专利名称：一种酒石酸泰乐菌素微球的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种酒石酸泰乐菌素微球的制备方法，属于兽药技术领域。
背景技术：
近年来，随着规模化、集约化养猪业的发展，不同地区、国家间频繁的引种，使得猪 呼吸道疾病增多，已经成为养猪业的一大难题。其中猪气喘病、猪繁殖与呼吸障碍综合症、 猪圆环病毒2型、猪流感病毒等在国内普遍存在，造成了养殖户的经济损失。人们对于治疗 猪呼吸道疾病已进行了很多的报道，提出了很多对该病的治疗方案，但由于该病病因的复 杂性及该病的多发性，给治疗带来了困难，治疗效果不佳，且预后多不良。目前临床上常用 泰乐菌素进行防治。泰乐菌素是一种大环内醋类抗生素，对革兰氏阳性菌、部分革兰氏阴性菌具有很 高的杀灭作用。敏感菌有金黄葡萄球菌、化脓链球菌、肺炎链球菌、化脓棒状杆菌等，同时， 对支原体感染的疾病治疗有特效，临床常用剂型有口服剂型及常规注射剂型。但该药常规 剂型消除半衰期较短，用药频繁，且在体内分布广泛。
发明内容
本发明的目的是提供一种载药量大、包封率高、消除半衰期较长的酒石酸泰乐菌 素微球的制备方法。为了实现以上目的，本发明所采用的技术方案是一种酒石酸泰乐菌素微球的制 备方法，每Ig酒石酸泰乐菌素按照如下步骤制成酒石酸泰乐菌素微球
1)取明胶0.l-2g，加入二次水制成5mL明胶溶液，在50°C温水浴中溶胀，然后加入Ig 酒石酸泰乐菌素，搅拌均勻，得到水相；
2)取液体石蜡和1.0-2. 0%的司盘-80按照4-6 1的体积比混合，得到油相；
3)将步骤1)得到的水相以1:5-7的体积比加入到步骤2)得到的油相中，并在500-800 r/min的转速下搅拌均勻，冷却至5°C以下，加入戊二醛交联剂进行交联固化；
4)用异丙醇洗去多余的交联剂，然后再用石油醚洗去微球表面的液体石蜡，真空干燥， 得到酒石酸泰乐菌素微球。所述戊二醛的加入量为l_5mL，固化时间为20_50分钟。本发明的酒石酸泰乐菌素微球，采用明胶作载体材料，无不良反应，无免疫原性， 具生物可降解性，应用广泛，可口服亦可注射。采用液体石蜡和司盘80为油相，能够提高微 球的载药量和包封率，而且有助于戊二醛的交联固化，从而延长微球药物的消除半衰期，在 动物体内起到药物缓释的作用。另外，本发明的制备方法操作简单，所采用的试剂平常无 奇，制备的成本较底，易于推广应用。
具体实施例方式实施例1本实施例的酒石酸泰乐菌素微球的制备方法，每Ig酒石酸泰乐菌素按照如下步骤制 成酒石酸泰乐菌素微球
1)取Ig明胶，加入二次水制成5mL明胶溶液，在50°C温水浴中完全溶胀，然后加入Ig 酒石酸泰乐菌素，搅拌均勻，得到水相；
2)取液体石蜡24mL和1.0-2. 0%的司盘-80 6mL将其混合，得到30mL的油相；
3)将步骤1)得到的水相加入到步骤2)得到的油相中，并在500r/min的转速下搅拌 均勻，冷却至5°C，加入2mL戊二醛交联剂进行交联固化，固化时间为20分钟；
4)用异丙醇洗去多余的交联剂，然后再用石油醚洗去微球表面的液体石蜡，真空干燥， 得到酒石酸泰乐菌素微球。经测定，该GMS粉末圆整度好，在水溶液中分散性好，平均载药量为43. 75%，包封 率为 87. 52%。实施例2
本实施例的酒石酸泰乐菌素微球的制备方法，每Ig酒石酸泰乐菌素按照如下步骤制 成酒石酸泰乐菌素微球
1)取0.Sg明胶，加入二次水制成5mL明胶溶液，在50°C温水浴中完全溶胀，然后加入 Ig酒石酸泰乐菌素，搅拌均勻，得到水相；
2)取液体石蜡25mL和1.0-2. 0%的司盘-80 5mL将其混合，得到30mL的油相；
3)将步骤1)得到的水相加入到步骤2)得到的油相中，并在600r/min的转速下搅拌 均勻，冷却至4°C，加入3mL戊二醛交联剂进行交联固化，固化时间为30分钟；
4)用异丙醇洗去多余的交联剂，然后再用石油醚洗去微球表面的液体石蜡，真空干燥， 得到酒石酸泰乐菌素微球。制得圆整度好的微球粉末，平均载药量为45. 68%，包封率为89. 52%。实施例3
本实施例的酒石酸泰乐菌素微球的制备方法，每Ig酒石酸泰乐菌素按照如下步骤制 成酒石酸泰乐菌素微球
1)取1.5g明胶，加入二次水制成5mL明胶溶液，在50°C温水浴中完全溶胀，然后加入 Ig酒石酸泰乐菌素，搅拌均勻，得到水相；
2)取液体石蜡30mL和1.0-2. 0%的司盘-80 5mL将其混合，得到35mL的油相；
3)将步骤1)得到的水相加入到步骤2)得到的油相中，并在800r/min的转速下搅拌 均勻，冷却至3°C，加入4mL戊二醛交联剂进行交联固化，固化时间为40分钟；
4)用异丙醇洗去多余的交联剂，然后再用石油醚洗去微球表面的液体石蜡，真空干燥， 得到酒石酸泰乐菌素微球。对该GMS微球粉末进行测试，其圆整度良好，分散性好，平均载药量为39. 68%，包 封率为86. 52%。实施例4
本实施例的酒石酸泰乐菌素微球的制备方法，每Ig酒石酸泰乐菌素按照如下步骤制 成酒石酸泰乐菌素微球
1)取2g明胶，加入二次水制成5mL明胶溶液，在50°C温水浴中完全溶胀，然后加入Ig 酒石酸泰乐菌素，搅拌均勻，得到水相；
42)取液体石蜡25mL和1.0-2. 0%的司盘-80 5mL将其混合，得到30mL的油相；
3)将步骤1)得到的水相加入到步骤2)得到的油相中，并在800r/min的转速下搅拌 均勻，冷却至2°C，加入5mL戊二醛交联剂进行交联固化，固化时间为50分钟；
4)用异丙醇洗去多余的交联剂，然后再用石油醚洗去微球表面的液体石蜡，真空干燥， 得到酒石酸泰乐菌素微球。经测定，该微球粉末，在水溶液中分散性好，圆整度好，平均载药量为41. 02%，包封 率为 79. 03%。实施例5
本实施例的酒石酸泰乐菌素微球的制备方法，每Ig酒石酸泰乐菌素按照如下步骤制 成酒石酸泰乐菌素微球
1)取Ig明胶，加入二次水制成5mL明胶溶液，在50°C温水浴中完全溶胀，然后加入Ig 酒石酸泰乐菌素，搅拌均勻，得到水相；
2)取液体石蜡20mL和1.0-2. 0%的司盘-80 5mL将其混合，得到25mL的油相；
3)将步骤1)得到的水相加入到步骤2)得到的油相中，并在700r/min的转速下搅拌 均勻，冷却至1°C，加入3mL戊二醛交联剂进行交联固化，固化时间为40分钟；
4)用异丙醇洗去多余的交联剂，然后再用石油醚洗去微球表面的液体石蜡，真空干燥， 得到酒石酸泰乐菌素微球。制得圆整度好的微球粉末，平均载药量为39. 71%，包封率为62. 39%。实施例6
本实施例的酒石酸泰乐菌素微球的制备方法，每Ig酒石酸泰乐菌素按照如下步骤制 成酒石酸泰乐菌素微球
1)取0.Ig明胶，加入二次水制成5mL明胶溶液，在50°C温水浴中完全溶胀，然后加入 Ig酒石酸泰乐菌素，搅拌均勻，得到水相；
2)取液体石蜡25mL和1.0-2. 0%的司盘-80 5mL将其混合，得到30mL的油相；
3)将步骤1)得到的水相加入到步骤2)得到的油相中，并在700r/min的转速下搅拌 均勻，冷却至0°C，加入ImL戊二醛交联剂进行交联固化，固化时间为20分钟；
4)用异丙醇洗去多余的交联剂，然后再用石油醚洗去微球表面的液体石蜡，真空干燥， 得到酒石酸泰乐菌素微球。经测定，该GMS粉末圆整度好，在水溶液中分散性好，平均载药量为42. 45%，包封 率为 85. 24%ο实验例酒石酸泰乐菌素明胶微球在兔体内药物动力学试验 1样品的配制
1. 1药品配制
取酒石酸泰乐菌素明胶微球，临用前加入注射用生理盐水，充分振摇，使微球均勻分 散，配制成浓度为0. 335mg/mL的TT-GMS (酒石酸泰乐菌素明胶微球)混悬液；另取酒石酸 泰乐菌素原料药，临用前加入注射用生理盐水，充分振摇，配制成浓度为0. 335mg/mL的TT 溶液，无菌过滤，作为对照药物。1.2泰乐菌素标准储备液的配制
精密称取泰乐菌素标准品10mg，置于IOOmL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配制成0. lmg/mL的泰乐菌素标准储备液，取ImL稀释成0. 01mg/mL泰乐菌素标准储备液，置冰箱
4°C保存。2试验动物的分组与给药
兔预饲一周临床检查健康后引入试验，给药前禁食12h，随机分为A、B两组，每组6只，A 组为酒石酸泰乐菌素注射剂对照组，B组为TT-GMS混悬剂试验组。A组分别以9mg/Kg · b. w.剂量(以TT计)于耳外缘静脉注射酒石酸泰乐菌素注射液。B组分别以9mg/Kg · b. w.剂量(以TT计)于耳外缘静脉注射TT-GMS注射混悬液。3血浆样品采集及前处理
试验组和对照组的家兔分别于给药前和给药后的下列不同时间点于对侧耳外缘静脉 采血，0. 083h、0. 167h、0. 333h、0. 5h、lh、2h、4h、sh、12h、24h、36h、48h、72h，采取的血液放入 经肝素处理过的小离心管中，3000r/min离心lOmin，取血浆0. 5mL，加入1. OmL甲醇涡旋振 动2min，充分混勻，12000r/min离心lOmin，取上清液1. OmL，50°C氮气吹干，残留物用流动 相100 μ L溶解后，再次12000r/min离心lOmin，取上清液用0. 45 μ m滤膜过滤，取200 μ L 进样，进行HPLC分析。4反相高效液相色谱法的色谱条件
色谱柱Hypersil ODS C18 柱(250mmX 4. 6mm，5 μ m)
流动相:2mol/L高氯酸钠(lmol/L盐酸调PH值至2. 5 士 0. 1)乙睛(60:40，V/V) 流速1. OmL/min
检测器紫外检测器，检测波长为290nm 柱温室温 进样量20yL 5标准曲线的绘制
取兔血0. 5mL,置于5mL带塞离心管中，依次加入泰乐菌素标准储备液，配制成浓度为 0. 05,0. 1,1. 0,5. 0、100μ g/mL系列样品，然后将上述样品按照3项“血浆样品采集及前处 理”方法进行离心、过滤等操作，取处理后样品放入反相高效液相色谱仪中进行血液色谱分 析。以泰乐菌素峰面积值为纵坐标，药物浓度(C)为横坐标，绘制标准曲线。得到线性回归 方程y=3339. 4x+3092. 4，r=0. 9969，得到的标准曲线可以用于待测样品的定量分析。6回收率和精密度测定
取兔血0. 5mL，加入泰乐菌素标准储备液，配制0. 1、1. 0,5. O μ g/mL的低、中、高三个不 同浓度样品，按照3项“血浆样品采集及前处理”方法进行离心、过滤等操作，再将处理后样 品放入反相高效液相色谱仪中进行血液色谱分析，测得的泰乐菌素的面积与相应浓度未经 处理的泰乐菌素标准溶液直接进样所得的面积之比，作为提取回收率。结果表明，回收率大 于 90%ο取兔血0. 5mL，加入泰乐菌素标准储备液，配制0. 1、1. 0、5. O μ g/mL的低、中、高三 个不同浓度，按上述方法于一日内做5次测定，连续测定5日，测定方法的日内与日间精密 度。结果表明日内平均相对标准偏差为5. 03%，日间平均相对标准偏差为5. 32%，表明精密 度好。7数据处理
本试验测得的血浆的药物浓度一时间数据采用MCPKP药物动力学参数计算程序在计
6算机上进行药动学计算和统计处理，通过实测值与方程预测值之间的平方差之和(F)和相 关系数(r2)来判定，并计算出药动学参数。
8试验结果
血浆的药物浓度一时间数据采用MCPKP即药物动力学参数计算程序在计算机上进行 药动学计算和统计处理，由程序自动拟合最佳模型，泰乐菌素的血浆一药时数据符合二室 开放式模型，理论方程C1=Q. 8456e_4_489t +0. 5670e_°_1828t。计算的药动学参数结果表明，静注 酒石酸泰乐菌素(9mg/kg · b. w.)后，分布半衰期为0. 1558h，消除半衰期为3. 7915h，曲线 下面积为5. 3152m mg/L · h，体内药物浓度维持时间为22. 0910h。实施例1的泰乐菌素明 胶微球的血菜一药时数据符合三室开放式模型，理论方程C1=L 4572e-3'9950t +0. 4621e_°_2629 t+0. 1526e_°_°4°7t。计算的药动学参数结果表明，静注TT-GMS混悬注射液(9g/Kg)后，分布半 衰期为2. 4307h,消除半衰期为15. 7201h,曲线下面积为19. 8090 mg/L -h,体内药物浓度维 持时间为96. 9400h。 9、采用上述相同的方法对实施例2-6进行试验，最终得到的结果见表1。
权利要求
一种酒石酸泰乐菌素微球的制备方法，其特征在于每1g酒石酸泰乐菌素按照如下步骤制成酒石酸泰乐菌素微球1)取明胶0.1 2g，加入二次水制成5mL明胶溶液，在50℃温水浴中溶胀，然后加入1g酒石酸泰乐菌素，搅拌均匀，得到水相；2)取液体石蜡和1.0 2.0%的司盘 80按照4 61的体积比混合，得到油相；3)将步骤1)得到的水相以15 7的体积比加入到步骤2)得到的油相中，并在500 800 r/min的转速下搅拌均匀，冷却至5℃以下，加入戊二醛交联剂进行交联固化；4)用异丙醇洗去多余的交联剂，然后再用石油醚洗去微球表面的液体石蜡，真空干燥，得到酒石酸泰乐菌素微球。
2.根据权利要求1所述的酒石酸泰乐菌素微球的制备方法，其特征在于所述戊二醛 的加入量为l_5mL，固化时间为20-50分钟。
全文摘要
本发明公开了一种酒石酸泰乐菌素微球的制备方法，采用明胶为载体，以液体石蜡和司盘80为油相，采用戊二醛为交联剂制备酒石酸泰乐菌素微球。本发明的酒石酸泰乐菌素微球，采用明胶作载体材料，无不良反应，无免疫原性，具生物可降解性，应用广泛，可口服亦可注射。采用液体石蜡和司盘80为油相，能够提高微球的载药量和包封率，而且有助于戊二醛的交联固化，从而延长微球药物的消除半衰期，在动物体内起到药物缓释的作用。另外，本发明的制备方法操作简单，所采用的试剂平常无奇，制备的成本较底，易于推广应用。
文档编号A61K47/22GK101947207SQ20101050925
公开日2011年1月19日 申请日期2010年10月15日 优先权日2010年10月15日
发明者吴红云, 李建正, 班曼曼 申请人:郑州后羿制药有限公司