专利名称：一种格木提取物、其制备方法、其药物组合物及用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种格木(Erthrophleum fordii Oliver)提取物，其制备方法，含有该提取物的药物组合物，以及该提取物和所述药物组合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
背景技术：
癌症是严重危及人类健康的多发病和常见病，2001年世界卫生组织(WHO)报道， 世界癌症发病率和死亡率比1990年上升了 22 %，今后20年还将上升约50 %。2020年全球癌症患病人数将达3000万，死亡1000万，癌症正在成为新世纪人类的第一杀手。基于此， 寻找和发现预防治疗癌症的新药，提高和改善人民的健康水平和生活质量，已成为药学科研工作者迫切需要解决的问题。目前在癌症的手术治疗、放疗、化疗和生物治疗等四大疗法中，化疗仍是主要方法。临床上使用的药物大多数作用机制都涉及肿瘤细胞的核酸代谢，以DNA为作用靶点。但化疗药物的严重毒性反应及杀灭癌细胞不彻底的问题始终未解决。因此，继续寻找和研制新型抗癌药物仍是主要的研究方向。近年来分子肿瘤学的研究所取得的进展为肿瘤治疗提供了许多新的、令人感兴趣的肿瘤治疗途径，癌基因及抑制基因、信号转导通路、端粒及端粒酶、DNA拓扑异构酶等都是可利用的抗癌药物新靶点。在新靶点发现中，研究肿瘤细胞信号转导机制，选择性阻断肿瘤细胞自分泌或旁分泌的信号转导通路，破坏其自控性生长调节机制，正在成为极具吸引力的研究热点。信号转导阻滞剂与经典的细胞毒性抗癌药物相比，具有选择性强、毒副作用小、不受细胞产生抗药性的影响等优点，尤其对晚期肿瘤或转移癌具有独到的疗效。因此研究肿瘤细胞信号转导机制具有潜在的应用价值和意义。天然产物作为抗肿瘤药物来源之一的作用是不可忽略的，实践证明，而且在已经发现的天然抗癌活性成分中相当一部分是从有毒植物资源中获得的。“毒性”也具有积极有益的一面，许多有毒植物由于具有强烈的生物活性而被用作药物、杀虫剂、灭菌剂以及供捕兽、捕鱼等使用，成为有特殊价值的主要经济资源。因此，从有毒植物中寻找具有新颖抗肿瘤作用机制的化合物和活性成分或组分， 具有广阔的应用前景。H- 7K (Erthrophleum fordii Oliver) ^ ja (Leguminosae) H- 7^ M (Erthrophleum)植物，为常绿乔木，通常直径约1. 2米，高约10米，有的可达40米。世界上共有15种，分布于非洲的热带地区、亚洲东部的热带和亚热带地区及澳大利亚北部。(中国植物志，科学出版社，第39卷，第1177页)。该属植物我国只有一种，即格木 (Erthrophleumfordii Oliver)，又名赤木叶、斗登凤，为我国传统草药。其树皮和种子可入药，性辛、平，有毒，入心经。主要功效为益气活血，可治疗心气不足所致的气虚血瘀之症，即心悸、气短、乏力、下肢及全身浮肿等(中华药海，哈尔滨出版社，1993，第1402页)。格木属植物中普遍含有活性成分咖萨因型二萜生物碱，目前在国内，除我课题组对该植物的化学成分及药理活性进行研究外，尚未见其它文献报道。
发明内容
本发明的一方面提供了一类格木提取物，其可用于制备抗肿瘤药物。本发明的另一方面提供了上述格木提取物的制备方法。本发明的又一方面提供了一种药物组合物，其包括有效剂量的作为活性成分的格木提取物及制药领域中常用的载体。本发明的再一方面涉及格木提取物及其组合物在制备抗肿瘤药物中的应用。为解决本发明的技术问题，本发明采取如下的技术方案本发明涉及一种可用于制备抗肿瘤药物的格木提取物，其制备方法如下(1)称取格木叶并用溶剂提取，提取液浓缩得格木提取物。优选的格木原药材是格木叶。格木叶优选经干燥并适当的粉碎，以增大与溶剂的接触面积，提高提取效率。提取溶剂可以为水或各种有机溶剂；优选的溶剂是醇类或水与醇类的混合物；优选的醇类包括甲醇、乙醇、异丙醇、丁醇等，最优选的是乙醇。乙醇浓度可以是体积比50 100% ；优选的浓度为体积比70 100%，最优选的乙醇浓度为体积比95%。提取时溶剂的使用量为溶剂体积原药重量=4 14 1(升/千克)，优选为 6 12 1，更优选为8 10 1。提取可以在静态或动态下进行，优选在动态条件下，例如搅拌。为了提高提取的效率，可以使用超声波等手段。提取的温度可以从室温(例如20°C )到溶剂回流温度的范围内，优选在溶剂回流温度下进行。提取可以以连续或间歇的方式进行，间歇提取时可重复1 5次，优选2 4次， 最优选为3次。每次的提取时间是1 5小时，优选为1. 5 4小时，最优选为2 3小时。提取步骤结束后，合并滤液，滤去药渣，然后，滤液在动态条件下，在常压或减压下加热浓缩成膏状，优选在减压下浓缩。所得膏状物即为格木提取物。一种优选的格木提取物制备方法如下称取格木叶，每千克格木叶使用6 10升的95%乙醇回流2 4次，每次2 3小时；合并提取液，提取液经减压浓缩得浸膏即为格木提取物。(2)为了提高药效，便于制剂和病人服用，步骤(1)中得到的格木提取物可以进一步地纯化。所述纯化可以通过萃取分离步骤、和/或柱层析步骤进行。优选采用萃取分离步骤，其具体包括将步骤(1)获得的格木浸膏溶于醇类溶剂，然后与硅藻土拌样，装入索氏提取器， 依次使用极性从小到大的有机溶剂进行提取，并将各种有机溶剂的提取液分别浓缩得到各类不同的提取物。其中，优选的醇类溶剂包括甲醇、乙醇，更优选的是甲醇。溶解格木浸膏时甲醇的用量为甲醇体积浸膏重量=1.5 2. 5 1(升/千克)， 优选是2 1。溶解后的甲醇溶液与硅藻土拌样，硅藻土的用量为浸膏重量硅藻土重量=1 4. 5 5. 5，优选是 1 5。所述极性从小到大的有机溶剂可以选自石油醚、乙酸乙酯、甲醇；相应地，浓缩得到的提取物分别是格木的石油醚提取物、乙酸乙酯提取物以及甲醇提取物。石油醚、乙酸乙酯、甲醇分别回流提取的时间是40 50小时，优选是48小时。石油醚、乙酸乙酯、甲醇的用量分别是5 10升，优选是8升。浓缩可以使用本领域的常规技术，例如在常压或减压条件下加热浓缩、薄膜蒸发等，优选在减压条件下浓缩。优选的纯化方法包括如下步骤将步骤(1)中获得的格木浸膏溶解于2倍量(升 /千克)的甲醇中；所得甲醇溶液与5倍浸膏重量的硅藻土拌样，放于索氏提取器中；分别以8升石油醚、乙酸乙酯、甲醇回流提取48小时；减压浓缩蒸干，分别得到格木的石油醚提取物、乙酸乙酯提取物、甲醇提取物。药理研究表明格木的乙酸乙酯提取物的药效最好。(3)为提高单位剂量的药效，减少病人的药物使用量，方便控制产品的质量，步骤 (2)制备得到的提取物还可以进一步的纯化。纯化可以通过柱层析，例如各类交换柱或吸附柱层析，以得到有效部位。优选的吸附柱包括正、反相硅胶、氧化铝、纤维素、聚酰胺、活性碳柱、大孔树脂柱。 优选的凝胶柱是羟丙基葡聚糖凝胶柱。最优选的是聚酰胺柱。吸附色谱中吸附剂的用量为样品重量的10 200倍，优选10 30倍。洗脱剂可以使用本领域常用的洗脱剂，例如水、有机溶剂、以及它们的混合物，所述有机溶剂包括甲醇、乙醇、丙酮、甲酰胺、二甲基甲酰胺等；优选的洗脱剂包括水、醇类以及水与醇类的混合物，优选的醇类是乙醇。洗脱溶剂的用量与吸附剂的重量比(升/千克)优选为3 20 1，进一步优选为10 15 1，更优选为12 1。色谱分离得到的提取物可经冷冻干燥或真空干燥成干粉，也可将浓缩液体直接喷雾干燥成干粉，或通过膜技术进行精制浓缩后，再成浸膏或干粉。一种优选的纯化步骤(2)中得到的提取物的方法是将步骤⑵中得到的乙酸乙酯提取物上聚酰胺柱分离。其具体包括如下步骤将乙酸乙酯提取物溶于水，过滤后加到装有10 30倍重量的30 60目的聚酰胺填料的层析柱上，依次用水、25 35%的乙醇、 55 65%的乙醇和90%的乙醇进行梯度洗脱，每种洗脱剂的用量与聚酰胺的重量比(升/ 千克)均为10 15 1，优选是12 1 ；将收集到的各部分洗脱液分别浓缩至干，得水提取物、25 35%乙醇提取物、55-65%乙醇提取物和90%的乙醇提取物。药理研究表明水提取物的药效是最好的，其次是25 35%的乙醇提取物。(4)为进一步获得有效组分，方便控制产品的质量，步骤(3)中制备的提取物可进
一步纯化。步骤C3)中得到的水提取物和25 35%的乙醇提取物可通过柱色谱分离纯化，可选的柱色谱包括排阻色谱和吸附柱色谱。优选的排阻色谱是凝胶色谱。优选的吸附柱包括正反相硅胶、氧化铝、纤维素、聚酰胺、活性碳柱、大孔树脂柱。
最优选的是羟丙基葡聚糖凝胶色谱和反相硅胶。羟丙基葡聚糖凝胶色谱中羟丙基葡聚糖凝胶色谱的用量为样品重量的20 100 倍，优选为30 60倍。羟丙基葡聚糖凝胶色谱中使用的洗脱剂可以是本领域常用的洗脱剂，例如水、有机溶剂、以及它们的混合物，所述有机溶剂包括甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷和石油醚；优选的洗脱剂包括水、醇类以及水与醇类的混合物，优选的醇类是甲醇。洗脱溶剂的用量与吸附剂的重量比(升/千克)为2 8 1，优选为4 1。反相硅胶柱中吸附剂的用量为样品重量的20 100倍，优选为30 60倍。反相硅胶柱中使用的洗脱剂可以是本领域常用的洗脱剂，例如水、有机溶剂、以及它们的混合物。所述有机溶剂包括甲醇、乙腈。优选为甲醇。洗脱溶剂的用量与吸附剂的重量比(升/千克)为10 20 1，优选为15 1。各流份的化学成分检测可以使用薄层层析后喷洒显色剂显色的方法或高效液相色谱/紫外检测的方法进行。薄层层析的吸附剂可以使用本领域常用的吸附剂，例如氧化铝、硅胶、硅藻土、聚酰胺、纤维素、淀粉等。优选为硅胶，最优选为硅胶gf254。展开剂主要使用本领域常用的低沸点有机溶剂及其混合物。所述低沸点有机溶剂包括石油醚、正己烷、苯、乙醚、二氯甲烷、 氯仿、乙酸乙酯、丙酮、乙醇、甲醇等。优选为氯仿与甲醇的混合展开剂。显色剂主要使用本领域常用的生物碱类化合物的显色剂及通用试剂。生物碱类显色剂包括碘化铋钾试剂、碘化汞钾、碘-碘化钾试剂等，通用显色剂包括硫酸、硫酸/香草醛、磷钼酸或硅钨酸等。优选为碘化铋钾试剂。高效液相色谱/紫外检测的波长选定在210 230nm，优选为220nm。也可以进行多个波长扫描。得到的提取物可经冷冻干燥或真空干燥成干粉，也可把浓缩液体直接喷雾干燥成干粉，或通过膜技术进行精制浓缩后，再成浸膏或干粉。优选的分离纯化步骤是水提取物和25 35%的乙醇提取物分别溶解于甲醇过滤后，加至30 60倍重量的羟丙基葡聚糖凝胶柱上，以甲醇为洗脱剂，甲醇的用量和凝胶的重量比(升/千克)为4 1。各流分经薄层层析或高效液相色谱检测后合并浓缩加至30 60倍重量的反相硅胶柱，以甲醇/水为洗脱剂进行梯度洗脱，甲醇水的比例从5 95至 90 10，每个梯度的洗脱剂的用量与反相硅胶的重量比(升/千克)为15 1。收集的各流分经薄层层析或高效液相色谱检测后合并并富集得到总生物碱。本发明涉及上述步骤⑴至⑷中得到的任意一种格木提取物。上述提取物均包括步骤(4)中获得的总生物碱。本发明的格木提取物的有效成分包括咖萨因型二萜生物碱类化合物。上述提取物可经冷冻干燥或真空干燥成干粉，也可把浓缩液体直接喷雾干燥成干粉，然后制成各种剂型。本发明涉及一种药物组合物，包括上述步骤⑴至⑷中得到的任意一种格木提取物及药学上可接受的载体。本发明还涉及含有作为活性成份的本发明提取物以及常规药物赋形剂或辅剂的药物组合物。通常本发明提取物占药物组合物总重量的0. 1 95%。本发明还提供一种药物组合物，它包括药物有效剂量的作为活性成分的格木提取物及药学上可接受的载体。本发明所述的药物组合物可根据本领域公知的方法制备。用于此目的时，如果需要，可将本发明提取物与一种或多种固体或液体药物赋形剂和/或辅剂结合，制成可作为人药或兽药使用的适当的施用形式或剂量形式。本发明提取物或含有它的药物组合物可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔粘膜、眼、肺、皮肤、阴道、腹膜、直肠等，优选口服给药。本发明提取物或含有它的药物组合物的给药途径可为注射给药。注射包括静脉注射、肌肉注射、皮下注射、皮内注射、腹腔注射和穴位注射等。给药剂型可以是液体剂型、固体剂型或半固体剂型。液体剂型可以是溶液剂(包括真溶液和胶体溶液)、乳剂(包括水包油型、油包水型和复乳)、混悬剂、注射剂(包括水针剂、粉针剂和输液)、滴眼剂、滴鼻剂、洗剂和搽剂等。固体剂型可以是片剂(包括普通片、 肠溶片、含片、分散片、咀嚼片、泡腾片、口腔崩解片)、胶囊剂(包括硬胶囊、软胶囊、肠溶胶囊)、颗粒剂、散剂、微丸、滴丸、栓剂、膜剂、贴片、气(粉)雾剂、喷雾剂等；半固体剂型可以是软膏剂、凝胶剂、糊剂等。本发明提取物可以制成普通制剂、也可以是缓释制剂、控释制剂、靶向制剂及各种
微粒给药系统。为了将单位给药剂型制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种赋形剂，包括稀释剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、润滑剂、助流剂。稀释剂可以是淀粉、糊精、蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纤维素、硫酸钙、磷酸氢钙、碳酸钙等；湿润剂可以是水、乙醇、异丙醇等；粘合剂可以是淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、微晶纤维素、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、丙烯酸树脂、卡波姆、聚乙烯毗咯烷酮、聚乙二丙醇等；崩解剂可以是干淀粉、微晶纤维素、低取代羟丙基纤维素、交联聚乙烯毗咯烷酮、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、碳酸氢钠与构椽酸、碳酸钙、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠；润滑剂和助流剂可以是滑石粉、二氧化硅、硬脂酸盐、酒石酸、液体石蜡、聚乙二醇等。还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。为了将给药单元制成丸剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如稀释剂与吸收剂，如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、氢化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、 月桂酸聚乙二醇甘油酯、高岭土、滑石粉等；粘合剂，如阿拉伯胶、黄菩胶、明胶、乙醇、蜂蜜、 液糖、米糊或面糊等；崩解剂，如琼脂粉、干燥淀粉、海藻酸盐、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等。为了将给药单元制成栓剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如聚乙二醇、卵磷脂、可可脂、高级醇、高级醇的酯、明胶、半合成甘油酯等。为了将给药单元制成胶囊，将有效成分本发明提取物与上述的各种载体混合，并将由此得到的混合物置于硬的明胶胶囊或软胶囊中。也可将有效成分本发明提取物制成微囊剂，混悬于水性介质中形成混悬剂，亦可装入硬胶囊中或制成注射剂应用。例如，将本发明提取物制成注射用制剂，如溶液剂、混悬剂溶液剂、乳剂、冻干粉针齐U，这种制剂可以是含水或非水的，可含一种和/或多种药效学上可接受的载体、稀释剂、 粘合剂、润滑剂、防腐剂、表面活性剂或分散剂。如稀释剂可选自水、乙醇、聚乙二醇、1，3_丙二醇、乙氧基化的异硬脂醇、多氧化的异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯等。另外，为了制备等渗注射液，可以向注射用制剂中添加适量的氯化钠、葡萄糖或甘油，此外，还可以添加常规的助溶剂、缓冲剂、PH调节剂等。这些辅料是本领域常用的。此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂、甜味剂或其它材料。为达到用药目的，增强治疗效果，本发明的提取物或药物组合物可用任何公知的给药方法给药。本发明提取物药物组合物的给药剂量取决于许多因素，例如所要预防或治疗疾病的性质和严重程度，患者或动物的性别、年龄、体重、性格及个体反应，给药途径、给药次数、 治疗目的，因此本发明的治疗剂量可以有大范围的变化。一般来讲，本发明中药学成分的使用剂量是本领域技术人员公知的。可以根据本发明提取物组合物中最后的制剂中所含有的实际药物数量，加以适当的调整，以达到其治疗有效量的要求，完成本发明的预防或治疗目的。本发明提取物的每天的合适剂量范围本发明的提取物的用量为0. 001 150mg/Kg体重，优选为0. 1 100mg/Kg体重，更优选为1 60mg/Kg体重，最优选为2 50mg/Kg体重。 上述剂量可以单一剂量形式或分成几个，例如二、三或四个剂量形式给药，这取决于给药医生的临床经验以及包括运用其它治疗手段的给药方案。每一种治疗所需总剂量可分成多次或按一次剂量给药。本发明的提取物或药物组合物可单独服用，或与其他治疗药物或对症药物合并使用并调整剂量。本发明具有的技术优势为1.为纯天然成份。2.体外具有明显的抗肿瘤活性。3.药材易得，提取工艺简单，适合大规模工业化生产。
图1 格木提取物的制备流程图。
具体实施例方式下面的实施例及药理活性实验用来进一步说明本发明，但这并不意味着对本发明的任何限制。实施例1格木提取物的制备方法称量干燥格木叶5. 2kg,粉碎，用95%乙醇回流提取3次，每次3小时，提取液减压浓缩得到806g浸膏(提取率15.5%)。溶于甲醇部分的浸膏(670g)用硅藻土 3. 5千克拌样，装于索氏提取器中，依次分别用8升的石油醚、乙酸乙酯和甲醇提取，得到石油醚提取物(90g)，乙酸乙酯提取物(45g)和甲醇提取物(532g)提取物。乙酸乙酯提取物经聚酰胺(30 60目，800g)柱色谱分离，依次分别用10升的水、30 %乙醇、60 %乙醇和90 %乙醇洗脱，得到水提取物(PA，20g)、30 %乙醇提取物(PB， 7. 6g)、60%乙醇提取物(PC, 5. Ig)和90%乙醇提取物(PD, 1. 6g)。组分PA和组分PB分别经kphadexLH-20柱色谱和ODS柱色谱纯化，合并得到总生物碱ET-Ery (17. 8g)。提取纯化的流程图见附图1。药理试验试验例1 提取物的体外抗肿瘤活性测定实验方法培养正常生长的肿瘤细胞，以IX 104Cell/mL接种到96孔板中(每孔100 μ L)，于 37°C,5% CO2培养箱中培养M小时，然后加入被试药物，复筛给药培养5天，然后弃除培养液，每孔加入0.04% MTT 100 μ L(培养液配制)，同样条件下培养4小时。弃培养液，加入 DMSO 150 μ L/孔。混合后于测定波长570nm，参比波长450nm，比色记录光吸收度，按下式计算药物对癌细胞生长的抑制率肿瘤细胞生长抑制率=(对照A-给药A)/AX100%。作标准曲线，计算ic5(1。判断标准复筛计算IC5tl，对于粗品，以IC5tl >50 μ g/mL为无效；以50 μ g/mL > IC50
>5 μ g/mL 为弱效；以 5 μ g/mL > IC50 > 0. 5 μ g/mL 为有效；以 IC50 < 0. 5 μ g/mL 为强效。 对于单体化合物，以IC5tl > 10 μ M为无效；以10 μ M > IC50 > 1 μ M为弱效；以1 μ M > IC50
>0. 1 μ M为有效；以IC5tl < 0. ΙμΜ为强效。格木叶95%乙醇总提取物及其它提取物的体外抗肿瘤活性测定结果实验结果见表1。格木叶的乙酸乙酯提取物各组分及总生物碱的体外抗肿瘤活性测定结果见表2。表1格木叶95%乙醇总提取物及其它提取物的细胞毒活性测定结果
权利要求
1.一种格木提取物的制备方法，其特征在于包括如下步骤称量格木叶并用溶剂提取，提取液经浓缩后得格木提取物，其中所述溶剂选自醇类溶剂或水与醇类溶剂的混合物。
2.根据权利要求1的制备方法，其中所述的醇类选自甲醇、乙醇、异丙醇和丁醇。
3.根据权利要求1的制备方法，其特征在于所述的方法包括如下步骤称量格木叶，每千克格木叶使用6-10升的90%乙醇回流2 4次，每次2 3小时；合并提取液，提取液经减压浓缩得浸膏，即为格木提取物。
4.根据权利要求1 3中任一项的制备方法，其特征在于所述制备方法还进一步包括萃取分离步骤。
5.根据权利要求4的制备方法，其中所述的萃取分离步骤包括将权利要求1-3中任一项得到的格木提取物溶解于醇类溶剂中，与硅藻土拌样后装入索氏提取器中，依次使用极性从小到大的有机溶剂回流提取，并将各种有机溶剂的提取液浓缩分别得到各有机溶剂的提取物，其中所述醇类溶剂选自甲醇或乙醇，所述有机溶剂选自石油醚、乙酸乙酯和甲醇。
6.根据权利要求5的制备方法，包括如下步骤将权利要求1 3中任一项得到的浸膏溶解于甲醇中，甲醇的用量和浸膏的重量比是1.5 2. 5 1升/千克；将得到的甲醇溶液与硅藻土拌样并置于索氏提取器中，硅藻土的用量与浸膏的重量比是4. 5 5. 5 1 ； 依次以石油醚、乙酸乙酯、甲醇分别回流提取48小时；石油醚、乙酸乙酯、甲醇的用量是5 IOL ；将得到的提取液分别减压浓缩蒸干，得到格木的石油醚提取物、乙酸乙酯提取物、甲醇提取物。
7.根据权利要求4-6任意一项所述的制备方法，其特征在于所述的方法进一步包括一个柱层析步骤，所使用的层析柱选自正相硅胶柱、反相硅胶柱、氧化铝柱、纤维素柱、活性碳柱、大孔树脂柱、聚酰胺柱、羟丙基葡聚糖凝胶柱；使用的洗脱剂选自水、甲醇、乙醇、丙酮、 二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯或它们的混合物。
8.根据权利要求7的方法，其中的层析柱优选聚酰胺柱，洗脱剂优选水、乙醇以及它们的混合物。
9.根据权利要求8的方法，包括如下步骤将权利要求5或6中得到的乙酸乙酯提取物溶于水过滤后上样至装有10 30倍重量的30 60目的聚酰胺填料的层析柱中，依次用水、25 35%的乙醇、55 65%的乙醇和90%的乙醇进行梯度洗脱，每种洗脱剂的用量与聚酰胺的重量比均为10 15 1升/千克；然后将收集到的各部分洗脱液分别浓缩至干，得格木的水提取物、25 35%乙醇提取物、55-65%乙醇提取物和90%的乙醇提取物。
10.根据权利要求7的制备方法，其特征在于在所述方法的基础上还进一步包括凝胶柱层析和反相柱层析的步骤，其中凝胶柱层析使用羟丙基葡聚糖凝胶柱，反相柱层析使用反相硅胶柱。
11.根据权利要求10的方法，包括如下步骤将权利要求7-9任意一项中得到的水提取物和25 35%乙醇提物分别溶解于甲醇并过滤后，加至30 60倍重量的羟丙基葡聚糖凝胶柱上，以甲醇为洗脱剂进行洗脱。各流分经薄层层析或高效液相色谱检测后合并浓缩， 然后上样至30 60倍重量的反相硅胶柱中，以甲醇/水为洗脱剂进行梯度洗脱，收集的各流分经薄层层析或高效液相色谱检测后合并，浓缩后得到格木提取物，其为格木的总生物碱。
12.根据权利要求1 11任意一项所述的制备方法得到的格木提取物。
13.根据权利要求12的格木提取物，其特征在于所述的格木提取物的有效成分包括咖萨因型二萜生物碱类化合物。
14.一种药物组合物，其特征在于包含作为有效成分的权利要求12或13所述的格木提取物以及药学上可接受的载体。
15.权利要求12或13所述的格木提取物在制备抗肿瘤药物中的应用。
16.权利要求14所述的药物组合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
全文摘要
本发明涉及一种格木(Erthrophleum fordii Oliver)提取物，其制备方法，含有该提取物的药物组合物，以及该提取物和所述药物组合物在制备抗肿瘤药物中的应用。本发明通过将格木叶干燥、粉碎、提取、浓缩和纯化，提取出具有抗肿瘤作用的提取物。其有效成分包括咖萨因型二萜生物碱类化合物，药理实验表明本发明的提取物在体外具有较好的抗肿瘤活性。
文档编号A61K36/48GK102451220SQ20101052737
公开日2012年5月16日 申请日期2010年10月26日 优先权日2010年10月26日
发明者唐克, 屈晶, 庾石山, 徐嵩, 杜丹, 陈晓光, 马双刚 申请人:中国医学科学院药物研究所