专利名称：区分含鬼臼毒素的八角莲和/或桃耳七中药产品的方法
技术领域：
本发明属于药物分析领域，涉及一种区分含鬼白毒素的八角莲和/或桃耳七中药产品的方法。
背景技术：
八角莲和桃耳七(亦为桃儿七)是含鬼白毒素类成分的毒性药材，目前国内市场 存在将八角莲与桃耳七混作鬼白药材使用的现象。由于两种药材所含鬼白毒素类化学成分 组分和含量的不同，其毒性强度也有所不同，资料表明八角莲(鬼臼)的日服用量为3 9g，桃耳七的日服用量为1. 5 6g，因此将二者混用必定会给临床使用带来安全隐患。对于 原药材来说，根据其外观性状就可以将二者区分开来，但是经加工制成中成药产品后，就不 可能通过简单的外观性状来区分了。为了预防或区分中药产品中将二者混用而导致临床不 良反应的发生，亟待研发一种区分含鬼臼毒素的八角莲和/或桃耳七中药产品的方法。
发明内容
本发明的目的是提供一种区分含鬼臼毒素的八角莲和/或桃耳七中药产品的方法。本发明提供的区分含鬼臼毒素的八角莲和/或桃耳七中药产品的方法，包括如下 步骤在无阴性干扰的情况下，以去氧鬼白毒素溶液为对照品，用反相高效液相色谱方法对 供试品的溶液进行检测，若在与所述对照品保留时间一致的位置上未出现色谱峰，则所述 供试品中不含八角莲，若在与所述对照品保留时间一致的位置上出现色谱峰，则所述供试 品中含有桃耳七；所述供试品为含八角莲和/或桃耳七的中药产品。该方法中，检测波长为210纳米 300纳米，优选290纳米。所述供试品的溶液 中，溶剂选自溶剂a-溶剂d中的任意一种，所述溶剂a为甲醇，所述溶剂b为乙醇，所述溶 剂c为甲醇和水组成的混合液，所述溶剂d为乙醇和水组成的混合液。所述溶剂c中，甲 醇和水的体积比为40 99 1 60，优选50 50，所述溶剂d中，乙醇和水的体积比为 40 95 5 60，优选70 30。所述检测方法中，流动相为由甲醇、乙腈和水组成的混 合液。所述由甲醇、乙腈和水组成的混合液中，乙腈、甲醇和水的体积比为10 25 15 40 15 70，优选20 25 20 25 55 65。所述作为对照品的去氧鬼臼毒素溶液 中，溶剂选自下述溶剂a-溶剂d中的任意一种，所述溶剂a为甲醇，所述溶剂b为乙醇，所述 溶剂c为甲醇和水组成的混合液，所述溶剂d为乙醇和水组成的混合液。所述溶剂c中，甲 醇在所述溶剂c中的体积百分比为40 % 99 %，优选80 % 99 %。所述溶剂d中，乙醇在 所述溶剂d中的体积百分比为40% 99%，优选80% 99%;去养鬼臼毒素可按照文献公 开的方法制备得到，如刘发，尚天民，傅永丰，华鬼臼化学成分研究，药学学报，1979，14 (4) 241-145，蒋子华，陈泗英.川八角莲的化学成分[J].云南植物研究，1989，11 (4) =479-481, 尚明英，李军，蔡少青等，藏药小叶莲的化学成分研究，中草药，2000，31 (8) :569-571。所述 检测方法中，反相高效液相色谱柱为C-18柱色谱柱，各种品牌的C-18色谱柱均适用于该方法。上述区分含鬼白毒素的八角莲和/或桃耳七中药产品的方法中，所述无阴性干扰的情况是指在与供试品溶液相同的色谱条件下，用阴性样品溶液进样，检测得到的色谱图 中，在与去氧鬼臼毒素对照品相同的保留时间处无色谱峰；其中，所述阴性样品是指与产品 生产工艺相同的前提下，仅在产品处方中不加入八角莲和/或桃耳七，生产得到的样品；所 述阴性样品溶液是指将阴性样品按照供试品溶液的制备方法制备得到的溶液。由于去氧鬼白毒素是桃耳七的标志成分，故可用高效液相色谱法进行鉴别。但现 有方法中，由于流动相的组成与比例选择不恰当，如用不同比例的甲醇-水或乙腈_水，难 于将其与八角莲中一个未知成分区分开来，导致不能有效区分中药产品中所用的原料是八 角莲还是桃耳七。本发明提供的区分方法，由于选用了适当的流动相，可以有效区分中药产 品中所用的原料是八角莲还是桃耳七，为区分中药产品中将二者混用，预防临床不良反应 的发生提供了一种有效的鉴别方法。
图1为实施例1中去氧鬼臼毒素对照品的HPLC色谱图。图2为实施例1中八角莲药材的HPLC色谱图。图3为实施例1中桃耳七药材的HPLC色谱图。图4为实施例2中去氧鬼臼毒素对照品的HPLC色谱图。图5为实施例2中八角莲药材的HPLC色谱图。图6为实施例2中桃耳七药材的HPLC色谱图。图7为对比例1中去氧鬼臼毒素对照品的HPLC色谱图。图8为对比例1中八角莲药材的HPLC色谱图。图9为对比例1中桃耳七药材的HPLC色谱图。图10为对比例2中去氧鬼臼毒素对照品的HPLC色谱图。图11为对比例2中八角莲药材的HPLC色谱图。图12为对比例2中桃耳七药材的HPLC色谱图。
具体实施例方式下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不限于以下实施例。本 发明中所述溶液如无特别说明，均为水溶液。实施例1取去氧鬼臼毒素适量，用甲醇溶解制成浓度为0.02mg/ml的对照品溶液；取含八 角莲和/或桃耳七的中药产品(供试品)0. lg，精密称定，置于25mL量瓶中，加体积百分浓 度为50%的甲醇溶液20mL，超声处理20分钟，冷却，再加入体积百分浓度为50%的甲醇溶 液至刻度，摇勻，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。用反相高效液相色谱方法进行分析，色 谱柱为C-18柱，检测波长为290nm ；流速为0. 8mL ^irT1 ；柱温为30°C。选用流动相为体积 比为15 25 60的甲醇、乙腈和水的混合液时，八角莲(保留时间为17. 467分钟)在与 去氧鬼白毒素对照品保留时间(20. 008分钟)一致的位置上未检出色谱峰，而桃耳七则可 检出色谱峰(保留时间为19. 997分钟)，能将八角莲与桃耳七有效区分开来。
上述HPLC色谱图如图1 3所示，其中，图1为去氧鬼臼毒素对照品的HPLC色谱 图，图2为八角莲药材的HPLC色谱图，图3为桃耳七药材的HPLC色谱图。实施例2取去氧鬼臼毒素适量，用甲醇溶解制成浓度为0.02mg/ml的对照品溶液；取含八 角莲和/或桃耳七的中药产品(供试品)0. lg，精密称定，置于25mL量瓶中，加体积百分浓 度为50%的甲醇溶液20mL，超声处理20分钟，冷却，再加入体积百分浓度为50%的甲醇溶 液至刻度，摇勻，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。用反相高效液相色谱方法进行分析，色 谱柱为C-18柱，检测波长为290nm ；流速为0. 8mL ^irT1 ；柱温为30°C。选用流动相为体积 比为25 20 55的甲醇、乙腈和水的混合液时，八角莲(保留时间为15. 578分钟)在与 去氧鬼臼毒素对照品保留时间(16. 194分钟)一致的位置上未检出色谱峰，而桃耳七则可 检出色谱峰(保留时间为16. 189分钟)，能将八角莲与桃耳七有效区分开来。上述HPLC色谱图如图4 6所示，其中，图4为去氧鬼臼毒素对照品的HPLC色谱 图，图5为八角莲药材的HPLC色谱图，图6为桃耳七药材的HPLC色谱图。对比例1取去氧鬼臼毒素适量，用甲醇溶解制成浓度为0.02mg/ml的对照品溶液；取含八 角莲和/或桃耳七的中药产品(供试品)0. lg，精密称定，置于25mL量瓶中，加体积百分浓 度为50%的甲醇溶液20mL，超声处理20分钟，冷却，再加入体积百分浓度为50%的甲醇溶 液至刻度，摇勻，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。用反相高效液相色谱方法进行分析，色 谱柱为C-18柱，检测波长为290nm ；流速为0. 8mL ^irT1 ；柱温为30°C。选用流动相为体积 比为60 40的甲醇与水的混合液时，八角莲(保留时间为17. 397分钟)与桃耳七(保留 时间为17. 464分钟)在与去氧鬼臼毒素对照品保留时间(17. 465分钟)一致的位置上均 检出色谱峰，故不能将八角莲与桃耳七区分开来。上述HPLC色谱图如图7 9所示，其中，图7为对比例1中去氧鬼臼毒素对照品 的HPLC色谱图，图8为对比例1中八角莲药材的HPLC色谱图，图9为对比例1中桃耳七药 材的HPLC色谱图。对比例2取去氧鬼臼毒素适量，用甲醇溶解制成浓度为0.02mg/ml的对照品溶液；取含八 角莲和/或桃耳七的中药产品(供试品)0. lg，精密称定，置25mL量瓶中，加体积百分浓度 为50%的甲醇溶液20mL，超声处理20分钟，冷却，再加入体积百分浓度为50%的甲醇溶液 至刻度，摇勻，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。用反相高效液相色谱方法进行分析，色谱 柱为C-18柱，检测波长为290nm ；流速为0. 8mL ^irT1 ；柱温为30°C。选用流动相为体积比 为50 50的乙腈和水的混合液时，八角莲(保留时间为15. 897分钟)与桃耳七(保留时 间为15. 927分钟)在与去氧鬼臼毒素对照品保留时间(15. 891分钟)一致的位置上均检 出色谱峰，不能将八角莲与桃耳七区分开来。上述HPLC色谱图如图10 12所示，其中，图10为对比例2中去氧鬼臼毒素对照 品的HPLC色谱图，图11为对比例2中八角莲药材的HPLC色谱图，图12为对比例2中桃耳 七药材的HPLC色谱图。
权利要求
一种区分含鬼臼毒素的八角莲和/或桃耳七中药产品的方法，包括如下步骤在无阴性干扰的情况下，以去氧鬼臼毒素的溶液为对照品，用反相高效液相色谱方法对供试品的溶液进行检测，若在与所述对照品保留时间一致的位置上未出现色谱峰，则所述供试品中不含八角莲，若在与所述对照品保留时间一致的位置上出现色谱峰，则所述供试品中含有桃耳七；所述供试品为含八角莲和/或桃耳七的中药产品。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述反相高效液相色谱方法中，检测波长 为210纳米 300纳米，优选290纳米。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于所述供试品的溶液中，溶剂选自溶剂 a-溶剂d中的任意一种，所述溶剂a为甲醇，所述溶剂b为乙醇，所述溶剂c为甲醇和水组 成的混合液，所述溶剂d为乙醇和水组成的混合液。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于所述溶剂c中，甲醇和水的体积比为40 99 1 60，优选50 50，所述溶剂d中，乙醇和水的体积比为40 95 5 60，优选 70 30。
5.根据权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于所述检测方法中，流动相为由甲 醇、乙腈和水组成的混合液。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于所述由甲醇、乙腈和水组成的混合液中， 乙腈、甲醇和水的体积比为10 25 15 40 15 70，优选20 25 20 25 55 65。
7.根据权利要求1-6任一所述的方法，其特征在于所述作为对照品的去氧鬼白毒素 溶液中，溶剂选自下述溶剂a-溶剂d中的任意一种，所述溶剂a为甲醇，所述溶剂b为乙醇，所述溶剂c为甲醇和水组成的混合液，所述溶 剂d为乙醇和水组成的混合液。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于所述溶剂c中，甲醇在所述溶剂c中的体 积百分比为40% 99%，优选80% 99%。
9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于所述溶剂d中，乙醇在所述溶剂d中的体 积百分比为40% 99%，优选80% 99%。
全文摘要
本发明公开了一种区分含鬼臼毒素的八角莲和桃耳七的中药产品的方法。该方法包括如下步骤在无阴性干扰的情况下，以去氧鬼臼毒素溶液为对照品，用反相高效液相色谱方法对供试品溶液进行检测，若在与所述对照品保留时间一致的位置上未出现色谱峰，则所述供试品中不含八角莲，若在与所述对照品保留时间一致的位置上出现色谱峰，则所述供试品中含有桃耳七；所述供试品溶液为含八角莲和/或桃耳七的中药产品。本发明提供的区分方法，由于选用了适当的流动相，可以有效区分中药产品中所用的原料是八角莲还是桃耳七，为区分中药产品中将二者混用，预防临床不良反应的发生提供了一种有效的鉴别方法。
文档编号A61K36/29GK101816695SQ20101014594
公开日2010年9月1日 申请日期2010年4月9日 优先权日2010年4月9日
发明者傅欣彤, 王志斌, 郭洪祝, 陈有根 申请人:北京市药品检验所