专利名称：胰岛淀粉样多肽衍生物的制作方法
胰岛淀粉样多肽衍生物发明领域本发明涉及与白蛋白和/或胰岛淀粉样多肽(amylin)受体结合的人胰岛淀粉样多肽或其类似物的衍生物、包含这些衍生物的药物组合物以及用作药物的胰岛淀粉样多肽衍生物。
背景技术：
大量且越来越多的人患有糖尿病和肥胖症。糖尿病为其中利用葡萄糖的能力部分或全部丧失的代谢病症。许多治疗方案靶向过量的血糖，而其它则主要集中于体重减轻。用于降低血糖的最有效的抗糖尿病剂为胰岛素和其类似物。早已知道的是，当将传统的胰岛素用于治疗糖尿病时，其伴随着体重增加。胰岛素必须每天皮下注射多达数次。2型糖尿病通常在早期用饮食和锻炼来治疗。随着该病状进展，增加各种口服抗糖尿病剂。也可在该时期使用注射药剂例如GLP-I类似物。一般而言，这些药剂在具有能够释放胰岛素和胰岛淀粉样多肽的功能性β-细胞的患者中最有效。人胰岛淀粉样多肽为37个氨基酸的长肽，其具有使其成为药物难题(drug troublesome)的物理化学性质。具体而言，其易于在体外和/或离体形成原纤维，并且由于沉淀而失效。另外，由于胰岛淀粉样多肽在生理PH下沉淀，使其难以配制。因而其在酸性溶液中配制。以商标Symlin 出售的药物产品目前在市场上有售。该产品包含称为普兰林肽的人胰岛淀粉样多肽类似物。与人胰岛淀粉样多肽相比，普兰林肽的第25J8和四位氨基酸被脯氨酸取代。该修饰降低了蛋白的原纤维化趋势。普兰林肽难以保存在中性PH溶液中， 因此其以酸性溶液即Symlin 提供。另一个缺点是Symlin必须每天在不同注射部位注射三次。国际专利申请号EP2008/062036公开了具有白蛋白结合残基的胰岛淀粉样多肽衍生物。虽然与普兰林肽相比，所述胰岛淀粉样多肽衍生物显示改进的药代动力学(PK)或药效学(PD)性质，但它们仍然易于原纤维化并且难以在pH 4的溶液中保存。发明概述已令人意想不到地发现，其中第17位氨基酸已用除Val、Lys或Ala之外的任何天然氨基酸置换的胰岛淀粉样多肽衍生物，具有降低的原纤维化趋势和当在酸性PH下配制时显示稳定性增加。本发明胰岛淀粉样多肽衍生物同时具有延长的药代动力学概况和良好的药效学性质。因此，本发明胰岛淀粉样多肽衍生物无须与已知的胰岛淀粉样多肽衍生物一样频繁地注射。在一个方面，本发明涉及胰岛淀粉样多肽衍生物，其为具有与人胰岛淀粉样多肽类似物的N端氨基酸残基的α -氨基或Lys残基连接的取代基的人胰岛淀粉样多肽类似物，其中所述取代基包含白蛋白结合部分并且所述人胰岛淀粉样多肽类似物的第17位氨基酸残基为除Val、Lys或Ala之外的任何天然氨基酸，和其中所述人胰岛淀粉样多肽类似物的氨基酸编号与SEQ ID NO 1的氨基酸编号一致。在一个方面，本发明涉及包含式1氨基酸序列的胰岛淀粉样多肽衍生物Xaa1-Cys-Xaa3-Thr-Ala-Thr-Cys-Ala-Thr-Gln-Arg-Leu-Ala-Xaa14-Phe-Le U-Xaa17-Xaa18-Ser-Ser-Xaa21-Asn-Phe-Xaa24-Xaa25-Xaa26-LeU-Xaa28-Xaa29-Thr-Xaa31--Val-Gly-Ser-Asn-Thr-Tyr式(1)(SEQ ID No 2)其中Xaa1被缺失或独立选自Lys、Arg、His和Glu ；Xaa3 独立选自 Asn 和 Lys ；Xaa14 独立选自 Glu、Asn、Gln 和 Asp ；Xaa17Ii立选自 His、Ser、Gly、Arg 禾口 Pro ；Xaa18 独立选自 Hi s 或 Arg ；Xaa21 独立选自 Asp、Asn 和 Gln ；
Xaa24 独立选自 Glu 和 Gly ；Xaa25 独立选自 Ala 和 Pro ；Xaa26 独立选自 Pro 和 Ile ；Xaa28 独立选自 Ser 和 Pro ；Xaa29 独立选自 Ser 和 Pro ；Xaa31 独立选自 Glu 和 Asn ；C端可任选衍生为酰胺；其中取代基与氨基酸残基) 或第2位的Cys连接，所述取代基包含白蛋白结合部分。在一个方面，本发明涉及包含本发明胰岛淀粉样多肽衍生物和药学上可接受的赋形剂的药物组合物。在一个方面，本发明涉及用作药物的本发明衍生物。附图描述图Ia显示根据药理学测定(I)在48小时期间的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。空心圆溶媒。黑色正方形30nmOl/kg的化合物3。图Ib显示根据药理学测定⑴在首个M小时、24-48小时时期和整个48小时时期内累积的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。灰色柱溶媒。黑色柱30nmOl/kg的化合物3。图加显示根据药理学测定(I)在48小时期间的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。空心圆溶媒。黑色正方形30nmOl/kg的化合物5。图2b显示根据药理学测定(I)在首个M小时、24-48小时时期和整个48小时时期内累积的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。灰色柱溶媒。黑色柱30nmOl/kg的化合物5。图3a显示根据药理学测定(I)在48小时期间的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。空心圆溶媒。黑色正方形30nmOl/kg的化合物6。图北显示根据药理学测定(I)在首个M小时、24-48小时时期和整个48小时时期内累积的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。灰色柱溶媒。黑色柱30nmOl/kg的化合物6。
8图如显示根据药理学测定⑴在48小时期间的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。空心圆溶媒。黑色正方形30nmOl/kg的化合物7。图4b显示根据药理学测定(1) 在首个M小时、24-48小时时期和整个48小时时期内累积的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。灰色柱溶媒。黑色柱30nmOl/kg的化合物7。图fe显示根据药理学测定(I)在48小时期间的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。空心圆溶媒。黑色正方形30nmOl/kg的化合物8。图恥显示根据药理学测定(I)在首个M小时、24-48小时时期和整个48小时时期内累积的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。灰色柱溶媒。黑色柱30nmOl/kg的化合物8。图6a显示根据药理学测定(I)在48小时期间的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。空心圆溶媒。黑色正方形30nmOl/kg的化合物9。图6b显示根据药理学测定(I)在首个M小时、24-48小时时期和整个48小时时期内累积的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。灰色柱溶媒。黑色柱30nmOl/kg的化合物9。图7a显示根据药理学测定(I)在48小时期间的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。空心圆溶媒。黑色正方形30nmOl/kg的化合物10。图7b显示根据药理学测定(I)在首个M小时、24-48小时时期和整个48小时时期内累积的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。灰色柱溶媒。黑色柱30nmOl/kg的化合物10。图fe显示根据药理学测定(I)在48小时期间的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。空心圆溶媒。黑色正方形30nmOl/kg的化合物11。图8b显示根据药理学测定(I)在首个M小时、24-48小时时期和整个48小时时期内累积的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。灰色柱溶媒。黑色柱30nmOl/kg的化合物11。图9a显示根据药理学测定(I)在48小时期间的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。空心圆溶媒。黑色正方形30nmOl/kg的化合物12。图9b显示根据药理学测定(I)在首个M小时、24-48小时时期和整个48小时时期内累积的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。灰色柱溶媒。黑色柱30nmOl/kg的化合物12。图IOa显示根据药理学测定(I)在48小时期间的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。空心圆溶媒。黑色正方形30nmOl/kg的化合物14。图IOb显示根据药理学测定(I)在首个M小时、24-48小时时期和整个48小时时期内累积的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。灰色柱溶媒。黑色柱30nmOl/kg的化合物14。图Ila显示根据药理学测定(I)在48小时期间的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。空心圆溶媒。黑色正方形30nmOl/kg的化合物16。图lib显示根据药理学测定(I)在首个M小时、24-48小时时期和整个48小时时期内累积的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。灰色柱溶媒。黑色柱30nmOl/kg的化合物16。
图1 显示根据药理学测定(I)在48小时期间的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。空心圆溶媒。黑色正方形30nmOl/kg的化合物17。图12b显示根据药理学测定(I)在首个M小时、24-48小时时期和整个48小时时期内累积的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。灰色柱溶媒。黑色柱30nmOl/kg的化合物17。图13a显示根据药理学测定(I)在48小时期间的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。空心圆溶媒。黑色正方形30nmOl/kg的化合物18。图1 显示根据药理学测定(I)在首个M小时、24-48小时时期和整个48小时时期内累积的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。灰色柱溶媒。黑色柱30nmOl/kg的化合物18。图1 显示根据药理学测定(I)在48小时期间的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。空心圆溶媒。黑色正方形30nmOl/kg的化合物19。图14b显示根据药理学测定(I)在首个M小时、24-48小时时期和整个48小时时期内累积的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。灰色柱溶媒。黑色柱30nmOl/kg的化合物19。图1 显示根据药理学测定(I)在48小时期间的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。空心圆溶媒。黑色正方形30nmOl/kg的化合物20。图1 显示根据药理学测定(I)在首个M小时、24-48小时时期和整个48小时时期内累积的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。灰色柱溶媒。黑色柱30nmOl/kg的化合物20。图16a显示根据药理学测定(I)在48小时期间的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。空心圆溶媒。黑色正方形30nmOl/kg的化合物22。图16b显示根据药理学测定(I)在首个M小时、24-48小时时期和整个48小时时期内累积的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。灰色柱溶媒。黑色柱30nmOl/kg的化合物22。图17a显示根据药理学测定(I)在48小时期间的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。空心圆溶媒。黑色正方形30nmOl/kg的化合物23。图17b显示根据药理学测定(I)在首个M小时、24-48小时时期和整个48小时时期内累积的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。灰色柱溶媒。黑色柱30nmOl/kg的化合物23。图18a显示根据药理学测定(I)在48小时期间的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。空心圆溶媒。黑色正方形30nmOl/kg的化合物对。图18b显示根据药理学测定(I)在首个M小时、24-48小时时期和整个48小时时期内累积的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。灰色柱溶媒。黑色柱30nmOl/kg的化合物对。图19a显示根据药理学测定(I)在48小时期间的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。空心圆溶媒。黑色正方形30nmOl/kg的化合物27。图19b显示根据药理学测定(I)在首个M小时、24-48小时时期和整个48小时时期内累积的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。灰色柱溶媒。黑色柱30nmOl/kg的化合物27。图20a显示根据药理学测定(I)在48小时期间的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。空心圆溶媒。黑色正方形30nmOl/kg的化合物28。图20b显示根据药理学测定(I)在首个M小时、24-48小时时期和整个48小时时期内累积的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。灰色柱溶媒。黑色柱30nmOl/kg的化合物观。图21a显示根据药理学测定(I)在48小时期间的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。空心圆溶媒。黑色正方形30nmOl/kg的化合物四。图21b显示根据药理学测定(I)在首个M小时、24-48小时时期和整个48小时时期内累积的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。灰色柱溶媒。黑色柱30nmOl/kg的化合物四。图2 显示根据药理学测定(I)在48小时期间的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。空心圆溶媒。黑色正方形30nmOl/kg的化合物30。图22b显示根据药理学测定(I)在首个M小时、24-48小时时期和整个48小时时期内累积的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。灰色柱溶媒。黑色柱30nmOl/kg的化合物30。图23a显示根据药理学测定(I)在48小时期间的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。空心圆溶媒。黑色正方形30nmOl/kg的化合物31。图2 显示根据药理学测定(I)在首个M小时、24-48小时时期和整个48小时时期内累积的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。灰色柱溶媒。黑色柱30nmOl/kg的化合物31。图2 显示根据药理学测定(I)在48小时期间的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。空心圆溶媒。黑色正方形30nmOl/kg的化合物32。图24b显示根据药理学测定(I)在首个M小时、24-48小时时期和整个48小时时期内累积的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。灰色柱溶媒。黑色柱30nmOl/kg的化合物32。图2 显示根据药理学测定(I)在48小时期间的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。空心圆溶媒。黑色正方形30nmOl/kg的化合物33。图2 显示根据药理学测定(I)在首个M小时、24-48小时时期和整个48小时时期内累积的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。灰色柱溶媒。黑色柱30nmOl/kg的化合物33。图26a显示根据药理学测定(I)在48小时期间的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。空心圆溶媒。黑色正方形30nmOl/kg的化合物37。图26b显示根据药理学测定(I)在首个M小时、24-48小时时期和整个48小时时期内累积的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。灰色柱溶媒。黑色柱30nmOl/kg的化合物37。图27a显示根据药理学测定(I)在48小时期间的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。空心圆溶媒。黑色正方形30nmOl/kg的化合物38。图27b显示根据药理学测定(I)在首个M小时、24-48小时时期和整个48小时时期内累积的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。灰色柱溶媒。黑色柱30nmOl/kg的化合物38。图28a显示根据药理学测定(I)在48小时期间的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。空心圆溶媒。黑色正方形30nmOl/kg的化合物39。图28b显示根据药理学测定(I)在首个M小时、24-48小时时期和整个48小时时期内累积的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。灰色柱溶媒。黑色柱30nmOl/kg的化合物39。图29a显示根据药理学测定(I)在48小时期间的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。空心圆溶媒。黑色正方形30nmOl/kg的化合物40。图29b显示根据药理学测定(I)在首个M小时、24-48小时时期和整个48小时时期内累积的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。灰色柱溶媒。黑色柱30nmOl/kg的化合物40。图30a显示根据药理学测定(I)在48小时期间的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。空心圆溶媒。黑色正方形30nmOl/kg的化合物41。图30b显示根据药理学测定(I)在首个M小时、24-48小时时期和整个48小时时期内累积的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。灰色柱溶媒。黑色柱30nmOl/kg的化合物41。图31a显示根据药理学测定(I)在48小时期间的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。空心圆溶媒。黑色正方形30nmOl/kg的化合物45。图31b显示根据药理学测定(I)在首个M小时、24-48小时时期和整个48小时时期内累积的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。灰色柱溶媒。黑色柱30nmOl/kg的化合物45。图3 显示根据药理学测定(I)在48小时期间的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。空心圆溶媒。黑色正方形30nmOl/kg的化合物47。图32b显示根据药理学测定(I)在首个M小时、24-48小时时期和整个48小时时期内累积的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。灰色柱溶媒。黑色柱30nmOl/kg的化合物47。图33a显示根据药理学测定(I)在48小时期间的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。空心圆溶媒。黑色正方形30nmOl/kg的化合物M。图3 显示根据药理学测定(I)在首个M小时、24-48小时时期和整个48小时时期内累积的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。灰色柱溶媒。黑色柱30nmOl/kg的化合物M。图3 显示根据药理学测定(I)在48小时期间的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。空心圆溶媒。黑色正方形30nmOl/kg的化合物55。图34b显示根据药理学测定(I)在首个M小时、24-48小时时期和整个48小时时期内累积的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。灰色柱溶媒。黑色柱30nmOl/kg的化合物55。图3 显示根据药理学测定(I)在48小时期间的食物摄取。数据=平均值。η =
125-7。空心圆溶媒。黑色正方形30nmOl/kg的化合物56。图3 显示根据药理学测定(I)在首个M小时、24-48小时时期和整个48小时时期内累积的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。灰色柱溶媒。黑色柱30nmOl/kg的化合物56。图36a显示根据药理学测定(I)在48小时期间的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。空心圆溶媒。黑色正方形30nmOl/kg的化合物57。图36b显示根据药理学测定(I)在首个M小时、24-48小时时期和整个48小时时期内累积的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。灰色柱溶媒。黑色柱30nmOl/kg的化合物57。图37a显示根据药理学测定(I)在48小时期间的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。空心圆溶媒。黑色正方形30nmOl/kg的化合物58。图37b显示根据药理学测定(I)在首个M小时、24-48小时时期和整个48小时时期内累积的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。灰色柱溶媒。黑色柱30nmOl/kg的化合物58。图38a显示根据药理学测定(I)在48小时期间的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。空心圆溶媒。黑色正方形30nmOl/kg的化合物59。图38b显示根据药理学测定(I)在首个M小时、24-48小时时期和整个48小时时期内累积的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。灰色柱溶媒。黑色柱30nmOl/kg的化合物59。图39a显示根据药理学测定(I)在48小时期间的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。空心圆溶媒。黑色正方形30nmOl/kg的化合物63。图39b显示根据药理学测定(I)在首个M小时、24-48小时时期和整个48小时时期内累积的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。灰色柱溶媒。黑色柱30nmOl/kg的化合物63。图40a显示根据药理学测定(I)在48小时期间的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。空心圆溶媒。黑色正方形30nmOl/kg的化合物64。图40b显示根据药理学测定(I)在首个M小时、24-48小时时期和整个48小时时期内累积的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。灰色柱溶媒。黑色柱30nmOl/kg的化合物64。图41a显示根据药理学测定(I)在48小时期间的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。空心圆溶媒。黑色正方形30nmOl/kg的化合物66。图41b显示根据药理学测定(I)在首个M小时、24-48小时时期和整个48小时时期内累积的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。灰色柱溶媒。黑色柱30nmOl/kg的化合物66。图4 显示根据药理学测定(I)在48小时期间的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。空心圆溶媒。黑色正方形30nmOl/kg的化合物67。图42b显示根据药理学测定(I)在首个M小时、24-48小时时期和整个48小时时期内累积的食物摄取。数据=平均值。η = 5-7。灰色柱溶媒。黑色柱30nmOl/kg的化合物67。定义本文所用术语“人胰岛淀粉样多肽”是指具有如SEQ ID No 1所示序列的肽人胰岛淀粉样多肽。所述术语包括但不限于称为胰岛淀粉样多肽的37个氨基酸的人肽激素，其与胰岛素天然共分泌自胰腺β-细胞。人胰岛淀粉样多肽具有以下氨基酸序列=Lys-Cys-A sn-Thr-Ala-Thr-Cys-Ala-Thr-Gln-Arg-Leu-Ala-Asn-Phe-Leu-Val-His-Ser-Ser-Asn-As n-Phe-Gly-Ala-Ile-Leu-Ser-Ser-Thr-Asn-Val-Gly-Ser-Asn-Thr-Tyr(SEQ ID NO :1)，其与两个Cys残基之间的二硫键和C端酰胺基示于以下。
H-K-NATQRLANFLVHSSNNFGA I LSSTNVGSN T-Y-f^在本文中，术语“人胰岛淀粉样多肽的类似物”或“人胰岛淀粉样多肽类似物”用于表示以下肽，其中人胰岛淀粉样多肽的一个或多个氨基酸残基已独立地通过用其它氨基酸残基取代和/或通过缺失一个或多个氨基酸残基和/或通过添加一个或多个氨基酸残基来修饰。氨基酸插入、添加、缺失或取代的数量可为至少1，但可存在多达2、3、4、5、6、7、8、9 或10个氨基酸插入、添加、缺失或取代。可用任何天然或非天然氨基酸、合成氨基酸、肽模拟物或其它化合物进行取代或添加。氨基酸残基的添加或缺失可在肽的N端和/或肽的C 端发生。本文所用术语“天然氨基酸”为选自以下的氨基酸(圆括号中为通常的三字母码和一字母码)甘氨酸(Gly和G)、脯氨酸(Pro和P)、丙氨酸(Ala和A)、缬氨酸(Val和V)、 亮氨酸(Leu和L)、异亮氨酸(lie和I)、甲硫氨酸(Met和M)、半胱氨酸(Cys和C)、苯丙氨酸(Phe和F)、酪氨酸(Tyr和Y)、色氨酸(Trp和W)、组氨酸(His和H)、赖氨酸(Lys和K)、 精氨酸(Arg和R)、谷氨酰胺(Gln和Q)、天冬酰胺(Asn和N)、谷氨酸(Glu和E)、天冬氨酸 (Asp和D)、丝氨酸(Ser和S)和苏氨酸(Thr和T)。如果由于打字错误而与常用码有偏离， 则以常用码为准。本发明胰岛淀粉样多肽衍生物中存在的氨基酸优选为可由核酸编码的氨基酸。本文所用术语“接头”意指化学部分，其使白蛋白结合部分与人胰岛淀粉样多肽类似物通过在它们之间具有接头而隔开。例如，接头可包含一个或两个氨基酸，其在一端与白蛋白结合部分连接和在另一端与人胰岛淀粉样多肽类似物的第1位氨基酸连接，或者当第 1位氨基酸缺失时，所述接头与人胰岛淀粉样多肽类似物的第2位Cys连接。接头的化学部分可有助于/提高取代基的白蛋白结合作用，例如包含YGlu的接头提高胰岛淀粉样多肽衍生物的白蛋白结合作用。术语“效价”用于描述既定化合物在测定中的作用，其为化合物的对数浓度与作用之间的已建立的S形关系。此外，反应应可从0-100%变化。EC(有效浓度)50可用于描述既定化合物在测定中产生50%反应的浓度。术语“活性”在一个方面是指降低食欲和/或增加饱腹感的能力。如例如在标题为“测定”的药理学测定I和II中所述，可根据减低食欲的能力测量活性。本文所用关于本发明胰岛淀粉样多肽衍生物或本发明蛋白制剂的术语“物理稳定性”是指当蛋白暴露至热机械应力和/或与失稳的界面和表面(例如疏水表面和界面)相互作用时，所述蛋白不形成无生物活性和/或不溶的蛋白聚集体的趋势。含水蛋白制剂的物理稳定性可通过如本文其它地方所述的目视检查、ThT原纤维化测定和/或浊度测量来评价。制剂的目视检查在强烈的聚焦光和黑暗背景中进行。制剂的浊度通过目视评分来表征，所述目视评分将浊度排列为例如0-3的等级(显示不混浊的制剂对应于目视评分0，和在日光下显示目视混浊的制剂对应于目视评分幻。当制剂在日光下显示目视混浊时，将其分类为蛋白聚集物理不稳定。或者，可通过技术人员熟知的简单浊度测量来评价制剂的浊度。关于本发明胰岛淀粉样多肽衍生物或蛋白制剂或药物制剂的术语“化学稳定性” 是指蛋白结构无化学共价变化，其因此不会导致形成与天然蛋白结构相比具有潜在较小生物效价和/或潜在增加的免疫原性的化学降解产物。根据天然蛋白的类型和性质以及所述蛋白所暴露的环境，可形成各种化学降解产物。如本领域技术人员所熟知，几乎不可能完全避免化学降解的消除，并且在储存和使用蛋白制剂期间常常见到化学降解产物的量不断增加。多数蛋白容易发生脱酰胺作用，其中谷氨酰胺酰或天冬酰胺酰残基的侧链酰胺基被水解而形成游离羧酸的过程。其它降解途径涉及高分子量转化产物的形成，其中两个或更多个蛋白分子通过转酰胺基作用和/或二硫化物相互作用相互共价结合，导致形成共价结合的二聚体、寡聚体和多聚体降解产物Stability of Protein Pharmaceuticals,Ahern. Τ. J.和Manning Μ. C.，Plenum Press, New York 1992)。可提及作为化学降解另一种变体的氧化(例如甲硫氨酸残基的氧化)。可通过在暴露至不同环境条件(可通常通过例如增加温度来加速降解产物的形成)下之后的各个时间点测量化学降解产物的量，来评价蛋白制剂的化学稳定性。通常通过利用各种色谱技术(例如SEC-HPLC和/或RP-HPLC)根据分子大小和/或电荷将降解产物分离来测量各种单独的降解产物的量。术语“稳定化制剂”是指与肽的水溶液剂相比，物理稳定性增力口、化学稳定性增加或物理和化学稳定性增加的制剂。“白蛋白结合亲和力”可通过本领域已知的数种方法来测量。在一种方法中，将待测量的衍生物用例如125I或3H放射性标记，然后与固定化白蛋白保温(Kurtzhals等， Biochem. J. ,312,725-731 (1995)).计算所述衍生物相对于标准品的结合。在另一种方法中，将相关化合物放射性标记，然后其与固定在例如SPA珠粒上的白蛋白的结合被系列稀释的待测量衍生物竞争。竞争的EC50值为所述衍生物亲和力的衡量。在第三种方法中，在不同白蛋白浓度下测量衍生物的受体亲和力或效价，然后作为白蛋白浓度的函数的衍生物相对亲和力或效价的变化反映其对白蛋白的亲和力。所用术语“Trx”或“反式-4-(氨甲基)环己烷甲酸”意指具有以下结构的氨基酸
权利要求
1.一种胰岛淀粉样多肽衍生物，其为具有与人胰岛淀粉样多肽类似物的N端氨基酸残基的α -氨基或Lys残基连接的取代基的人胰岛淀粉样多肽类似物，其中所述取代基包含白蛋白结合部分并且所述人胰岛淀粉样多肽类似物的第17位氨基酸残基为HiS、kr、Gly、 Pro或Arg，和其中所述人胰岛淀粉样多肽类似物的氨基酸编号与SEQ ID NO :1的氨基酸编号一致。
2.权利要求1的衍生物，其中第25J8和四位氨基酸为ftx)。
3.权利要求1-2的衍生物，其中所述取代基包含接头。
4.权利要求1-3的衍生物，其中所述接头包含选自以下的氨基酸YGlu、 Arg、y Glu-Arg> yGlu-His> Trx-yGlu> γ Glu_His、Glu_Lys、Glu_Glu、Glu_Arg、 Y Glu-His-His, γ Glu-Arg-His、γ Glu-His_Arg、γGlu_Glu_Arg、Glu_Glu_Arg、 Glu-Lys-Arg、y Glu-Glu-His-His, γ Glu-Glu-His_Arg、Glu-Glu-Arg-Glu 禾口 Glu-Glu-Glu-Glu。
5.权利要求1-4的衍生物，其中所述接头包括-(:(0)-(011-040^0^-01-(( ) p-[NHC(0)-(01^-04(011-01-(CH2)1JrNH-,其中 l、m、n 和 ρ 独立为 1-7，q 为 0-5。
6.权利要求1-5中任一项的衍生物，其中所述白蛋白结合残基为选自HOOC(CH2)sCO-的酰基，其中s为17-21的整数，例如18、19或20。
7.权利要求1的衍生物，其中所述人胰岛淀粉样多肽类似物包含式1的氨基酸序列 Xaa1-Cys-Xaa3-Thr-Ala-Thr-Cys-Ala-Thr-Gln-Arg-Leu-Ala-Xaa14-Phe-Leu-XaB17-Xaa18-Ser-Ser-Xaa21-Asn-Phe-Xaa24-Xaa25-Xaa26-Leu-Xaa28-Xaa29-Thr-Xaa31-Val-Gly-Ser-Asn-Thr-Tyr式(1) (SEQ ID No 2)其中Xaa1被缺失或独立选自Lys、Arg、His和Glu ；Xaa3独立选自Asn禾口 Lys ；Xaa14 独立选自 Glu、Asn、Gln 和 Asp ；Xaa17 独立选自 His、Ser, Gly、Arg 和 Pro ；Xaa18独立选自His或Arg ；Xaa21 独立选自 Asp、Asn 和 Gln ；Xaa24独立选自Glu和Gly ；Xaa25独立选自Ala和Pro ；Xaa2J立选自 Pro 禾口 Ile ；Xaa28独立选自Ser和Pro ；Xaa29独立选自Ser和Pro ；Xaa31独立选自Glu和Asn ；C端可任选衍生为酰胺；其中取代基与氨基酸残基) 或第2位的Cys连接，所述取代基包含白蛋白结合部分。
8.权利要求1的衍生物，其中所述衍生物选自N-α-(19-羧基十九烷酰基)-Glu-Glu-Arg-[Glul，Glul4，Hisl7，Glu31]_ 普兰林肽、 N- ε 3-(19-羧基十九烷酰基-Glu-Glu-Arg-Glu)-[Lys3，Hisl7，Asp21]-普兰林肽、 N- ε 3- {2- [2- (2- {(S) ~4~羧基_2_ [ (S) ~4~羧基-2-(19-羧基十九烷酰基氨基)丁酰氨基]丁酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰基}-[LyS3，HiS17，ASp21]-普兰林肽、N- ε 3-(19-羧基十九烷酰基-Glu-Glu-Glu-Glu)-[Lys3, Hisl7，Asp21]-普兰林肽、 N-a-[(S)-4-羧基-4-(19-羧基十九烷酰基氨基)丁酰基]-[Hisl7]_普兰林肽 (2-37)、N-α-[(S)-4-羧基-4-(19-羧基十九烷酰基氨基)丁酰基]_[Argl，Hisl7]_普兰林肽、Ν-α-[ (S) -4-羧基-4-(19-羧基十九烷酰基氨基)丁酰基]_[Hisl7]-普兰林肽、 N-α-[19-羧基十九烷酰基]-Glu-Lys-[Argl，Hisl7]_普兰林肽、 N-α-[19-羧基十九烷酰基]-Glu-Lys-Arg-[Hisl7]_普兰林肽、 N-a-[(S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]-[Hisl7]_普兰林肽 (2-37)、N-a-[(S)-4-羧基-4-(19-羧基十九烷酰基氨基)丁酰基]-[Serl7]-普兰林肽 (2-37)、N-a-[(S)-4-羧基-4-(19-羧基十九烷酰基氨基)丁酰基]_[Alal7]_普兰林肽 (2-37)、N-a-[(S)-4-羧基-4-(19-羧基十九烷酰基氨基)丁酰基]_[Glyl7]_普兰林肽 (2-37)、N-a-[(S)-4-羧基-4-(19-羧基十九烷酰基氨基)丁酰基]-[Argl7]_普兰林肽 (2-37)、N-a-[(S)-4-羧基-4-(19-羧基十九烷酰基氨基)丁酰基]-[Prol7]_普兰林肽 (2-37)、N-α-[2-{244-( -羧基-4-(19-羧基十九烷酰基氨基)丁酰氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰基]_[Hisl7]-普兰林肽0-37)、N-c卜[⑶-ζ〖_羧基·-4-(19--羧基十九烷酰基氨基)丁酰基]_-Arg--[Hisl7]·-普3兰林肽、N-c卜[⑶-ζ〖_羧基·-4-(19--羧基十九烷酰基氨基)丁酰基]_-Arg--[Glyl7]--普3兰林肽、N-c卜[⑶-ζ〖_羧基·-4-(19--羧基十九烷酰基氨基)丁酰基]_-Arg--[Alal7]·-普3兰林肽、N-c卜[⑶-ζ〖_羧基·-4-(19--羧基十九烷酰基氨基)丁酰基]_-Arg--[Serl7]·-普3兰林肽、N-c卜[⑶-ζ〖_羧基·-4-(19--羧基十九烷酰基氨基)丁酰基]_-Arg--[Prol7]·-普3兰林肽、N-c卜[⑶-ζ〖_羧基·-4-(19--羧基十九烷酰基氨基)丁酰基]_-Arg--[Argl7]--普3兰林肽、N-cι -[2-(2--{2-[4-(S)-羧基-4-(19-羧基十九烷酰基氨基)丁酰氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰基]-Arg-[Argl7]-普兰林肽、N-α-[2-{244-( -羧基-4-(19-羧基十九烷酰基氨基)丁酰氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰基]-Arg-[Alal7]-普兰林肽、N- α -[4-(19-羧基十九烷酰基氨基)丁酰基]-Arg-[Argl7]-普兰林肽、 Ν-α-[ (S) -4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]-Arg-[Argl7]-普兰林肽、 N-α-[(S)-4-羧基-4-(19-羧基十九烷酰基氨基)丁酰基]-His-[Hisl，Hisl7]_普兰林肽、Ν-α-[⑶-4-羧基-4-(19-羧基十九烷酰基氨基)丁酰基]-His-[Hisl7]-普兰林肽、 N-a-[(S)-4-羧基-4-(19-羧基十九烷酰基氨基)丁酰基]-[Hisl，Hisl7]_普兰林肽、N-α-[4-(19-羧基十九烷酰基氨基)丁酰基]-[Hisl7]_普兰林肽Q-37)、 N-α-[(S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]-His-[Hisl，Hisl7]_普兰林肽、N-a-[(S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]-[Hisl，Hisl7]_普兰林肽、N- a - [4-羧基-4- ({4- [ (19-羧基十九烷酰基氨基)甲基]反式-环己烷羰基}氨基) 丁酰基]-[Hisl，Hisl7]_普兰林肽、N-a-[2-{244-( -羧基-4-(19-羧基十九烷酰基氨基)丁酰氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰基]-His-[Hisl，Argl7]-普兰林肽、N-a-[(S)-4-羧基-4-(19-羧基十九烷酰基氨基)丁酰基]-His-[Hisl，Argl7]_普兰林肽、N-a-[ (S) -4-羧基-4-(19-羧基十九烷酰基氨基)丁酰基]_[Hisl，Argl7]-普兰林肽、N-a-[2-{244-( -羧基-4-(19-羧基十九烷酰基氨基)丁酰氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰基]-[Hisl，Hisl7]-普兰林肽、N-a-[2-{244-( -羧基-4-(19-羧基十九烷酰基氨基)丁酰氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰基]-HiS-[Hisl，Hisl7]-普兰林肽、N-a-[(S)-4-羧基-4-(19-羧基十九烷酰基氨基)丁酰基]-His-His-[Hisl， Hisl7]_普兰林肽、N- a -[(S)-4-羧基-4-(19-羧基十九烷酰基氨基)丁酰基]-His-Arg-[Hi si 7]-普兰林肽、N-a-[(S)-4-羧基-4-(19-羧基十九烷酰基氨基)丁酰基]-Glu_Arg-[Glul，Hisl7, Gln21, Ala25, Pro26, Ser28, Ser29]_ 普兰林肽、N-α-[(S)-4-羧基-4-(19-羧基十九烷酰基氨基)丁酰基]-Glu-Arg-[Glul，Aspl4, Hisl7, Ala25, Pro26, Ser28, Ser29]_ 普兰林肽、Ν-α-[ (S) -4-羧基-4-(19-羧基十九烷酰基氨基)丁酰基]_[Aspl4,Hisl7]-普兰林肽 0-37)、Ν-α-[ (S) -4-羧基-4-(19-羧基十九烷酰基氨基)丁酰基]-[Hisl7，Glu24]-普兰林肽 0-37)、N-α-[2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰基氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰基][Argl，Hisl7]-普兰林肽、N-α-[(S)-4-羧基-4-(19-羧基十九烷酰基氨基)丁酰基]-Glu_Arg4Glul，Argl7， Ala25, Pro26, Ser28, Ser29]_ 普兰林肽、N-a-[(S)-4-羧基-4-(19-羧基十九烷酰基氨基)丁酰基]-His-[Hisl，Hisl7, Argl8]_普兰林肽、N-α-[(S)-4-羧基-4-(19-羧基十九烷酰基氨基)丁酰基]-Glu-Arg-[Glul，Aspl4, Hisl7, Gln21, Ala25, Pro26, Ser28, Ser29]-普兰林肽、Ν-α-[⑶-4-羧基-4-(19-羧基十九烷酰基氨基)丁酰基]-Glu-[Glul, Argl7]-普兰林肽、N-α-[(S)-4-羧基-4-(19-羧基十九烷酰基氨基)丁酰基]-Glu-[Glul，Hisl7]_普兰林肽、N-a-[(S)-4-羧基-4-(19-羧基十九烷酰基氨基)丁酰基]KGlul，Hisl7]_普兰林肽、N- a - [3- (2- {2- [2- (2_ {2_ [2_ (2- {2- [ (S) -4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰氨基]乙氧基}乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)丙酰基氨基][Argl，Hisl7]_普兰林肽、N-a-[ (S) -4-羧基-4-(19-羧基十九烷酰基氨基)丁酰基]_[Hisl7,Asp31]-普兰林肽 0-37)、N-a-[(S)-4-羧基-4-(19-羧基十九烷酰基氨基)丁酰基]-Glu-HiS-HiS-[HiSl， Hisl7]_普兰林肽、N- a - [ (S) -4-羧基-4- (19-羧基十九烷酰基氨基)丁酰基]-Glu-His-Arg- [Argl， Hisl7]_普兰林肽、N-a-[2-{244-( -羧基-4-(19-羧基十九烷酰基氨基)丁酰氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰基]-His-His-[Argl，Hisl7]_普兰林肽、N-a-[2-{244-( -羧基-4-(19-羧基十九烷酰基氨基)丁酰氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰基]-His-His-[Argl，Argl7]_普兰林肽、N- a - [ (S) -4-羧基-4- (19-羧基十九烷酰基氨基)丁酰基]-Glu-His-His- [Argl， Argl7]_普兰林肽、N-a-[2-{244-( -羧基-4-(19-羧基十九烷酰基氨基)丁酰氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰基]-His-HiS-[Argl Hisl7，Gln21]-普兰林肽、N-a-[(S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]-His-His-[Hisl， Hisl7]_普兰林肽、N- a - [ (S) -4-羧基-4- (5-羧基戊酰基氨基)丁酰基]-Hi s-Hi s_ [Hi s 1，Hi s 17]-普兰林肽N-a-[2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰基氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰基][Hisl7]_普兰林肽0-37)、N-a-[(S)-4-羧基-4-(19-羧基十九烷酰基氨基)丁酰基]-GluHi s-His-[Argl， Hisl7，Gln21]_ 普兰林肽、N-a-[2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基-4-(19-羧基十七烷酰基氨基)丁酰氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰基氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰基]_[Hisl7]-普兰林肽0-37)、N-a-[2-{244-( -羧基-4-(19-羧基十九烷酰基氨基)丁酰氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰基]-His-His-[Argl，Argl7，Gln21]_ 普兰林肽、N-a-[(S)-4-羧基-4-(19-羧基十九烷酰基氨基)丁酰基]-Glu-His-Arg-[Hisl， Hisl7]_普兰林肽、N- a - [ (S) -4-羧基-4- (19-羧基十九烷酰基氨基)丁酰基]-Glu-His-His- [Argl， Hisl7]_普兰林肽、N- a - [ (S) -4-羧基-4- (19-羧基十九烷酰基氨基)丁酰基]-Glu-His-His- [Argl，Argl7，Gln21]_ 普兰林肽、N-α - [(S)-4-羧基-4-(19-羧基十九烷酰基氨基)丁酰基]-Glu-Arg-His-[Argl， Hisl7]_普兰林肽、N-a-[(S)-4-羧基-4-(19-羧基十九烷酰基氨基)丁酰基]-Arg-His [Argl， Hisl7]_普兰林肽、N-a-[(S)-4-羧基-4-(19-羧基十九烷酰基氨基)丁酰基]-His-His-[Argl， Hisl7]_普兰林肽、N-a-[(S)-4-羧基-4-(19-羧基十九烷酰基氨基)丁酰基]-His-Arg-[Hisl， Hisl7]_普兰林肽。
9.一种药物组合物，其包含权利要求1-8中任一项的衍生物和药学上可接受的赋形剂。
10.用作药物的权利要求1-8中任一项的衍生物。
11.权利要求1-8中任一项的衍生物在制备药物中的用途。
12.权利要求1-8中任一项的衍生物在制备药物中的用途，所述药物用于治疗或预防高血糖症、2型糖尿病、葡萄糖耐量降低、1型糖尿病、肥胖症、高血压、X综合症、血脂障碍、 认知障碍、动脉粥样硬化、心肌梗死、冠心病和其它心血管病症、中风、炎性肠综合征、消化不良和胃溃疡。
13.一种用于制备权利要求9的药物组合物的方法，其包括将权利要求1-8中任一项的衍生物与至少一种药学上可接受的赋形剂混合。
14.实施例中的胰岛淀粉样多肽衍生物。
全文摘要
本发明涉及新型胰岛淀粉样多肽衍生物、包含所述衍生物的药物组合物以及使用本发明胰岛淀粉样多肽衍生物治疗糖尿病和高血糖症的方法。
文档编号A61K38/22GK102197049SQ200980142468
公开日2011年9月21日 申请日期2009年10月20日 优先权日2008年10月21日
发明者L·舍弗, T·克鲁斯, J·刘, H·托格森 申请人:诺沃-诺迪斯克有限公司