治疗溃疡性结肠炎的中成药颗粒剂的制备工艺的制作方法

专利名称：：治疗溃疡性结肠炎的中成药颗粒剂的制备工艺的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种治疗溃疡性结肠炎的中成药颗粒剂的制备工艺。
背景技术：
：目前，治疗溃疡性结肠炎的药物基本上只能根据处方配置的药材现熬成汤剂服用，尚未有较为有效的治疗溃疡性结肠炎的中成药颗粒剂及其制备工艺，这种现状一方面给病人的治疗带来很大不便，另一方面由于汤剂的疗效受其熬制方法和熬制时间的影响较大，给治疗效果也带来一定程度的影响。此外，在常规的颗粒剂制剂工艺中，挥发油是直接喷洒在颗粒剂中。由于挥发油化学性质很不稳定，随着颗粒剂保存时间的延长，颗粒剂中的挥发油会发生质和量的变化，从而影响药物的疗效。
发明内容本发明的目的在于提供一种治疗溃疡性结肠炎的中成药颗粒剂的制备工艺，它能较好的保持药物疗效，使本发明制作的中成药颗粒剂达到甚至优于中药汤剂的治疗效果。本发明的技术方案是这样构成的一种治疗溃疡性结肠炎的中成药颗粒剂的制备工艺，其特征在于，它包括以下制备步骤(1)挥发油提取工艺按照重量份数比取砂仁4-8份、防风4-8份、荷叶15-25份三味药材粉碎后，加2.5-7.5倍体积量的水，不浸泡，直接进行4-10小时的挥发油提取，提取挥发油后，剩余滤液A;(2)煎煮液提取工艺按照重量份数比取白芍10-15份、淮山药25-35份、党参15-20份、野麻草25-35份、甘草3-8份、白术10-15份六味药材，将其中一味药材淮山药的10%磨为细粉，淮山药的剩余90%与其余五味药材混合后，浸泡30-90分钟，之后加水煎煮1-5次，每次煎煮1-2小时，每次加入的水的数量是浸泡前药材的4-12倍体积量，将每次煎煮所得滤液合并得到滤液B;(3)挥发油的包合工艺将步骤(1)提取的挥发油用其6_12倍体积量的95%乙醇溶解后，加入体积量为挥发油的8-12倍的13-环糊精45-6(TC饱和溶液中，先恒温搅拌1-2小时，再静置18-28小时，接着抽滤后将滤渣低温干燥得到白色干燥粉末；(4)浓縮将滤液A和滤液B合并后，加95X的乙醇稀释至含醇量为70%，静置18-28小时，抽滤后得到滤液，水浴浓縮后恒温干燥得干固物，在干固物内加入P-环糊精及步骤(2)制得的淮山药细粉，e-环糊精及淮山药细粉的总和量为干固物重量的1-1.5倍，之后喷雾干燥得到干燥粉末；(5)制成颗粒剂将步骤(3)和(4)得到的干燥粉末合并，混合均匀，干压制粒，分装，包装，质检，获得成品。本发明上述技术方案的优选方案如下步骤(1)中，三味药材的重量份数比为砂仁6份、防风6份、荷叶20份，加入的水的数量是该步骤所述的三味药材的5倍体积量，挥发油提取的时间为7小时。步骤(2)中，六味药材的重量份数比为白芍15份、淮山药30份、党参20份、野麻草30份、甘草5份、白术10份，浸泡时间为60分钟，煎煮次数为3次，每次煎煮时间为1.5小时，每次煎煮时加入的水的数量是该步骤浸泡前药材的8倍体积量。步骤(3)中，所述乙醇的体积量为挥发油的9倍；所述P-环糊精饱和溶液的温度为55t:，体积量为挥发油的10倍；恒温搅拌时间为1.5小时，静置时间为24小时。步骤(4)中，静置时间为24小时，e-环糊精及淮山药细粉的总和量为干固物重量的1.2倍。较之现有技术而言，本发明具有以下优点1、通过实验表明，本发明制备方法生产的中成药颗粒剂治疗效果优于原配方中药汤剂的治疗效果。2、本发明能较好地提高治疗溃疡性结肠炎中成药制剂稳定性，不但相同疗效下，减少原汤剂的服用量，且具有体积小、重量轻、易于运输携带与储藏、服用方便等特点。3、本发明的制备工艺中，P-环糊精包合挥发油的工艺技术是制备过程中的重要环节，实验结果表明应用该工艺后制粒容易，颗粒较理想，粉得率比较高，包合率可达70%左右，达到设计要求，证明该工艺可行。山药粉末为配方所有，制剂过程最后阶段和P-环糊精一起加入，既符合制剂要求，又降低成本，并减少了患者的服用剂量。本发明不但增加药物稳定性，且提高生物利用度及其药物疗效，且为该中成药颗粒剂的研究及后续实验奠定基石出。4、本制剂工艺技术质量控制好，可重复性强。图1是久泻宁颗粒等实验组对UC大鼠血清IL-2的影响对比示意图。图2是久泻宁颗粒等实验组对UC大鼠血清TNF-a的影响对比示意图。图3是正常对照组的光镜下病理切片示意图。图4是正常对照组的光镜下病理切片示意图。图5是UC模型组的光镜下病理切片示意图。图6是UC模型组的光镜下病理切片示意图。图7是阳性对照组的光镜下病理切片示意图。图8是久泻宁颗粒低剂量组的光镜下病理切片示意图。图9是久泻宁颗粒中剂量组的光镜下病理切片示意图。图10是久泻宁颗粒高剂量组的光镜下病理切片示意图。具体实施例方式下面结合具体实施例和制备工艺研究过程对本
发明内容进行详细说明—.实施例如下实施例1按以下制备步骤制备治疗溃疡性结肠炎的中成药颗粒剂(1)挥发油提取工艺按照重量份数比取砂仁6份、防风6份、荷叶20份三味药材粉碎后，加约三味药材的5倍体积量的水，不浸泡，直接进行7小时左右的挥发油提取(按照传统工艺)，提取挥发油后，剩余滤液A;(2)煎煮液提取工艺按照重量份数比取白芍15份、淮山药30份、党参20份、野麻草30份、甘草5份、白术10份六味药材，将其中一味药材淮山药的10%磨为细粉，淮山药的剩余90%与其余五味药材混合后，浸泡约60分钟，之后加水煎煮3次，每次煎煮1.5小时左右，每次加入的水的数量大约是浸泡前药材的8倍体积量，将每次煎煮所得滤液合并得到滤液B;(3)挥发油的包合工艺将步骤(1)提取的挥发油用大约其9倍体积量的95%乙醇溶解后，加入体积量大约为挥发油的io倍的e-环糊精55t:饱和溶液中，先恒温搅拌1.5小时左右，再静置24小时左右，接着抽滤后将滤渣低温干燥得到白色干燥粉末；(4)浓縮将滤液A和滤液B合并后，加95X的乙醇稀释至含醇量为70X，静置24小时左右，抽滤后得到滤液，水浴浓縮(按照传统工艺)后恒温干燥得干固物，在干固物内加入e-环糊精及步骤(2)制得的淮山药细粉，P-环糊精及淮山药细粉的总和量约为干固物重量的1.2倍，之后喷雾干燥得到干燥粉末(按照现有技术手段)；(5)制成颗粒剂将步骤(3)和(4)得到的干燥粉末合并，混合均匀，干压制粒，分装，包装，质检，获得成品。实施例2按以下制备步骤制备治疗溃疡性结肠炎的中成药颗粒剂(1)挥发油提取工艺按照重量份数比取砂仁4份、防风4份、荷叶15份三味药材粉碎后，加约三味药材的2.5倍体积量的水，不浸泡，直接进行4小时左右的挥发油提取(按照传统工艺)，提取挥发油后，剩余滤液A;(2)煎煮液提取工艺按照重量份数比取白芍10份、淮山药25份、党参15份、野麻草25份、甘草3份、白术12份六味药材，将其中一味药材淮山药的10%磨为细粉，淮山药的剩余90%与其余五味药材混合后，浸泡约30分钟，之后加水煎煮1次，每次煎煮2小时左右，每次加入的水的数量大约是浸泡前药材的4倍体积量，将每次煎煮所得滤液合并得到滤液B;(3)挥发油的包合工艺将步骤(1)提取的挥发油用大约其6倍体积量的95%乙醇溶解后，加入体积量大约为挥发油的8倍的e-环糊精451:饱和溶液中，先恒温搅拌1小时左右，再静置18小时左右，接着抽滤后将滤渣低温干燥得到白色干燥粉末；(4)浓縮将滤液A和滤液B合并后，加95X的乙醇稀释至含醇量为70X，静置18小时左右，抽滤后得到滤液，水浴浓縮(按照传统工艺)后恒温干燥得干固物，在干固物内加入e-环糊精及步骤(2)制得的淮山药细粉，P-环糊精及淮山药细粉的总和量约为干固物重量的l倍，之后喷雾干燥得到干燥粉末(按照现有技术手段)；(5)制成颗粒剂将步骤(3)和(4)得到的干燥粉末合并，混合均匀，干压制粒，分装，包装，质检，获得成品。实施例3按以下制备步骤制备治疗溃疡性结肠炎的中成药颗粒剂(1)挥发油提取工艺按照重量份数比取砂仁8份、防风8份、荷叶25份三味药材粉碎后，加约三味药材的7.5倍体积量的水，不浸泡，直接进行10小时左右的挥发油提取5(按照传统工艺)，提取挥发油后，剩余滤液A;(2)煎煮液提取工艺按照重量份数比取白芍12份、淮山药35份、党参18份、野麻草35份、甘草8份、白术15份六味药材，将其中一味药材淮山药的10%磨为细粉，淮山药的剩余90%与其余五味药材混合后，浸泡约90分钟，之后加水煎煮5次，每次煎煮1小时左右，每次加入的水的数量大约是浸泡前药材的12倍体积量，将每次煎煮所得滤液合并得到滤液B;(3)挥发油的包合工艺将步骤(1)提取的挥发油用大约其12倍体积量的95%乙醇溶解后，加入体积量大约为挥发油的12倍的P-环糊精6(TC饱和溶液中，先恒温搅拌2小时左右，再静置28小时左右，接着抽滤后将滤渣低温干燥得到白色干燥粉末；(4)浓縮将滤液A和滤液B合并后，加95X的乙醇稀释至含醇量为70X，静置28小时左右，抽滤后得到滤液，水浴浓縮(按照传统工艺)后恒温干燥得干固物，在干固物内加入e-环糊精及步骤(2)制得的淮山药细粉，P-环糊精及淮山药细粉的总和量约为干固物重量的1.5倍，之后喷雾干燥得到干燥粉末(按照现有技术手段)；(5)制成颗粒剂将步骤(3)和(4)得到的干燥粉末合并，混合均匀，干压制粒，分装，包装，质检，获得成品。二.下面为本发明所提供的治疗溃疡性结肠炎的中成药颗粒剂的制备工艺研究过程1提取工艺研究1.1砂仁等三味药材挥发油提取工艺研究本颗粒剂中砂仁等三味药材均含有挥发油，故三味中药在工艺中先用提取挥发油的方法。本文以挥发油提取量作为挥发油提取工艺的考察指标，按照L9(34)正交表进行了试验，以探讨挥发油最佳提取工艺。1.1.1提取流程取6倍处方量砂仁、防风等3味药材用挥发油测定器提取，挥发油收集于棕色瓶中备用，提取挥发油的药液滤过，滤液备用。1.1.2测定方法直接从挥发油测定器刻度处读取挥发油量。1.1.3正交试验及结果根据预试验，选用煎煮时间、浸泡时间、加水量3个因素，每个因素设3个水平的实验方案。见表l。表1挥发油提取工艺因素水平表因素ABCD水平加水量(倍)煎煮时间(h)空白浸泡时间1550<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>以挥发油提取量为考察指标，采用L9(34)正交表试验，见表2.表2挥发油提取工艺正交试验表ABCDX试验号加水量(倍)煎煮时间(h)空白浸泡时间挥发油提取量111110.90212221.05313331.10421230.95522311.00623120.95731320.80832131.05933211.20Kl3.052.652.90110K22.903.103.202.80K33.053.252.903.10R0.150.600.300.30由上表直观分析Rb最大，Rc、Rd次之，Ra最小。已知Rc为空项，Rc等于Rd，二者均大于Ra，若三项合并为误差项，该实验无意义；又Rc大于Ra，故考虑可能有交互作用。结合各因素条件，去掉A2B1D2，重新安排实验。(见表3)1.1.4第二次挥发油提取正交试验和结果表3第二次挥发油提取工艺因素水平表因素AA*BBA*CCB*CD水平煎煮时间'(h)浸泡时间(h)加水量(倍)空白16052737.5以挥发油提取量为考察指标，采用L8(27)正交表试验，见表4。表4挥发油提取工艺正交试验表AA*BBA*CCB*CD试验号煎煮时间(h)浸泡时间(h)加水量(倍)空白<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>结果显示各因素对实验结果的影响大小依次为B>A>C。挥发油提取条件以B1A2C1，即加入5倍于药材量的水，不浸泡，直接提取7小时为最佳，且各因素间交互作用影响不大。1.1.5按照最佳条件进行提取的重复试验取6倍处方量砂仁、防风等3味药材，加入5倍于药材量的水，不浸泡，直接提取7小时，重复3次，分别取得挥发油1.2ml、1.2ml、1.15ml，挥发油得率均较高。1.2砂仁等三味中药挥发油的包合工艺研究在常规制剂工艺中，挥发油是直接喷洒在颗粒剂中。由于挥发油是一类极易挥发的物质，化学性质很不稳定，随着颗粒剂保存时间的延长，颗粒剂中的挥发油会发生质和量的变化，影响药物的疗效。因此本课题组采用P-环糊精包合的方法，使挥发油进入P-环糊精的环状筒型空洞骨架中，形成包合物，以增加药物稳定性，提高生物利用度及其药物疗效。本文以挥发油包合率作为挥发油包合工艺的考察指标，按照L9(34)正交表进行试验，以探讨挥发油最佳包合工艺条件。1.2.l包合流程将上面提取的挥发油用13-环糊精包合，静置24小时，滤过，包合物低温干燥。1.2.2测定方法包合物中实际回收挥发油量(ml)挥发油包合率=__*100%挥发油投入量(ml)*(l—挥发油回收耗损率)1.2.3挥发油回收耗损率的测定取挥发油lml，加水400ml，按照中华人民共和国药典2000版挥发油测定法进行提取。测定结果，挥发油回收耗损率为20%。1.2.4正交试验及结果根据文献资料，本课题组选用了挥发油与P-环糊精的投放量的比例、包合温度、包合时间3个因素，每个因素三个水平的实验方案。(1)(2)见表5。表5挥发油包合工艺因素水平表因素ABCD水平环糊精油(g:ml)搅拌温度(°C)搅拌时间(小时)空白_16:1451.0空白28:1551.5空白310:1_^__空白正交实验表及结果。见表6。表6挥发油包合工艺正交实验表实验号环糊精油搅拌温度搅拌时间空白挥发油投入量挥发油回收量AB'C_0__^__I_11111.00.25212221.00.30313330.90.25421231.00.30522311.00.35623120.80.3531321.00.25832131.00.30933211.00.359以挥发油包合率为考察指标，实验结果见表7。表7挥发油包合工艺正交实验表实验号<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>结果显示各因素对实验结果的影响大小依次为B>A>C。挥发油包合条件为B3A2C2，即挥发油加入其体积10倍量的13-环糊精65t:饱和溶液中，恒温搅拌1.5小时。观察实验结果可以看出，总的包合率太低，最高还不到50%，后来考虑挥发油为脂溶性成分，若分散不完全，在包合过程中，容易挥发，不利于13-环糊精的包合，因此重新选择包合条件，增加无水乙醇与挥发油体积比作为新的考虑因素，重新选用L9(34)正交表(表8)进行正交试验。搅拌时间影响较小，参照预正交试验的结果，选定为1.5小时。1.2.5第二次正交试验及结果表8第二次挥发油包合工艺因素水平表因素ABC水平乙醇油(ml:ml)环糊精油(g:ml)温度D空白6:19:112:16:18:110:1455565空白空白空白正交实验及结果。见表9。表9第二次挥发油包合工艺正交实验表及结果实验号乙醇油环糊精油温度空白挥发油投入量挥发油回收量水平ABCDXIX2YlY2111111.000.900.400.30212220.901.000.500.50313331.000.850.500.40421231.200.850.550.50522310.900.950.500.45623120.801.000.450.50731320.951.000.450.50832130.950.950.350.45933210.801,100.500.55以挥发油包合率为指标，实验结果见表10c表10第二次挥发油包合工艺正交实验表11实验号乙醇油环糊精油温度空白结果水平ABCDXIX2￡X111150.042.692.62122269.462.131.93133361.958.8120.74212357.373.5130.85223169.459.2128.66231270.362.132.87313259.262.5121.78321346.152.698.79332178.162.5140.6Kl345.2345.1324.1361.8K2392.2359.2403.3386.4K3361.0394.1371.0350.2R47.049.079.236.2S245.4266.8697.0145.6**为P小于0.01,F5.3*5.7*15.0*'3.1*为P小于0.05结果显示各因素对实验结果的影响大小依次为C>B>A，挥发油包合条件为C^B^p即挥发油用9倍体积的无水乙醇溶解，加入挥发油体积10倍量的13-环糊精55t:饱和溶液中，恒温搅拌1.5小时。1.2.6按照最佳条件进行包合的重复试验取挥发油lml，用9ml无水乙醇溶解，加入10gP-环糊精55。C饱和溶液中，恒温搅拌1.5小时。重复上面的实验3次，油利用率分别为69%、70%、74%，挥发油包合率均较高。1.2.7薄层层析鉴别挥发油包合前后的变化取包合物2g加水20ml，用石油醚(30-60°C)提取3次，每次50ml，合并石油醚提取液浓縮至约2ml，作为供试液。另取挥发油，加石油醚制成每ml含0.2ml的挥发油，作为对照品溶液。按照薄层色谱法(中华人民共和国药典2000版一部附录VIB)试验。吸取上述两种溶液各10ml，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-丙酮(12:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液。供试品色谱中，在与对照挥发油色谱相应的位置上，显示基本相同的斑点。结果表明包合前后挥发油的薄层图谱基本一致。1.3山药等六味药材煎煮液提取工艺研究根据山药等六味中药的理化性质及其药理作用，该六味中药采用水提醇沉的方法12进行提取。本文以干粉量及芍药苷提取率为考察指标，按照L9(34)正交表进行了试验，以探讨煎煮液最佳提取工艺条件。1.3.l提取流程取3倍处方量的野麻草、荷叶、甘草等五味药材，与3倍处方量山药的90%合并，水煎醇沉，水浴浓縮，得流浸膏，72t:恒温烘干得总固物(备用)。1.3.2测定方法芍药苷的测定对照品溶液的配制精密称取真空干燥至恒重的芍药苷标准品至5ml容量瓶中，用50%甲醇溶解，定容，制成每lml含芍药苷0.44mg的对照品溶液。供试品溶液的制备取干固物约2g，精密称定，加甲醇80ml，水浴回流30分钟，放冷，滤过，滤渣用20ml甲醇洗涤，合并甲醇液，除去甲醇，精密吸取10ml水，加入残留物中使溶解，于离心机上3000r/min离心12分钟，精密移取上清液5ml于10ml容量瓶中，加水定容至10ml，用微孔滤膜滤过，滤液作为供试品溶液。高效液相色谱条件HypersilC18色谱柱(4.6X250mm，5um);流动相为水甲醇为66:34;流速为0.8ml/min，检测波长232nm，进样10ul。1.3.3正交试验及结果根据预试验结果，选定浸泡时间、煎煮时间、加水量、煎煮次数4个因素，每个因素设3个水平的试验方案。见表ll.表ll煎煮液提取工艺因素水平表因素ABCD水平浸泡时间(分钟)加水量(倍)煎煮时间(小时)煎煮次数1061.01230.81.523_^_^_^_^_以3倍处方量的药材提取所得干粉量及芍药苷提取率为考察指标，采用L9(34)正交表试验。结果见表12、13。表12煎煮液提取工艺正交实验表13<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>浸泡时间加水量煎煮时间煎煮次数芍药苷提取量<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>结果显示各因素对实验结果的影响大小依次为D>A>C>B;从芍药苷提取量看提取条件以D3A3C2B2，即浸泡60分钟，加8倍于药材体积量的水，煎煮3次，每次1.5小时为最佳。综合分析二者B、C、D—致，A不一致，A因素对干粉量影响不大，而对芍药苷提取率影响较大；故最佳提取工艺为D3A3C2B2，即浸泡60分钟，加8倍于药材量的水，煎煮3次，每次1.5小时。1.3.4按照最佳条件进行提取的重复试验取3倍处方量的野麻草、荷叶、甘草等五味药材，3倍处方量山药的90%合并，加8倍于药材量的水，浸泡60分钟，煎煮3次，每次1.5小时。重复3次，测得芍药苷分别为8.68mg/g、8.27mg/g、9.17mg/g.2浓縮与干燥工艺研究芍药苷相对来讲是比较稳定的，但在药液浓縮、浸膏烘干等过程中，若条件掌握不好，则损失率明显增加。[OMO]2.1浓縮工艺研究文献报道药液浓縮过程中，减压浓縮的芍药苷损失率明显低于直火浓縮的芍药苷损失率。如郭氏等研究发现将同一份煎煮液分为等量的两份，一份直火浓縮，一份减压浓縮。结果直火浓縮的芍药苷含量为14.74mg/g，芍药苷转移率为69.1%;减压浓縮的芍药苷含量为18.60mg/g，芍药苷转移率为87.2%。[OH2]2.2干燥工艺研究文献报道药液干燥过程中，喷雾干燥的芍药苷损失率明显低于烘箱干燥的芍药苷损失率。有文献报道妇炎康颗粒中芍药苷的含量，采用烘箱干燥法6批样品中芍药苷平均含量为8.5mg/g，采用喷雾干燥法6批样品中芍药苷平均含量为14.4mg/g。因此，我们选用了喷雾干燥工艺。本发明所述的治疗溃疡性结肠炎的中成药颗粒剂为中药复方，经提取所得干浸膏吸湿性强，粘度大，因此，我们以喷雾干燥的难易程度及干粉得率为指标，筛选辅料及辅料用量，确定处方，对该颗粒剂的喷雾干燥工艺进行了研究2.2.l实验材料的准备取30倍处方量药材进行小试，得浸膏525克，干固物含量66.8%，折合生药提取率为7.84%。将上述浸膏平均分为6份，每份含干固物58克。2.2.2喷雾干燥的条件在以下试验中，喷雾干燥的条件为固定的，即进风温度170°C，出风温度90-100°C，给液速度20ml/min。2.2.3加入辅料的筛选根据实践经验和预试验结果，选用微晶纤维素、微粉硅胶和e-环糊精三种物质作为辅料进行试验。取上述浸膏粉3份，各加入山药细粉(过120目)18g，另按照干固物辅料=1:1.5分别加入上述三种物质，见表14.表14辅料加入表试验号加入辅料.名称重量1微晶纤维素^2微粉硅胶87克3P—环糊精87克以药粉是否粘壁、颗粒性状及粉得率为指标，试验结果见表15.表15辅料加入试验结果表试验号粘壁与否颗粒性状粉得率1有些粘壁颗粒略呈絮状84%2.不粘壁颗粒轻，颜色浅91%3不粘壁颗粒较理想92%结果显示以e-环糊精作为辅料最为理想，故选用e-环糊精作为成型的辅料。2.2.4辅料加入量的筛选本颗粒剂选用|3_环糊精作为辅料，但辅料加入量的多少，直接影响颗粒剂的制备和保存。过多，增加颗粒剂成本，并增大服药剂量；过少，导致生产困难、稳定性差。为了寻求一较好比例，我们仍以药粉是否粘壁及粉得率为指标，进行了辅料加入量的筛选。取上述浸膏粉3份，按照不同比例加入辅料。见表16。表16辅料加入量表试验号加入辅料名称加入辅料用量加入山药粉量干固物与辅料比例1<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>结果显示加入辅料量以2、3组为佳，考虑到成本及服药量等问题，故选用第三组，及加入e-环糊精与山药粉总和为干固物的1.5倍。3久泻宁颗粒制剂成型工艺研究3.l干压制粒工艺研究芍药苷为一亲水性成分，无论单煎还是合煎，提取率均较高，但受外界条件影响较大，可能与芍药苷结构中具有苯甲酸酯键，其受热过久或温度过高，均易发生分解有关。因此，我们在工艺制备过程中不仅选用减压浓縮、喷雾干燥、而且采用干压制粒技术尽量减少芍药苷的损失，提高药品质量。干压制粒使物料不经过湿和热的过程，可縮短工时，并可减少生产设备对受湿、热容易变质的药物的影响，提高产品质量、成品率，并可减少污染。3.2休止角的测定采用固定漏斗法，将3只漏斗串联并固定于水平放置的坐标纸上2厘米处，小心地将药粉沿漏斗壁倒入最上面的漏斗中，直到下面的药粉圆锥体尖端接触到最下面漏斗下口为止。测出圆锥底部的直径，计算出休止角。结果为3=29.5结果显示本颗粒剂流动性良好。3.3吸湿率的测定将称量瓶烘干至恒重，准确称量，加入干燥至恒重的久泻宁颗粒，均匀摊开，使称量瓶底部颗粒厚约2mm。将底部盛有NaCL过饱和溶液的干燥器放入25。C恒温箱恒温24小时，此时干燥器内的相对湿度为75%。将药粉瓶放入干燥器内，瓶盖打开，25t:恒温保存48小时，1、2、4、8、12、24、48小时定时称量，按照下面的公式计算吸湿率。结果见表18。17吸湿后药粉重量-干燥至恒重的药粉重量吸湿率=-*ioo%干燥至恒重的药粉重量表18药粉在相对湿度为75%的环境中的吸湿率及物理外观时间'(h)1248122448因素吸湿率0.84%2.00°/。2.67%3.72%5.75%7.68%13.5%物理棕黄色棕黄色棕黄色棕黄色棕黄色棕黄色棕黄色外观颗粒颗粒颗粒颗粒颗粒颗粒颗粒结果显示颗粒吸湿程度较小，物理外观在吸湿后仍能保持颗粒状态，相对容易储存，达到了成型工艺研究的目的。三.本发明所制备的治疗溃疡性结肠炎的中成药颗粒剂(以下简称久泻宁颗粒)与功能主治有关的主要药效学试验资料(—)久泻宁颗粒主要药效学研究摘要目的观察久泻宁颗粒对大鼠溃疡性结肠炎模型的影B向，为临床用药的有效性提供实验依据。方法采用异种异体结肠黏膜组织致敏法和三硝基苯磺酸(TNBS)和无水乙醇局部灌肠相结合。将SD大鼠随机分为空白对照组，模型对照组，阳性对照组，久泻宁颗粒剂量组、久泻宁汤药剂量组。连续给药20天，末次给药后24h，大鼠腹主动脉取血，采用ELISA法测定大鼠细胞因子IL-2、TNF-a以及免疫球蛋白IgG、IgM含量。结果久泻宁颗粒中、高剂量组可升高IL-2，与UC模型组比较，差异非常显著(P<0.01);久泻宁颗粒各剂量组可降低TNF-q，与UC模型组比较，差异有显著意义(P<0.05P<0.01)。久泻宁颗粒中剂量组可显著降低IgG水平，久泻宁颗粒中、高剂量组可显著降低IgM水平，与UC模型组比较，差异有显著意义(P<0.05)。结论久泻宁颗粒对溃疡性结肠炎模型大鼠有显著的治疗作用。(二)实验方法与结果1.实验材料1.l实验动物清洁级SD种大鼠60只，雌雄各半，体重为200士20g，上海西普尔_必凯实验动物有限公司提供，许可证号SCXK(沪)2003-0002。大耳白家兔6只，体重2.0kg-2.5kg，福建中医学院实验动物中心提供。1.2主要实验药品久泻宁颗粒，实验用药为颗粒剂成剂前之药液。久泻宁汤药野麻草、荷叶、防风等九味中药购于福建中医学院国医堂中药房提供。弗氏完全佐剂，批号Lot102K8930，美国Sigma提供。2，4，6-三硝基苯磺酸(TNBS)，批号Lot42K5002，美国Sigma提供。无水乙18醇，批号030518，上海联试化工试剂有限公司提供。乙醚，批号CY030805，国药集团化学试剂有限公司提供。1.3实验试剂i厶大鼠白介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子(TNF-a)试剂盒由大连泛邦化工技术开发有限公司提供。一氧化氮(NO)试剂盒由南京建成生物工程研究所提供。补体C3、Q试剂盒由上海太阳生物技术公司提供。大鼠免疫球蛋白IgG、IgM试剂盒由美国Bethyl提供。总蛋白试剂盒由上海荣盛生物技术有限公司提供。1.4实验仪器TGL-16G高速冷冻离心机上海安亭科学仪器厂4020型自动生化分析仪日立BS210S电子天平北京赛多利斯天平有限公司TDL-4低速台式离心机上海安亭科学仪器厂MDF-V5410深低温冰箱日本HH-2数显恒温水浴锅国华电器有限公司ELX808酶联免疫检测仪美国宝特公司生产2.实验方法2.1实验动物分组清洁级SD大鼠60只，雌雄各半，体重为200士20g，随机分为6组，每组10只。各组分别为正常组，uc模型对照组，uc模型+久泻宁汤药阳性对照组，uc模型+久泻宁颗粒高剂量组、中剂量组和低剂量组。2.2模型所需药物的制备(1)异种异体抗原参照徐叔云方法稍作改进，取家兔新鲜结肠粘膜组织，匀浆充分后，-2(TC下冷冻24h，溶冻后以4000r/min速度离心30min，取上清夜提纯，用总蛋白试剂盒双縮脲法测定蛋白质含量。(2)抗原乳化液异种异体抗原与弗氏完全佐剂等体积配比。(3).灌肠液2，4，6-三硝基苯磺酸(TNBS)与无水乙醇等体积配比，浓度为2.5%(w/v)。白。匀分布c弱拱背c(4)麻醉剂乙醚。2.3UC大鼠模型的制备(1)在大鼠一侧足趾皮下注射抗原乳化液，使大鼠获得8mg异种蛋白。(2)14天后，在大鼠腹股沟部位皮下注射抗原乳化液，同样使大鼠获得8mg异种蛋(3)将免疫剌激40天的大鼠用乙醚麻醉。(4)用硅胶管插入大鼠肛门深约8cm，局部灌肠lml灌肠液。(5)拔出硅胶管后迅速捏紧大鼠肛门8min，其间不断摇摆大鼠，使液体在肠道均(6)待液体不再从肛门流出，把大鼠放回笼中常规饲养。三天后，大部分大鼠出现稀便，甚至稀水、脓血，肛门周围潮湿、污秽，精神萎靡，瘦造模1周后随机取2只大鼠处死取其部分结肠，肉眼可见结肠粘膜层变黑，肠壁增厚，管腔变粗，病理分析示粘膜糜烂坏死，但仍较完整，粘膜层可见炎性渗出坏死物，各层均见炎细胞浸润；2周后取2只大鼠结肠病理分析示粘膜脱落，溃疡明显；3周后大部分大鼠可见稀便或粘液便、精神萎靡等症状，模型大鼠结肠病理分析示仍有明显溃疡，腺体及肠壁各层可见大量急、慢性炎细胞，镜下可见血管增生、炎性肉芽肿及淋巴滤胞结构。实验中模型组大鼠的免疫球蛋白IgM、IgG和补体C3、C4以及IL-2、TNF-a等免疫和炎症指标较正常组都发生明显变化，说明大鼠体内存在免疫异常。以上表明造模成功。2.4给药方法正常组和UC模型对照组给等量的饮用水，各给药组分别给予久泻宁颗粒高剂量30g/kg、中剂量15g/kg(相当于60kg人的等效剂量)、低剂量7.5g/kg(以上浓度均为生药含量)，久泻宁汤药组12g/kg(相当于60kg人的等效剂量)，每天1次，连续灌胃20天。2.5标本采集及处理大鼠灌胃第20天后，禁食不禁水24小时，第21天用氯胺酮麻醉，腹主动脉采血6ml左右，以3000r/min离心10min，分离血清，冰冻保存待测，所有血清样本在1小时内分离完毕。取脾脏、胸腺、肾上腺、结肠(肛门处向上8cm，洗净内容物，用滤纸吸干)称重。取结肠溃疡明显处作病理分析。2.6实验指标检测与方法白介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子(TNF-a)的测定采用ELISA法。—氧化氮(NO)的测定采用硝酸还原酶法。补体C3、C4的测定采用免疫浊度法。免疫球蛋白IgG、IgM的测定采用ELISA法。总蛋白的测定采用双縮脲法。3.统计学处理数据均用SPSS11.0统计软件进行分析，用t检验作统计学处理，以显著性差异界定在0.05水平，结果以均数±标准差(；±S)表示。4.实验结果(见表16)4.1久泻宁颗粒对UC模型大鼠脾脏、胸腺、肾上腺的影响表1久泻宁颗粒对UC大鼠脾脏、胸腺、肾上腺的影响G±S)组另J鼠数剂量脾脏指数胸腺指数肾上腺指数(只)(g/kg)(%)(y。)正常对照组90.17±0.030.11±0.030.014±0.006uc模型组8O響21±0.040.09±0.030,017±0,006阳性对照组9120.23±0.040.10±0.020.018±0.007低剂量组97.50.29±0.07"0.12±0.030.018±0.007中剂量组9150.22±0.080.11±0.030.016±0.006髙剂量组10300.24±0.050.13±0.02*.0.018±0.005注t检验，与UC模型组比较，"<0.05;与阳性对照组比较,P<0.05。表1结果显示UC模型组与正常对照组比较，脾脏和肾上腺的脏器指数增高，胸腺指数降低，但差异均不显著(P>0.05)。药物治疗组与UC模型组比较，久泻宁颗粒低剂量组可显著增高脾脏指数(P<0.05);久泻宁颗粒高剂量组可显著增高胸腺指数(P<0.05)，且和阳性对照组比较，差异有显著意义(P<0.05)。4.2久泻宁颗粒对UC模型大鼠细胞因子的影响表2久泻宁颗粒对UC大鼠IL_2、TNF_a的影响G±S)<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>注t检验，与正常对照组比较，**P<0.01;与UC模型组比较，AP<0.05，"P<0.Ol，与阳性对照组比较，'P<0.05，"P<0.01。表2结果显示UC模型组与正常对照组比较，IL-2降低与TNF-a升高，差异非常显著(P<0.01)。药物治疗组与UC模型组比较，久泻宁颗粒中、高剂量组可升高IL-2，差异非常显著(P<0.01);久泻宁颗粒各剂量组和阳性对照组可降低TNF-a，差异有显著意义(P<0.05P<0.01)。与阳性对照组比较，久泻宁颗粒中、高剂量组可显著升高IL-2(P<0.05P<0.01);久泻宁颗粒中剂量组可显著降低TNF-a(P<0.05)。具体参照图1和图2所示。4.3久泻宁颗粒对UC模型大鼠免疫球蛋白的影响表3久泻宁颗粒对UC大鼠IgG、IgM的影响G±S)<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>注t检验，与正常对照组比较，**P<0.01;与UC模型组比较，"<0.05，AAP<0.01;与阳性对照组比较，'P<0.05，**P<0.01。表3结果显示UC模型组与正常对照组比较，UC模型组IgG、IgM均升高，差异有显著意义(P<0.05P<0.01)。药物治疗组与UC模型组比较，久泻宁颗粒中、高剂量组可显著降低IgG水平(P<0.05P<0.01);久泻宁颗粒中剂量组可显著降低IgM水平(P<0.01)。与久泻宁汤药阳性对照组比较，久泻宁中剂量组可显著降低IgG、IgM水平(P<0.05P<0.01)。4.4久泻宁颗粒对UC模型大鼠补体C3、C4的影响表4久泻宁颗粒对UC大鼠C3、C4的影响G±S)组另U鼠数(只)剂量(g/kg)C3(g/L)C4(g/L)正常对照组90.051±0.0220.020±0.008uc模型组80.101±0.043*0.052±0.026*阳性对照组9120.139±0.0710.076±0.043低剂量组97.50.123±0.0430.043±0.030中剂量组9150.155±0.071*0.067±0.030高剂量组10.300.137±0.0370.082±0.028*注t检验，与正常对照组比较，*P<0.05;与UC模型组比较，AP<0.05.表4结果显示UC模型组与正常对照组比较，UC模型组C3、Q均升高，差异有显著意义(P<0.05)。药物治疗组与UC模型组比较，久泻宁中剂量组可显著升高C3水平(P<0.05);久泻宁高剂量组可显著升高C4水平(P<0.05)。4.5久泻宁颗粒对UC模型大鼠一氧化氮(NO)的影响表5久泻宁颗粒对UC大鼠NO的影响(；±S)组另'J鼠数(只)剂量(g/kg)恥(umol/L)正常对照组96.68±1.01UC模型组819.72±3.53**阳性对照组91226.98±1.83"低剂量组97.521.72±4.27中剂量组91522.85±4.98高剂量组103027.11±5.05"注t检验，与正常对照组比较，**P<0.01;与UC模型组比较，<()01。表5结果显示UC模型组与正常对照组比较，UC模型组NO升高，差异非常显著(P<0.01)。药物治疗组与UC模型组比较，阳性对照组和久泻宁颗粒高剂量组可非常显著升高NO水平(P<0.01)。4.6久泻宁颗粒对UC模型大鼠结肠重量的影响表6久泻宁颗粒对UC大鼠结肠重量的影响(；±S)组别鼠数(只)剂量(g/kg)结肠(g)正常对照组90.49±0.11uc模型组81.50±0.69**阳性对照组9121.57±0.21低剂量组97.51.22±0.26中剂量组9151.06±0.32"高剂量组10301.29±0.33注t检验，与正常对照组比较，**P<0.01;与UC模型组比较，AP<0.05;与阳性对照组比较，'P<0.05。表6结果显示UC模型组与正常对照组比较，结肠重量明显增加，差异非常显著22(P<0.01)。药物治疗组与UC模型组比较，久泻宁颗粒中剂量组可显著降低结肠重量(P<0.05)。与阳性对照组比较，久泻宁颗粒中剂量组可显著降低结肠重量(P<0.05)。4.7久泻宁颗粒对UC模型大鼠结肠组织的影响光镜下病理切片观察正常对照组大鼠结肠粘膜上皮完整，连续，腺体排列规则，结构清楚。UC模型组大鼠结肠粘膜脱落，溃疡明显。阳性对照组可见腺体结构出现，一层上皮组织盖住溃疡。久泻宁颗粒低剂量组可见两边上皮组织向中间愈合。久泻宁颗粒中剂量组上皮组织基本完整，腺体排列欠规则，溃疡基本愈合。久泻宁颗粒高剂量组上皮组织基本完整，腺体排列较规则，溃疡基本愈合。(见图3_图10)权利要求一种治疗溃疡性结肠炎的中成药颗粒剂的制备工艺，其特征在于，它包括以下制备步骤(1)挥发油提取工艺按照重量份数比取砂仁4-8份、防风4-8份、荷叶15-25份三味药材粉碎后，加2.5-7.5倍体积量的水，不浸泡，直接进行4-10小时的挥发油提取，提取挥发油后，剩余滤液A；(2)煎煮液提取工艺按照重量份数比取白芍10-15份、淮山药25-35份、党参15-20份、野麻草25-35份、甘草3-8份、白术10-15份六味药材，将其中一味药材淮山药的10％磨为细粉，淮山药的剩余90％与其余五味药材混合后，浸泡30-90分钟，之后加水煎煮1-5次，每次煎煮1-2小时，每次加入的水的数量是浸泡前药材的4-12倍体积量，将每次煎煮所得滤液合并得到滤液B；(3)挥发油的包合工艺将步骤(1)提取的挥发油用其6-12倍体积量的95％乙醇溶解后，加入体积量为挥发油的8-12倍的β-环糊精45-60℃饱和溶液中，先恒温搅拌1-2小时，再静置18-28小时，接着抽滤后将滤渣低温干燥得到白色干燥粉末；(4)浓缩将滤液A和滤液B合并后，加95％的乙醇稀释至含醇量为70％，静置18-28小时，抽滤后得到滤液，水浴浓缩后恒温干燥得干固物，在干固物内加入β-环糊精及步骤(2)制得的淮山药细粉，β-环糊精及淮山药细粉的总和量为干固物重量的1-1.5倍，之后喷雾干燥得到干燥粉末；(5)制成颗粒剂将步骤(3)和(4)得到的干燥粉末合并，混合均匀，干压制粒，分装，包装，质检，获得成品。2.根据权利要求1所述的治疗溃疡性结肠炎的中成药颗粒剂的制备工艺，其特征在于步骤(1)中，三味药材的重量份数比为砂仁6份、防风6份、荷叶20份，加入的水的数量是该步骤所述的三味药材的5倍体积量，挥发油提取的时间为7小时。3.根据权利要求1所述的治疗溃疡性结肠炎的中成药颗粒剂的制备工艺，其特征在于步骤(2)中，六味药材的重量份数比为白芍15份、淮山药30份、党参20份、野麻草30份、甘草5份、白术10份，浸泡时间为60分钟，煎煮次数为3次，每次煎煮时间为1.5小时，每次煎煮时加入的水的数量是该步骤浸泡前药材的8倍体积量。4.根据权利要求1所述的治疗溃疡性结肠炎的中成药颗粒剂的制备工艺，其特征在于步骤(3)中，所述乙醇的体积量为挥发油的9倍；所述P-环糊精饱和溶液的温度为55t:，体积量为挥发油的10倍；恒温搅拌时间为1.5小时，静置时间为24小时。5.根据权利要求1所述的治疗溃疡性结肠炎的中成药颗粒剂的制备工艺，其特征在于步骤(4)中，静置时间为24小时，e-环糊精及淮山药细粉的总和量为干固物重量的1.2倍。全文摘要本发明涉及一种治疗溃疡性结肠炎的中成药颗粒剂的制备工艺，其特征在于，它包括以下制备步骤挥发油提取工艺、煎煮液提取工艺、挥发油的包合工艺、浓缩及制成颗粒剂。本发明所述的制备工艺能较好的保持药物疗效，使本发明制作的中成药颗粒剂达到甚至优于中药汤剂的治疗效果。文档编号A61K36/88GK101745069SQ20101010323公开日2010年6月23日申请日期2010年1月29日优先权日2010年1月29日发明者阮时宝申请人:阮时宝