治疗雌激素受体相关疾病的抗体及方法

专利名称：治疗雌激素受体相关疾病的抗体及方法
技术领域：
本发明涉及可用于预防和/或治疗雌激素受体相关疾病的抗体、药物组合物及其预防和/或治疗方法。
背景技术：
雌激素参与人体中多种关键的生理功能。雌激素功能包括发育雌性性器官，为怀孕做子宫准备和为分娩后作哺乳准备。雌激素在维持适度心血管功能和骨密度方面也发挥重要的作用。雌激素可刺激细胞增殖，故可增加女性患癌症的风险，特别是乳腺癌和子宫癌。雌激素在靶细胞中可结合雌激素受体并调节细胞功能。在人体细胞中已发现了两种雌激素受体(hER)，hER-α和hER-β。它们的蛋白结构类似，都有三个独立但相互作用的功能域N端结构域(A/B结构域)、中间DNA结合结构域(C结构域)和C端配体结合域 (D/E/F结构域)。N端结构域具有配体非依赖性的激活功能(AF-I)，在没有配体存在的条件下可与激活辅助因子相互作用并参与靶基因的转录激活。DNA结合结构域可特异性地结合DNA序列，并在受体二聚化中发挥重要作用。C端结合域介导配体结合，具有配体依赖性的激活功能(AF-2)，可在配体存在的条件下激活基因转录。hER-α蛋白全长66kDa，称为hER-a 66。hER-a 66含有全部的三个功能结构域。随后发现hER- a 66的剪接异构体，称为hER- a 46。hER- a 46分子量约为46KDa，缺失 hER-a 66中的N端AF-I结构域。最近又发现了一种新的36kDa的hER-α变体，hER_36 α。 其缺失 hER- α 66 的 N 端 AF-1 结构域禾口 C 端 AF-2 结构域(Wang et al.，Biochem. Biophys. Res. Commun. 336，1023-1027 (2005))。hER-α 66被认为是通过激活雌激素靶基因的转录从而介导雌激素刺激细胞增殖。雌激素结合hER-α 66后可激活其反式激活域，从而刺激下游靶基因的表达并最终导致细胞增殖。研究发现，hER-α 46在雌激素的刺激下可介导一氧化氮的在细胞膜的迅速合成(Li et al. , Proc. Natl. Acad. Sci. USA 100 :4807-4812 (2003)) 缺失 AF-1 域的 hER- α 46 可抑制 hER- α 66 的 AF-1 活性(Flouriot，G.，EMBO, 19，4688-4700，(2000))。由于hER- α 36缺失AF-I和AF-2转录激活域，所以具有hER- α 66和hER- β显性失活的抑制剂活性，可抑制hER-α和hER-β两者的AF-I和AF-2功能。另外，hER- α 36主要定位于细胞膜，介导雌激素的细胞膜信号转导，刺激细胞增殖和有丝分裂。(Wang et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 336,1023-1027 (2005) ；Wanget al. , Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 103 :9063-9068 (2006))。大量研究证明，雌激素受体信号转导是由经典核转录激活通路以及非经典膜信号通路介导。hER- α 66和hER- α 46可能主要在核内发挥功能而hER- α 36主要通过核外发挥功能。研究还表明，hER-α 36缺失原始hER-α 66配体结合域的螺旋8-12，所以完全改变了 hER-α 36的配体结合特异性。因此，hER-α 36可结合与hER-α 66和hER-β不同的配体。由于雌激素和雌激素受体相关的疾病仍然在影响诸多个体，因此迫切需要发现可用于预防和/或治疗这些疾病的新方案如新的抗体和/或新的预防/治疗方法。

发明内容
本发明提供了可用于治疗、预防、诊断与雌激素受体ER-α 36 (SEQ ID Ν0:1，基因登陆号Β)(640939)相关状态的抗体及其抗原结合片段，以及药物组合物和使用方法。在某些实施方式中，本发明提供了一抗体或其抗原结合片段，其可特异性结合 ER- α 36而非ER- α 66 (基因登陆号Χ03635，氨基酸序列见图la)或ER- α 46 (氨基酸序列见图lb)。在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段可特异性地结合SEQ ID N0:1中的氨基酸残基284到310，或SEQ ID NO 2中的氨基酸残基1到27。在某些实施方式中，本发明提供了一抗体或其抗原结合片段，其结合的表位基本上同于 ScFvl (SEQ ID NO 3), ScFv2 (SEQ ID NO 5), ScFv3 (SEQ ID NO :7)、ScFv4 (SEQ ID NO 9), ScFv5(SEQ ID NO :11)、ScFv6 (SEQ ID NO : 13)、ScFv7 (SEQ ID NO :15)所特异性结合的表位。在某些实施方式中，本发明提供了一抗体或其抗原结合片段，其包含kFvl、 ScFv2, ScFv3, ScFv4, ScFv5, ScFv6 或的 HCDR3、HCDRl、和 / 或 HCDR2 序列。在某些这样的实施方式中，所述的抗体或其抗原结合片段包含kFVljCFV2、kFV3、kFV4jCFV5、 ScFv6或的HCDRl、HCDR2、和HCDR3序列。在某些这样的实施方式中，所述的抗体或其抗原结合片段包含kFvl、&Fv2、ScFv3, ScFv4, ScFv5, ScFv6或&Fv7的重链可变区。在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含kFvl、ScFv2, ScFv3, ScFv4, ScFv5、ScFv6或ScFv7的LCDRl、LCDR2、和/或LCDR3序列。在某些这样的实施方式中， 所述的抗体或其抗原结合片段包含kFvl、ScFv2, ScFv3, ScFv4, ScFv5, ScFv6或&Fv7的 IXDR1、IXDR2、和IXDR3序列。在某些这样的实施方式中，所述的抗体或其抗原结合片段包含 kFvl、&Fv2、ScFv3, ScFv4, ScFv5, ScFv6 或的轻链可变区。在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段含有l)kFvl、ScFv2, ScFv3, ScFv4, ScFv5,ScFv6 或的 HCDR3、HCDR1、和 / 或 HCDR2 序列；2) &Fvl、ScFv2、ScFv3、ScFv4、 ScFv5, ScFv6或的LCDR1、LCDR2、和/或LCDR3序列。在某些这样的实施方式下，所述的抗体或其抗原结合片段含有IWcFvl、ScFv2, ScFv3, ScFv4, ScFv5, ScFv6或&Fv7的 HCDR1、HCDR2、和 HCDR3 序列；以及 2) &Fvl、ScFv2、ScFv3、ScFv4、kFv5、ScFv6 或的 LCDR1、LCDR2、和 LCDR3 序列。在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段含有一重链可变区，其含有1) 一重链 CDR1，选自于如下的一组ScFv 1 HCDRU ScFv 2 HCDRU ScFv 3 HCDRU ScFv 4 HCDRU ScFv 5 HCDRU ScFv 6 HCDRUPkFv 7 HCDRl ；2) 一重链 CDR2，选自于如下的一组ScFv 1 HCDR2、ScFv 2 HCDR2、ScFv 3 HCDR2、ScFv 4 HCDR2、ScFv 5 HCDR2、ScFv 6 HCDR2、和 ScFv 7 HCDR2，和 3) —重链 CDR3，选自于如下的一组ScFv 1 HCDR3, ScFv 2 HCDR3、kFv 3 HCDR3, ScFv 4 HCDR3, ScFv 5 HCDR3, ScFv 6 HCDR3、* kFv 7 HCDR3。ScFv m HCDR i 指 ScFv m 的 HCDR i (1 彡 i 彡 3，1 彡 m 彡 7)。在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段含有轻链可变区，其含有1) 一轻链CDR1，选自于如下的一组ScFv 1 LCDRU ScFv 2 LCDRU ScFv 3 LCDRU ScFv 4 LCDRU ScFv 5 LCDRU ScFv 6 LCDRl、和 kFv 7 LCDRl ；2) 一轻链 CDR2，选自于如下的一组ScFv
1LCDR2、ScFv 2 LCDR2、ScFv 3 LCDR2、ScFv 4 LCDR2、ScFv 5 LCDR2、ScFv 6 LCDR2、和 ScFv 7 LCDR2，和 3) —轻链 CDR3，选自于如下的一组ScFv 1 LCDR3, ScFv 2 LCDR3、ScFv 3 LCDR3,ScFv 4 LCDR3,ScFv 5 LCDR3,ScFv 6 LCDR3JP kFv 7 LCDR3。kFvm LCDRi 是指 ScFvm 的 LCDR i (1 彡 i 彡 3，1 彡 m 彡 7)。在某些实施方式中，本发明提供的抗体或其抗原结合片段含有1) 一重链可变区， 其含有 kFvl、ScFv2, ScFv3, ScFv4, ScFv5, ScFv6 或的 HCDR3、HCDRUP / 或 HCDR2 序列；和 2、一轻链可变区，其含有 kFvl、ScFv2, ScFv3, ScFv4, ScFv5, ScFv6 或 &Fv7 的 IXDRl、IXDR2、和/或IXDR3序列。在某些这样的实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段含有 1) 一重链可变区，其含有 kFvUcFv2、kFv3JcFv4、kFv5JcFv6 或 &Fv7 的 HCDR1、 HCDR2、和 HCDR3 序列；2) —轻链可变区，其含有 kFvl、ScFv2, ScFv3, ScFv4, ScFv5, ScFv6 或的IXDR1、IXDR2、和IXDR3序列。在某些这样的实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段含有1) 一重链可变区，选自由kFvl、ScFv2, ScFv3, ScFv4, ScFv5, ScFv6和的任意重链可变区组成的群组，和2、一轻链可变区，选自由kFvl、ScFv2, ScFv3, ScFv4, ScFv5, ScFv6和的任意轻链可变区组成的群组。在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段含有
A) —重链可变区，其含有1) 一重链⑶Rl选自于如下的一组ScFv 1 HCDRU ScFv 2 HCDRl、ScFv 3 HCDRl、ScFv 4 HCDRl、ScFv 5 HCDRl、ScFv 6 HCDRUPkFv 7HCDR1 ；2) 一重链CDR2选自于如下的一组ScFv 1 HCDR2、ScFv 2 HCDR2、ScFv 3 HCDR2、ScFv 4 HCDR2、 ScFv 5 HCDR2, ScFv 6 HCDR2jP kFv 7 HCDR2;以及 3) —重链 CDR3 选自于如下的一组 ScFv 1 HCDR3、ScFv 2 HCDR3、ScFv 3 HCDR3、ScFv 4 HCDR3、ScFv 5 HCDR3、ScFv 6 HCDR3、 和 kFv 7 HCDR3 ；以及B) 一轻链可变区，其含有1) 一轻链⑶Rl选自于如下的一组ScFv 1 IXDRl、ScFv
2LCDRl、ScFv 3 LCDRl、ScFv 4 LCDRl、ScFv 5 LCDRl、ScFv 6 LCDRUP ScFv 7 LCDRl ； 2) 一轻链 CDR2 选自于如下的一组ScFv 1 LCDR2、ScFv 2 LCDR2、ScFv 3 LCDR2、ScFv 4 LCDR2、ScFv 5 LCDR2、ScFv 6 LCDR2、和 ScFv 7 LCDR2 ；以及 3) —轻链 CDR3 选自于如下的一组ScFv 1 LCDR3,ScFv 2 LCDR3,ScFv 3 LCDR3, ScFv 4 LCDR3,ScFv 5 LCDR3、ScFv 6 LCDR3 JPkFv 7 LCDR3。在某些实施方式中，本发明提供的抗体或其抗原结合片段含有一重链可变区，其含有1) 一种或多种在SEQ ID NO 20, SEQ ID N0:21、和/或SEQ ID N0:22中列出的氨基酸序歹Ij ；2) 一种或多种在SEQ ID NO 26,SEQ ID N0:27、和/或SEQ ID N0:28中列出的氨基酸序歹Ij ；3) 一种或多种在SEQ ID NO 32,SEQ ID N0:33、和/或SEQ ID N0:34中列出的氨基酸序歹Ij ；4) 一种或多种在SEQ ID NO 38,SEQ ID N0:39、和/或SEQ ID NO :40中列出的氨基酸序列；5) 一种或多种在SEQ ID NO 44,SEQ ID N0:45、和/或SEQ ID NO 46中列出的氨基酸序歹Ij ；6) 一种或多种在SEQ ID NO 50,SEQ ID N0:51、和/或SEQ ID NO :52中列出的氨基酸序列；或7) —种或多种在SEQ IDNO :56、SEQ ID NO :57、和/或SEQ ID NO 58中列出的氨基酸序列。在某些这样的实施方式下，抗体或其抗原结合片段含有一重链可变区，其包括选自于如下一组的序列SEQ ID NO :60,SEQ ID NO :62、SEQ ID NO :64、SEQ IDNO :66、SEQ ID NO :68、SEQ ID NO :70、和 SEQ ID NO -J2。在某些实施方式中，本发明提供的抗体或其抗原结合片段含有一轻链可变区，其含有1) 一种或多种在SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO 18、和/或SEQ ID NO: 19中列出的氨基酸序歹Ij ；2) 一种或多种在SEQ ID NO 23,SEQ ID N0:24、和/或SEQ ID N0:25中列出的氨基酸序歹Ij ；3) 一种或多种在SEQ ID NO 29,SEQ ID N0:30、和/或SEQ ID N0:31中列出的氨基酸序列；4) 一种或多种在SEQ ID NO 35,SEQ ID N0:36、和/或SEQ ID NO :37中列出的氨基酸序歹Ij ；5) 一种或多种在SEQ ID N0:41、SEQ ID N0:42、和/或SEQ ID NO :43中列出的氨基酸序歹Ij ；6) 一种或多种在SEQ ID NO 47,SEQ ID N0:48、和/或SEQ ID NO :49中列出的氨基酸序列；或7) —种或多种在SEQ ID NO 53, SEQ ID N0:54、和/或SEQ ID NO: 55中列出的氨基酸序列。在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段含有一种轻链可变区， 其包括选自于如下一组的序列:SEQ ID NO :59, SEQ ID N0:61、SEQ ID N0:63、SEQ ID NO: 65、SEQ ID NO :67, SEQ ID NO :69、和 SEQ ID NO -Jl0在某些实施方式中，本发明提供的抗体或其抗原结合片段含有一重链可变区，其含有1) 一重链CDRl，包括选自于如下一组的序列SEQ ID NO :20、SEQ ID NO :26、SEQ ID NO :32、SEQ ID NO 38和SEQ ID NO 44 ；2) 一重链CDR2，包括选自于如下一组的序列=SEQ ID NO :21、SEQ ID NO :27、SEQ ID NO :33、SEQ ID NO 39 和 SEQ ID NO 45 ；禾口 3) —重链 CDR3，包括选自于如下一组的序列=SEQ ID NO :22、SEQ ID NO :28、SEQ ID NO :34、SEQ ID NO 40, SEQ ID NO :46、SEQ ID NO :52、和SEQ ID NO :58。在某些这样的实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段含有一重链可变区，其包括选自于如下的一组的序列SEQ ID NO 60,SEQ ID NO 62,SEQ ID NO :64、SEQ ID NO :66、SEQ ID NO :68、SEQ ID N0:70、和SEQ ID NO -J 2。在某些实施方式中，本发明提供的抗体或其抗原结合片段含有一轻链可变区，其含有1) 一轻链CDRl，包括选自于如下一组的序列:SEQ ID NO :17、SEQ ID NO :23、SEQ ID NO :35、SEQ ID NO 47和SEQ ID NO 53 ；2) 一轻链CDR2，包括选自于如下一组的序列=SEQ ID NO :18、SEQ ID NO :24、SEQ ID NO :36、SEQ ID NO :48、禾口 SEQ ID NO 54 ；禾口 3) 一轻链 CDR3，选择由以下组分组成的群组SEQ ID NO :19、SEQ ID NO :25、SEQ ID NO :37、SEQ ID NO 43, SEQ ID NO :49、和SEQ ID NO :55。在某些这样的实施方式中，所述的抗体或其抗原结合片段含有一轻链可变区，其包括选自于如下一组的序列SEQ ID NO 59, SEQ ID N0 61、SEQ ID NO 63, SEQ ID NO 65, SEQ ID NO 67, SEQ ID NO :69、和 SEQ ID NO -Jl0在某些实施方式中，本发明提供的抗体或其抗原结合片段含有
A) 一轻链可变区，其含有1) 一种或多种在SEQ ID NO :17、SEQ ID NO :18、和/或SEQ ID NO 19中列出的氨基酸序列；2) 一种或多种在SEQ ID NO :23、SEQ ID NO :24、和/或 SEQ ID NO 25中列出的氨基酸序列；3) 一种或多种在SEQ ID NO :29、SEQ ID NO :30、和/ 或SEQ ID NO 31中列出的氨基酸序列；4) 一种或多种在SEQ ID NO 35,SEQ ID NO :36、禾口 /或SEQ ID NO 37中列出的氨基酸序列；5) 一种或多种在SEQ ID NO :41、SEQ ID NO :42、 和/或SEQ ID NO 43中列出的氨基酸序列；6) 一种或多种在SEQ ID NO :47、SEQ ID NO 48、和/或SEQ ID NO :49中列出的氨基酸序列；或7) —种或多种在SEQ ID NO 53、SEQ ID NO :54、和/或SEQ ID NO 55中列出的氨基酸序列；和B) 一重链可变区，其含有1) 一种或多种在SEQ ID NO 20,SEQ ID NO :21、禾口 /或SEQ ID NO 22中列出的氨基酸序列；2) 一种或多种在SEQ ID NO :26、SEQ ID NO :27、和/ 或SEQ ID NO :28中列出的氨基酸序列；3) 一种或多种在SEQ ID NO 32、SEQ ID NO :33、和 /或SEQ ID NO 34中列出的氨基酸序列；4) 一种或多种在SEQ ID NO 38,SEQ ID NO :39、 和/或SEQ ID NO 40中列出的氨基酸序列；5) 一种或多种在SEQ ID NO :44、SEQ ID NO 45、和/或SEQ ID NO :46中列出的氨基酸序列；6) 一种或多种在SEQ ID NO 50、SEQ ID N0:51、和/或SEQ ID NO :52中列出的氨基酸序列；或7) 一种或多种在SEQ ID NO 56、SEQ ID NO :57、和/或SEQ ID NO 58中列出的氨基酸序列。在某些实施方式中，本发明提供的抗体或其抗原结合片段含有
A) 一重链可变区，其含有1) 一重链⑶R1，包括选自于如下一组的序列SEQ ID NO :20、 SEQ ID NO :26、SEQ ID NO :32、SEQ ID NO :38、和 SEQ ID NO 44 ；2) 一重链 CDR2，包括选自于如下一组的序列:SEQ ID NO :21,SEQ ID NO 27,SEQ ID NO 33,SEQ ID NO 39 禾P SEQ ID NO 45 ；和3) 一重链CDR3，包括选自于如下一组的序列=SEQ ID NO 22,SEQ ID NO :28、 SEQ ID NO :34、SEQ ID NO :40、SEQ ID NO :46、SEQ ID NO :52、和 SEQ ID NO 58 ；禾口B) 一轻链可变区，其含有1) 一轻链⑶R1，包括选自于如下一组的序列SEQ ID NO :17、SEQ ID NO :23、SEQ ID NO :35、SEQ ID NO :47、禾口 SEQ ID NO 53 ；2) 一轻链 CDR2， 包括选自于如下一组的序列SEQ IDNO :18,SEQ ID NO :24、SEQ ID NO 36, SEQ ID NO :48、 和SEQ ID NO 54 ；和3) 一轻链CDR3，包括选自于如下一组的序列=SEQ ID NO :19、SEQ ID NO 25, SEQ ID NO 37, SEQ ID NO 43, SEQ ID NO :49、和 SEQ ID NO :55。在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段含有A) —轻链可变区，包括选自于如下一组的序列SEQ ID NO :59, SEQ ID N0:61、SEQ ID NO :63、SEQ ID NO :65、SEQ ID NO :67,SEQ ID NO :69、和SEQ ID NO :71 ；以及B) —重链可变区，包括选自于如下一组的序列SEQ ID NO :60、SEQ ID NO :62、SEQ ID NO :64、SEQ ID NO :66、SEQ ID NO :68、SEQ ID NO :70、禾口 SEQ ID NO -J2。在某些实施方式中，本发明提供的抗体或其抗原结合片段含有一轻链可变区，其含有一种或多种在SEQ ID NO 17, SEQ ID NO :18 JPSEQ ID NO 19中列出的氨基酸序列， 和一重链可变区,其含有一种或多种在SEQ ID NO 20, SEQ ID NO :21、和SEQ ID NO :22中列出的氨基酸序列。在某些这样的实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段的轻链可变区含有在SEQ ID NO :59中列出的氨基酸序列。在某些实施方式中，该抗体或其抗原结合片段的重链可变区含有在SEQ ID NO 60中列出的氨基酸序列。在某些实施方式中，本发明提供的抗体或其抗原结合片段含有一轻链可变区，其含有一种或多种在SEQ ID NO 23, SEQ ID NO :24、和SEQ ID NO :25中列出的氨基酸序列， 和一重链可变区,其含有一种或多种在SEQ ID NO 26, SEQ ID NO :27、和SEQ ID NO :28中列出的氨基酸序列。在某些这样的实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段的轻链可变区含有在SEQ ID NO :61中列出的氨基酸序列。在某些实施方式中，该抗体或其抗原结合片段的重链可变区含有在SEQ ID NO 62中列出的氨基酸序列。在某些实施方式中，本发明提供的抗体或其抗原结合片段含有一轻链可变区，其含有一种或多种在SEQ ID NO 29, SEQ ID NO :30、和SEQ ID NO 31中列出的氨基酸序列， 和一重链可变区,其含有一种或多种在SEQ ID NO 32, SEQ ID NO :33、和SEQ ID NO :34中列出的氨基酸序列。在某些这样的实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段的轻链可变区含有在SEQ ID NO :63中列出的氨基酸序列。在某些实施方式中，该抗体或其抗原结合片段的重链可变区含有在SEQ ID NO 64中列出的氨基酸序列。在某些实施方式中，本发明提供的抗体或其抗原结合片段含有一轻链可变区，其含有一种或多种在SEQ ID NO 35, SEQ ID NO :36、和SEQ ID NO :37中列出的氨基酸序列， 和一重链可变区,其含有一种或多种在SEQ ID NO 38, SEQ ID NO :39、和SEQ ID NO :40中列出的氨基酸序列。在某些这样的实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段的轻链可变区含有在SEQ ID NO :65中列出的氨基酸序列。在某些实施方式中，该抗体或其抗原结合片段的重链可变区含有在SEQ ID NO 66中列出的氨基酸序列。在某些实施方式中，本发明提供的抗体或其抗原结合片段含有一轻链可变区，其含有一种或多种在SEQ ID NO 41, SEQ ID NO :42、和SEQ ID NO :43中列出的氨基酸序列， 和一重链可变区,其含有一种或多种在SEQ ID NO 44, SEQ ID NO :45、和SEQ ID NO :46中列出的氨基酸序列。在某些这样的实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段的轻链可变区含有在SEQ ID NO :67中列出的氨基酸序列。在某些实施方式中，该抗体或其抗原结合片段的重链可变区含有在SEQ ID NO 68中列出的氨基酸序列。在某些实施方式中，本发明提供的抗体或其抗原结合片段含有一轻链可变区，其含有一种或多种在SEQ ID NO 47, SEQ ID NO :48、和SEQ ID NO 49中列出的氨基酸序列， 和一重链可变区,其含有一种或多种在SEQ ID NO 50, SEQ ID NO :51、和SEQ ID NO :52中列出的氨基酸序列。在某些这样的实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段的轻链可变区含有在SEQ ID NO :69中列出的氨基酸序列。在某些实施方式中，该抗体或其抗原结合片段的重链可变区含有在序列70中列出的氨基酸序列。在某些实施方式中，本发明提供的抗体或其抗原结合片段含有一轻链可变区，其含有一种或多种在SEQ ID NO 53, SEQ ID NO :54、和SEQ ID NO :55中列出的氨基酸序列， 和一重链可变区,其含有一种或多种在SEQ ID NO 56, SEQ ID NO :57、和SEQ ID NO :58中列出的氨基酸序列。在某些这样的实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段的轻链可变区含有在SEQ ID NO :71中列出的氨基酸序列。在某些实施方式中，该抗体或其抗原结合片段的重链可变区含有在序列72中列出的氨基酸序列。在某些以上的实施方式中，本发明中公开的抗体或其抗原结合片段进一步含有一 λ轻链、κ轻链、一 Yl重链、一 γ 2重链、一 Y 3重链、或一 Y 4重链恒定区。在某些这样的实施方式中，所述的抗体或其抗原结合片段含有一 IgG2恒定区。在某些实施方式中，本发明所公开的抗体为完整抗体。在某些这样的实施方式中，所述抗体可以是单克隆抗体、多克隆抗体、重组抗体、双特异抗体、人源化抗体、嵌合抗体、标记抗体、双价抗体、抗独特型抗体、或完全人抗体。在某些实施方式中，本发明中提供的抗体或其抗原结合片段可以是骆驼化单域抗体(camelized single chain domain antibody)，双功能抗体(diabody), scFv, scFv 二聚体，BsFv，dsFv，(dsFv)2，dsFv-dsFv'，Fv 片段，Fab，Fab‘ , F(ab‘ )2，ds 双功能抗体(ds diabody)，纳米抗体，域抗体，或双价域抗体。在某些实施方式中，本发明中提供的抗体或其抗原结合片段可特异性地结合 ER- α 36和/或调控ER- α 36活性。在某些实施方式中，本发明中公开的抗体或其抗原结合片段可治疗、抑制、减少、或预防与ER-α 36相关的疾病。例如，本发明中公开的抗体或其抗原结合片段可抑制肿瘤生长，其抑制作用与肿瘤生长抑制百分比呈函数关系；可减小肿瘤大小；或延迟肿瘤生长至一特定的大小。在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段与ER-a 36结合的Kd值 ≤ IOOOpM0在某些这样的实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段与ER-α 36结合的Kd值彡500ρΜ，在另一实施方式中≤200ρΜ，≤IOOpM, ≤50ρΜ，≤20ρΜ，≤ΙΟρΜ，或≤IpM0在某些实施方式中，本发明提供了某些方法，可通过对需求对象给予治疗有效剂量的一种或多种本发明中公开的抗体或其抗原结合片段，从而在所述对象中抑制、治疗、减少或预防与ER-α 36相关的疾病。在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段的单次给药剂量为约0. 01mg/kg到约100mg/kg(例如，约10mg/kg或约5mg/kg或更少)。在某些这样的实施方式中，所述的抗体或其抗原结合片段的单次给药剂量为lmg/kg或更少，在其他的实施方式中约为0. 5mg/kg或更少，在另外其他的实施方式中约为0. lmg/kg或更少。在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段的给药方式为多次给药，每次给药间隔为一天一次到每两月一次。在某些这样的实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段可以约一周给药一次，约两周给药一次，约一月给药一次，或约两月给药一次。在某些实施方式中，本发明提供了诊断的方法，通过将某样品与本发明提供的抗体或其抗原结合片段接触，确定所述抗体或其抗原结合片段与所述样品的结合，从而确定 ER-CI36蛋白的存在或与ER-α36相关的某疾病的进行/退行。例如，本发明提供了一试剂盒，含有一种或多种本发明中公开的抗体或其抗原结合片段。在某些实施方式中，所述试剂盒含有使用所述抗体或其抗原结合片段的使用说明，和/或试剂盒中其他组分使用说明。在某些实施方式中，本发明提供了多核苷酸，其编码本发明公开的抗体或其抗原结合片段的氨基酸序列。在某些其他实施方式中，本发明提供了含有上述多核苷酸的载体， 在某些其他实施方式中，本发明提供了含有上述载体的宿主细胞。在某些实施方式中，本发明提供了表达一种或多种本发明公开的抗体或其抗原结合片段的方法，该方法通过在一定条件下培养宿主细胞，使载体中的编码所述抗体或其抗原结合片段的多核苷酸得以表达。 在某些实施方式中，本发明提供的多核苷酸操作性地连接于载体中的启动子，如CMV启动子。在某些实施方式中，含有本发明提供的载体的宿主细胞为中国仓鼠卵巢细胞。在某些实施方式中，本发明提供了药物组合物，其含有一种或多种本发明公开的抗体或其抗原结合片段。在某些实施方式中，所述组合物进一步含有一种或多种药物载剂 (carrier)。在某些这样的实施方式中，所述的一种或多种药物载剂可以是一种或多种药用可接受的载剂包括，例如，稀释剂、抗氧化剂、佐剂、辅料或无毒的辅助物质。在某些实施方式中，本发明提供的一种或多种抗体或其抗原结合片段可用于制造药物，其可用于治疗与ER-α 36相关的疾病。


图1为人ER的氨基酸序列。其中图Ia为ERa 66的氨基酸序列，图Ib为ERa 46
的氨基酸序列。图 2 为以包涵体存在的 ScFvl (S14)，ScFv2 (S24)，ScFv3 (S33)，ScFv4 (S41)， ScFv6 (S66)和 ScFv7 (S72)在 SDS-PAGE 电泳中的结果。图 2a, 2b, 2c, 2d, 2e 和 2f 为 SDS-PAGE 电泳结果，分别显示了 kFvl，ScFv2，ScFv3, ScFv4, ScFv6 和 &Fv7 在上清液 S14， S24, S33, S41，S66和S72的(见箭头)的存在。
图3为纯化后的kFv的SDS-PAGE电泳结果。图3a，3b和3c分别对应纯化后的 ScFvl, ScFv4 和 &Fv6。图4为复性后的kFv的SDS-PAGE电泳结果。在图如中，1 复性后的ScFvl的还原SDS-PAGE电泳图；2 复性后的ScFvl的非还原SDS-PAGE电泳图。图4b显示复性后的 ScFv4的还原SDS-PAGE电泳图(1 复性后的；2 分子量标准)。图如显示了复性后的ScFv6的还原SDS-PAGE电泳图(1 复性后的ScFv6 ；2 分子量标准)。图5为复性后ScFvl ScFv7的还原SDS-PAGE电泳图，其中S14，S24，S33，S41， S53, S66 和 S72 分别对应于 kFvl，ScFv2, ScFv3, ScFv4, ScFv5, ScFv6 和 &Fv7。图 6 为抗 ER- α 36 ScFvl ScFv7 的 ELISA 结果，显示 ScFvl ScFv7 与 ER- α 36 的结合力。图7为荷瘤裸鼠分别给药抗ER-α 36 kFvl，ScFv3，ScFv4，和抗ER-α 36多克隆抗体，阴性对照IgG以及阳性对照赫赛汀后，其相对肿瘤体积的变化。图8为荷瘤裸鼠分别给药抗ER- α 36 ScFvl,ScFv3, ScFv4, ScFv7和抗ER- α 36多克隆抗体，阴性对照IgG以及阳性对照赫赛汀后，其肿瘤重量的变化。图9为荷瘤裸鼠分别给药抗ER- α 36 ScFvl, ScFv3, ScFv4, ScFv7和抗ER- α 36多克隆抗体，阴性对照IgG以及阳性对照赫赛汀后，其肿瘤抑制率的变化。图10为荷瘤裸鼠分别给药阴性对照IgG(IOa)，阳性对照赫赛汀(IOb)，抗ER- α 36 多克隆抗体(10c)，抗 ER-α 36 ScFvl (IOd)，抗 ER-α 36 ScFv3 (IOe), ER-α 36 ScFv4 (IOf) 和抗ER-a36 ScFv7 (IOg)后取出的肿瘤的照片。图11为荷瘤裸鼠分别给药对照，&Fv7，和他莫昔芬后的相对肿瘤体积。图12为荷瘤裸鼠分别给药对照，&Fv7，和他莫昔芬后的相对肿瘤生长速度。图13为荷瘤裸鼠分别给药对照，&Fv7，和他莫昔芬后的肿瘤重量。图14为荷瘤裸鼠分别给药对照，&Fv7，和他莫昔芬后的肿瘤生长抑制率。图15为荷瘤裸鼠分别给药他莫昔芬(a)，抗肿瘤抗体(b)和对照(c)后的取出的肿瘤的照片。图 16 为在 SK-BR-3 和 HEK293/ER36 细胞中用 ScFvl ScFv7 检测 ER- α 36 的 Western Blot 结果。
具体实施例方式本发明的以下描述只为说明本发明的多种实施方式。同样地，此处讨论的具体修改方式不应理解为对发明范围的限制。本领域的熟练人员不偏离本发明范围即可很容易地得出多种等同物，变化和修改，应理解这样的等同实施方式包括在本发明范围内。本发明中的“抗体” 一词包括任意可结合某特定抗原的单克隆抗体、多克隆抗体、 多特异性抗体或双特异性(双价)抗体。一个完整的抗体包含两条重链和两条轻链。每条重链由一可变区和第一、第二、第三恒定区组成；每条轻链由一可变区和一恒定区组成。哺乳动物的重链可分为α，δ，ε，Y，和μ，哺乳动物的轻链可分为λ或κ。抗体呈“Y”型，“Y” 型结构的颈部由两条重链的第二和第三恒定区组成，其通过二硫键结合。“Y”型结构的每条臂包括其中一条重链的可变区和第一恒定区，其与一条轻链的可变区和恒定区结合。轻链和重链的可变区决定抗原的结合。每条链的可变区均含有三个高变区，称互补决定区(CDR)(轻链(L)的 CDR 包含 LCDRl、LCDR2、LCDR3，重链(H)的 CDR 包含 HCDRl、HCDR2、HCDR3。本发明中公开的抗体和抗原结合片段的⑶R边界可通过Kabat，Chothia或Al-Lazikani命名法命名或识别。(Al-Lazikani 1997 ；Chothia 1985 ；Chothia 1987 ；Chothia 1989 ；Kabat 1987 ；Kabat 1991)。其中，三个⑶R由被成为构架区(FR)的侧面连续部分间隔开，构架区比CDR更加高度保守并形成一个支架支撑超变环。重链和轻链的恒定区与抗原结合无关， 但具有多种效应功能。抗体依据重链恒定区的氨基酸序列可以分成几类。根据是否含有 α，δ，ε，Y，和μ重链，抗体可分别分为五个主要的分类或异构体IgA、IgD、IgE、IgG和 IgM。几个主要的抗体分类还可分为亚类，如IgGl ( Y 1重链)、IgG2 ( Y 2重链)、IgG3 ( y 3 重链)、IgG4(Y4重链)、IgAl(a 1重链)或IgA2(a2重链)等。“双价”的抗体或其抗原结合片段含有两个抗原结合位点。这两个抗原结合位点可以结合同一个抗原，或分别结合不同抗原，这两种情况下该抗体或其抗原结合片段都认为是“双价”。本发明中的“抗原结合片段”一词，指一种抗体片段，例如双功能抗体(diabody)、 Fab、Fab ‘、F (ab ‘ ) 2、Fv片段、二硫键稳定的Fv片段(dsFv)、(dsFv) 2、双特异性 dsFv (dsFv-dsFv' )，二硫键稳定的双功能抗体(ds diabody)、单链抗体分子(scFv)、scFv 二聚体(双价的双功能抗体)，双价单链抗体(BsFv)，由含有一个或多个CDR的抗体的一部分形成的多特异性抗体、骆驼化单域抗体(camelized single domain antibody)、纳米抗体、域抗体、双价域抗体、或任何其他结合抗原但不具有完整抗体结构的抗体片段。抗原结合片段可以与母体抗体或母体抗体片段(如母体scFv)结合相同的抗原。在某些实施方式中，抗原结合片段可以含有来自某特定人抗体的一个或多个CDR，移接至来自一个或多个不同人抗体的框架区。抗体的“Fab”片段是指由一条轻链(包括可变区和恒定区)和一条重链的可变区和恒定区经二硫键结合起来的那部分抗体分子。"Fab' ”片段是指包含了部分铰链区的Fab片段。"F(ab' )2”指的是 Fab 的二聚体。抗体的“Fe”指的是由重链的第二、第三恒定区经二硫键结合组成的那部分抗体。 抗体的Fc段负责多种不同的效应功能如ADCC和CDC，但不参与抗原的结合。抗体的“Fv”段指的是含有完整抗原结合位点的最小抗体片段。Fv片段由一条轻链的可变区和一条重链的可变区组成。“单链Fv抗体”或“scFv”是指由轻链可变区与重链可变区直接相连或通过一个肽链连接而成的工程抗体(Houston 1988)。“单链抗体Fv-Fc”或“scFv-Fc”是指由连接到某抗体Fc段的scFv组成的工程抗体。“骆驼化单域抗体(Camelized single domain antibody) ”、“重链抗体”或 "HCAb (Heavy-chain-only antibodies, HCAb) ”都是指含有两个Vh域而不含有轻链的抗体(Riechmann 1999 ；Muyldermans 2001 ；W094/04678 ；W094/25591 ；U.S. Patent No. 6，005，079)。重链抗体最初从驼科(骆驼、、单峰驼、和美洲驼)衍生得到。虽然缺失轻链，骆驼化抗体(camelized antibodies)有确证的抗原结合全部功能(Hamers-Casterman 1993 ；Nguyen 2002 ；Nguyen 2003)。重链抗体的可变区(VHH域)是最小的已知的获得性免疫产生的抗原结合单位(Koch-Nolte 2007)。“纳米抗体”是指一种抗体片段，其由一个来自重链抗体的VHH域和两个恒定区 CH2禾口 CH3组成。“双功能抗体(diabody)”包括带有两个抗原结合位点的小抗体片段，其中该片段含有在同一条多肽链上相连的Vh域和Vl域(Vh-Vl或Vh-Vl)(请参见，Holliger 1993 ； EP404097 ；W093/11161)。两个域之间衔接物很短，使同一条链上的两个域不能互相配对，从而迫使两个域与另一条链的互补域配对，形成两个抗体结合位点。这两个抗体结合位点可靶向结合相同或不同的抗原(或抗原表位)。“域抗体”是指仅含有一条重链可变区或一条轻链可变区的抗体片段。在某些情况下，两个或多个Vh域由一个多肽衔接物共价结合并形成双价域抗体。双价域抗体的两个Vh 域可靶向作用于相同或不同的抗原。在某些实施方式中，“(dsFv)2”含有三条肽链两个Vh基团间通过一条多肽衔接物相连，并通过二硫键与两个\基团结合。在某些实施方式中，“双特异性ds双功能抗体”含有Vu-Vh2 (由一个多肽衔接物相连)和Vhi-Vl2 (也是由一个多肽衔接物相连)，两者在Vhi和Vu间通过二硫键结合。在某些实施方式中，“双特异性dsFv”或“dsFv-dsFv”含有三条多肽链VH1_VH2基团，其中两者的重链通过多肽衔接物(如长的弹性衔接物)相连，并通过二硫键分别与Vu 和\2基团结合，每对通过二硫键配对的重链轻链具有不同的抗原特异性。在某些实施方式中，“scFv 二聚体”是双价双功能抗体或双价单链抗体(BsFv)，含有二聚化的两个Vh-VJ由多肽衔接物连接)基团，其中一个基团的Vh与另一个基团的\ 协作形成两个结合位点，这两个结合位点可靶向结合相同抗原(或抗原表位)或不同抗原 (或抗原表位)。在另一些实施方式中，“scFv 二聚体”是双特异性双功能抗体，含有相互连接的VU-VH2(由多肽衔接物连接)和VhiU由多肽衔接物连接)，其中Vhi和Vu协作，Vh2 和\2协作，且每个协作的配对具有不同的抗原特异性。本发明中的“表位”是指抗原分子中与抗体结合的那部分氨基酸或原子基团。如果两种抗体表现出对抗原的竞争性结合，则可能结合抗原上的相同表位。例如，如果本发明中公开的某抗体或其抗原结合片段与kFvl，&Fv2，ScFv3, ScFv4, ScFv5, ScFv6或&Fv7竞争结合ER α 36，则该抗体可能，但不一定，被认为结合与ScFvl, ScFv2, ScFv3, ScFv4, ScFv5, ScFv6或相同的表位。本发明中的“Er”是指多种已知雌激素受体，ER- α 66或ER- α 46或ER- α 36中的一种。全长的人ER-α称为hER-α 66，其被确证为一个66kDa的蛋白，含有595个氨基酸(见图la)。hER- α 66由三个独立但相互关联的功能域组成Ν端Α/Β域，C或DNA结合域，和D/E/F或配体结合域(见美国专利申请10/591，199，做为参考文献并入)。ER-α 66 的N端结构域编码一个配体非依赖性激活功能(AF-I)，该区域参与与辅助激活因子的相互作用，以及对目的基因转录激活。DNA结合域或C域含有两个锌指结构，其在受体二聚化以及与特异DNA序列结合中发挥重要作用。C端D/E/F域为配体结合域，调节配体结合，受体二聚化，核转位，和配体依赖性激活功能(AF-2)。AF-I和AF-2对转录控制的相对贡献在不同细胞和不同DNA启动子中会有所不同(Berry et. al.，EMBO J.，9 :2811 (1990)and Tzukerman et. al.，Mol. Endocrin. ,8 21 (1994))。人 ER- α 46 (h ER- α 46，见图 lb)是hER- α 66的剪接异构体，具有约46kDa的分子量，含有412个氨基酸，缺少hER- α 66的N端 AF-I 域。人 ER- α 36 (hER- α 36，其序列如 SEQ ID NO 1 所示)是一个 36kDa 的 hER- α 66 的异构体，其缺失 hER- α 66 的 N 端 AF-1 域和 C 端 AF-2 域(Wang et al.，Biochem. Biophys. Res. Commun. 336，1023-1027(2005)，美国专利申请 10/591，199，W02005/087811)。但是与 hER- α 66或hER- α 46相比，hER- α 36在其C端有独特的27个氨基酸残基添加。这27个氨基酸残基为SEQ ID NO 1中的第观4到310个氨基酸残基，或SEQ ID NO 2中的第1到第27个氨基酸残基。本发明中的“ER活性”包括由ER(如，hER- α 36)介导的细胞内活动，如受体磷酸化(如，酪氨酸磷酸化)，细胞内信号分子与受体或其他细胞内信号分子的结合，信号级联的起始，和/或某生物反应的起始(如，具有ER(如，hER-α 36)的细胞的基因表达诱导和生理或发育中的变化(如，增殖))。本发明中的“癌症”或“癌状态”是指任何由肿瘤或恶性细胞生长、增殖、或转移所介导，并引发实体瘤和非实体瘤如白血病的医疗状态。本发明中的“肿瘤”是指肿瘤和/或恶性细胞的实体物质。对某种状态的“治疗”或“疗法”包括预防或减轻某种状态，降低某种状态兴起或发展的速度，减少发展出某种状态的风险，预防或延迟与某种状态相关的症状发展，减少或终止与某种状态相关的症状，产生某种状态的完全或部分的逆转，治愈某种状态，或以上的组合。对于癌症来说，“治疗”或“疗法”可以指抑制或减缓肿瘤或恶性细胞生长，繁殖，或转移，或以上的某些组合。对于肿瘤来说，“治疗”或“疗法”包括清除全部或部分的肿瘤，抑制或减缓肿瘤生长和转移，预防或延缓肿瘤的发展，或以上的某些组合。本发明中的“特异性结台”是指，指两分子间的非随机结合反应，如抗体和抗原间的反应。在某些实施方式中，特异性结合某抗原的抗体或其抗原结合片段与抗原结合的亲和力(Kd) ( IO^6M(如彡 5χ1(Γ7Μ，( 2χ1(Γ7Μ，( 1(Γ7Μ，( 5xl(T8M，( 2χ10_8Μ, ( 1(Γ8Μ， (5χ10-9Μ, ( 2Χ10-9Μ, ( IO-9M, ( I(TiqM)。本发明中的Kd是指解离速度与结合速度的比值 (k。ff/k。n)，可通过本领域公知的方法测定(如用Biacore或Kinexa方法)。“被分离”的物质已经经人工由自然状态改变。如果自然界中出现某种“被分离” 的物质或成分，那么其已经被改变或脱离其原始状态，或二者均有发生。例如，某一活体动物体内天然存在的多核苷酸或多肽是未被分离的，但如果这些多核苷酸或多肽与之在天然状态下共存的物质足够分离并以足够纯的状态存在，则可以认为是“被分离”。本发明中“载体”是指，可将编码某蛋白的多核苷酸操作性地插入其中并使该蛋白获得表达的一种运载工具。载体可用于转化、转导或转染宿主细胞，使其携带的遗传物质元件在宿主细胞内得以表达。举例来说，载体包括质粒、噬菌粒、柯斯质粒、人工染色体如酵母人工染色体(YAC)、细菌人工染色体(BAC)或Pl衍生的人工染色体(PAC)、噬菌体如λ 噬菌体或Μ13噬菌体，以及动物病毒等。用作载体的动物病毒种类有逆转录病毒(包括慢病毒)、腺病毒、腺相关病毒、疱疹病毒(如单纯疱疹病毒)、痘病毒、杆状病毒、乳头瘤病毒、 乳头多瘤空泡病毒(如SV40)。载体可含有多种控制表达的元件，包括启动子序列、转录起始序列、增强子序列、选择元件及报告基因。另外，载体还可含有复制起始位点。载体还可包括协助其进入细胞的成分，包括但不限于，病毒颗粒、脂质体或蛋白外壳。本发明中“宿主细胞”是指导入外源多核苷酸和/或载体的细胞。宿主细胞可选自多种细胞种类，如大肠杆菌或枯草菌等原核细胞，酵母细胞或曲霉菌等真菌细胞，S2果蝇细胞或Sf9等昆虫细胞，或者动物细胞如纤维原细胞，CHO细胞，COS细胞，NSO细胞，HeLa 细胞，BHK细胞，HEK 293细胞，或人细胞。本发明中的“与ER或ERa 36相关或有关联的疾病”是指，任何由于ER(如 ERα 36)活性升高或降低而导致、加剧、或其他相关的状态。这些状态包括由细胞介导的癌症，这些细胞的生长、繁殖或转移依赖于ER(如ERa 36)；骨骼疾病，例如骨流失、骨裂或骨质疏松；和炎症状态，如类风湿性关节炎、牛皮癣、硬皮病、慢性阻塞性肺炎或哮喘。本发明中的“阻断结合”或“竞争性结合”的能力是指抗体或其抗原结合片段将两个分子间结合的相互作用抑制到任何可检测的程度的能力。在某些实施方式中，阻断两个分子间结合的抗体或抗原结合片段可将两个分子间结合的相互作用抑制至少50%。在某些实施方式中，这样的抑制作用可以大于60%，在某些实施方式中大于70%，在某些实施方式中大于80 %，在某些实施方式中大于90%。在某些实施方式中，被抑制的结合相互作用可以是 kFv 1, ScFv 2, ScFv 3, ScFv 4, ScFv 5, ScFv7 与 hER-α 36 的结合。本发明中的“治疗有效剂量”或“有效剂量”是指，某种药物有效治疗与hERa 36相关疾病或状态的剂量或浓度。例如，对于本发明中公开的抗体或其抗原结合片段的用途来说，治疗有效剂量是在该剂量或浓度下，该抗体或抗原结合物可以清除全部或部分肿瘤、抑制或减缓肿瘤生长、抑制介导癌状态的细胞的生长或繁殖、抑制肿瘤细胞转移、减轻任何与肿瘤或癌状态相关的症状或标记，预防或延缓肿瘤或癌状态的发展，或以上的某些组合。“药用可接受的”是指所指的载剂、溶媒、稀释剂、辅料、和/或盐，总的来说在化学上和/或在物理上与制剂中的其他配料相兼容，并在生理上与接受者相兼容。本发明提供了抗hERa 36的抗体及其抗原结合片段，其特征在于可特异性地结合 SEQ ID NO 1中的第284 第310位氨基酸残基，和/或具有体内抗肿瘤活性。本发明公开了全长人单链抗体kFv 1, ScFv 2, ScFv 3, ScFv 4, ScFv 5, ScFv 6， 或kFv 7，所有这些均特异性的结合hER α 36 (如hER α 36的第284 第310位氨基酸残基)，均通过在噬菌体展scFv文库中用靶多肽筛选得到。该靶多肽的序列在SEQ ID NO 2 中列出，对应于SEQ ID NO :1中的第观4 第310位氨基酸残基。SEQ ID NO :1,SEQ ID NO 2和7种单链抗体的氨基酸序列在以下列出(衔接多肽加下划线，所有的CDR加框)。SEQIDNO 1的氨基画I序列MetAlaMetGluSerAlaLysGluThrArgTyrCysAlaValCysAsnAspTyr AlaSer GlyTyrHisTyrGlyValTrpSerCysGluGlyCysLysAlaPhePheLysArg Serlie GlnGlyHisAsnAspTyrMetCysProAlaThrAsnGlnCysThrlieAspLys AsnArg ArgLysSerCysGlnAlaCysArgLeuArgLysCysTyrGluValGlyMetMet LysGly GlylieArgLysAspArgArgGlyGlyArgMetLeuLysHisLysArgGlnArg AspAsp GlyGluGlyArgGlyGluValGlySerAlaGlyAspMetArgAlaAlaAsnLeu TrpPro SerProLeuMetlieLysArgSerLysLysAsnSerLeuAlaLeuSerLeuThr AlaAsp GlnMetValSerAlaLeuLeuAspAlaGluProProlieLeuTyrSerGluTyr AspPro ThrArgProPheSerGluAlaSerMetMetGlyLeuLeuThrAsnLeuAlaAsp ArgGlu LeuValHisMetlieAsnTrpAlaLysArgValProGlyPheValAspLeuThr LeuHis Asp Gln Val His Leu Leu Glu Cys Ala Trp Leu Glu lie Leu Met lie Gly Leu Val Trp Arg Ser Met Glu His Pro Gly Lys Leu Leu Phe Ala Pro Asn Leu Leu Leu Asp Arg Asn Gln Gly Lys Cys Val Glu Gly Met Val Glu lie Phe Asp Met Leu Leu Ala Thr Ser Ser Arg Phe Arg Met Met Asn Leu Gln Gly Glu Glu Phe Val Cys Leu Lys Ser lie Leu Leu Leu Asn Ser Gly lie Ser His Val Glu Ala Lys Lys Arg lie Leu Asn Leu His Pro Lys lie Phe Gly Asn Lys Trp Phe Pro Arg ValSEQ ID NO :2的氨基酸序列
Gly lie Ser His Val Glu Ala Lys Lys Arg lie Leu Asn Leu His Pro Lys lie Phe Gly Asn Lys Trp Phe Pro Arg ValScFvl 的氨基酸序歹Ij (SEQ ID NO :3)
权利要求
1.一种抗体或其抗原结合片段，其结合的抗原表位基本上相同于KSEQ ID NO 3)、ScFv 2 (SEQ ID NO 5)、ScFv 3(SEQ ID NO 7)、ScFv 4(SEQ ID NO 9)、ScFv 5(SEQ ID NO 11)、ScFv 6 (SEQ ID NO 13)、或 ScFv 7 (SEQ ID NO 15)特异性结合的表位。
2.一种抗体或其抗原结合片段，其含有一个或多个选自于如下一组的成员AcFv IHCDRU ScFv 2 HCDRU ScFv 3 HCDRU ScFv 4 HCDRU ScFv 5 HCDRU ScFv 6 HCDRl JcFv 7 HCDRU ScFv 1 HCDR2,ScFv 2 HCDR2, ScFv 3 HCDR2,ScFv 4 HCDR2,ScFv 5HCDR2,ScFv 6 HCDR2、ScFv 7 HCDR2、ScFv 1 HCDR3、ScFv 2 HCDR3、ScFv 3 HCDR3、ScFv 4 HCDR3、ScFv 5 HCDR3,ScFv 6 HCDR3,ScFv 7 HCDR3,ScFv 1 LCDRl, ScFv 2LCDRU ScFv 3 LCDRl JcFv 4 LCDRl、ScFv 5 LCDRl、ScFv 6 LCDRl、ScFv 7 LCDRl、ScFv 1 LCDR2、ScFv 2 LCDR2、ScFv 3 LCDR2,ScFv 4 LCDR2,ScFv 5 LCDR2,ScFv 6LCDR2, ScFv 7 LCDR2,ScFv 1 LCDR3、kFv 2 LCDR3,ScFv 3 LCDR3,ScFv 4 LCDR3, ScFv 5 LCDR3,ScFv 6 LCDR3JP kFv 7 LCDR3。
3.一种抗体或其抗原结合片段，其含有一个或多个选自于如下一组的成员a)一含有kFv 1的HCDR3、HCDRljP /或HCDR2序列的重链可变区；b)一含有kFv 2的HCDR3、HCDRljP /或HCDR2序列的重链可变区；c)一含有kFv 3的HCDR3、HCDRl、和/或HCDR2序列的重链可变区；d)一含有kFv 4的HCDR3、HCDRljP /或HCDR2序列的重链可变区；以及e)一含有kFv 5的HCDR3、HCDRlJn /或HCDR2序列的重链可变区；f)一含有kFv 6的HCDR3、HCDRl、和/或HCDR2序列的重链可变区；g)一含有kFv 7的HCDR3、HCDRl、和/或HCDR2序列的重链可变区。
4.一种抗体或其抗原结合片段，其含有一个或多个选自于如下一组的成员a)一含有kFv 1的IXDRl，IXDR2，和/或IXDR3序列的轻链可变区；b)一含有kFv 2的IXDRl，IXDR2，和/或IXDR3序列的轻链可变区；c)一含有kFv 3的IXDRl，IXDR2，和/或IXDR3序列的轻链可变区；d)一含有kFv 4的IXDRl，IXDR2，和/或IXDR3序列的轻链可变区；e)一含有kFv 5的IXDRl，IXDR2，和/或IXDR3序列的轻链可变区；f)一含有6的LCDRl，LCDR2，和/或LCDR3序列的轻链可变区；以及g)一含有7的IXDRl，IXDR2，和/或IXDR3序列的轻链可变区。
5.—种抗体或其抗原结合片段，其含有 a)权利要求3中的任一重链可变区；以及b)权利要求4中的任一轻链可变区。
6.一种抗体或其抗原结合片段，其含有一重链可变区含有a)一重链 CDRl 选自于如下一组ScFv 1 HCDRl,ScFv 2 HCDRl,ScFv 3 HCDRl,ScFv 4 HCDRl，ScFv 5 HCDRl，ScFv 6 HCDRl，Sc Fv 7 HCDRl ；b)一重链 CDR2 选自于如下一组ScFv 1 HCDR2,ScFv 2 HCDR2,ScFv 3 HCDR2,ScFv 4 HCDR2, ScFv 5 HCDR2, ScFv 6 HCDR2, Sc Fv 7 HCDR2 ；以及c)一重链 CDR3 选自于如下一组ScFv 1 HCDR3,ScFv 2 HCDR3,ScFv 3 HCDR3,ScFv 4 HCDR3, ScFv 5 HCDR3, ScFv 6 HCDR3, Sc Fv 7 HCDR3 ；
7.一种抗体或其抗原结合片段，其含有一轻链可变区含有a) 一轻链 CDRl 选自于如下一组ScFv 1 LCDRl,ScFv 2 LCDRl,ScFv 3 LCDRl,ScFv 4LCDRl，ScFv 5 LCDRl，ScFv 6 LCDRl，Sc Fv 7 LCDRl ；b)一轻链 CDR2 选自于如下一组ScFv 1 LCDR2,ScFv 2 LCDR2,ScFv 3 LCDR2,ScFv 4 LCDR2, ScFv 5 LCDR2, ScFv 6 LCDR2, Sc Fv 7 LCDR2 ；以及c)一轻链 CDR3 选自于如下一组ScFv 1 LCDR3,ScFv 2 LCDR3,ScFv 3 LCDR3,ScFv 4 LCDR3, ScFv 5 LCDR3, ScFv 6 LCDR3, Sc Fv 7 LCDR3。
8.一种抗体或其抗原结合片段，其含有a)权利要求6中的任一重链可变区；以及b)权利要求7中的任一轻链可变区。
9.一种抗体或其抗原结合片段，其含有一氨基酸序列选自于如下一组SEQ ID NO 17, SEQ ID NO 18, SEQ ID NO 19, SEQ ID NO 20, SEQ ID N0:21、SEQ ID NO 22, SEQ ID NO: 23、SEQ ID NO :24、SEQ ID NO :25、SEQ ID NO :26、SEQ ID NO :27、SEQ ID NO :28、SEQ ID NO :32、SEQ ID NO :33、SEQ ID NO :34、SEQ ID NO :35、SEQ ID NO :36、SEQ ID NO :37、SEQ ID NO :38、SEQ ID NO :39、SEQ ID NO :40、SEQ ID NO :43、SEQ ID NO :44、SEQ ID NO :45、 SEQ ID NO46,SEQ ID NO47,SEQ ID NO 48,SEQ ID NO49,SEQ ID NO52,SEQ ID NO: 53、SEQ ID NO :54, SEQ ID NO :55、和 SEQ ID NO :58。
10.一种抗体或其抗原结合片段，其含有一重链可变区选自于如下一组a)一含有SEQIDNO20、SEQIDNO:21、和/ 或 SEQIDNO22 的I■链可变区；b)一含有SEQIDNO:26, SEQIDNO:27、和/ 或 SEQIDNO28 的I■链可变区；C)一含有SEQIDNO32、SEQIDNO:33、和/ 或 SEQIDNO34 的I■链可变区；d)一含有SEQIDNO38、SEQIDNO:39、和/ 或 SEQIDNO40 的!■链可变区；e)一含有SEQIDNO44、SEQIDNO:45、和/ 或 SEQIDNO46 的!■链可变区；f)一含有SEQIDNO50、SEQIDNO:51、和/ 或 SEQIDNO52 的I■链可变区；以及g)一含有SEQIDNO56、SEQIDNO:57、和/ 或 SEQIDNO58 的I■链可变区。
11.根据权利要求10所述的抗体或其抗原结合片段，其含有-一重链可变区选自于如下组1a)含有SEQIDNO20、SEQIDNO:21、和 SEQIDNO22 的 j■链可变区；b)含有SEQIDNO:26,SEQIDNO:27、禾口 SEQIDNO28 的 j■链可变区；C)含有SEQIDNO32、SEQIDNO:33、禾口 SEQIDNO34 的 j■链可变区；d)含有SEQIDNO38、SEQIDNO:39、禾口 SEQIDNO40 的 j■链可变区；e)含有SEQIDNO44、SEQIDNO:45、和 SEQIDNO46 的 j■链可变区；f)含有SEQIDNO50、SEQIDNO:51、和 SEQIDNO52 mi■链可变区；以及g)含有SEQIDNO56、SEQIDNO:57、禾口 SEQIDNO58 的 j■链可变区。
12.根据权利要求11所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区选自于如下组1a含有SEQIDNO60的!■链可变区b含有SEQIDNO62的!■链可变区C含有SEQIDNO64的!■链可变区d含有SEQIDNO66的!■链可变区e含有SEQIDNO68的!■链可变区f)含有SEQID NO 70的重链可变区；以及g)含有SEQID NO 72的重链可变区。
13.根据权利要求10-12所述的抗体或其抗原结合片段，其进一步含有一轻链可变区选自于如下一组a)一含有SEQIDNO17、SEQIDNO:18、和 // 或 SEQIDNO19的轻链可变区；b)一含有SEQIDNO:23、SEQIDNOJ4、和 // 或 SEQIDNO25的轻链可变区；C)一含有SEQIDNO:29, SEQIDNO:30、和 // 或 SEQIDNO31的轻链可变区；d)一含有SEQIDNO:35, SEQIDNO:36、和 // 或 SEQIDNO37的轻链可变区；e)一含有SEQIDNO:41, SEQIDNO:42、和 // 或 SEQIDNO43的轻链可变区；f)一含有SEQIDNO47、SEQIDNO:48、和/ 或 SEQIDNO49的轻链可变区；以及g)一含有SEQIDNO53、SEQIDNO力4、和/ 或 SEQIDNO55的轻链可变区。
14.根据权利要求13所述的抗体或其抗原结合片段，其含有-一轻链可变区选自于如下组1a)含有SEQIDNO17、SEQIDNO:18、禾口 SEQIDNO19的轻链可变区b)含有SEQIDNO23、SEQIDNO:24、和 SEQIDNO25的轻链可变区C)含有SEQIDNO:29,SEQIDNO:30、禾口 SEQIDNO31的轻链可变区d)含有SEQIDNO:35,SEQIDNO:36、禾口 SEQIDNO37的轻链可变区e)含有SEQIDNO:41,SEQIDNO:42、和 SEQIDNO43的轻链可变区f)含有SEQIDNO47、SEQIDNO:48、和 SEQIDNO49的轻链可变区g)含有SEQIDNO53、SEQIDNO:54、和 SEQIDNO55的轻链可变区。
15.根据权利要求14所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区含有SEQID NO 17, SEQ ID NO :18 JPSEQ ID NO 19 ；以及所述重链可变区含有 SEQ ID NO 20, SEQ ID NO :21、和 SEQ ID NO :22。
16.根据权利要求14所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区含有SEQID NO 23, SEQ ID NO :24、禾口 SEQ ID NO 25 ；以及所述重链可变区含有 SEQ ID NO 26, SEQ ID NO :27、禾口 SEQ ID NO :28。
17.根据权利要求14所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区含有SEQID NO 29,SEQ ID NO :30、和 SEQ ID NO 31 ；以及所述重链可变区含有 SEQ ID NO 32,SEQ ID NO :33、禾口 SEQ ID NO :34。
18.根据权利要求14所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区含有SEQID NO 35, SEQ ID NO :36、禾口 SEQ ID NO 37 ；以及所述重链可变区含有 SEQ ID NO 38, SEQ ID NO :39、禾口 SEQ ID NO :40。
19.根据权利要求14所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区含有SEQID NO :41、SEQ ID NO :42、和 SEQ ID NO 43 ；以及所述重链可变区含有 SEQ ID NO :44、SEQ ID NO :45、禾口 SEQ ID NO :46。
20.根据权利要求14所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区含有SEQID NO 47,SEQ ID NO :48、和 SEQ ID NO 49 ；以及所述重链可变区含有 SEQ ID NO 50,SEQ ID NO :51、和 SEQ ID NO :52。
21.根据权利要求14所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区含有SEQIDNO 53, SEQ ID NO :54、和 SEQ ID NO :55 ；以及所述重链可变区含有 SEQ ID NO 56, SEQ ID NO :57、禾口 SEQ ID NO :58。
22.根据权利要求14所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区选自于如下一组a)所述轻链可变区含有SEQIDNO59,b)所述轻链可变区含有SEQIDNO61,c)所述轻链可变区含有SEQIDNO63,d)所述轻链可变区含有SEQIDNO65,e)所述轻链可变区含有SEQIDNO67,f)所述轻链可变区含有SEQIDNO:69，以及g)所述轻链可变区含有SEQIDNO:71ο
23.根据权利要求22所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区含有SEQID NO 59且所述重链可变区含有SEQ ID NO :60。
24.根据权利要求22所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区含有SEQID NO 61且所述重链可变区含有SEQ ID NO :62。
25.根据权利要求22所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区含有SEQID NO 63且所述重链可变区含有SEQ ID NO :64。
26.根据权利要求22所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区含有SEQID NO 65且所述重链可变区含有SEQ ID NO :66。
27.根据权利要求22所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区含有SEQID NO 67且所述重链可变区含有SEQ ID NO :68。
28.根据权利要求22所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区含有SEQID NO 69且所述重链可变区含有SEQ ID NO :70。
29.根据权利要求22所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区含有SEQID NO 71且所述重链可变区含有SEQ ID NO :72。
30.一种抗体或其抗原结合片段，其含有一重链可变区含有a)一重链 CDRl 选自于如下一组SED ID NO 20, SEQ ID NO :26，SEQ ID NO :32，SEQ ID NO :38，禾口 SEQ ID NO 44 ；b)一重链 CDR2 选自于如下一组SED ID NO :21，SEQ ID NO :27，SEQ ID NO :33，SEQ ID NO :39，禾口 SEQ ID NO 45 ；以及c)一重链 CDR3 选自于如下一组SED ID NO :22，SEQ ID NO :28，SEQ ID NO :34，SEQ ID NO 40, SEQ ID NO :46，SEQ ID NO :52，和 SEQ ID NO :58。
31.根据权利要求30所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述的重链可变区选自于如下一组a)含有SEQ ID NO :20、SEQ ID NO :21、禾口 SEQ ID NO 22 的重链可变区；b)含有SEQ ID NO :26、SEQ ID NO :27、禾口 SEQ ID NO 28 的重链可变区；c)含有SEQ ID NO :32、SEQ ID NO :33、禾口 SEQ ID NO 34 的重链可变区；d)含有SEQ ID NO :38、SEQ ID NO :39、禾口 SEQ ID NO 40 的重链可变区；e)含有SEQ ID NO :44、SEQ ID NO :45、和 SEQ ID NO 46 的重链可变区；f)含有SEQ ID NO 50, SEQ ID NO :51、和 SEQ ID NO 52 的重链可变区；以及g)含有SEQ ID NO :56、SEQ ID NO :57、和 SEQ ID NO 58 的重链可变区。
32.根据权利要求31所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述的重链可变区选自于如下一组a)含有SEQIDNO60 的I■链可变区b)含有SEQIDNO62 的I■链可变区C)含有SEQIDNO64 的I■链可变区d)含有SEQIDNO66 的I■链可变区e)含有SEQIDNO68 的I■链可变区f)含有SEQIDNO70 的I■链可变区g)含有SEQIDNO72 的!■链可变区
33.根据权利要求30-32所述的抗体或其抗原结合片段，其进一步含有一轻链可变区含有a)一轻链可变区选自于如下一组SEQ ID N0:17、SEQ ID NO :23、SEQ ID NO :35、SEQ ID NO :47、禾口 SEQ ID NO 53 ；b)一轻链可变区选自于如下一组SEQ ID NO 18, SEQ ID NO 24、SEQ ID NO 36、SEQ ID NO :48、禾口 SEQ ID NO 54 ；c)一轻链可变区选自于如下一组SEQ ID NO 19, SEQ ID NO 25、SEQ ID NO 37、SEQ ID NO 43, SEQ ID NO :49、和 SEQ ID NO :55。
34.根据权利要求33所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述的轻链可变区选自于以下一组a)含有SEQIDNO17、SEQIDNO:18、禾口 SEQIDNO19的轻链可变区b)含有SEQIDNO23、SEQIDNO:24、和 SEQIDNO25的轻链可变区C)含有SEQIDNO:29,SEQIDNO:30、禾口 SEQIDNO31的轻链可变区d)含有SEQIDNO:35,SEQIDNO:36、禾口 SEQIDNO37的轻链可变区e)含有SEQIDNO:41,SEQIDNO:42、和 SEQIDNO43的轻链可变区f)含有SEQIDNO47、SEQIDNO:48、和 SEQIDNO49的轻链可变区g)含有SEQIDNO53、SEQIDNO:54、和 SEQIDNO55的轻链可变区。
35.根据权利要求34所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述的轻链可变区选自于以下一组a)含有SEQID NO 59的轻链可变区；b)含有SEQID NO 61的轻链可变区；c)含有SEQID NO 63的轻链可变区；d)含有SEQID NO 65的轻链可变区；e)含有SEQID NO 67的轻链可变区；f)含有SEQID NO 69的轻链可变区；以及g)含有SEQID NO 71的轻链可变区。
36.根据权利要求1-35任一所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述的抗体或其抗原结合片段为单克隆抗体、多克隆抗体、双特异性抗体、嵌合抗体、人源化抗体、重组抗体、人抗体、标记抗体、双价抗体、或抗独特型抗体。
37.根据权利要求1-35任一所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述的抗体或其抗原结合片段为骆驼化的单域抗体(camelized single domain antibody)、双功能抗体 (diabody)、scFv、scFv 二聚体、BsFv、dsFv、(dsFv)2> dsFv-dsFv'、Fv 片段、Fab、Fab'、a F(ab' )2、ds双功能抗体(ds diabody)、纳米抗体、域抗体或双价域抗体。
38.根据权利要求1-35任一所述的抗体或其抗原结合片段，其中进一步含有免疫球蛋白恒定区。
39.根据权利要求38所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述的免疫球蛋白恒定区为 λ轻链、κ轻链、γ 1重链、γ 2重链、γ 3重链或γ 4重链恒定区。
40.一种含有如权利要求1-39任一所述的抗体或其抗原结合片段的复合物，该复合物可与SEQ ID NO 1所示的hER- α 36或hER- α 36的片段结合。
41.一种被分离的多肽，其含有一种或多种如权利要求1-39中任一所述的抗体或其抗原结合片段的氨基酸序列。
42.一种被分离的多核苷酸，其编码权利要求41所述的多肽。
43.一种被分离的载体，其含有权利要求42所述的多核苷酸。
44.一种被分离的宿主细胞，其含有权利要求43所述的载体。
45.一种表达多肽方法，所述多肽含有一种或多种权利要求41中的氨基酸序列，所述方法包括在权利要求42中的多核苷酸可以被表达的条件下培养权利要求44中的被分离的宿主细胞。
46.一种药物组合物，其含有如权利要求1-39任一所述的抗体或其抗原结合片段以及一种或多种药用可接受的载剂。
47.根据权利要求46所述的药物组合物，其中所述的一种或多种药用可接受的载剂选自于如下的一组药用可接受的液体、凝胶、固体载剂、水相介质、非水相介质、抗微生物物质、等渗物质、缓冲液、抗氧剂、麻醉剂、悬浮剂/分散剂、螯合剂、稀释剂、佐剂、辅料、或无毒辅助物质。
48.一种含有如权利要求1-39任一所述的抗体或其抗原结合片段的药物组合物，其中所述的抗体或其抗原结合片段与一种或多种化疗物质相连或组合。
49.含有如权利要求48所述的抗体或其抗原结合片段的药物组合物，其中所述的一种或多种化疗物质选自于如下的一组氨柔比星，阿曲生坦、骨化三醇、西仑吉肽、达沙替尼、德卡坦尼(decatanib)、伊多特卡林(edotecarin)、恩扎妥林(enzastaurin)、 盐酸厄洛替尼片、依维莫司、吉马替康、棉酚伊匹里单抗(gossypol ipilimumab)、洛那法尼(Ionafarnib)、硫蒽酮、纽莱迪(neuradiab)、诺拉曲特、奥利默森(oblimersen)、 欧法图穆单抗(ofatumumab)、欧格沃单抗(oregovomab)、帕尼单抗、帕佐泮尼 (pazopanibrubitecan)、他仑帕奈、特穆斯洛利(temsirolimus)、特斯密利(tesmilifene)、 汉防己硷、提斯利姆单抗(ticilimumab)、特拉倍特定(trabectedin)、凡德他尼、维特斯潘(vitespan)、扎诺利姆单抗(zanolimumab)、唑仑二膦酸盐、组氨瑞林、阿扎胞苷、右雷佐生、阿仑单抗、来那度胺、吉姆单抗、酮康唑、氮芥、替伊莫单抗、地西他滨、六甲基嘧胺、贝沙罗汀、托西莫单抗、三氧化二砷、伊地托奈特(editronate)、环孢霉素、Edwina-天门冬酰胺酶、以及锶89。
50.一种含有如权利要求1-39任一所述的抗体或其抗原结合片段的药物组合物，其中所述的抗体或其抗原结合片段与一种或多种治疗物质组合。
51.如权利要求50所述的药物组合物，其中一种或多种治疗物质选自于如下的一组: 淫羊藿、他莫昔芬、17β-雌激素，ICI 182，780，美国专利申请11/877，575中公开的化合物、美国专利申请60/046，255中公开的化合物、细胞因子、抗VEGF抗体(例如，贝伐单抗或阿瓦斯汀)、抗HER2抗体(例如赫赛汀或曲妥珠单抗)，以及抗EGFR抗体、酪氨酸受体抑制剂(例如Gapatinib,拉帕替尼)。
52.如权利要求50所述的药物组合物，其中一种或多种治疗物质选自于如下的一组 淋巴细胞因子、单核因子、人生长激素、牛生长激素、甲状旁腺激素、甲状腺素、胰岛素、胰岛素原、耻骨松弛激素、耻骨松弛激素原、卵泡刺激素、促甲状腺素、黄体生成素、肝生长因子、 纤维原生长因子、泌乳刺激素、胎盘催乳激素、肿瘤坏死因子、缪勒(氏)管抑制物质、小鼠促性腺激素相关肽、抑制素、活化素、整联蛋白、促血小板生成素、神经生长因子、如NGF-β、 血小板生长因子、转化生长因子如TGF-α和TGF-β、胰岛素样生长因子I和II、促红细胞生成素、成骨因子、干扰素、如干扰素-α、_β、和-Y ；集落刺激因子、如巨噬细胞-CSF、 粒细胞巨噬细胞CSF、和粒细胞-CSF、白介素、如=IL-U IL-Ia、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、 IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-Il、以及 IL-12、肿瘤坏死因子，如TNF-a 和 TNF-β，以及其他多肽因子。
53.一种含有如权利要求1-39任一所述的抗体或其抗原结合片段的药物组合物，其中所述的抗体或其抗原结合片段与一种或多种结合物相连。
54.如权利要求53所述的组合物，其中所述的结合物选自于如下的一组选自以下的放射性同位素1^、1、、125!、1、、3^111^!、1^!!、^、64^!、67^!、’、’、9’、177!^、21^、 186Re,188Re,153Sm^212Bi和32P,镧系元素、化学发光标记物、选自如下一组的荧光标记物焚光素、罗丹明、丹黄酰(dansyl)、藻红素、或得克萨斯红(Texas Red)，以及酶-底物标记物例如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、或β -D-半乳糖苷酶。
55.一种在细胞中调控ER- α 36活性的方法，所述方法包括将如权利要求1_35任一所述的抗体和其抗原结合片段与表达ER-α 36的细胞接触。
56.一种在样品中检测ER-a 36存在的方法，所述方法包括将如权利要求1_35任一所述的抗体和其抗原结合片段与样品接触并检测ER-α 36的存在。
57.一种在对象中治疗或预防与ER-α 36相关的状态的方法，所述方法包括对所述对象使用治疗有效浓度的药物组合物，所述药物组合物含有如权利要求1-35任一所述的抗体或其抗原结合片段。
58.根据权利要求57所述的方法，其中所述状态选自于如下的一组骨丢失、骨折、骨质疏松、转移性骨病、帕哲氏病、牙周病、软骨退变、子宫内膜异位、子宫肌瘤、热潮红、LDL 胆固醇水平升高、心血管疾病、认知功能损伤、大脑退行性疾病、术后再狭窄、男子女性型乳房、管道平滑肌细胞增殖、肥胖、失禁、焦虑、雌激素受体导致的抑郁、更年期抑郁、产后抑郁、经前综合征、躁狂忧郁、焦虑、痴呆、强迫症、注意力缺陷障碍、睡眠障碍、激惹、冲动、免疫缺失、自身免疫性疾病、愤怒管理、多发性硬化症和帕金森(氏)病、炎症、炎症状态、炎性肠病、呼吸系统疾病、性功能障碍、高血压、视网膜变性、哮喘和癌状态。
59.根据权利要求57所述的方法，其中所述的状态包括骨丢失、骨折、骨质疏松、绝经、经前综合征、子宫内膜异位、子宫疾病、阳痿、性功能障碍、LDL胆固醇水平升高、心血管疾病、管道平滑肌增殖、雌激素受体导致的抑郁、更年期抑郁、产后抑郁、免疫缺失、自身免疫性疾病、炎症、炎症状态、哮喘和癌状态。
60.根据权利要求59所述的方法，其中所述的状态选自于如下的一组骨丢失、子宫内膜异位、阳痿、心血管疾病、动脉粥样硬化、免疫缺失、炎症、炎症状态、哮喘和癌状态。
61.根据权利要求59所述的方法，其中所述炎症状态选自于如下的一组类风湿性关节炎、牛皮藓、硬皮病、慢性阻塞性肺病，以及哮喘。
62.根据权利要求59所述的方法，其中所述的癌状态选自于如下的一组恶性肿瘤、 胚细胞瘤、肉瘤、生殖细胞瘤、或者血液或淋巴的恶性肿瘤，例如白血病、淋巴瘤、或多骨髓瘤。更具体地，可以使用本发明提供的抗体或其抗原结合片段治疗的癌状态和肿瘤种类包括但不限于，鳞状细胞癌、肺癌(如，小细胞肺癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、肺部腺癌、或肺部鳞状细胞癌)、腹膜癌、肝癌(如肝细胞瘤)、胃癌(如胃肠癌)、胰腺癌、脑癌(如，胶质母细胞脑瘤/多形性胶质母细胞瘤(GBM)、非胶质母细胞脑瘤、或脑膜瘤)，神经胶质瘤(如， 室鼓膜瘤、星细胞瘤、间变型星形细胞瘤、少突胶质细胞瘤、或混合型胶质瘤如星形细胞混合瘤)、宫颈癌、子宫癌、肝癌(如，肝母细胞瘤、肝细胞瘤或肝癌)、膀胱癌(如，尿路上皮癌)、乳癌、结肠癌、肠癌、直肠癌、子宫内膜或宫颈癌、涎腺癌、肾癌(如肾横纹肌样瘤)、 前列腺癌、外阴癌、阴茎癌、肛门癌(如，肛管鳞状细胞癌)、甲状腺癌、头颈部癌(如，鼻咽癌)、皮肤癌(如，黑素癌或鳞状细胞癌)、骨肉瘤、尤文氏肉瘤、软骨肉瘤、软组织肉瘤(如， 横纹肌肉瘤、纤维肉瘤、卡波西肉瘤)、类癌、眼癌(如视网膜母细胞瘤)、间皮瘤、淋巴细胞白血病(如，T细胞和B细胞前体谱系的急性淋巴细胞白血病(ALL)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、急性髓细胞性白血病(AML)、包括肥大细胞白血病、慢性髓细胞性白血病(CML)、 毛细胞白血病(HCL)、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、慢性粒单核细胞白血病(CMML)、滤泡性淋巴瘤(FL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLCL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、淋巴瘤(BL)、蕈样肉芽肿、Sezary综合征，皮肤T细胞淋巴瘤、肥大细胞瘤、髓母细胞瘤、肾母细胞瘤、孤立性浆细胞瘤、骨髓异常增生综合征、慢性和非慢性骨髓增生异常、中枢神经系统瘤、脑垂体瘤、 前庭神经鞘瘤、神经外胚层肿瘤、室管膜瘤、脉络丛乳头状瘤、真性红细胞增多症、血小板增多症、原发性骨髓纤维化症，以及儿童癌，如，小儿肉瘤(如神经母细胞瘤、横纹肌肉瘤以及骨肉瘤)。
63.根据权利要求57所述的方法，其中所述药物组合物经注射途径给药，包括皮下注射、腹腔注射、静脉注射、肌肉注射、或皮内注射，或非注射给药，包括皮肤给药、口服给药、 鼻腔给药、眼内给药、舌下给药、直肠给药或外用给药。
64.根据权利要求57所述的方法，其中所述的治疗有效剂量为约0.01mg/kg到约 100mg/kg。
65.根据权利要求64所述的方法，其中所述的治疗有效剂量选自于如下的一组约 0. 01mg/kg,约 0. 5mg/kg,约 lmg/kg,约 2mg/kg,约 5mg/kg,约 10mg/kg,约 15mg/kg,约 20mg/ kg,约 25mg/kg，约 30mg/kg，约!35mg/kg，约 40mg/kg，约 45mg/kg，约 50mg/kg，约 55mg/kg，约 60mg/kg,约 65mg/kg，约 70mg/kg，约 75mg/kg，约 80mg/kg，约 85mg/kg，约 90mg/kg，约 95mg/ kg,以及约 100mg/kg。
66.一种确定对象中与ER-α 36相关状态的状况的方法，所述方法包括使用如权利要求1-35所述的抗体或其抗原结合片段测定ER- α 36的水平。
全文摘要
本发明的某些实施方式中提供了调节雌激素受体α36功能的抗体、抗体片段、药物组合物、及调节雌激素受体α36功能的方法，以及预防和/或治疗由雌激素α36介导的疾病的方法。
文档编号A61P5/32GK102307595SQ201080007193
公开日2012年1月4日 申请日期2010年2月10日 优先权日2009年2月23日
发明者孟坤, 李靖 申请人:盛诺基医药科技有限公司