专利名称：黄芪提取物的应用的制作方法
技术领域：
本发明属于药学领域，涉及一种中药提取物的新用途，具体涉及黄芪提取物在保护缺血心肌，改善心功能方面的应用。
背景技术：
黄芪，又名黄耆，为植物和中药材的统称。植物黄芪产于内蒙古、山西、甘肃、黑龙江等地，为国家三级保护植物。中药材黄芪为豆科草本植物蒙古黄芪、膜荚黄芪的根，具有补气固表、利水退肿、托毒排脓、生肌等功效。黄芪的药用迄今已有2000多年的历史，现代研究，黄芪含皂甙、蔗糖、多糖、多种氨基酸、叶酸及硒、锌、铜等多种微量元素。黄芪有增强机体免疫功能、保肝、利尿、抗衰老、抗应激、降压和较广泛的抗菌作用。黄芪提取物为豆科植物黄芪的干燥根提取物，其化学成分众多，主要含有皂苷、黄酮、多糖以及氨基酸等几类成分。黄芪提取物具有增强免疫力，增强能量，抗疲劳，抗突变， 保肝，抑制破骨细胞的作用。传统中医学认为，黄芪具有补气升阳、固表止汗、托毒排脓、利水消肿、敛疮生肌的功效。现代药理研究表明，黄芪具有增强机体免疫功能，强心降压、降血糖、利尿、抗衰老、抗疲劳、抗肿瘤、抗病毒、镇静、镇痛等作用。目前已有研究表明，黄芪具有抗心肌缺血作用，但是其治疗效果及作用机理鲜有报道。心肌缺血，是指心脏的血液灌注减少，导致心脏的供氧减少，心肌能量代谢不正常，不能支持心脏正常工作的一种病理状态。心脏的供血不是一成不变的，而是始终存在着波动，但这种波动经过机体自身调节，促使血液供需相对恒定，保证心脏正常工作。如果任何一种原因引起心肌缺血，经机体调节不能满足心脏工作需要，这就构成了真正意义上的心肌缺血。心肌缺血对心脏和全身都可能带来许多不利影响。氧是心肌细胞活动必不可少的物质，而氧是通过血液输送给细胞的。心脏没有“氧仓库”，完全依赖心肌血供，所以一旦缺血，立刻会引起缺氧。缺氧的直接后果是心肌细胞有氧代谢减弱，产能减小，使心脏活动时必需的能量供应不足，引起心绞痛、心律失常、心功能下降。同时，代谢的废物也不能被有效及时地清除，易产生不利影响。缺血、缺氧、缺能量，最终会影响心脏的收缩功能。若有 20% 25%的心肌停止收缩，通常会出现左室功能衰竭；若有40%以上的心肌不能收缩， 就会有重度心泵功能衰竭。如果这种情况突然发生，就会出现非常危险的心源性休克。急性心肌梗死就常与这种情况相关。心肌缺血还会损害舒张功能。收缩不良和舒张不良结合起来，易导致心室充盈压升高，引起肺充血，还可引起复杂的物质代谢紊乱和心肌电活动失常。发明人通过不断的努力和研究，通过科学的实验发现，黄芪及其提取物在治疗心肌缺血疾病方面的新的作用机理
发明内容
本发明的目的在于提供黄芪提取物在制备保护缺血心肌，改善心功能的药物中的应用。所述应用是通过促进内皮细胞增殖、迁移、管腔形成及促进NO分泌起作用。所述应用是通过抑制缺血区心肌胶原纤维化的形成及梗死面积，增加缺血交界区小静脉及小动脉的生成起作用。 黄芪提取物通过激活AKT/GSK 3 β、AKT/mT0R通路，上调VEGF蛋白表达，从而促进血管生成，进而起到保护缺血心肌，改善心功能的作用。所述黄芪提取物的提取方法选自水提、醇提、酯提、酮提、层析、真空提取、超临界流体萃取法、超声提取法、酶法提取、微波提取法、荷电提取法、半仿生提取法。所述提取方法包括以下步骤黄芪药材加水煎煮3次，每次1.证，第1次加水量为 5倍量，第2、3次加水量为3倍量，合并煎煮液，浓缩至浸膏，加95 %乙醇至溶液含醇量为 70 %，冷藏过夜，过滤，滤液浓缩至浸膏。加无水乙醇使浸膏含醇量为85 %，冷藏过夜，滤过， 滤液浓缩至浸膏，即可。所述提取方法包括以下步骤取黄芪药材，加水10倍量煎煮三次，每次1小时，合并建筑液，滤过，滤液减压浓缩至每Iml相当于原生药l_2g，用95%乙醇沉淀至含醇量达 60%,冷藏静置M小时，滤过，取滤液回收乙醇，冷藏静置M小时，滤过。取滤液通过HPD100 柱，水洗至近无色，用75%乙醇洗脱，收集洗脱液，滤过，回收乙醇并浓缩至IOg生药/ml，冷藏静置M小时，滤过；加95%乙醇至含醇量达85%，冷藏静置M小时，滤过；回收乙醇，煮沸30分钟，加水至规定量12. 5g生药/ml，密封，冷藏M小时以上，滤过即得。所述药物是以黄芪提取物为主要药物活性成分的药物组合物。所述药物，单位剂量含有药物活性成分0. 1-lOOOmg，其余为药学上可接受的载体。所述药物是任何药用剂型。其中，所述黄芪提取物是将中药黄芪用常规的中药提取方法提取得到的提取物， 提取物可以是水提物，也可以是醇提物，提取物为中药浸膏形式，可以是干浸膏也可以是流浸膏。国际上常用的心血管疾病治疗药物主要包括钙离子通道拮抗剂、β -受体阻断剂等。本发明意外的发现，用本发明的黄芪提取物可通过促进缺血区血管生成产生治疗作用， 可以用于制备保护缺血心肌，改善心功能的药物。为此，本发明提供一种保护缺血心肌，改善心功能的药物组合物，该组合物以黄芪提取物为主要药物活性成分，所述组合物，根据需要可以含有药学上可接受的载体。本发明的药物组合物，其中含有药物活性成分0. 1-lOOOmg，其余为药学上可接受的载体。本发明的药物组合物，其中药物活性成分以重量百分比计可以是组合物总重量的 0. 1-99. 9%，其余为药学上可接受的载体。本发明的药物组合物，其中，所述药学上可接受的载体包括但不限于甘露醇、山梨醇、山梨酸或钾盐、焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、盐酸半胱氨酸、巯基乙酸、蛋氨酸、维生素A、维生素C、维生素E、维生素D、氮酮、EDTA 二钠、EDTA钙钠，一价碱金属的碳酸盐、醋酸盐、磷酸盐或其水溶液、盐酸、醋酸、硫酸、磷酸、氨基酸、氯化钠、氯化钾、乳酸钠、木糖醇、麦芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇、硅衍生物、纤维素及其衍生物、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、丙二醇、乙醇、土温60-80、司班-80、蜂蜡、羊毛脂、液体石蜡、十六醇、没食子酸酯类、琼脂、三乙醇胺、碱性氨基酸、尿素、尿囊素、碳酸钙、碳酸氢钙、表面活性剂、聚乙二醇、环糊精、β-环糊精、磷脂类材料、高岭土、滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁，植物油大豆油、中链油、橄榄油、茶油、棕榈油、当归油、沙棘油、 莪术油、川芎油、薏米仁油、红花油、花椒油、大蒜油；磷脂蛋黄卵磷脂、大豆磷脂、氢化蛋黄卵磷脂、氢化大豆磷脂、人工合成磷脂；聚乙二醇磷脂或其衍生物，选自聚乙二醇-脑磷脂或其衍生物、聚乙二醇-胆固醇或其衍生物、聚乙二醇-二-脂肪酸甘油酯或其衍生物、 聚乙二醇-脂肪酸酯或其衍生物、聚乙二醇-脂肪胺或其衍生物、聚乙二醇-脂肪醇或其衍生物、以及含有脂溶性高分子片段的聚乙二醇磷脂衍生物；油酸或油酸盐，选自油酸、油酸钾盐、油酸钠盐；抗氧化剂维生素E ；亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、维生素C ；控制阳离子浓度的络合剂，选自=EDTA或其它离子络合剂。本发明所述的药物组合物，可以以药物制剂的形式存在，可以是任何一种可服用的药物制剂形式，如片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊齐 、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、溶液剂、注射剂、栓剂、软膏剂、硬膏剂、霜剂、喷雾剂、滴剂、贴剂。本发明的药物组合物在使用时根据病人的情况确定用法用量，如一日2-3次，一次1-5片等。本发明所述的黄芪提取物，可以在市场购买或者根据药剂学常规方法提取，如水提、醇提、酯提、酮提、层析、真空提取、超临界流体萃取法、超声提取法、酶法提取、微波提取法、荷电提取法、半仿生提取法等。优选的，本发明的提取方法在实施例中。通过以下实验详细说明黄芪提取物的治疗效果。1.实验方法(实验过程中，所述的黄芪提取物为实施例1制备得到的黄芪提取物)1. 1体外实验方法1. 1. 1人脐静脉内皮细胞的培养人脐静脉内皮细胞(HumanUmbilical Vein Endothelial Cell, HUVEC)为原代分离所得。新鲜产后脐带用冷无菌PBS冲洗干净。用止血钳夹住脐带一端，从另一端注入0.1% I型胶原酶，然后用止血钳夹住。37°C消化12min，收集含有内皮细胞的消化液， IOOOrpm离心5min，弃上清，PBS清洗一次。加入含12. 5%胎牛血清，50U/mL的肝素，30 μ g/ mL ECGS, 10ng/mLEGF, 100U/mL 青霉素及 100 μ g/mL 链霉素的 Medium 199 (M199，Gibco)细胞培养液，制成细胞悬液，种于培养瓶内，37°C,5% C02条件下常规培养。所有实验用HUVEC 均为4 8代内皮细胞，内皮细胞用vWF进行鉴定。1.1. 2细胞增殖实验HUVECs以每孔2 X IO4细胞数接种于预先包被明胶的96孔板，培养4 后，将培养液换为0. ImL M199含2% FBS的培养液。分别加入不同浓度的黄芪提取物05，50，75 μ g/ mL)和DMSO (对照)，每组设3复孔，培养48h后，MTT法550nm波长下测定。1.1. 3DAN 法测 NO 分泌HUVECs以每孔1 X IO5细胞数接种于预先包被明胶的96孔板，常规培养4 待细胞完全融合后，用PBS洗，换为含药培养液(5^^83及无酚红机99)，对照组(DMS0)，给药组分别为黄芪提取物25，50，75 μ g/mL,每组设3复孔，药物作用24h后，分别取5 μ L上清液，用 MilliQ 水稀释至 100μ L，加入 0. 05mg/mLDAN 10 μ L，室温反应 lOmin，再加入 2. 8N NaOH 20 μ L，室温静置20min，在激发波长380nm，发射波长450nm下测定。1. 1. 4细胞迁移实验细胞迁移实验用transwell小室测定。IX 105HUVECs含2% FBS培养液加入到 24孔transwell (Corning)的上层小室中，下层小室分别加入DMS0，黄芪提取物和IOng/ mLVEGF。培养箱孵育24h后，弃去培养液，PBS洗1遍，10%甲醛固定30min，PBS洗1遍，用棉签擦去内室未迁移细胞，0. 结晶紫染色20min，PBS洗去多余染料，光镜下拍照。1. 1. 5管腔形成实验管腔形成实验采用Matrigel进行测定，在96孔板中加入Growth factor-reducedMatrigel (BD)，50 μ L/ 孔，37 "C 凝固 lh，每孔加入 1 X 104HUVECs (2 % FBSM199)，依次加入黄芪提取物及lOng/mL VEGF，37°C孵育6_12h。光镜下拍照。1.2体内实验方法1. 2. 1心肌缺血动物模型的建立及给药心肌缺血模型采用冠状动脉左前降支结扎的方法，雄性SD大鼠用戊巴比妥麻醉 (50mg/kg i. p.)后接呼吸机，于第四肋间开胸暴露心脏，距左冠状动脉起点2 3mm处，穿 5个0手术线结扎，闭胸，对照组只开胸，暴露心脏穿线但不结扎冠状动脉。术后大鼠苏醒后随机分为对照组(CON)，模型组(MI)，黄芪提取物50mg/kg给药组(MI+AME50)，黄芪提取物 100mg/kg 给药组(MI+AME100)。黄芪提取物用MilliQ水溶解成50mg/kg及100mg/kg，分别连续灌胃给药3天、7 天及14天。1.2.2心肌纤维化程度的观察黄芪提取物50mg/kg及100mg/kg分别连续给予3天，7天和14天后处死，取心脏， 10%甲醛固定，masson三色法染色。观察缺血心脏纤维化程度。1. 2. 3梗死面积模型大鼠连续给药14天后，迅速摘离心脏，红四氮唑染色，称出梗死区和非梗死区重量，计算梗死重量百分比梗死区重量/左心室重量X 100%。1. 2. 4免疫组化观察小静脉及小动脉的生成黄芪提取物分别连续给予3天，7天和14天后处死，取心脏，10%甲醛固定，石蜡包埋，切片，免疫组化对vWF及α -SMA进行染色，光镜下拍照，进行小静脉和小动脉计数。1. 2. 5ffestern blot测定与血管生成相关的蛋白表达黄芪提取物分别连续给予3天，7天和14天后处死，迅速取缺血区心脏，组织勻浆后，Bradford法进行蛋白定量。Westrn blot对促血管生长因子VEGF及其下游ΡΙΙ/ΑΚΤ 通路蛋白P-AKT/AKT，P-GSK3 0/GSK3 0 及 P-mTOR/mTOR 蛋白进行测定。2.实验结果2. 1体外实验结果2. 1. 1黄芪提取物对细胞增殖及NO分泌的影响以DMSO作为对照，黄芪提取物分别以25，50，75μ g/mL的浓度作用于内皮细胞48h 后，75 μ g/mL浓度促进内皮细胞增殖最显著。同样，以黄芪提取物分别以25，50，75 μ g/mL 的浓度作用于内皮细胞24h后，以75 μ g/mL浓度促进内皮细胞分泌NO最显著。结果见图1，图 2。2. 1. 2黄芪提取物对细胞迁移及管腔形成的影响以DMSO作为对照，10ng/mLVEGF作为阳性对照，观察75 μ g/mL黄芪提取物对内皮细胞迁移的影响。Transwell小室实验结果显示，75 μ g/mL黄芪提取物显著促进内皮细胞迁移。结果见图3。2. 2体内实验结果2. 2. 1黄芪提取物对心肌纤维化及梗死面积的影响随着造模时间3天，7天，14天的变化，梗死区心肌细胞逐渐丢失，胶原纤维组织不断填充，左心室扩张，黄芪提取物100mg/kg给药组显著降低胶原纤维组织的生成。TTC结果显示，与模型组比，黄芪提取物100mg/kg给药14天后显著降低梗死面积(36. 1 士6. 7% vs. 23. 3士7. 4%, P < 0. 05)。结果见图 4。2. 2. 2黄芪提取物对缺血交界区小静脉及小动脉数目的影响免疫组化进行vWF染色，结果显示，黄芪提取物100mg/kg连续给药7及14天后， 显著增加缺血交界区小静脉的数目，黄芪提取物50mg/kg连续给药14天后，小静脉的数目也显著上升。α -SMA染色结果显示，黄芪提取物50mg/kg及100mg/kg连续给药7及14天后，显著升高缺血交界区小动脉血管数。结果见图5。2. 2. 3黄芪提取物对血管生成相关蛋白表达的影响2. 2. 3. 1黄芪提取物对VEGF，P-AKT蛋白表达的影响造模7天和14天后，模型组VEGF蛋白表达低于对照组，与模型组相比，黄芪提取物100mg/kg连续给药7及14天后，VEGF蛋白表达显著升高。同样，与模型组相比，黄芪提取物100mg/kg连续给药14天后，P-AKT (ser473)蛋白含量显著上升。结果见图6。2. 2. 3. 2黄芪提取物对P-GSK 3 β和P-mTOR蛋白表达的影响随着时间的延长，模型组动物缺血区心肌表达P-GSK 3 β (ser9)增加，与模型组比，黄芪提取物100mg/kg连续给药7及14天后，P-GSK 3β (ser9)蛋白表达显著增加，黄芪提取物50mg/kg连续给药14天后，P-GSK 3β (ser9)蛋白表达也显著增加。同样，模型组动物缺血区心肌表达P-mT0R(Ser2448)随着时间的增加也呈显递增的趋势，与模型组比，黄芪提取物100mg/kg连续给药14天后，P-mT0R(ser2448)蛋白表达显著增加。结果见图7。综上所述，本发明体外实验结果显示黄芪提取物能促进内皮细胞增殖，迁移，管腔形成及分泌NO。本发明体内实验结果显示黄芪提取物能显著抑制缺血区心肌胶原纤维化的形成及梗死面积，增加缺血交界区小静脉的数目及小动脉的生成。分子生物学实验结果显示其血管生成作用可能与激活AKT/GSK 3 β，AKT/mTOR 通路及上调VEGF蛋白表达相关。本发明实验表明黄芪提取物通过激活AKT/GSK 3β、AKT/mT0R通路，上调VEGF蛋白表达，从而促进血管生成，进而起到保护缺血心肌，改善心功能的作用。
图1、25，50，75 μ g/mL黄芪提取物对内皮细胞增殖的影响。(数据以均数士方差表示。(n = 3)，**P < 0. 05vs. DMS0。)
图2、25，50，75 μ g/mL黄芪提取物对内皮细胞分泌NO的影响。(数据以均数士方差表示。(n = 3)，*P < 0. 05vs. DMS0。)图3、黄芪提取物对细胞迁移及管腔形成的影响。(A) Transwell 小室测定 DMSO (CON)，75 μ g/mL 黄芪提取物(AME)，10ng/mLVEGF 对内皮细胞迁移的影响。(X 200，Bar = 100 μ m)(B)基质胶测定DMSO (CON)，75 μ g/mL黄芪提取物(AME)，10ng/mLVEGF对管腔形成的影响。(C)每孔取6个不同视野作统计，结果与CON作对照。(D)每孔取5个不同的视野，以每个视野中管腔的总长度作统计，结果与CON作对照。(数据以均数士 方差表示。(n = 3)，**Ρ < 0. 05vs. CON ；*P < 0. 05vs. CON。)图4、黄芪提取物对心肌胶原纤维化及梗死面积的影响。(A)Mass0n三色法测定心肌胶原纤维的生成。(XlO)(B)TTC染色观察黄芪提取物给药14天后对梗死面积的影响。(数据以均数士方差表示。(n = 8)，*P<0.05vs.MI。)图5、黄芪提取物对缺血区心脏小静脉及小动脉生成的影响。(A)免疫组化进行 vWF 染色。(X400，Bar = 100 μ m)。(B)免疫组化进行 α -SMA 染色。(X 400，Bar = 100 μ m)。(C)缺血交界区小静脉密度。(D)缺血交界区小动脉密度。(数据以均数士 方差表示。(n = 4)，**Ρ < 0. 05vs. MI ；*P < 0. 05vs. MI。)图6、黄芪提取物对VEGF及P-AKT/AKT蛋白表达的影响。(A)黄芪提取物50mg/kg及100mg/kg连续给药3，7及14天后对VEGF蛋白表达的改变。(B)VEGF 蛋白表达以 VEGF/Tubulin 的比值统计(n = 4)。(C)黄芪提取物50mg/kg及100mg/kg连续给药3，7及14天后对P-AKT蛋白表达的改变。(D)P-AKT蛋白表达以P-AKT/AKT的比值统计(n = 4)。(*Ρ < 0. 05vs. MI ;#P < 0. 05vs. CON.)图7、黄芪提取物对P-GSK 3 β及P-mT0R蛋白表达的影响。(A)黄芪提取物50mg/kg及100mg/kg连续给药3，7及14天后对P-GSK 3 β蛋白表达的改变。(B)P-GSK 3 β 蛋白表达以 P-GSK 3 β /GSK 3 β 的比值统计(n = 4)。(C)黄芪提取物50mg/kg及100mg/kg连续给药3，7及14天后对Ρ-mTOR蛋白表达的改变。(D) Ρ-mTOR 蛋白表达以 P-mT0R/mT0R 的比值统计(n = 4)。(**Ρ < 0. Olvs. MI ；*P < 0. 05vs. MI ;#P < 0. 05vs. control.)
具体实施方式
通过以下具体实施例对本发明作进一步说明，但不作为对本发明的限制。实施例1、黄芪提取物黄芪提取步骤如下原料黄芪药材(天津天士力制药股份有限公司提供)黄芪药材加水煎煮3次，每次1. 5h，第1次加水量为5倍量，第2、3次加水量为3 倍量，合并煎煮液，浓缩至浸膏，加95 %乙醇至溶液含醇量为70 %，冷藏过夜，过滤，滤液浓缩至浸膏。加无水乙醇使浸膏含醇量为85 %，冷藏过夜，滤过，滤液浓缩至浸膏，即可。实施例2、黄芪提取物黄芪提取步骤如下取黄芪药材，加水10倍量煎煮三次，每次1小时，合并建筑液，滤过，滤液减压浓缩至每Iml相当于原生药l_2g，用95%乙醇沉淀至含醇量达60%，冷藏静置M小时，滤过， 取滤液回收乙醇，冷藏静置M小时，滤过。取滤液通过HPD100柱，水洗至近无色，用75% 乙醇洗脱，收集洗脱液，滤过，回收乙醇并浓缩至IOg生药/ml，冷藏静置M小时，滤过；力口 95%乙醇至含醇量达85%，冷藏静置M小时，滤过；回收乙醇，煮沸30分钟，加水至规定量 (12. 5g生药/ml)，密封，冷藏M小时以上，滤过即得。实施例3、黄芪提取物黄芪提取步骤如下(1)将黄芪原药材家伙随煎煮3次，每次1.证，合并煎液，滤过，滤液浓缩至每Iml 相当于原药材l_2g;(2)以75%及85%的乙醇两次沉淀，每次均冷藏放置12小时，回收乙醇并浓缩至每Iml相当于原药材10g，用注射用水稀释至每Iml相当于原药材0. 75_lg，冷藏放置12小时，滤过，滤液浓缩至每Iml相当于原药材5-6g，防冷；(3)用20%氢氧化钠溶液调节ph值至7. 5，煮沸，加入0. 125%的活性炭，煮沸5 分钟，趁热滤过，加注射用水，滤过，再用20%氢氧化钠溶液调节ph值为6. 0-7. 5，滤过，即时。实施例4、黄芪提取物黄芪提取步骤如下取黄芪饮片，加8-12倍量水提取2-4次，每次1_2小时，滤过，滤液浓缩至相对密度在50°C热测时为1. 15-1. 25，加乙醇至含醇量达70-85%，静置M-48小时，滤过，滤液减压回收乙醇至浓缩液相对密度在50°C热测时为1. 15-1. 20，加中性水稀释，黄芪饮片生药中性水体积Ig Ι-aiil，于80-90°C溶解30-60分钟，趁热滤过，滤液加于已处理好的 DlOl型大孔吸附树脂柱上，黄芪饮片生药树脂重量比1 2-4，加中性水洗至无色后，再加70%乙醇洗至洗脱液不含皂苷类成分，收集70%乙醇洗脱液，减压回收乙醇，浓缩液于 75-80°C减压干燥或喷雾干燥，即可。实施例5、药物组合物以黄芪提取物为药物活性成分的药物组合物，根据需要加入药物可接受的载体制备成任何可药用的剂型。按照药剂学常规方法制备成片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊剂、 硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、溶液
9齐U、注射剂、栓剂、软膏剂、硬膏剂、霜剂、喷雾剂、滴剂、贴剂。其中，药学上可接受的载体包括但不限于甘露醇、山梨醇、山梨酸或钾盐、焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、盐酸半胱氨酸、巯基乙酸、蛋氨酸、维生素A、维生素C、维生素E、维生素D、氮酮、EDTA 二钠、EDTA钙钠，一价碱金属的碳酸盐、醋酸盐、磷酸盐或其水溶液、盐酸、醋酸、硫酸、磷酸、氨基酸、氯化钠、氯化钾、乳酸钠、木糖醇、麦芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇、硅衍生物、纤维素及其衍生物、藻酸盐、 明胶、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、丙二醇、乙醇、土温60-80、司班-80、蜂蜡、羊毛脂、液体石蜡、 十六醇、没食子酸酯类、琼脂、三乙醇胺、碱性氨基酸、尿素、尿囊素、碳酸钙、碳酸氢钙、表面活性剂、聚乙二醇、环糊精、环糊精、磷脂类材料、高岭土、滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁，植物油大豆油、中链油、橄榄油、茶油、棕榈油、当归油、沙棘油、莪术油、川芎油、薏米仁油、红花油、花椒油、大蒜油；磷脂蛋黄卵磷脂、大豆磷脂、氢化蛋黄卵磷脂、氢化大豆磷月旨、人工合成磷脂；聚乙二醇磷脂或其衍生物，选自聚乙二醇-脑磷脂或其衍生物、聚乙二醇-胆固醇或其衍生物、聚乙二醇-二-脂肪酸甘油酯或其衍生物、聚乙二醇-脂肪酸酯或其衍生物、聚乙二醇-脂肪胺或其衍生物、聚乙二醇-脂肪醇或其衍生物、以及含有脂溶性高分子片段的聚乙二醇磷脂衍生物；油酸或油酸盐，选自油酸、油酸钾盐、油酸钠盐；抗氧化剂维生素E ；亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、维生素C ；控制阳离子浓度的络合剂，选自EDTA 或其它离子络合剂。本发明的制剂，在制成药剂时，单位剂量的药剂可含有本发明的药物活性物质 0. 1-lOOOmg，其余为药学上可接受的载体。药学上可接受的载体以重量计可以是制剂总重量的 0. 1-99. 9%。
权利要求
1.黄芪提取物在制备保护心肌缺血，改善心功能的药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用是通过促进内皮细胞增殖、迁移、管腔形成及促进NO分泌起作用。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用是通过抑制缺血区心肌胶原纤维化的形成及梗死面积，增加缺血交界区小静脉及小动脉的生成起作用。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，黄芪提取物通过激活AKT/GSK3i3、AKT/ mTOR通路，上调VEGF蛋白表达，从而促进血管生成，进而起到保护缺血心肌，改善心功能的作用。
5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述黄芪提取物的提取方法选自水提、 醇提、酯提、酮提、层析、真空提取、超临界流体萃取法、超声提取法、酶法提取、微波提取法、 荷电提取法、半仿生提取法。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述提取方法包括以下步骤黄芪药材加水煎煮3次，每次1.证，第1次加水量为5倍量，第2、3次加水量为3倍量，合并煎煮液，浓缩至浸膏，加95 %乙醇至溶液含醇量为70 %，冷藏过夜，过滤，滤液浓缩至浸膏。加无水乙醇使浸膏含醇量为85%，冷藏过夜，滤过，滤液浓缩至浸膏，即可。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述提取方法包括以下步骤取黄芪药材，加水10倍量煎煮三次，每次1小时，合并建筑液，滤过，滤液减压浓缩至每Iml相当于原生药l_2g，用95%乙醇沉淀至含醇量达60%，冷藏静置M小时，滤过，取滤液回收乙醇，冷藏静置M小时，滤过。取滤液通过HPD100柱，水洗至近无色，用75%乙醇洗脱，收集洗脱液，滤过，回收乙醇并浓缩至IOg生药/ml，冷藏静置M小时，滤过；加95%乙醇至含醇量达 85%,冷藏静置M小时，滤过；回收乙醇，煮沸30分钟，加水至规定量12. 5g生药/ml，密封， 冷藏M小时以上，滤过即得。
8.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，其中所述药物是以黄芪提取物为主要药物活性成分的药物组合物。
9.权利要求1所述的应用，其特征在于，其中所述药物，单位剂量含有药物活性成分 0. 1-lOOOmg，其余为药学上可接受的载体。
10.权利要求1所述的应用，其特征在于，其中所述药物是任何药用剂型。
全文摘要
本发明属于药学领域，涉及黄芪提取物在保护缺血心肌，改善心功能方面的应用。本发明所述的黄芪提取物通过促进缺血区的血管生成，从而保护缺血心肌，改善心功能。
文档编号A61P9/10GK102475736SQ201010566580
公开日2012年5月30日 申请日期2010年11月29日 优先权日2010年11月29日
发明者李云飞, 王毅, 程翼宇 申请人:天津天士力制药股份有限公司