三肽硼酸(酯)类化合物、其制备方法和应用的制作方法

专利名称：三肽硼酸(酯)类化合物、其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及药品生产领域，具体的，本发明涉及一类新的三肽硼酸(酯)类化合 物、其制备方法和应用，所述的三肽硼酸(酯)类化合物具有很好的蛋白酶体抑制活性，可 用于各种基因疾病，如恶性肿瘤、多种神经系统变性疾病、肌肉恶病质、糖尿病等疾病的治疗。
背景技术：
2004年10月6日，瑞典皇家科学院宣布，将本年度的诺贝尔化学奖授予以色列科 学家Aaron Ciechanover, Avram Hershko和美国科学家IrwinRose，因为他们共同发现了 泛素(ubiquitin)-蛋白酶体(proteasome)(以下简称UPP)调节的蛋白降解过程。这说明 泛素_蛋白酶体降解蛋白质这一途径在生命领域具有非凡的意义。泛素(简称Ub)是一个由76个氨基酸组成的高度保守的多肽链，分子量约 为8.5kD。很多分子、生物化学、细胞、遗传和临床研究表明，泛素-蛋白酶体降解蛋白 质这一过程对很多生理过程的调控以及人类许多重要疾病的发展过程都起到非常重要 的作用。近期发现，这一过程还对神经退行性疾病、肌萎缩侧索硬化症(Amyotrophic Lateral Sclerosis, ALS)、阿尔茨海默病(Alzheimer， disease, AD)、帕金森病 (Parkinson，disease, PD)、亨廷顿舞蹈病(Huntington，disease, HD)、皮质-纹状体-脊 髓变性病(Creutzfeld-Jacob disease, CJD)以及糖尿病的发病都有很大的影响。已经知道，蛋白酶体能调控参与细胞周期控制的蛋白质的水平，如作用于Gl期和 有丝分裂期的周期素、cdk抑制剂、肿瘤抑制因子蛋白及其它调控蛋白。目前已证实UPP依 赖的蛋白降解途径在控制细胞繁殖和细胞死亡方面起着重要的作用，而且这一途径还对神 经系统退行性疾病如PD、AD等有重大的影响。使用新的抑制剂将会揭示泛素蛋白酶体更多 新的未知功能。目前已发现的蛋白酶体抑制剂可分为肽类和非肽类两类。肽类抑制剂通常是由短 肽及其C末端连接的各种药效团构成。其中，药效团与蛋白酶体上起催化作用的氨基酸残 基(主要是N端苏氨酸上的羟基)反应生成可逆或不可逆的共价复合物，而肽链的其它部 分则选择性地与亚基活性部位的其余残基结合。目前，主要的药效团有醛基(肽醛类)、乙 烯基砜、硼酸(肽硼酸类)以及α ’，β ’ -环氧化酮等。与肽醛类抑制剂相比，肽硼酸类抑制剂更具有成药性，因为这类化合物的药效团 硼酸基或硼酸酯基的稳定性和选择性比醛基好，而且硼类物质的毒性非常低，它们可以最 终降解为环境友好的硼酸。例如，PS341，英文名Bortezomib或VELCADE，中文名硼替佐米，
又称为万珂，其结构为 是一种二肽硼酸类抑制剂，由美国千年制药公司(MillenniumPharmaceuticals) 开发的新型抗肿瘤药物，已在美国、欧盟和我国上市，主要用于治疗至少接受过二种以上疗 法的多发性骨髓瘤(multiplemyeloma，MM)。该药是目前全球唯一批准用于临床治疗的蛋 白酶体抑制剂，它能克服传统抗癌药物的耐受性，为多发性骨髓瘤的治疗带来希望。USP5, 780，454公开了新的硼酸酯类化合物P-AA1-AA1-AA3-B^1) (Z2)，其中包括 三肽硼酸酯类化合物，但仅公开了少量三肽类化合物，而且所述三肽的结构只有两类 L-Leu-L-Leu-L-Leu或L-Leu-L-Nal-L-Leu ；该专利提供的数据表明，其中二肽类化合物的 活性优于三肽类化合物。另据美国专利(5，693，617)报道，三肽醛类化合物是一类活性很好的蛋白酶体抑 制剂。但是这类抑制剂由于其药效团为醛基，使得它们的选择性和稳定性都非常差。在此基础上，本发明人通过研究发现一类新的三肽的硼酸(酯)类化合物具有更 好的蛋白酶体抑制活性。

发明内容
本发明的目的是提供一种新的、具有下述通式(I)结构的三肽硼酸(酯)类化合 物 其中，R1^R2和R3各自独立的为L-氨基酸侧链，E为H或2，3-菔烷二醇酯基。其 中所述的氨基酸为α “氨基酸，优选所述的氨基酸是天然氨基酸。优选的，R1, R2和R3各自独立的为CV6的直链或支链烷基、芳基甲基或芳杂环基甲 基，其中在芳基甲基或芳杂环基甲基的芳环上可任选的被选自Cy的直链或支链烷基、羟 基、氨基或卤素的基团所取代。在本发明化合物定义中，所用的术语"(V6的直链或支链烷基”是指含有1-6个碳 原子的、直链或支链的饱和烃基；优选具有3-4个碳原子的直链或支链烷基，例如丙基、异 丙基、丁基、异丁基或叔丁基等，更优选异丙基、异丁基或叔丁基；最优选异丁基。类似地，所 用的术语"(V4的直链或支链烷基”是指含有1-4个碳原子直链或支链的饱和烃基，例如甲 基、乙基、丙基、异丙基、异丁基或叔丁基等，优选甲基。所用的术语“芳基”是指具有6-10个碳原子的芳香族基团，优选苯基或萘基。所用的术语“芳杂环基”是指含有选自N、0、S的杂原子的五员或六员环，且所述的 五员或六员环还可与苯环稠合；例如吡咯基、吡啶基、呋喃基、噻吩基、吲哚基、苯并噻吩基、喹啉基或异喹啉基等，更优选的芳杂环基为吲哚基。上述定义中，在芳基甲基或芳杂环基甲基的芳环上可任选的被选自Cy的直链或 支链烷基、羟基、氨基或卤素的基团所取代，其中所使用的术语“卤素”是指氟、氯、溴和碘原 子，优选为氟、氯或碘原子；所述芳环上的取代基优选是甲基、羟基、氟或氯原子。优选的，其中所述的礼、R2和R3各自独立的为苯甲基、对羟基苯甲基、β -吲哚基 甲基、异丁基或2-萘基甲基等L-氨基酸侧链，更优选所述的R3基团是异丁基。根据上述定义，本发明化合物结构中的三肽结构部分的三个氨基酸优选的是下述 L-氨基酸的任意组合亮氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸和2-萘基丙氨酸；更优选的，其中 所述的R3基团是异丁基，即最靠近硼酸(酯)一端的氨基酸是亮氨酸。优选的，本发明提供了下述化合物UN-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰-L-苯丙氨酰-L-亮氨硼酸菔烷二醇酯(5a)，2、N-吡嗪甲酰基-L-萘丙氨酰-L-苯丙氨酰_L_亮氨硼酸菔烷二醇酯(5b)，3、N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰-L-酪氨酰-L-亮氨硼酸菔烷二醇酯(5c)，4、N-吡嗪甲酰基-L-酪氨酰-L-苯丙氨酰_L_亮氨硼酸菔烷5、N-吡嗪甲酰基-L-亮氨酰-L-苯丙氨酰_L_亮氨硼酸菔烷6、N-吡嗪甲酰基-L-亮氨酰-L-萘丙氨酰_L_亮氨硼酸菔烷7、N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰-L-萘丙氨酰_L_亮氨硼酸菔烷二醇酯(5g)，8、N-吡嗪甲酰基-L-萘丙氨酰-L-萘丙氨酰-L-亮氨硼酸菔烷二醇酯(5h)，9、N-吡嗪甲酰基-L-色氨酰-L-苯丙氨酰-L-亮氨硼酸菔烷二醇酯(5i)，
\1/ \1/ \1/ d θ f
5 5 5
/. /. /.
匕日 匕日 匕日
酉酉酉
醇醇醇 .1 - 1 ^10、N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰_-L-色氨酰-L--亮氨硼酸菔烷二醇酉旨(5j)，
11、N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰_-L-亮氨酰-L--亮氨硼酸菔烷二醇酉旨(5k)，
12、N-吡嗪甲酰基-L-亮氨酰-L--亮丙氨酰-L--亮氨硼酸菔烷二醇酉旨(51)，
13、N-吡嗪甲酰基-L-萘丙氨酰_-L-亮氨酰-L--亮氨硼酸菔烷二醇酉旨(5m)，
14、N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰_-L-苯丙氨酰_-L-亮氨硼酸(6a)，
15、N-吡嗪甲酰基-L-萘丙氨酰_-L-苯丙氨酰_-L-亮氨硼酸(6b)，
16、N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰_-L-酪氨酰-L--亮氨硼酸(6c)，
17、N-吡嗪甲酰基-L-酪氨酰-L--苯丙氨酰-L--亮氨硼酸(6d)，
18、N-吡嗪甲酰基-L-亮氨酰-L--苯丙氨酰-L--亮氨硼酸(6e)，
19、N-吡嗪甲酰基-L-亮氨酰-L--萘丙氨酰-L--亮氨硼酸(6f)，
20、N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰_-L-萘丙氨酰_-L-亮氨硼酸(6g)，
21、N-吡嗪甲酰基-L-萘丙氨酰_-L-萘丙氨酰_-L-亮氨硼酸(6h)，
22、N-吡嗪甲酰基-L-色氨酰-L--苯丙氨酰-L--亮氨硼酸(6i)，
23、N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰_-L-色氨酰-L--亮氨硼酸(6 j)，
24、N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰_-L-亮氨酰-L--亮氨硼酸(6k)，
25、N-吡嗪甲酰基-L-亮氨酰-L--亮丙氨酰-L--亮氨硼酸(61)，和
26、N-吡嗪甲酰基-L-萘丙氨酰_-L-亮氨酰-L--亮氨硼酸(6m) ο其中括号中的编号为该化合物在本发明的描述中所使用的编号。本发明的另一目的是提供了一种上述通式化合物的制备方法，该方法包括以吡嗪 甲酸为起始原料，依次引入二种所需的氨基酸，然后引入所需第三个氨基酸的硼酸酯，可得到本发明上述通式的硼酸酯类化合物；如果需要制备相应的硼酸化合物，可将上述硼酸酯 化合物水解。其中所述的R3基团是异丁基，即最靠近硼酸(酯)一端的氨基酸是亮氨酸的通式 化合物可以吡嗪甲酸为起始原料，按照下述合成路线制备 在上述方法中主要包括逐个引入氨基酸的步骤，而每一引入氨基酸的步骤包括首 先与所述氨基酸的甲酯反应，然后再水解得到相应的氨基酸化合物，上述引入氨基酸的过 程可按照肽合成反应中常规的方法进行。其中所用的原料亮氨酸硼酸酯(在本文中简称为LeuBdiol-NH2)可按照文献 中公开的方法(Hall, D. G. , Structure, properties, andpreparation of boronic acid derivatives, WILEY-VCH Verlag GmbH & Co. KgaA，Weinheim. 2005，p8)制备；也可按照下
述合成路线制备 其中所使用的原料顺式手性菔烷二醇〔(1S，2S，3R，5S) -2，6，6-三甲基二环 [3. 1. 1]庚烷_2，3-二醇〕是一种立体位阻较大的、非常有效的手性试剂。该试剂可在市场 上买到，也可以用现有技术已知的方法合成。
本发明的另一目的是提供了一种药物组合物，该药物组合物是一种蛋白酶体抑制 剂，可用于治疗由蛋白酶体介导的疾病，例如可用于治疗恶性肿瘤、多种神经系统变性疾 病、肌肉恶病质或糖尿病等。该组合物以本发明的通式(I)的三肽硼酸(酯)类化合物为 活性成分，其中还可以任意地含有药用载体。具体的，该组合物含有治疗有效量的本发明通式⑴化合物，以及一种或多种药 学上可接受的载体。优选的，本发明组合物中活性成分的含量是0.5%-99%，药用载体的 含量是-99. 5%。本发明的组合物可以制成各种常规的药用剂型，例如制成口服、肠胃外给药的形 式，所述肠胃外给药的形式例如是各种注射给药、局部给药、吸入给药、直肠给药或植入给 药的形式。优选注射给药形式，例如注射剂、冻干粉针制剂或输液剂型；或口服给药形式，例 如是片剂、胶囊、颗粒剂或其它适于口服的液体制剂形式如溶液、乳液、悬浮剂等。优选的口 服制剂是片剂，所述片剂可以制成包衣或肠溶形式，优选所述的口服制剂被制成缓释或定 量释放的形式。为了制备适用的剂型，可根据需要在活性成分中添加一种或多种药用载体，所述 的药用载体包括各种常规的药用辅剂，例如赋形剂、填充剂、稀释剂、崩解剂、表面活性剂、 湿润剂、防腐剂、甜味剂、色素等。根据疾病的类型、严重的程度以及患者的状况，例如性别、年龄、体重等选用合适 的剂型和施用剂量，通常成人施用剂量在l-200mg/kg体重/天，优选为l-50mg/kg体重/ 天之间。本发明的药用组合物和该组合物的各种制剂可按照制药领域已知的常规方法、使 用常规的药用载体制备。本发明的三肽硼酸(酯)类化合物对蛋白酶体具有良好的抑制活性，可作为一种 新的蛋白酶体抑制剂使用，用于治疗恶性肿瘤、多种神经系统变性疾病、肌肉恶病质或糖尿 病等疾病。本发明的另一目的是提供了通式(I)化合物和含有所述化合物的药物组合物的 药用用途。即本发明提供了通式(I)化合物以及含有上述化合物的药物组合物在制备蛋 白酶体抑制剂中的应用，特别是该化合物或药物组合物在制备治疗恶性肿瘤、多种神经系 统变性疾病、肌肉恶病质或糖尿病等疾病的药物中的应用。所述的疾病包括各种恶性肿瘤、 神经退行性疾病、肌萎缩侧索硬化症、阿尔茨海默病、帕金森病、亨廷顿舞蹈病、皮质_纹状 体-脊髓变性病以及糖尿病；其中所述的恶性肿瘤是白血病、胃癌、肝癌或鼻咽癌。本发明的另一目的是提供了一种治疗各种恶性肿瘤、神经退行性疾病、肌萎缩侧 索硬化症、阿尔茨海默病、帕金森病、亨廷顿舞蹈病、皮质_纹状体_脊髓变性病或糖尿病的 方法，该方法包括将治疗有效量的通式(I)化合物施用于需要这种治疗的患者；其中所述 的恶性肿瘤是白血病、胃癌、肝癌或鼻咽癌等。试验证明，本发明的三肽硼酸(酯)对蛋白酶体抑制作用具有很好的活性，其抗肿 瘤活性高于已知药物硼替佐米，可用于替代硼替佐米治疗恶性肿瘤，特别是用于治疗多发 性骨髓瘤。在对HL-60人白血病、BGC-823人胃癌、Bel_7402人肝癌和KB人鼻咽癌的测试 模型实验中，本发明化合物也显示出良好的活性。
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具体实施例方式下面通过具体的实施方式对本发明的技术方案作进一步的说明，其中例举的实施 例仅是对本发明的说明，而不以任何方式限制本发明的保护范围。制备实施例1 L-苯丙氨酸甲酯盐酸盐在IOOmL反应瓶中加入25mL无水甲醇，冰盐浴冷却到-10°C以下，搅拌下缓慢滴加 SOCl2 (7mL, 96mmol)，然后于-10°C 以下反应 IOmin,再加入 L-苯丙氨酸(1. 65g，IOmmol)，低 温反应40min，撤去冰盐浴，于室温反应48h，减压浓缩，再加入15mL甲醇，反复减压浓缩两 次。加入50mL乙醚，放置，析出针状结晶，过滤干燥，粗产品再用甲醇-乙醚重结晶，得白色 晶体 L-苯丙氨酸甲酯盐酸盐 2. 0g，收率 95%，[a ]D25 =+37 . 2° (c = 1，CH3CH2OH)，m. p. 155-158°C制备实施例2 N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酸甲酯将制备实施例1的产物L-苯丙氨酸甲酯盐酸盐(1. 12g，5. 2mmol)溶于20mL THF 中，用N-甲基吗啉(NMM) (0. 7mL，6. 2mmol)中和，于冰浴下冷却备用。在另一反应瓶中加入 吡嗪甲酸(0. 65g，5. 2mmol)，用THF20mL溶解，冰水浴冷却，于0°C加入二环己基碳二亚胺 (DCC) (1. 07g，5. 2mmol)，HOBt (0. 84g，6. 2mmol)，于 0°C反应 40min，然后加入已制备并冷却 好的中和完毕的L-苯丙氨酸甲酯盐酸盐的THF溶液，TLC检测反应，2h后反应完毕，过滤除 去不溶物N，N’ - 二环己基脲(D⑶)，滤液加入乙酸乙酯150mL，分别用5% NaHCO3溶液、10% 的柠檬酸溶液、5% NaHCO3溶液、饱和食盐水溶液洗涤(2X20mL)。乙酸乙酯层用无水Na2SO4 干燥，过滤，减压蒸除溶剂，得化合物1.378，产物为白色固体，收率98%，!11. . :152-155°C。 1H-WR(O)Cl3, 300MHz) δ 3. 26 (-CH2, m, 2H)，3. 75 (-CH3, s, 3H)，5. 09 (-CH, m, 1H)，7. 15
7.32 (-Ph, m，5H) ,8. 23 (-C0NH, d, 1H) ,8. 52 (-Pyz, d, 1H) ,8. 74 (-Pyz, d, 1H) ,9. 37 (-Pyz, s, 1H)。制备实施例3 N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酸将制备实施例2的产物N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酸甲酯(1.0g，3. 51mmol)用 IOmL丙酮溶解，冰水浴下慢慢滴加2N NaOH至pH值为12 13，继续保持冰水浴中反应， TLC检测，2h后反应完毕。冰水浴下滴加盐酸至pH值为2 3，产生大量白色固体，过滤 产生的沉淀，用水、乙醚洗涤后晾干，得白色产品0.89g，收率93.6%，m.p. 166-1690C0 1H-WR (DMS0-d6，300MHz) δ 3. 23 (-CH2, m, 2H)，4. 74 (-CH, m, 1H)，7. 16 7. 25 (-Ph, m, 5H)，
8.74 (-C0NH, t, 1H) ,8. 86 8. 89 (-Pyz, t，2H)，9. 14 (-Pyz, d, 1H)，13. 06 (-C00H, s, 1H)。制备实施例4 N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰-L-苯丙氨酸甲酯将L-苯丙氨酸甲酯盐酸盐(0. 8g，3. 69mmol)用20mL THF溶解，用NMM(0. 49mL， 4. 43mmol)中和盐酸，于冰浴下冷却备用。在另一反应瓶中加入制备实施例3的产物N-吡 嗪甲酰基-L-苯丙氨酸(1.(^，3.69讓01)，用201^ THF溶解，冰水浴冷却，于0°C加入二 环己基碳二亚胺(DCC) (0. 76g,3. 69mmol), HOBt (0. 60g,4. 42mmol)于 0 °C 反应 40min，然 后加入已制备并冷却好的中和完毕的L-苯丙氨酸甲酯盐酸盐的THF溶液，TLC检测反应， 2h后反应完毕，过滤除去不溶物D⑶，滤液加入乙酸乙酯80mL，分别用5 % NaHCO3溶液、 10%的柠檬酸溶液、5% NaHCO3溶液、饱和食盐水溶液洗涤(2X20mL)。乙酸乙酯层用无 水Na2SO4干燥，过滤，减压蒸除溶剂，得化合物1. 52g，产物为白色固体，收率95.6%，m. p. 111 113°C。1H-Wr(CdcI3JOOMHz) δ 3. 04(-CH2，m，2H)，3· 18 (-CH2, d，2Η)，3· 69 (-CH3, s,3H)，4. 82 (-CH, m, 2H)，6. 36 (-C0NH, d, 1H)，6. 92 7. 30 (-Ph, m, 10H)，8. 26 (-C0NH, d, 1H)， 8. 54 (-Pyz, d, 1H) ,8. 76 (-Pyz, d, 1H) ,9. 33 (-Pyz, s, 1H)。制备实施例5 N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰-L-苯丙氨酸将制备实施例4的产物N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰-L-苯丙氨酸甲酯(1. 52g， 3. 52mmol)用IOmL丙酮溶解，冰水浴下慢慢滴加2N NaOH至pH值为12 13，继续保持冰 水浴中反应，TLC检测，2h后反应完毕。冰水浴下滴加盐酸至pH值为2 3，产生大量白 色固体，过滤产生的沉淀，用乙醚洗涤后晾干得白色产品1.33g，收率90.5%，白色固体熔 点194-196 "C ；1H-WR (DMS0-d6，300MHz) δ 12. 88 (s，1Η)，9. 10 (s，1H)，8. 90-8. 87 (m，1H)， 8. 77-8. 73 (m, 1H)，8. 75-8. 65 (m, 2H)，7. 24-7. 14 (m, 10H)，4. 84-4. 80 (m, 1H)，4. 53-4. 50 (m, 1H), 3. 14-2. 89(m，4H)。制备实施例6 N-吡嗪甲酰基-L-萘丙氨酸以萘丙氨酸甲酯烟酸盐为原料，合成及后处理同制备实施例3。得红褐色粘稠固 体 2. 96g，收率 97. 4%。1H-NMR(DMS0-d6，300MHz) δ 4. 78(_CH，s，1H)，6. 92 7. 54 ( = CH, m，5H)，8· 74 (-C0NH, -Pyz, d，2H)，8· 87 (-Pyz, s, 1H)，9· 15 (-Pyz, s, 1H)，10. 86 (-NH, s, 1H)， 13. 04(-C00H, s，1H)。制备实施例7 N-吡嗪甲酰基-L-萘丙氨酰-L-苯丙氨酸甲酯以上一制备实施例6的产物N-吡嗪甲酰基-L-萘丙氨酸为原料，合成方法及后处 理同制备实施例4。得黄色粘稠状物1.89g，收率94.2%。产品直接用于下步皂化。制备实施例8 N-吡嗪甲酰基-L-萘丙氨酰-L-苯丙氨酸以制备实施例7的产物2b为原料，合成方法及后处理同制备实施例5。收率77%， 白色固体，熔点196-197°C ；1H-WR(DMS0-d6，300MHz) δ 9. 07 (s, 1H) ,8. 86 (d, J = 2. 7Hz, 1H)，8. 70 (d, J=L 2Hz, 1H)，8. 68-8. 62 (m, 2H)，7. 83-7. 72 (m, 4H)，7. 45-7. 37 (m, 3H)， 7. 24-7. 17 (m, 5H)，4. 93-4. 91 (m, 1H)，4. 53-4. 50 (m, 1H)，3. 24-2. 98 (m, 4H).制备实施例9 N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰-L-酪氨酸甲酯以酪氨酸甲酯盐酸盐及制备实施例3产物为原料，合成方法及后处理同制备实施 例4。得黄色粘稠状物，收率92%。产品直接用于下步皂化。制备实施例10 N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰-L-酪氨酸以制备实施例9产物2c为原料，合成方法及后处理同制备实施例5。得泡沫状固 体，收率83 %。，直接用于下一步反应。制备实施例11 N-吡嗪甲酰基-L-酪氨酸以N-吡嗪甲酸和酪氨酸甲酯盐酸盐为原料，合成方法同制备实施例3，得乳白色 粘稠状固体，收率89%，产品直接用于下步反应。制备实施例12 N-吡嗪甲酰基-L-酪氨酰-L-苯丙氨酸甲酯以制备实施例11产物为原料，合成方法及后处理同制备实施例4。得黄色粘稠状 物2. 26g，收率95. 5%。产品直接用于下步皂化。制备实施例13 N-吡嗪甲酰基-L-酪氨酰-L-苯丙氨酸以制备实施例12产物为原料，合成方法及后处理同制备实施例5。得泡沫状固体， 收率86%。直接用于下一步反应。制备实施例14 L-亮氨酸甲酯盐酸盐
以L-亮氨酸为原料，合成方法及后处理同制备实施例1。得白色晶体1. 7g，收率 94%，[a ]D25 =+20 . 2° (c = 1，CH3OH)，m. p. :149_150°C。制备实施例15 N-吡嗪甲酰基-L-亮氨酸甲酯以制备实施例14产物为原料，合成方法及后处理同制备实施例2。得红色粘 稠液体 2. 47g,收率 98 %。1H-Wr(CdcI3JOOMHz) δ 0. 97 0. 99 (-CH3, m，6H)，1. 69
1.83 (-CH2, -CH, m, 3H)，3. 78 (-CH3, s，3H)，4. 82 4. 90 (-CH, m, 1H)，8. 15 (-C0NH, d, 1H)， 8. 57 (-Pyz, q, 1H)，8· 78 (-Pyz, d, 1H)，9· 40 (-Pyz, s，1Η)。制备实施例16 N-吡嗪甲酰基-L-亮氨酸以制备实施例15的产物N-吡嗪甲酰基-L-亮氨酸甲酯为原料，合成方法及后 处理同制备实施例3。得白色固体2. 22g，收率为95%，m. p. 36-380C0 1H-NMR(DMS0_d6， 300MHz) δ 0· 88 0· 91 (-CH3, t, 6Η)，1· 57 1. 64 (-CH2, m, 2H)，1. 81 1. 91(_CH，m，1H)， 4. 48 4. 55 (-CH, m, 1H)，8. 77 (-C0NH, q，1H)，8. 90 8. 95 (-Pyz，dd,2H) ,9. 19 (-Pyz，d, 1H), 12. 8K-COOH, s，lH)。制备实施例17 N-吡嗪甲酰基-L-亮氨酰-L-苯丙氨酸甲酯以制备实施例16产物N-吡嗪甲酰基-L-亮氨酸为原料，合成方法及后处理 同制备实施例4。产物为黄色粘稠状物，收率93%。1H-NMR (⑶Cl3，300MHz) δ 0.92 0. 96 (-CH3, dd, 6H)，1. 64 1. 79 (-CH2, -CH, m, 3H)，3. 02 3. 20 (-CH2, m, 2H)，3. 74 (-CH3, s，3H)，4. 64 (-CH, m, 1H)，4. 88 (-CH, dd, 1H)，6. 64 (-C0NH, d, 1H)，7. 03 7. 10 (-Ph, m, 5H)， 8. 03 (-C0NH, d，1H)，8. 55 (-Pyz，q，1H)，8. 79 (-Pyz，d，1H)，9. 36 (-Pyz，d，1H)。制备实施例18 N-吡嗪甲酰基-L-亮氨酰-L-苯丙氨酸以制备实施例17产物2e为原料，合成方法及后处理同制备实施例18。得粘稠状 固体，收率 95. 6% ；1H-WR (DMS0-d6，300MHz) δ 12. 61 (s，1Η)，9. 20 (s，1Η)，8. 98-8. 91 (m， 1H)，8. 77 (s，1H)，8. 66-8. 62 (m, 1H)，8. 46-8. 44 (m, 1H)，7. 22-7. 15 (m, 5H)，4. 61 (s，1H)， 4. 48-4. 46 (m, 1H)，3. 10-2. 87 (m, 2H)，1. 98-1. 92 (m, 1H)，1. 62-1. 59 (m, 2H)，0. 92-0. 88 (m, 6H).制备实施例19 N-吡嗪甲酰基-L-亮氨酰-L-萘丙氨酸甲酯以制备实施例16产物N-吡嗪甲酰基-L-亮氨酸为原料，合成及后处理同制备实 施例4。得黄色粘稠状物2. lg，收率93%。产品直接用于下步皂化。制备实施例20 N-吡嗪甲酰基-L-亮氨酰-L-萘丙氨酸以制备实施例19产物为原料，合成方法及后处理同制备实施例5。得白色固体，收 率 83%，m. p. jg-lOOtVH-WlUDMSO-dj；，300MHz) δ 9. 16 (s，1H)，8· 89(d, J = 2. 4Hz, 1H)， 8. 70 (d, J=L 5Hz, 1H)，8. 58 (d, J = 9. OHz，1H)，8. 46 (d, J = 7. 8Hz, 1H)，7. 79-7. 73 (m, 4H)，4. 60-4. 57 (m, 1H)，4. 55-4. 53 (m, 1H)，1. 54-1. 45 (m, 3H)，0. 83-0. 79 (m, 6H).制备实施例21 N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰-L-萘丙氨酸甲酯以制备实施例3产物为原料，合成方法及后处理同制备实施例4。得黄色粘稠状物
2.3g，收率93.5%。产品直接用于下步反应。制备实施例22 N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰-L-萘丙氨酸以制备实施例21产物为原料，合成方法及后处理同制备实施例5。得白色固体，收 率 79%, m. p. :191-193°C ；1H-WR(DMS0_d6，300MHz) δ 9. 07 (d, J=L 2Hz, 1H)，8· 86 (d, J
12=2. 7Hz, 1H)，8. 68 (d, J = 1. 5Hz, 1H)，8. 64-8. 56 (m，2H)，7. 81-7. 72(m，4H)，7. 42-7. 40 (m, 3H)，7. 17-7. 11 (m, 5H)，4. 83-4. 79 (m, 1H)，4. 59-4. 55 (m, 1H)，3. 26-3. 02 (m, 4H).制备实施例23 N-吡嗪甲酰基-L-萘丙氨酰-L-苯丙氨酸甲酯以制备实施例6产物为原料，合成方法及后处理同制备实施例4。得黄色粘稠状物 1.898，收率94.2%。产品直接用于下步皂化。制备实施例24 N-吡嗪甲酰基-L-萘丙氨酰-L-萘丙氨酸以制备实施例23产物为原料，合成方法及后处理同制备实施例5。得淡黄色固 体，收率 72 %，熔点208-209 "C ；1H-WR(DMS0_d6，300MHz) δ 9. 04(s，1H)，8· 84(d, J = 2. 4Hz, 1Η)，8. 73-8. 69 (m, 1Η)，8. 67-8. 66 (m, 2Η)，7. 82-7. 69 (m, 8H)，7. 74-7. 69 (m, 6H)，
7.44-7. 35 (m, 6H)，4. 95-4. 91 (m, 1H)，4. 64-4. 60 (m, 1H)，3. 28-3. 08 (m, H)。制备实施例25 L-色氨酸甲酯盐酸盐以L-色氨酸为原料，合成方法及后处理同制备实施例1。得白色晶体3.02g，收率 93%，[a ]D25 =+16. 5° (c = 1，CH3OH)，m. p. :206_208°C。制备实施例26 N-吡嗪甲酰基-L-色氨酸甲酯以N-吡嗪甲酸和制备实施例25产物为原料，合成方法及后处理同制备实施例2。 得红褐色粘稠状物3. 18g，收率96%，直接用于下步反应。制备实施例27 N-吡嗪甲酰基-L-色氨酸以制备实施例26为原料，合成方法及后处理同制备实施例3。得红褐色粘稠固体 2. 96g，收率 97. 4 %。1H-WR (DMS0-d6，300MHz) δ 4. 78 (-CH, s，1Η)，6· 92 7· 54 ( = CH， m，5H)，8· 74 (-C0NH, -Pyz, d，2H)，8· 87 (-Pyz, s, 1Η)，9· 15 (-Pyζ, s, 1Η)，10. 86 (-ΝΗ, s, 1Η)， 13. 04(-C00H, s，1Η)。制备实施例28 N-吡嗪甲酰基-L-色氨酰-L-苯丙氨酸甲酯以制备实施例27产物为原料，合成方法及后处理同制备实施例4。得黄色粘稠物
2.13g，收率96.8%，未经分离，直接用于皂化。制备实施例29 N-吡嗪甲酰基-L-色氨酰-L-苯丙氨酸以制备实施例28为原料，合成方法及后处理同制备实施例3。收率96. 4%，白 色固体，熔点74-76 "C ；1H-WR(DMS0-d6，300MHz) δ 10. 79 (s, 1H)，9. 13 (s，1H)，8. 86 (s, 1H)，8. 68 (s，1H)，8. 62-8. 59 (m, 2H)，7. 54-6. 84 (m, 10H)，4. 84 (s, 1H)，4. 58-4. 50 (m, 2H)，
3.20-3. 09 (m, 4H)。制备实施例30 N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰-L-色氨酸甲酯以制备实施例3产物为原料，合成方法及后处理同制备实施例4。得淡黄色油状液 体 1. 65g，收率 94. 8%。1H-Wr(CdcI3JOOMHz) δ 3. 13 3. 24 (_CH2，m，4Η)，3. 68 (_CH3，s， 3H)，4· 90 (-CH, q, 1H)，5. 06(_CH，m，1H)，6· 79(_NH，s，1H)，6· 91 7. 34(-Ph, = CH，m，10H)，
8.26 8. 33 (-C0NH, t，2H)，8. 43 (-Pyz, d, 1H)，8. 63 (-Pyz, d, 1H)，9. 14 (-Pyz, s，1H)。制备实施例31 N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰-L-色氨酸以制备实施例30产物为原料，合成方法及后处理同制备实施例5。得淡黄色固体， 收率 93. 7 %，m. ρ· 106-108 "C ；1H-WR(DMS0_d6，300MHz) δ 12. 59 (s, 1H)，10. 87 (s, 1H)，
9.16-9. 12 (m, 1H)，8. 89-8. 87 (m, 1H)，8. 75-8. 72 (m, 1H)，8. 66-8. 59 (m, 2H)，7. 56-6. 96 (m, 10H)，4. 88-4. 85 (m, 1H)，4. 59-4. 56 (m, 1H)，3. 22-3. 05 (m, 4H).
制备实施例32 N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰-L-亮氨酸甲酯以制备实施例3产物为原料，合成方法及后处理同制备实施例4。得白色粘稠固体
1.20g，收率94. 5%，直接用于下一步皂化。制备实施例33 N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰-L-亮氨酸以制备实施例32产物为原料，合成方法及后处理同制备实施例5。收率93.9%，淡 黄色固体，熔点142-144°C ；1H-WR (DMS0-d6，300MHz) δ 12. 70 (s, 1H) ,9. 15-9. 12 (m, 1H), 8. 90-8. 88 (m, 1H)，8. 79-8. 74 (m, 1H)，8. 68-8. 65 (m, 1H)，8. 57-8. 53 (m, 1H)，7. 27-7. 15 (m, 5H) ,4. 90-4. 82 (m, 1H) ,4. 32-4. 25 (m, 1H) , 3. 21-3. 04(m，2H)，1. 68-1. 54(m，3H)， 0. 94-0. 91 (m, 3H)，0. 87-0. 85 (m, 3H).制备实施例34 N-吡嗪甲酰基-L-亮氨酰-L-亮氨酸甲酯以制备实施例16产物N-吡嗪甲酰基-L-亮氨酸为原料，合成方法及后处理同制 备实施例4。得黄色粘稠状物1.69g，收率91.8%。产品直接用于下步皂化。制备实施例35 N-吡嗪甲酰基-L-亮氨酰-L-亮氨酸以制备实施例34产物为原料，合成方法及后处理同制备实施例5。得粘稠固体，收 率83% .，直接用于下一步反应。制备实施例36 N-吡嗪甲酰基-L-萘丙氨酰-L-亮氨酸甲酯以制备实施例6产物为原料，合成方法及后处理同制备实施例4。得黄色粘稠状物 1.8g，收率92.5%。产品直接用于下步皂化。制备实施例37 N-吡嗪甲酰基-L-萘丙氨酰-L-亮氨酸以制备实施例36产物为原料，合成方法及后处理同制备实施例5。得白色固体，收 率 78%，熔点 AS-lOOtVH-WlUDMSO-dj；，300MHz) δ 9. 09 (d, J = 1. 2Hz, 1H)，8· 86 (d, J =
2.7，1Η)，8. 71-8. 70 (m, 2Η)，8. 57 (d, J = 7. 8Hz, 1H)，7. 84-7. 45 (m, 4H)，7. 43-7. 42 (m, 3H)， 5. 02-4. 96 (m, 1H)，4. 32-4. 28 (m, 1H)，1. 66-1. 58 (m, 3H)，0. 89 (d, J = 6. 6Hz,3H)，0. 83 (d, J =6. 3Hz,3H).制备实施例38(化，25，31 ，55)-2，6，6-三甲基二环[3.1. 1]庚烷 _2，3-二醇将Me3N0.2H20(11.3g，102^ol)用 16mL 水溶解，搅拌下再加入 α -菔烯(13. 2g， 96. 9mmol)、74mL叔丁醇、7. 4mL吡啶和四氧化锇(60mg，0. 236mmol)。然后通氮气，10分钟 后，加热至回流。TLC检测，15小时反应完毕。自然降至室温，加入NaHSO3(1. 2g，11. 5mmol)， 适量NaCl饱和水溶液。分出有机相，水层用乙醚提取(3X20mL)，合并有机相，无水硫酸钠 干燥。浓缩后柱层析分离(乙酸乙酯石油醚=1 30)，得白色固体15. 33g，收率92.9%， [a JD20 = -IO. 79° (c = 5. 5，甲苯)，m. p. Jz-SrCtj1H-WR(CDCl3JOOMHz) δ 0. 94(-CH3, s，3Η)，1. 28 (-CH3, s，3Η)，1. 32 (-CH3, s，3Η)，1. 34 1. 38 (-CH2, d, 1H)，1. 66 (-CH2, m, 1H)，1. 93 (-CH, m, 1H)，2. 01 (-CH2, t, 1H)，2. 20 (-CH, m, 1H)，2. 33 (H2O, s，2H)，2. 49 (-CH2, m, 1H) ,4. 00(-CH, q, 1H) ； 13C-NMR(CDCl3, 300MHz) δ 24. 11,27. 80,28. 00,29. 54,38. 21, 8. 99，40. 51，53. 98，69. 26，73. 88 ；元素分析 CltlH18O2 计算值C，70. 55 ；H, 10. 66 ；实测值C， 70. 55 ；H, 10. 67。制备实施例39 二氯甲基硼酸二甲酯于250mL瓶中加入无水二氯甲烷(4. 26mL，66mmol)和120mL无水四氢呋喃，通 入氮气，降温至-110 °C，然后慢慢滴加正丁基锂的环己烷溶液(25. 2mL,60mmol)，滴加完毕后低温继续搅拌1小时，再加入硼酸三甲酯(7. 5mL，66mmol)，继续低温搅拌1小时后加 入5N HCl溶液12mL，自然升至室温。反应液转入分液漏斗，分出有机相，水层用乙醚提取 (2 X IOmL)，合并有机相，无水硫酸钠干燥。蒸除溶剂得白色粘稠状固体9. 3g，收率99. 4%。 产品未经纯化直接用于下步反应。制备实施例40 二氯甲基硼酸-α-菔烷二醇酯于25mL瓶中加入制备实施例38产物α -菔烷二醇(3. 23g, 0. 019mmol)和制备 实施例38产物二氯甲基硼酸二甲酯(5. 38g，0.035mmol)，5mL THF溶解，室温下搅拌。TLC 检测，18h后反应完毕。柱层析分离(乙酸乙酯石油醚=1 20)得无色液体4. 92g，收 率 98.5%。1H-Wr(CdcI3JOOMHz) δ 0. 85 (-CH3, s，3Η)，1. 21 (-CH2, t，1H)，1. 31 (-CH3, s, 3H)，1. 47 (-CH3, s，3H)，1. 92 1. 97 (-CH2, CH, m, 2H)，2. 15 (-CH, t，1H)，2. 25 2. 43 (-CH2, m，2H)，4. 47 (-CH，q，1H)，5. 40 (-CH，s, 1H) ； 13C-WR(CDCl3，75MHz) δ 23. 92,26. 18，26. 93， 28. 18,34. 98,38. 31,39. 16,51. 09,79. 41,88. 08。MS(EI) :m/z 262. 0 (M+),计算值m/z 262. O0制备实施例41 2-甲基-4-氯-丁基硼酸-α-菔烷二醇酯将制备实施例40产物二氯甲基硼酸- α -菔烷二醇酯(1. 18g，4. 49mmol)用12mL 乙醚溶解，室温下搅拌。通入氮气，并降温至_78°C，然后慢慢滴加新制的叔丁基格式试剂 的乙醚溶液(6mL，4. 50mmol)，滴加完毕后，加入干燥好的ZnCl2粉末(0. 44g，3. 25mmol)。 自然升至室温，继续室温下搅拌。TLC检测，18h后反应完毕。过滤除去ZnCl2及反应生 成的MgBr2，浓缩后柱层析分离(乙酸乙酯石油醚=1 200)得无色液体1. 13g，收率 88. 5 V0o 1H-WR (CDCl3, 300MHz) δ 0. 85-0. 94 (-CH3, m, 9H)，1. 19 (-CH, q, 1H)，1. 30 (-CH3, s，3H)，1. 42 (-CH3, s，3H)，1. 62 (CH, m, 1H)，1. 75-1. 95 (-CH2, m, 4H)，2. 10 (-CH, t，1H)， 2. 21-2. 40 (-CH2, m,2H) ,3. 54(-CH, m, 1H) ,4. 37 (-CH, q，1H)。13C-NMR (CDCl3, 75MHz) δ 21. 18,22. 84,23. 93,25. 54,26. 27,26. 97,28. 37,35. 24,38. 18,39. 27,42. 72,51. 11， 86. 63 ；MS (EI) :m/z 284. 2 (M+)，计算值m/z 284. 6。制备实施例42 2-甲基-4-氨基-丁基硼酸-α -菔烷二醇酯盐酸盐 (LeuBdiol-NH2)于150mL茄形瓶中加入LiN (SiMe3)2 (9. 5mL，17. 98讓01)，通入氮气，并降温 至-78°C，然后用注射器慢慢加入含有制备实施例41产物2-甲基-4-氯-丁基硼酸_ α -菔 烷二醇酯(4. 7g，16. 54mmol)的THF溶液，滴加完毕后，自然升至室温，继续室温下搅拌。TLC 检测，20h后反应完毕。减压蒸除溶剂，并用乙醚带两次，加50mL石油醚溶解，过滤除去不溶 物。将滤液降温至_78°C，加入65mL氯化氢的乙醚溶液，然后自然慢慢升至室温，出现大量 乳白色固体。冷冻使完全析出结晶，过滤，乙醚洗涤产品得乳白色固体2. Sg,收率56. 2%0 产品未经纯化，直接用于下步反应。实施例IN-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰-L-苯丙氨酰-L-亮氨硼酸菔烷二醇酯(5a)々将0. 42g (Immol)制备实施例5的N-吡嗪甲酰
15基-L-苯丙氨酰-L-苯丙氨酸溶于7ml四氢呋喃，在_20°C下加入HOBt 0. 16g(1.2mmol) 和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐0. 29g(1.5mm0l)，反应30分钟后，加入 0. 3g(Immol)制备实施例 42 得到的 LeuBdiol-NH2 和 N, N- 二异丙基乙胺 0. 26g(2mmol)， 在-20°C下搅拌过夜。TLC检测反应完毕，过滤除去不溶物，减压蒸除溶剂，用20mL乙酸乙 酯溶解，分别用10%的柠檬酸溶液、5% NaHCO3溶液、饱和食盐水溶液洗涤(3X 15mL)。乙 酸乙酯层用无水硫酸镁干燥，过滤，浓缩后柱层析分离得0. 54g化合物4a，为白色固体，收 率 82 %。熔点 78-80 "C ；1H-WR (CDCl3, 500MHz) δ 9. 31-9. 26 (m, 1H) ,8. 82-8. 77 (m, 1H)， 8. 58-8. 54 (m, 1H)，8. 23-8. 19 (m, 1H)，7. 32-6. 99 (m, 10H)，6. 48-6. 42 (m, 1H)，5. 72-5. 67 (m, 1H) , 4. 80-4. 77 (m, 1H) ,4. 59-4. 55 (m, 1H) ,4. 36-4. 33 (m, 1H) , 3. 19-3. 09 (m, 4H)， 2. 90-2. 88 (m, 1H)，2. 36-2. 22 (m, 2H)，2. 08-2. 03 (m, 1H)，1. 94-1. 86 (m, 2H)，1. 47-1. 39 (m, 3H)，1. 30-1. 28(m，3H)，1. 29-1. 21 (m，3H)，0· 90-0. 83(m，9H) ；13C-NMR(CDCl3,125MHz) 169. 86，169. 77，163. 21，147. 63，144. 33，143. 52，142. 69，136. 25，135. 94，129. 22，129. 13， 128. 81，128. 45，127. 28，126. 72,84. 72,54. 73,54. 27,51. 50,39. 41,39. 37,38. 37,38. 03， 37. 84,37. 64,35. 68,28. 53,28. 44,27. 05,26. 36,26. 32,25. 58,23. 96,22. 36 ；MS(EI) :m/z 665. 6 (M)+. 实施例2 N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰-L-苯丙氨酰_L_亮氨硼酸(6a)
丙酮溶解，加入NH4OAC溶液(0. 1N, 11. 6mL)，最后加入NaIO4 (0. 32g，1. 5mmol)，室温搅拌反 应。TLC检测显示，IOh后反应完全。向反应溶液中加入NaOH溶液(2N，0. 5mL)，CH2Cl2萃 取。用浓盐酸调节溶液PH值约为3。用012(12萃取(3 Xl5mL)，合并有机相，无水Na2SO4干 燥，过滤，蒸干得到淡黄色固体 5a 0. 19g，收率 72. 1%。m. p. :112_114°C。1H-NMR(O)Cl3, 300MHz) δ 0. 88 (-CH3, d，3H)，0. 90 (-CH3, d，3H)，1. 25 2. 17 (-CH2, -CH, -B (OH)2, m, 5H)， 2. 96 3. 17 (-CH, m, 5H)，4. 65 4. 77 (-CH, m, 2H)，6. 38 6. 42 (-C0NH, m, 1H)，6. 84 7. 07 (-Ph, -C0NH, m，6H)，7. 24 7. 29 (-Ph, m，5H)，8. 18(_C0NH，s, 1H)，8· 53(-Pyz, s, 1H) ,8. 77(-Pyz, s, 1H) ,9. 15 9. 26 (-Pyz, m, 1Η) ；13C-NMR(CDCl3, 75MHz) δ 22. 51, 23. 17，25. 66，37. 30，37. 54，51. 70，53. 64，54. 96，126. 75，127. 41，128. 41，128. 54，128. 88， 129. 20，135. 66，135. 89，142. 72，143. 32，144. 28，147. 75，163. 32，163. 58，169. 74，170. 01 ； MS (ESI) :m/z 530. 4907 (M-H) ；FT-MS :m/z 532. 27179 (M+H)，计算值532. 27258。
实施例3N-吡嗪甲酰基-L-萘丙氨酰-L-苯丙氨酰_L_亮氨硼酸菔烷二醇酯(5b)
。以制备实施例8产物为原料，合成及后处理同实施例
1，得白色固体，87%收率，熔点:98-100°Co 1H-Wr(Cdci3JOOMHz) δ 9. 13 (s, 1H) ,8. 74 (d,
z0H将实施例 1 产物 5a(0. 33g，0. 5mmol)用 12mL 的J = 2. 4Hz, 1H) ,8. 48 (d, J = 2. 1Hz，1H)，8. 23-8. 20 (d，J = 7. 5Hz，1H)，7. 80-7. 69 (m， 4H)，7. 46-7. 43 (m, 2H)，7. 35 (d, J = 8. 4Hz, 1H)，7. 02-6. 95 (m, 5H)，6. 53-6. 45 (m, 1H)， 4. 65-4. 57 (m, 1H)，4. 29-4. 27 (m, 1H)，3. 40-3. 26 (m, 2H)，3. 13-3. 02 (m, 1H)，2. 95-2. 84 (m, 1H)，2. 35-2. 27 (m, 1H)，2. 20-2. 15 (m, 1H)，2. 04-1. 99 (m, 1H) , 1. 89-1. 80 (m, 1H)， 1. 39-1. 23 (m, 12H) ,0. 87-0. 83(m，9H) ；13C_NMR (CDC13，75MHz) :170. 39，169. 85，163. 19， 147. 57，144. 32，143. 59，142. 71，136. 13，133. 51，133. 46，132. 47，129. 22，128. 56，128. 35， 128. 01，127. 66，127. 57，127. 51，126. 65，126. 24，125. 84,54. 55,54. 42,53. 64,51. 35， 39. 70，39. 55，38. 19，37. 85，37. 74，35. 50，28. 61，27. 08，26. 24，25. 36，25. 21，24. 03， 22. 97,22. 01 ；HRMS 计算值 C42H51BN505 (M+l)+716. 3978，实测值 716. 3986.
实施例4 N-吡嗪甲酰基-L-萘丙氨酰-L-苯丙氨酰-L-亮氨硼酸(6b)/\ ^OH在100ml圆底瓶中，将实施例3产物硼酸酯
\0H
5b (0. 357g 0. 5mmol)溶于无水二氯甲烷中，滴加1N的三溴化硼二氯甲烷溶液2. 5ml，冰浴 下搅拌，2小时后，TLC检测反应结束，滴加50ml水扑灭反应，二氯甲烷萃取(15mlX4次)， 合并有机相，饱和食盐水洗(15ml X 4次)，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，乙醚二氯甲烷重结 晶得乳白色固体0. 18g。产率 63. 5%。熔点:134-135°Co 咕-匪R(CDC13，300MHz) 8 9. 15 (s， 1H)，8. 73(d, J = 2. 4Hz, 1H)，8. 46(d, J = 2. 1Hz, 1H)，8. 24-8. 17 (m, 1H)，7. 76-7. 66(m，4H)， 7. 44-7. 40 (m, 3H)，7. 32-7. 25 (m, 1H)，6. 90-6. 86 (m, 5H)，6. 52-6. 46 (m, 2H)，4. 81-4. 67 (m, 2H) ,3. 31-3. 26 (m, 1H) ,3. 11 (d, J = 6. 9Hz，2H)，2. 93-2. 89 (m, 1H)，1. 92 (s，br,2H)， 1. 55-1. 21 (m，3H)，0. 85-0. 82(m，6H) ；13C_NMR (CDC13，75MHz) :172. 96，169. 99，163. 61， 147. 70，144. 24，143. 30，142. 70，137. 28，135. 61，133. 47，133. 19，132. 49，129. 13，128. 64， 128. 35，128. 07，127. 64，127. 55，127. 11,126. 71,126. 39，125. 92,54. 88,51. 86,39. 85， 39. 34,37. 43,37. 23，36. 88,25. 68,23. 12,22. 46. HRMS 计算值 C32H36BN505 (M_l广580. 2727， 实测值580. 2736。 实施例5 N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰-L-酪氨酰-L-亮氨硼酸菔烷二醇酯(5c)YJ Y S bn K以制备实施例10产物为原料，合成及后处理同实
OH
施例1制备，得淡黄色固体，收率81%。熔点；llQ-UOt。1!!-匪R(CD30D，300MHz) 8 9. 18(s， 1H) ,8. 68 (d, J = 10. 2Hz, 1H) ,8. 48 (s, 1H) ,8. 26 (d, J = 7. 5Hz，1H)，7. 82-7. 74 (m，1H)， 7. 27-7. 18 (m, 5H)，6. 80-6. 76 (m, 3H)，6. 49-6. 40 (m, 2H)，4. 82-4. 61 (m, 2H)，4. 29-4. 27 (d, J =8. 1Hz, 1H)，3. 13-3. 06 (m, 2H)，2. 95-2. 84 (m, 3H)，2. 35-2. 27 (m, 2H)，2. 04-2. 02 (m, 1H)， 1. 85-1. 80(m，2H)，1. 43-1. 26 (m,9H) ,0. 88-0. 83 (m, 9H) ； 13C_NMR(CD30D，75MHz) :170. 17，163. 36，155. 62，147. 61，143. 96，143. 44，142. 83，135. 95，130. 37，129. 21，128. 78，127. 47， 127. 23，126. 61，126. 44，115. 34,85. 30,54. 86,54. 74,52. 91,51. 54,40. 16,39. 82,39. 64， 38. 10,37. 57,36. 97,35. 80,35. 69,28. 73,27. 10,26. 28,25. 41,24. 04,23. 06,22. 97， 22. 03,21. 95 ；HRMS 计算值 C38H49BN506 (M+1)+682. 3770，实测值 682. 3767。
实施例6 N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰-L-酪氨酰-L-亮氨硼酸(6c) fiY V Y V Y、^^以实施例5产物5c为原料，合成及后处理同实施
例 4，得黄色固体，产率 56. 3 %。熔点298-300 °C。屯-匪1 (003( ，300MHz) 8 9. 13(s, 1H) ,8. 78 (t, J = 2. 4Hz，1H)，8. 67-8. 66(dd，J = 1. 2，2. 4Hz，1H)，7. 23—7. 16 (m，5H)， 7. 16-7. 01 (m, 2H)，6. 66-6. 18 (m, 2H)，4. 80-4. 73 (m, 2H)，3. 20-3. 18 (m, 1H)，3. 08-3. 02 (m, 3H)，2. 68-2. 56 (m, 1H)，1. 62-1. 54 (m, 2H)，1. 33-1. 26 (m, 2H)，1. 14-1. 04 (m, 2H)， 0. 89-0. 83 (m, 6H) ；13C_WR(CD30D，300M) -.111. 69，173. 05，165. 13，164. 95，157. 77，157. 68， 148. 79，145. 59，144. 96，144. 79，144. 49，137. 82，131. 47，131. 35，130. 34，129. 56，127. 97， 127. 40，127. 16,116. 41,56. 11,55. 90,52. 87,52. 67,40. 70,38. 82，38. 49,37. 65,37. 30， 26. 83，26. 61，23. 89，23. 69，22. 31，21. 83. HRMS 计算值 C28H34BN506(M_l广546. 2529，实测值 546. 2527。 实施例7 N-吡嗪甲酰基-L-酪氨酰-L-苯氨酰L-亮氨硼酸菔烷二醇酯(5d) 八以制备实施例13产物为原料，按照实施例1的合成
方法制备，得淡黄色固体，收率80%。熔点90-92°C。屯-匪R(CD30D，300MHz) 8 9. 29 (s, 1H)，8. 74 (d, J = 2. 4Hz, 1H)，8. 50 (d, J = 2. 1Hz, 1H)，8. 26 (d, J = 7. 8，1H)，7. 11-6. 99 (m, 8H)，6. 74 (d, J = 8. 4Hz,2H)，6. 74-6. 71 (m, 1H)，6. 50-6. 42 (m, 1H)，4. 70-4. 26 (m, 1H)， 4. 51-4. 27 (m, 1H)，4. 29-4. 17 (m, 2H)，3. 07-2. 93 (m, 5H)，2. 37-2. 31 (m, 1H)，2. 21-2. 16 (m, 1H) , 2. 06-2. 03 (m, 1H)，1. 90-1. 80 (m，2H)，1. 40-1. 26 (m，6H) ,0. 90-0. 79 (m, 12H)； 13C-NMR(CD30D，75MHz) :171. 36，170. 18，163. 03，155. 47，147. 50，144. 29，143. 74，142. 73， 135.95，130.29，130.15，129.31,128.50，127.51,126.83,116.47,116.64,85.33,55.08， 53. 19，51. 55，39. 73，39. 64，39. 40，38. 23，38. 16，37. 44，37. 14，35. 67，28. 73，28. 54， 27. 14,26. 30,25. 44,24. 07,22. 98,22. 02 ；HRMS 计算值 C38H49BN506 (M+1)+682. 3770，实测值 682.3795。实施例8 N-吡嗪甲酰基-L-酪氨酰-L-苯丙氨酰L-亮氨硼酸(6d)
18oh以实施例7产物5d为原料，合成及后处理方法同实
施例 4，得黄色固体，产率 71. 5%0 熔点:219-221°C 屯-匪1 (。03( ，300MHz) 8 9. 15 (s， 1H)，8. 78 (d, J = 2. 4Hz, 1H)，8. 66 (d, J = 2. 1Hz, 1H)，7. 24-7. 19 (m, 5H)，7. 13-7. 00 (m, 2H)， 6. 97-6. 62 (m, 2H)，4. 80-4. 71 (m, 2H)，3. 11-3. 06 (m, 3H)，2. 93-2. 87 (m, 1H)，2. 64-2. 54 (m, 1H) , 1. 62-1. 54 (m，2H) , 1. 40-1. 29 (m, 2H) , 1. 16-1. 11 (m, 2H) ,0. 92-0. 81 (m, 6H)； 13C-NMR(CD30D，75MHz) -.111. 20，173. 18，164. 92，157. 51，148. 68，145. 62，144. 93，144. 73， 137. 17，136. 96，131. 36，130. 46，130. 33，129. 69，129. 62，128. 25，128. 19，116. 32,56. 34， 56. 17,52. 61,40. 77,38. 46,38. 11,37. 82,26. 62,23. 86,21. 91. ESI :MS(ESI)实测值 (M+Na/z) +570. 2168，计算值570. 2500 (M+Na)。实施例9 N-吡嗪甲酰基-L-亮氨酰-L-苯氨酰L-亮氨硼酸菔烷二醇酯(5e)以制备实施例18产物为原料，按照实施例1的合成方法制备，收率87%。
得白色固体，m. p. 63-65 °C 'H-NMR^DC^, 500MHz)
8 9. 32 (s, 1H)，8. 78-8. 67 (m, 1H)，8. 55-8. 21 (m, 1H)，8. 10-7. 95 (m, 1H)，7. 15-6. 99 (m, 6H)， 6. 04-5. 96 (m, 1H)，4. 65-4. 34 (m, 2H)，4. 30-4. 15 (m, 1H)，3. 22-3. 01 (m, 2H)，2. 37-2. 22 (m, 2H)，2. 12-2. 04 (m, 1H)，1. 93-1. 90 (m, 2H)，1. 76-1. 63 (m, 3H)，1. 48-1. 39 (m, 1H)，1. 28 (s, 3H)，1. 29-1. 22 (m，3H)，0. 94-0. 90(m，6H)，0. 86-0. 83(m，9H) ； 13C_NMR(CDC13，125MHz) 171. 35，170.30，163. 15，147. 47，144. 38，143. 72，142.63，136.451，129. 10，128.37， 126. 66，84. 55，54. 50，52. 02，51. 45，40. 73，38. 31，38. 03，37. 95，37. 77，35. 63，28. 48， 27. 00,26. 26,25. 52,24. 78,23. 91,22. 89,22. 29,21. 78 ；MS (EI) :m/z 631. 6(M)+。
实施例10 N-吡嗪甲酰基-L-亮氨酰-L-苯丙氨酰L-亮氨硼酸(6e)
NH 、 / t
HN
lo
\
:NH
o
4§11以实施例9产物5e为原料，合成方法及后处理
OH
同实施例2。蒸干得到黄色固体19. 7mg，收率68. 4%。m. p. 113-116°C。力-匪1 (0)(13， 300MHz) S 0. 78 0. 82 (_CH3，m, 13H)，1. 19 1. 57 (_CH2，_CH，_B (OH) 2，m, 7H)，1. 95 (-CH, d, 1H)，2. 89 3. 09 (-CH, -CH2, m, 3H)，4. 28 4. 41 (-CH, m, 1H) ,4. 61 4. 76 (-CH, m, 1H)，6. 92 7. 02 (-Ph, -C0NH, m, 6H)，7. 19 7. 25 (-C0NH, m, 1H)，7. 96 8. 02 (-C0NH, m, 1H) ,8. 47(-Pyz, s, 1H) ,8. 72(-Pyz, s，lH)，9. 16 9. 25 (_Pyz，m，1H) ；MS (ESI)实测值m/
19z496. 3710 (M-H)，计算值497. 2809。 实施例11 N-吡嗪甲酰基-L-亮氨酰-L-萘氨酰L-亮氨硼酸菔烷二醇酯(5f)
以制备实施例20产物为原料，合成及后处理方法
同实施例 1,收率 85%，白色固体，熔点140-142 °C .咕-匪1 (0)(13，300MHz) 8 9. 195 (d, J = 1. 5Hz，lH)，8. 71(d，J = 2. 4Hz, 1H) ,8. 40 (t, J = 1. 2Hz，1H)，7. 93 (d，J = 8. 1Hz, 1H)，7. 66-7. 61 (m, 4H)，7. 36-7. 32 (m, 3H)，6. 75 (d, J = 7. 8Hz, 1H)，6. 00 (d, J = 4. 8,1H)， 4. 78-4. 71 (m, 1H)，4. 59-4. 53 (m, 1H)，4. 27 (dd, J = 8. 7Hz, 1H)，3. 23 (d, J = 6. 6Hz,2H)， 3. 14-3. 10 (m, 1H)，2. 28-2. 20 (m, 1H)，2. 17-2. 08 (m, 1H)，2. 00-2. 05 (m, 1H)，1. 87-1. 57 (m, 6H)，1. 41-1. 27(m，9H)，0. 92-0. 90(m，6H)，0. 83-0. 77(m，9H) ；13C_NMR (CDC13，75MHz) 171. 05，170. 61, 163. 13，147. 52，144. 24，143. 45，142. 59，142. 47，133. 933，133. 25， 132. 22，128. 13，127. 99，127. 48，127. 26，125. 95，125. 52,85. 83,53. 06,51. 98，51. 88， 51. 32，40. 63，39.68，39.56，38. 19，35. 48，28.56，27. 10，26. 23，25. 33，25. 22，24.78， 24. 04，22. 89,21. 80 ；HRMS 计算值 C39H53BN505 (M+l) +682. 4134，实测值 682. 4155。
实施例12 N-吡嗪甲酰基-L-亮氨酰-L-萘丙氨酰-L-亮氨硼酸(6f)
以实施例11产物5f 为原料，合成及后处理方
法同实施例4，得乳白色固体，产率56. 3 %，熔点157-159 °C。力-匪R(CDC13，300MHz) 8 9. 13-9. 10 (m, 1H)，8. 67 (s, 1H)，8. 36 (s, 1H)，7. 98-7. 94 (m, 2H)，7. 59-7. 29 (m, 7H)， 7. 22-7. 19 (m, 2H)，4. 98-4. 84 (m, 1H)，4. 41-4. 37 (m, 1H)，3. 46-3. 35 (m, 2H)，3. 24-3. 10 (m, 1H)，1. 71-1. 25(m，8H)，0. 88-0. 78 (m, 12H) ； 13C_NMR(CDC13，75MHz) -.111. 48，163，92，147， 65，144，15，143. 31，143. 07，142. 56，133.56，133.22，132.25，129. 16，128. 69，128.24， 127. 51，127. 10，125. 98，125. 58,52. 95,52. 77,51. 91,41. 12,40. 23,36. 76,25. 68,24. 72， 23. 12，22. 83，22. 44，21. 69. HRMS 计算值 C29H37BN505 (M_l广546. 2893，实测值 546. 2906。
实施例13 N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰-L-萘氨酰-L-亮氨硼酸菔烷二醇酯(5g)
o \ H 9
20
C
B
/ /
NH
V
N no
SH
N n ^ n K^r^i以制备实施例22产物为原料，合成制备及后 j|N N
处理方法同实施例1，得白色固体，收率86%，熔点:97-98°Co i-NMR (⑶Cl3，300MHz) 实施例14N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰-L-萘丙氨酰-L-亮氨硼酸(6g)
以实施例13产物5g为原料，合成方法及后处理同
实施例4，得乳白色固体，产率53%，熔点137-138°C。屯-匪R(CDC13，300MHz) 8 9. 90 (s, 1H)，8. 61 (s，1H)，8. 26 (s, 1H)，8. 09-7. 98 (m, 1H)，7. 50-7. 23 (m, 12H)，7. 19-7. 07 (m, 1H)， 6. 73-6. 56 (m, 2H)，4. 88-4. 76 (m, 1H)，4. 72-4. 67 (m, 1H)，3. 33-3. 28 (m, 1H)，3. 14-3. 12 (d, J = 6. 3Hz，2H)，3. 02-2. 97(m，1H)，2. 04(s，br，2H)，1. 51-1. 42(m，3H)，0. 87-0. 80(m，6H)； 13C-NMR(CDC13，75MHZ) :173. 10，170. 06，163. 51,147. 59，143. 90，142. 95，142. 86，142. 64， 142. 52，135. 90，135. 70，133. 45，133. 23，133. 07，132. 14，129. 29，128. 88，128. 24，127. 94， 127. 46，127. 14，125. 90，125. 53,54. 94,51. 96,42. 92,39. 98,37. 26,36. 92,25. 69,23. 14， 22. 56 ；HRMS 计算值 C32H35BN505 (M_l广580. 2736，实测值 580. 2729。 实施例15N-吡嗪甲酰基-L-萘丙氨酰-L-萘氨酰-L-亮氨硼酸菔烷二醇酯(5h)
以制备实施例24产物为原料，合成及后
处理同实施例1，得白色固体，收率82 %，熔点136-137 °C。t-NMR (CD30D, 300MHz) 8 9. 10 (s，1H) ,8. 63 (d, J = 2. 4Hz，1H)，8. 26 (d, J = 2. 4Hz, 1H) ,8. 12-8. 02 (m, 1H)， 7. 81-7. 57(m，6H)，7. 53-7. 32(m，8H)，7. 20-7. 17 (dd, J = 1. 8,8. 4Hz，2H)，6. 51-6. 49 (m, 1H) ,6. 00 (d, J = 5. 1Hz，1H)，4. 87-4. 72(m，2H)，4. 28-4. 24(dd，J = 1. 5，8. 7Hz，1H)， 3. 33-3. 31 (d, J = 6. 3Hz,2H)，3. 24-3. 22 (m, 1H)，3. 07-3. 00 (m, 1H)，2. 33-2. 25 (m, 1H)， 2. 18-2. 13 (m, 1H)，2. 04-2. 00 (m, 1H)，1. 87-1. 67 (m, 2H)，1. 36-1. 25 (m, 8H)，0. 87-0. 74 (m, 12H) ； 13C-NMR(CD30D，75MHz) :170. 46，169. 85，163. 22，147. 46，144. 00. 143. 16，142. 61，
21142. 49，133. 58，133. 45，133. 34，132. 50，132. 13，128. 58，127. 97，127. 71，127. 57，127. 44， 126. 31. 125. 90，125. 52,85. 76,54. 41,53. 30,51. 35,39. 58,38. 19,37. 98,37. 59,35. 50， 28. 59，27. 10，26. 24，25. 33，25. 18，24. 04，21. 96 ；HRMS 计算值 C46H53N505 (M+1) +766. 4134，实 测值 766. 4148。实施例16 N-吡嗪甲酰基-L-萘丙氨酰-L-萘丙氨酰-L-亮氨硼酸(6h)以实施例15产物5h为原料，合成方法及后处理同实施例4，得乳白色 固体，产率 72. 1 %,熔 ^ 145-146 °C。iH-WI^CDClySOOMHz) S 8. 95(s，1H)，
8. 54(s，lH)，8. 16(s，lH)，8. 17-8. ll(m，lH)，7. 74-7. 16 (m,
14H)，7. 08-6. 95 (m, 2H)，6. 87-6. 50 (m, 2H)，4. 95-4. 87 (m, 1H)，4. 79-4. 68 (m, 1H)， 3. 28-3. 26 (m, 2H)，3. 00-2. 86 (m, 1H)，2. 33 (s, br, 2H)，1. 38-1. 35 (m, 3H)，0. 81-0. 79 (m, 6H) ； 13C-NMR(CDC13，75MHz) :170. 18，169. 61,163. 56，147. 51，143. 79，141. 90，142. 55， 133. 42，133. 126，133. 01, 132. 46，132. 07，128. 58，128. 09，127. 39，127. 14，127. 01， 126. 32，125. 94，125. 83，125. 49，54. 79，51. 52，39. 78，37. 49，37. 30，36. 95，25. 64，23. 09， 22. 39，22. 19 ；HRMS 计算值 C36H37BN505 (M-l)"630. 2893，实测值 630. 2895。
实施例17N-吡嗪甲酰基-L-色氨酰-L-苯丙氨酰-L-亮氨硼酸菔烷二醇酯(5i)
以制备实施例26产物为原料，合成及后处理同实
施例 1，得白色固体，收率 78%，熔点:127-129°Co 屯-匪 R(CDC13，300MHz) 8 9. 24(s,lH), 8. 76 (d, J = 2. 4Hz,lH),8. 51 (d, J = 2. 4Hz，1H)，8. 50-8. 46 (m，1H)，8. 22-8. 14 (m，1H)， 7. 40-7. 38 (m, 5H)，7. 01-6. 88 (m, 4H)，6. 78-6. 58 (m, 1H)，6. 09-5. 97 (m, 1H)，5. 75-5. 71 (m, 2H) ,4. 82-4. 75 (m，2H) , 3. 51-3. 45 (m, 1H) , 3. 31-3. 01 (m，4H)，1. 25-1. 23 (m, 10H)， 0. 99-0. 89 (m, 8H)，0. 88-0. 85 (m, 6H) ；MS (EI) m/z703. 6 (M_l) \
实施例18 N-吡嗪甲酰基-L-色氨酰-L-苯丙氨酰-L-亮氨硼酸(6i)
OH以实施例17产物5i为原料，合成及后处理同实施
例2，蒸干得到黄色粘稠固体11. 4mg,收率49. 2%0力-匪R(CDC13，300MHz) 8 0. 79 (_CH3，d, 6H)，1. 40 1. 60(-CH2，-CH，m，3H)，1. 97 2. 13 (_CH2，_B (OH) 2，m，10H) ,3. 15 3. 19 (-CH,m, 1H)，3. 53 3. 58 (-CH, m, 1H)，3. 75 3. 98 (-CH, m, 1H)，4. 87 4. 98 (-CH, m, 1H)， 5. 05 (-CH, s，1H)，6. 89 (-C0NH, m, 1H)，7. 16 7. 19 (_Ph，吲哚，m, 9H)，8. 06 (-C0NH, d, 1H)， 8. 64(-Pyz, d, 1H) ,9. 17(-Pyz, s, 1H) ,9. 28(-Pyz, d, 1H) ,9. 72 (-NH, s, 1H)。实施例19 N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰-L-色氨酰-L-亮氨硼酸菔烷二醇酯(5j)以制备实施例30产物为原料，合成及后处理同实施例1，得淡黄色固
体，收率 79 %，熔点153-155 °C。iH-NMlUCDCly
300MHz) 8 9. 08 (s, 1H) ,8. 73-8. 69 (m, 1H) ,8. 48 (s，1H)，8. 34 (s，1H) ,8. 11-7. 94 (m, 1H)， 7. 32-7. 21 (m, 5H)，7. 08-6. 88 (m, 4H)，6. 62-6. 42 (m, 1H)，6. 01 (s, 1H)，5. 65-5. 58 (m, 2H)， 4. 38-4. 29 (m, 2H)，3. 20-3. 01 (m, 4H)，1. 40-1. 24 (m, 10H)，0. 99-0. 89 (m, 8H)，0. 83-0. 80 (m, 6H) ；MS (EI)m/z 704. 7 (M+)。 实施例20 N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰-L-色氨酰-L-亮氨硼酸(6 j)
以实施例19产物5j为原料，合成方法及后处 理同实施例2，蒸干得到黄色粘稠固体49. 3mg,收率42. 4 %。'H-NMR(CDC13，300MHz) 8 0. 81(-CH3, m，6H)，1. 23 1. 45(_CH2，_CH，m, 3H)，1. 89 2. 07(_CH2，_B(0H)2，m, 10H)， 3.05 3. 11(-CH, m，lH)，3. 33 3. 48 (-CH, m，1H)，3. 45 3. 78 (-CH, m，lH)，4. 64 4. 81 (-CH, m, 1H)，5. 25 (_CH，d, 1H)，6. 76 (-C0NH, m, 1H)，7. 08 7. 16 (_Ph，吲哚，m, 9H)， 8. 12(-C0NH, d，lH)，8. 57(-Pyz, d，lH)，9. 07(-Pyz, d，1H)，9. 21 (_Pyz，d，lH)，9. 28 (-NH, d, 1H)。 实施例21N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰-L-亮氨酰-L-亮氨硼酸菔烷二醇酯(5k)
以制备实施例32产物为原料，合成及后处理同
实施例 1，得白色固体，收率 81%。熔点68-70°C。屯-匪 R(CDC13，300MHz) 8 9. 33(s,lH), 8. 76-8. 73 (d, 1H)，8. 54 (s, 1H)，8. 29-8. 10 (m, 1H)，7. 29-7. 25 (m, 5H)，6. 39-6. 31 (m, 2H)， 4. 82-4. 79 (m, 1H)，4. 44-4. 41 (m, 1H)，4. 30-4. 27 (m, 1H)，3. 22-3. 19 (m, 3H)，2. 32-2. 17 (m, 3H)，2. 05-2. 02 (m, 1H)，1. 89-1. 27 (m, 14H) ,0. 96-0. 83 (m, 15H) ；MS (EI)m/z 631. 6 00。 实施例22 N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰_L亮氨酰_L_亮氨硼酸(6k)
以实施例21产物5k为原料，合成方法及后处理
同实施例2，蒸干得到黄色固体16. 7mg,收率73. 2 %，熔点116-118 °C。力-匪_。13， 300MHz) 8 9. 30-9. 21 (m, 1H)，8. 74 (s, 1H)，8. 47 (s, 1H)，8. 33-8. 29 (m, 1H)，7. 32-7. 22 (m, 6H)，6. 99-6. 91 (m, 1H)，4. 93-4. 57 (m, 2H)，3. 21 (s，2H)，2. 85-2. 58 (m, 1H)，2. 18-1. 25 (m, 8H) ,0. 96-0. 82 (m, 12H) ；MS (ESI)实测值m/z 496. 3977 (M_H)，计算值497. 2809。
实施例23 N-吡嗪甲酰基-L-亮氨酰-L-亮氨酰_L_亮氨硼酸菔烷二醇酯(51)
以制备实施例34产物为原料，合成方法及
后处理同实施例1，得粘稠状固体，收率87%。屯-匪_。13，300MHz) 6 9.41(s,1H), 8. 76-8. 65 (m, 1H)，8. 56-8. 45 (m, 1H)，8. 18-8. 10 (m, 1H)，5. 43-5. 38 (m, 1H)，4. 71-4. 50 (m, 1H) ,4. 38-4. 32 (m, 1H) ,4. 07-3. 97 (m, 2H) , 3. 86-3. 84 (m, H) , 2. 52-2. 08 (m, 3H)， 2. 04-1. 90 (m, 6H)，1. 67-1. 60(m，2H)，1. 41-1. 25 (m, 10H)，0. 99-0. 83(m，21H) ；MS (EI)m/z 597. 5(M)+。 实施例24 N-吡嗪甲酰基-L-亮氨酰-L-亮氨酰_L_亮氨硼酸(61)
/OH以实施例23产物51为原料，合成方法及后处理
同实施例2，得到黄色粘稠固体14. 4mg，收率62. 8%。力-匪1 _13，300MHz) S 0. 81 0. 97 (-CH3, m，18H)，l. 19 2. 82(-CH2, _CH，_B(0H)2，m, 11H) ,2. 85 2. 91(-CH, m，1H)， 4. 53(-CH，s，1H), 4. 69 4. 86(_CH，m，1H) ,6. 99 (-C0NH, d, 1H)，7. 16 (-C0NH, d, 1H) ,8. 06 8. 28 (-C0NH，m，1H)，8. 50(-Pyz, s，lH)，8. 71(-Pyz, s，lH)，9. 30(-Pyz, s, 1H) ；MS (ESI)实测 值:m/z 462. 3825 (M_H)，计算值463. 2966。 实施例25N-吡嗪甲酰基-L-萘丙氨酰-L-亮氨酰_L_亮氨硼酸菔烷二醇酯(5m)
以制备实施例36产物为原料，合成及后处理方
法同实施例 1，得白色固体，收率 81%。熔点:99-100°C . iH-NMlUCDCly 300MHz) 8 9. 31(s, 1H) ,8. 73 (s, 1H) ,8. 49 (d, J = 1. 8Hz，1H)，8. 33 (d，J = 7. 5Hz，1H)，7. 66-7. 58 (m，4H)， 7. 44-7. 38 (m, 3H)，6. 48-6. 36 (m, 2H)，4. 94-4. 85 (m, 1H)，4. 42-4. 30 (m, 1H)，4. 25-4. 16 (m,
241H) ,3. 39-3. 37 (d, J = 6.3Hz，2H)，3. 19-3. 11 (m，1H)，2. 35-2. 27 (m，1H)，2. 20-2. 15 (m, 1H) , 1. 89-1. 84 (m, 2H) , 1. 68-1. 61 (m, 2H) , 1. 37-1. 36 (m, 3H) , 1. 53-1. 43 (m, 4H)， 1. 28-1. 21 (m，3H)，0. 94-0. 89(m，6H)，0. 83-0. 79 (m, 9H) ；13C_NMR(CDC13，75MHz) -.111. 81， 170. 10，163. 298，147. 59，144. 34，143. 72，142. 77，133. 46，132. 47，128. 56，128. 12， 127. 62，127. 16，126. 18，125. 80,85. 60,54. 70,54. 53,51. 40,51. 20,50. 96,40. 89,40. 08， 39. 85，39. 56，38. 18，38. 09，35. 58，28. 59，27. 08，26. 25，25. 26，25. 46，24. 51，24. 03， 23. 00,22. 71,22. 15,21. 94 ；HRMS 计算值 C39H53BN505 (M+l)+682. 4134，实测值 682. 4152.
实施例26 N-吡嗪甲酰基-L-萘丙氨酰_L_亮氨酰_L_亮氨硼酸(6m)
J = 2. 1Hz, 1H) ,8. 45 (d, J = 1. 8Hz, 1H) ,8. 40 (d, J = 7. 5Hz，1H)，7. 74-7. 66 (m，4H)， 7. 45-7. 42 (m, 3H)，7. 37 (d, J = 8. 7Hz, 1H)，5. 05-4. 93 (m, 1H)，4. 53-4. 45 (m, 1H)，3. 38 (d, J = 8. 7Hz，2H)，2. 98-2. 83 (m, 1H)，1. 99 (s，br,2H)，1. 80-1. 51 (m, 1H)，1. 50-1. 29 (m, 6H), 0. 86-0. 74 (m, 12H) ； 13C_NMR(CDC13，75MHz) :170. 59，170. 45，163. 83，147. 74，144. 27， 143. 61，142. 77，133. 46，133. 27，132. 47，128. 59，128. 12，127. 63，127. 05，126. 24，125. 84， 54. 76,39. 88,37. 74，25. 78,24. 61,24. 48,23. 03,22. 82,22. 63,21. 60,21. 45. MS (ESI)实测 值:m/z 462. 3825 (M_H)，计算值463. 2966。 试验实施例1三肽硼酸(酯)化合物的蛋白酶体抑制作用采用荧光肽的方法测定蛋白酶体的活性，用SuC-leu-leu-Val-Tyr-AMC(SuC代表 琥珀酰，AMC代表7-氨基-4-甲基香豆素，从SIGMA购买)测定糜蛋白酶样活性(ChT_L)； 用Z-Ala-Arg-Arg-AMC(Z代表苄氧羰基，从Calbiochem购买)测定胰蛋白酶样活性(T-L)； 用Z-leu-leu-Glu-代表0萘酰胺，从SIGMA购买)测定多肽-谷氨酰-多肽水 解酶活性(PGPH)。所述的活性测定方法是37°C下将1 y g从大鼠肝脏中提取20S蛋白酶体用含有不 同浓度的化合物、50 u M的荧光肽和20mM三羟甲基氨基甲烷盐酸盐的100 u L溶液分别培养 一小时，在380/440nm和335/410nm的激发/发射波长下分别用Fluostar OPTIMA和BMG Germany光谱荧光剂测定AMC及0 NA物质的释放的荧光，用0. 1 % DMS0作为溶剂空白。比 较溶剂空白的荧光来计算抑制率。所述的试验以抗肿瘤药物硼替佐米(bortezomib)(白血 病治疗药)，即PS341作为阳性对照的比较化合物。试验结果见下表1。表1本发明化合物的蛋白酶体抑制作用
试验实施例2体外抗肿瘤活性初筛试验本实施例所采用的试验方法是药学领域常规的抗肿瘤活性试验方法，例如可参见 下述文献(J. Immunol Method, 1983，65，55)。测试模型A :MTT法(HL-60人白血病)；B :SRB法(BGC-823人胃癌)；C :SRB法 (Bel-7402人肝癌)；D :SRB法(KB人鼻咽癌)。用本发明的实施例1-26的化合物进行上述试验，试验结果分别列于表2-5。其中 试验结果的表示方法是“+++”表示3个剂量的抑制率均大于50% ；“++”表示2个剂量的 抑制率大于50% ；“ + ”表示1个剂量的抑制率大于50%。表2对HL-60人白血病细胞生长的抑制活性(MTT法)
表3对BGC-823人胃癌细胞生长的抑制活性(SRB法)
化合物 编号不同剂量下的测试效应(抑制率％)结果0.05 ^M0.5|iM5b68.5994.7696.54+++6b56.3593.6996.69+++5c3.1955.9996.09++6c2.6425.1097.70+5d23.6493.6397.85++6d4.3346.6697.55+5f38.2789.1583.02++6f80.3095.5296.79+++5g77.6295.4395.89+++6g76.8695.5597.09+++5h55.0088.9795.40+++6h44.9488.0697.58++5m45.9784.5397.18++6m60.3181.9396.99+++ 表4对Bel-7402人肝癌细胞生长的抑制活性(SRB法)
27
表5对KB人鼻咽癌细胞的生长抑制活性(SRB法)
化合物 编号不同剂量下的测试效应(抑制率％)结果0.05nM0.5^iM5(aM5b40.3595.0695.78++6b23.3391.4796.64++5c1.8429.8391.36+6c-13.57-5.1695.40+5d0.8373.2394.76++6d3.2317.3496.20+5f3.7493.4195.26++6f32.1195.6997.80++5g62.7995.5096.51+++6g59.4395.9796.66+++5h20.8391.2594.62++6h14.2591.7797.40++5m8.5985.6196.17++6m40.8486.4294.69++以上试验数据表明(1)本发明的三肽硼酸(酯)具有很好的体外抗肿瘤活性。多 数化合物在5 u M浓度下可达到> 90%的抑制率，甚至在0. 05 u M浓度下个别化合物仍能达 到> 50. 0%的抑制率；⑵保护基菔烷二醇的脱除与否，对活性影响很小。试验实施例3体外抗肿瘤活性(IC5(1)
根据上述抗肿瘤细胞活性初步筛选试验结果，选择其中活性较好的化合物在 HL-60(早幼粒细胞白血病细胞株)、BXPC-3(人胰腺癌细胞株)、U266(多发性骨髓瘤细胞 株)及BGC-823(人胃癌细胞株)四种肿瘤细胞株上测定了它们的IC5Q值。其中前三种肿 瘤细胞株由American Type Culture (Manassas, VA)获得，BGC-823 (人胃癌细胞株)从中 国药科大学获得。试验方法HL_60细胞于含有20%胎牛血清的IMDM培养基上培养，培养温度 37°C，培养环境含5% C02 ；BGC-823细胞及BXPC-3细胞在含有10%胎牛血清的RPMI1640 培养基上培养，培养温度37°C，培养环境含5% C02 ；U266细胞在含有15%胎牛血清的RPMI 1640培养基上培养，培养温度37°C，培养环境含5% C02。采用标准的MTT法测定细胞的生长。在96孔板的每个孔中加入150 y L (含3000 个细胞)的分散液并使其生长，24小时后，将10个50 yL含不同浓度药物的介质加入相应 的孔中，继续培养72小时。然后在37°C下将20 y L含有5mg/ml MTT的溶液加入到每个孔 中培养4小时。在4°C下1000转/分离心5分钟，将上层介质小心弃去。将沉淀物溶于 lOOii L的DMS0中，在540nm波长下用Infinite M200 (Tecan, Austria)酶标仪测定吸光度。结果用IC5(I值来表示，取三次独立测定的平均值。结果见表6。表6部分化合物的IC5Q值 结果显示，多数化合物显示出比PS341更好的选择性，而且在一些肿瘤瘤株上的 活性明显高于PS341。如除6c外，其它化合物对BGC-823细胞的生抑制率均高于PS341 ；6f 对3种细胞的生长抑制率均高于PS341。试验实施例4体内抗肿瘤活性动物ICR小鼠，雌雄各半(18-22克)，由北京医科大学动物部提供。肿瘤细胞株小鼠H22由天然药物及仿生药物国家重点实验室药理组细胞库提{共。方法取小鼠肿瘤细胞，经处理后将细胞稀释为5xl06/ml。在无菌条件下，按 0. 2ml/只，接种于小鼠左前肢腋下。接种24h后，分组给药，每天口服给药一次，连续10天。 第12天剥瘤称重，计算每组平均瘤重、标准差及P值。表7化合物6f和6m的体内抗肿瘤活性 NS 空白组；***P < 0. 001 ；*P < 0. 05以上体内抗肿瘤活性试验结果表明，本发明三肽硼酸化合物的活性与硼替佐米 (PS341)相当，但毒性明显降低，尤其是化合物6g毒性更低，有望研发成为效果更好、毒副 作用更低的蛋白酶体抑制剂。以上已经详细描述了本发明的实施方案，对本领域技术人员来说很明显可以做很 多改进和变化而不会背离本发明的基本精神。所有这些变化和改进都认为是本发明的范围 之内。
权利要求
一种具有下述通式(I)结构的三肽硼酸类化合物其中，R1、R2和R3各自独立的为C1 6直链或支链的烷基、芳基甲基或芳杂环基甲基，其中在芳基甲基或芳杂环基甲基的芳环上可任选的被选自C1 4的直链或支链烷基、羟基、氨基或卤素的基团所取代；E为H或2，3 蒎烷二醇酯基。F2009101472920C0000011.tif
2.根据权利要求1所述的化合物，其中所述的芳基是苯基或萘基，所述的杂芳环基是 吲哚基，和/或所述芳环上的取代基是甲基、羟基、氯原子或氟原子。
3.根据权利要求2所述的化合物，其中所述的礼、1 2和R3各自独立的为苯甲基、对羟基 苯甲基、β -吲哚基甲基、异丁基或2-萘基甲基。
4.根据权利要求3所述的化合物，其中所述的R3基团是异丁基。
5. 根据权利要求4所述化合物，其中所述的化合物是N-N-N-N-N-N-N-N-N-N-N-N-N-N-N-N-N-N-N-N-N-N-N-N-吡嗪甲酰基 吡嗪甲酰基 吡嗪甲酰基 吡嗪甲酰基 吡嗪甲酰基 吡嗪甲酰基 吡嗪甲酰基 吡嗪甲酰基 吡嗪甲酰基 吡嗪甲酰基 吡嗪甲酰基 吡嗪甲酰基 吡嗪甲酰基 吡嗪甲酰基 吡嗪甲酰基 吡嗪甲酰基 吡嗪甲酰基 吡嗪甲酰基 吡嗪甲酰基 吡嗪甲酰基 吡嗪甲酰基 吡嗪甲酰基 吡嗪甲酰基 吡嗪甲酰基-L--L--L--L--L--L--L--L--L--L--L--L--L--L--L--L--L--L--L--L--L--L--L--L-苯丙氨酰-L-苯丙氨酰-L-亮氨硼酸菔烷二醇酯 萘丙氨酰-L-苯丙氨酰-L-亮氨硼酸菔烷二醇酯 苯丙氨酰-L-酪氨酰-L-亮氨硼酸菔烷 酪氨酰-L-苯丙氨酰-L-亮氨硼酸菔烷 亮氨酰-L-苯丙氨酰-L-亮氨硼酸菔烷 亮氨酰-L-萘丙氨酰-L-亮氨硼酸菔烷匕日 匕日 匕日 匕日酉酉酉酉醇醇醇醇 .1 ^ - ^ ,1匕日 匕日 匕日 匕日 匕日酉酉酉酉酉醇醇醇醇醇 .1 ^ - ^ ,1 ^苯丙氨酰-L-萘丙氨酰-L-亮氨硼酸菔烷二醇酯 萘丙氨酰-L-萘丙氨酰-L-亮氨硼酸菔烷二醇酯 色氨酰-L-苯丙氨酰-L-亮氨硼酸菔烷 苯丙氨酰-L-色氨酰-L-亮氨硼酸菔烷 苯丙氨酰-L-亮氨酰-L-亮氨硼酸菔烷 亮氨酰-L-亮丙氨酰-L-亮氨硼酸菔烷 萘丙氨酰-L-亮氨酰-L-亮氨硼酸菔烷 苯丙氨酰-L-苯丙氨酰-L-亮氨硼酸； 萘丙氨酰-L-苯丙氨酰-L-亮氨硼酸； 苯丙氨酰-L-酪氨酰-L-亮氨硼酸 酪氨酰-L-苯丙氨酰-L-亮氨硼酸 亮氨酰-L-苯丙氨酰-L-亮氨硼酸 亮氨酰-L-萘丙氨酰-L-亮氨硼酸 苯丙氨酰-L-萘丙氨酰-L-亮氨硼酸； 萘丙氨酰-L-萘丙氨酰-L-亮氨硼酸； 色氨酰-L-苯丙氨酰-L-亮氨硼酸 苯丙氨酰-L-色氨酰-L-亮氨硼酸 苯丙氨酰-L-亮氨酰-L-亮氨硼酸N-吡嗪甲酰基-L-亮氨酰-L-亮丙氨酰-L-亮氨硼酸；和 N-吡嗪甲酰基-L-萘丙氨酰-L-亮氨酰-L-亮氨硼酸。
6.根据权利要求1-5所述化合物的制备方法，该方法包括以吡嗪甲酸为起始原料，依 次引入二种所需的氨基酸，然后引入所需第三个氨基酸的硼酸酯，可得到本发明上述通式 的硼酸酯类化合物；如果需要制备相应的硼酸化合物，可将上述硼酸酯化合物水解。
7.根据权利要求6所述化合物的制备方法，当其中所述的R3基团是异丁基时，所述的 通式化合物可按下述合成路线制备 优选其中所用的原料L-亮氨硼酸酯可按下述合成路线制备
8.药物组合物，其中含有权利要求1-5任意一项所述的三肽硼酸类化合物作为活性成 分，和任选的含有一种或多种药用载体，优选其中所的活性成分的含量是0.5% -99%，药 用载体的含量是_99.5%。
9.根据权利要求8所述的药物组合物，其中所述的组合物被制成口服或肠胃外给药的 形式，所述肠胃外给药的形式包括注射给药、局部给药、吸入给药、直肠给药或植入给药的 形式；优选的，其中口服给药的剂型是片剂、胶囊、颗粒剂或适于口服的液体制剂形式，或所 述的口服制剂是缓释或定量释放的形式；其中所述注射给药的药物组合物是注射剂、冻干粉针制剂或适于输液的剂型。
10.权利要求1-5任意一项所述的化合物或权利要求8或9所述的的药物组合物在制 备蛋白酶体抑制剂中的应用；优选其中所述的蛋白酶体抑制剂是恶性肿瘤、多种神经系统 变性疾病、肌肉恶病质或糖尿病的治疗剂；其中所述的恶性肿瘤是白血病、胃癌、肝癌或鼻咽癌。
全文摘要
本发明涉及药品生产领域，具体的，本发明公开了具有通式(I)结构的一系列三肽硼酸(酯)类蛋白酶体抑制剂、其制备方法和应用，通过合成和初步生物活性评价，发现本发明化合物具有很好的蛋白酶体抑制活性，可作为蛋白酶体抑制剂，用于各种基因疾病如恶性肿瘤、多种神经系统变性疾病、肌肉恶病质或糖尿病等疾病的治疗。
文档编号A61P35/00GK101928329SQ20091014729
公开日2010年12月29日 申请日期2009年6月19日 优先权日2009年6月19日
发明者姚书扬, 崔景荣, 朱永强, 李润涛, 程铁明, 葛泽梅 申请人:北京大学