镇咳和祛痰方面的研究。试验材料、方法和结果如下1、材料药品与试剂1)枸橼酸上海化学试剂一厂，批号20070201，用蒸馏水配制成15%的浓度备用；2)磷酸可待因片青海制药厂，批号20060615;蒸馏水配制成0.5mg/ml混悬液；3)Capsaicin(辣椒素)SigmaChemicalCompany,lot:123H78341,新鲜配制称取Capsaicin3mg，用10%乙醇lml溶解，力tU0。/o吐温80lml，研磨后加水至100ml。4)地西泮注射液江苏济川制药有限公司，批号20060309;5)酚红试剂上海化学试剂三厂；批号20070615;精密称取酚红试剂2g，加生理盐水至80ml。由于酚红在生理盐水不能完全溶解，因此置超声波洗涤器内超声溶解30min,使酚红颗粒均匀，配制成0.25%酚红悬液。6)氢氧化钠浙江萧山化学试剂厂，批号20060726;7)carbamylcholine:SigmaChemicalCompany,lot:08348)异丙肾上腺素上海信宜制药业有限公司，批号200702129)甘草苷胶囊自制，批号20080206;将甘草苷10粒胶囊或片剂的原料药加蒸馏水至100ml。整体试验剂量以mg/kg表示，离体试验以mol浓度。动物1)ICR品系小鼠，体重1822g，雌雄各半。2)Hartley品系豚鼠，体重350-500g，雌雄不拘。购于浙江大学实验动物中心，合格证号220010014。所有的操作和实验流程均遵守《实验动物管理条例》。动物在实验前均自由进食和进水。3)青蛙，体重2540g，雌雄不拘。购于市场。2、方法2.1小鼠酚红排泌试验将2.5%酚红置电磁搅拌器上边混合边注射，2.5%酚红0.2mL/10g体重ip，30min后脱臼处死动物，分离气管(避免分离气管时出血)，取喉结下至肺门的主气管，每一气管放置一支5mL试管内，加生理盐水1.0mL，震荡洗涤30min后，力B1mmoL/LNaOH0.1mL，混匀后150g离心10min，取上清液于722型分光光度仪以A546nm测定酚红含量。标准曲线绘制取4.17xl(T7、8.34xl(T7、1.67xl(^g/L浓度的酚红液在A546nm测定A值，绘制曲线。实验结果根据酚红标准曲线的回归方程计算出小鼠的气道酚红排泌量(|ig/mL)。分组共分6组，每组812只小鼠，雌雄各半。具体分组情况如下A.生理盐水对照组，以等量生理盐水灌胃给药B.甘草苷6mg/kgC.甘草苷20mg/kgD.甘草苷60mg/kgE.甘草苷120mg/kgF.15%氯化铵1.35mL/kgG.15%氯化铵2.10mL/kgH.15%氯化铵3.28mL/kgI.15°/。氯化铵6.40mL/kg给药剂量和容积所有试验小鼠饥饿过夜，均在注射酚红前30min给药一次。采用等容不等量ig。2.2青蛙食道纤毛运动实验将毁脑脊髓后的蛙固定于板上，分离口腔上腭至食道末端的粘膜，取2.5cmxl.5cm粘膜平贴于板上，加以固定，定时以任氏液湿润粘膜表面。每只试验的蛙食道粘膜均先用活性炭(半粒芝麻大小)测定一次2.0cm长度的运动时间，作为粘膜标本的筛选，剔除运动时间<803、>1503的标本。筛选合格的粘膜标本以含受试药物的任氏液湿润，用同样大小的活性炭粒再测定一次运动2.0cm长度的运动时间作为用药后所需要的运动时间，并与加任氏液对照组比较组间显著性差异。分组A.生理盐水对照组，以等量生理盐水加入B.甘草苷lxlO-9lxl(T6mol/L4个浓度C.阳性对照药乙酰胆碱组lxlO"tlxl(^mol/L4个浓度2.3枸橼酸引起的豚鼠咳嗽试验分组共分5组，每组89只豚鼠，雌雄不拘。具体分组情况如下A.生理盐水对照组，以等量生理盐水灌胃给药B.甘草苷3mg/kgC.甘草苷10mg/kgD.甘草苷30mg/kgE.可待因10mg/kg筛选豚鼠用超声波雾化器气雾15W枸橼酸2min后，10min内咳嗽次数在IO次以上的豚鼠作为实验豚鼠，弃去10次以下的豚鼠。24h后给豚鼠灌胃给药(ig)，进行药物镇咳试验。给药剂量和容积所有试验豚鼠均在枸橼酸引咳前30min给药1次。采用等容不等量灌胃给药(ig)。实验步骤将豚鼠放入20xl0xl0cm体积描记盒中，用高灵敏度压力换能器将豚鼠呼吸频率和容积信号输入微机Pclab生物信号采集系统，记录豚鼠咳嗽次数。豚鼠放入体积描记盒稳定lmin后，用超声波雾化器气雾15。/。枸橼酸2min，计数自气雾开始10min内的咳嗽次数，每一次咳嗽均以听到豚鼠咳嗽声音和微机Pclab上见到的明显的咳嗽记录结合分析。2.4电剌激豚鼠喉上神经引咳试验分组共分5组，每组89只豚鼠，雌雄不拘。具体分组情况如下A.生理盐水对照组，以等量生理盐水灌胃给药B.甘草苷3mg/kg10C.甘草苷10mg/kgD.甘草苷30mg/kgE.可待因15mg/kg试验步骤按文献方法[2]，用25%乌拉坦按lg/kg腹腔注射麻醉豚鼠，麻醉后分离出豚鼠的喉上神经，及进行气管插管，用Y字型的接头一头与换能器相连，一头与大气相通。用高灵敏度压力换能器将豚鼠呼吸频率和容积信号通过AD、DA接口传入微机Pclab生物信号采集系统(版本1丄36,MicSignStarCorp)，分别用刺激电极刺激气管和喉上神经，刺激参数为主周期ls，脉冲数10次，间隔10ms，波宽lms。除电压外，其他所有参数不变，即以电压为唯一刺激变量。刺激电压由小加大，刺激时间为12s，两次刺激之间至少相隔5min，记录其刺激引咳阈值。每一次咳嗽均以听到豚鼠咳嗽声音和微机Pclab上见到的明显的咳嗽记录结合分析。2.5统计用微机和SigmaStat统计软件(Sigmastat1.01forWindows95，1992，Jandelcorporation,USA)。ED50(95%可信限)和EC50(95%可信限)用上海科学技术出版社POMS2.0版软件计算。具体方法见结果中的表注。3结果3.1对小鼠气道酚红排泄的促进作用甘草苷能促进小鼠气道酚红排泄，见表5。甘草苷组ED5Q(95%可信限)为0.50(0.46~0.56)mL/kg;氯化铵组为2.89(2.51-3.31)mL/kg。表5.甘草苷对小鼠气道酚红排泄的促进作用(5±SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>统计方法Dunnett's，与生理盐水组比较*P<0.01，"P<0.01，"'P<0.001，下表同3.2对蛙上腭和食道粘膜纤毛运动的增强作用甘草苷和阳性对照药乙酰胆碱组均呈剂量反应增加蛙上腭和食道纤毛运动,见表6。甘草苷组EC5Q(95%可信限)为3.1x10°(7.0xlO-4~1.3xlO-2)mL/L;乙酰胆碱组为9.8xl(T7(l,9xl(T7~5.0xlO-6)mL/L0表6.甘草苷对蛙上腭和食道粘膜纤毛运动的促进作用(5±SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>表注同上表3.3对豚鼠枸橼酸引晐模型的抑制作用甘草苷能抑制枸櫞酸引起的豚鼠咳嗽。甘草苷ID5C(95%可信限)为2.72(2.023.67)mLkg"。结果见表7.—表7.甘草苷对枸橼酸引起豚鼠咳嗽反应的抑制作用(n=10，^±S)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>30.0mg.kf124.3±9.911.0±9.(T58.5统计方法T-test，与生理盐水组比较*P<0.05,"P<0.01。3.4对电刺激豚鼠喉上神经引起的咳嗽的影响甘草苷能抑制电刺激喉上神经引起的咳嗽反射，使引起咳嗽反射所需的阈值电压明显增高，见表8。ED5o(95%可信限)为0.85(0.641.14)ml.kg"。表8电刺激豚鼠喉上神经给药前后的阈值变化<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>统计方法Pairedt-test;给药前后咳嗽刺激阖值比较'PO.05，"PO.014讨论与小结在本实验中，采用了2种动物镇咳试验模型，枸橼酸引起的豚鼠咳嗽模型和电刺激喉上神经引起的咳嗽反射模型。甘草苷抑制枸橼酸引起的豚鼠咳嗽反应和电刺激喉上神经引起的咳嗽反射，提示甘草苷具有很强的镇咳作用。在本实验中，采用了2种动物祛痰试验模型，小鼠气道酚红排泄模型和蛙上腭和食道纤毛运动模型。甘草苷促进小鼠气道酚红排泄，增强蛙上腭和食道纤毛运动，提示甘草苷具有很强的祛痰作用。枸橼酸引起的豚鼠咳嗽反应主要通过刺激外周C纤维释放递质引起咳嗽反射和支气管收縮反应，因此可归类于外周性咳嗽模型，外周性镇咳药物对该模型有较强的抑制作用。而电刺激喉上神经能快速传导到咳嗽中枢，反射性引起咳嗽反应，因而把它归类于中枢性咳嗽模型。IshiiR等曾将豚鼠的喉上神经刺激模型用于研究一种外周镇咳药moguisteine时发现，可待因(中枢性和外周性混合作用)静脉注射(0.54mg.kg'1)和脑室内注射(520昭)呈剂量依赖抑制电剌激喉上神经引起的咳嗽，但moguisteine无论静脉注射(4和20mg.kg")还是脑室内注射(2(Hig)都不起作用，而对枸橼酸引咳模型模型却有非常明显的作用，证明moguisteine的作用机制是属于外周性的[2]。本实验中，我们应用这一模型对甘草苷的作用部位进行了初步探讨，发现甘草苷对枸橼酸引起的豚鼠咳嗽模型和电刺激喉上神经引起的咳嗽反射模型均有明显抑制作用。这些结果表明甘草苷的镇咳作用可能是中枢性的和周围性兼顾的。权利要求1.一种甘草苷制剂，所述甘草苷的分子式C26H30O13，分子量550，其特征在于将甘草苷单独或与其它活性组份或辅料配合制成药剂，制剂组成以制成1000粒计，甘草苷40g，氢氧化钠3.2g，聚维酮15g，葡甲胺10g，微晶纤维素115g，乳糖20g。2.根据权利要求1所述的一种甘草苷制剂在制备治疗急、慢性咳嗽和痰多症状药物中的应用。3.根据权利要求1所述的一种甘草苷制剂，其特征在于所述的制剂剂型为胶囊剂、片剂或口服液体剂。全文摘要本发明提供一种甘草苷制剂，所述甘草苷分子式C<sub>26</sub>H<sub>30</sub>O<sub>13</sub>，分子量550，将甘草苷单独或与其它活性组份或辅料配合制成药剂，制剂组成以制成1000粒计，含甘草苷40g。经过初步的药理实验证实，具有较强的镇咳和祛痰作用，因此，将甘草苷单独或与其它活性组份或辅料配合制成药剂，可用于咳嗽和痰多症状的改善，可在制备治疗急、慢性咳嗽和痰多症状药物中的应用。本发明提供的甘草苷制剂来源于天然植物，可制成保健品。本发明为临床治疗提供了毒副作用较小、疗效显著的天然镇咳药物。文档编号A61K31/7042GK101518542SQ20091009749公开日2009年9月2日申请日期2009年4月7日优先权日2009年4月7日发明者吴希美,睿曹,董新威,谢强敏,谢诒诚申请人:浙江大学