用于优化组织和细胞富集的移植物的系统、方法和组合物的制作方法

专利名称：用于优化组织和细胞富集的移植物的系统、方法和组合物的制作方法
技术领域：
本文中公开的实施方式普遍地涉及包含包括脂肪组织的移植物、植入物或可移植的制品的，具有以及不具有脂肪来源的再生细胞群(例如，包括干细胞的脂肪来源的再生细胞浓缩群)的组合物、以及用于制备、优化和给药该组合物的方法和系统。
背景技术：
脂肪组织转移到身体的各个区域是相对普通的美容、治疗和构建过程 (structural procedure)，涉及从一个位置采集脂肪组织，以及将采集的和通常经过加工的组织再植入另一个位置(参见Coleman 1995 ；和Coleman 2001)。脂肪组织的转移最近已用于美容的和/或治疗的隆胸和乳房重建(Bircoll和Novack 1987;以及Dixon 1988)， 以及隆臀(Cardenas-Camarena，Lacouture 等人 1999 ；de Pedroza 2000 ；以及Peren，Gomez 等人2000)，同时广泛地用于修复小的美容缺陷，如面部皱褶、皱纹、痘痕和痘疤(pock marks and divots)0在过去，脂肪组织移植物和脂肪组织转移方法一直受到包括坏死、由身体的移植吸收、感染(Castello，Barros 等人 1999 ；Valdatta，Thione 等人 2001)、钙化及痕痕(Huch， Kunzi ^A 1998) >^ffiWW^liItliiA (inconsistent engraftment) (Eremia and Newman 2000)、耐久性的缺乏，以及由缺乏新生血管形成和移植物组织的坏死而产生的其他问题的困难和副作用的困扰。在脂肪组织转移中最大的挑战之一是由身体的移植吸收和转移之后的脂肪组织移植物的体积保留。当采集或清洗脂肪组织时，被采集的脂肪组织的各个部分之间的空间由液体(例如水、血液、肿胀液、油(oil))充满。当该组织/液体混合物植入到受体中，液体部分被身体迅速吸收导致体积损失。将大量的液体从组织/液体混合物中去除的过程通常称为“干燥脂肪组织”或“使脂肪组织脱水”。由于炎症反应的诱导或加重， 脂肪组织移植物中的红细胞和白细胞等的含量也可以显著影响移植物移植后保留的移植物体积。组织保留的另一个方面涉及脂肪组织移植物内的脂质(lipid)的量。据了解，月旨肪组织移植物内的游离脂质的存在(意味着从死亡或受损的脂肪细胞释放的脂质；也称为油)可以导致带有实质上吞噬活性的炎症反应的诱导或加重以及移植物体积的必然损失。还已知与脂肪来源的再生细胞浓缩群混合的未加工的脂肪组织克服了许多与上述脂肪组织移植物和脂肪组织转移相关的问题。具体地，以包含脂肪来源干细胞的脂肪来源细胞浓缩群补充的未加工的脂肪组织增加了脂肪移植物的重量、血管生成和保持力。 (参见第7390484号美国专利以及未决的公布号2005/0025755的美国专利申请，其全部以引用的方式明确地并入本文中)。在动物模型中，以包含脂肪来源的干细胞的细胞浓缩群补充或与包含脂肪来源的干细胞的细胞浓缩群混合的脂肪组织碎片(fragment)与脂肪组织未补充的移植物单独相比，在移植物中表现出改善的新血管形成(neoangiogeneis)和灌流。此外，以包括脂肪来源干细胞的脂肪来源再生细胞补充的脂肪组织移植物，当与未补充的移植物相比时，表现出随着时间的推移的增加的移植物保持力和重量(参见公开号 2005/0025755的美国专利申请)。此外，在封闭的、无菌液体通道中的脂肪组织的加工，大大降低了感染的机会。在上述动物模型中观察到的脂肪组织的自体同源转移的改进也已经在人体临床研究复制。尽管如此，包括脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells, ADSCs)的脂肪来源再生细胞的浓缩群的分离和纯化，通常涉及到一系列的清洗、消化、过滤和/或离心步骤，它可以减少有生活力的细胞的产量，需要机械设备和专业临床医生，和/ 或可以对移植物的质量、外观、寿命、水合或功效妥协。对制备和优化脂肪组织移植物和植入物，并分离和/或浓缩脂肪来源再生细胞的额外的方法的需要是显然的。

发明内容
本文所述的实施方式涉及加工脂肪组织移植物的装置，以及制备脂肪组织移植物和以脂肪来源的再生细胞补充的脂肪组织移植物的方法。本文提供的几个实施方式涉及用于制备脂肪组织移植物的组织的装置。在一些实施方式中，该装置可以包括具有柔性可折叠袋，该袋具有第一室和第二室，所述第一室和第二室由具有小孔的过滤器来限定。该装置还可以包括位于第二室内的分离器，以及连接到柔性可折叠袋的出口和一个或多个进口。所述进口可以配置为允许脂肪组织无菌引入第一室；以及所述出口可配置为从所述第二室中无菌去除液体和细胞。在一些实施方式中，所述分离器可以是在第二室中自由浮动的多孔结构。在一些实施方式中，所述分离器可以是在第二室中限定第三室的多孔结构。在一些实施方式中，所述分离器可以包括脂质芯吸材料(lipid-wicking material)，如聚酯网筛等。在一些实施方式中所述分离器可以是一种系统的多孔结构，其具有大于过滤器小孔的小孔。例如，在一些实施方式中，所述分离器的小孔具有以下孔径大小，其可以大于或等于过滤器小孔的 5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、 32、33、34、35、36、37、38、39或40倍。在一些实施方式中，所述分离器的孔径大小可以为约 300-2000 μ m。在一些实施方式中，所述过滤器的孔径大小可以大于或等于约30 μ m,例如， 在约30 μ m至约200 μ m之间。在一些实施方式中，所述过滤器的孔径大小为35 μ m。在一些实施方式中，所述进口可以配置为与适配器可拆连接。在一些实施方式中， 所述适配器可以配置为与注射筒的尖端可拆连接，例如60或250ml的注射器、托米注射器 (Toomey syringe)等。在一些实施方式中，所述进口可以配置为允许物质进入该端口，但不允许物质从该端口排出。例如，在一些实施方式中，所述进口包括或配置为与可变形的塑料阀和/或组织入口组件(tissue access port assembly)连接。在一些实施方式中，所述进口可以配置为连接到插管(cannula)，而保持无菌液体/组织通道。在一些实施方式中，该装置可以包括第二装置，其中所述第二装置是脂肪来源再生细胞分离装置。在一些实施方式中，所述脂肪来源的再生细胞分离装置可以连接到用于制备脂肪组织移植物的组织的第一装置上，而保持封闭的通道。在一些实施方式中，脂肪来源再生细胞的分离装置可以是本文上述的装置。在一些实施方式中，所述第二装置可以通过管道(conduit)连接到用于制备脂肪组织移植物的组织的装置上，所述管道可以配置为将分离的脂肪来源再生细胞从第二装置转移到用于制备脂肪组织移植物的组织的装置的第一室。在一些实施方式中，所述管道可以包括Y形连接。本文提供的一些实施方式涉及制造脂肪组织移植物的方法。该方法可以包括获得未加工的脂肪组织的第一部分；用生理溶液冲洗未加工的脂肪组织的第一部分；以及将冲洗后的脂肪组织脱水到小于脱水前未加工的脂肪组织的第一部分中存在的水合量的步骤。 例如，在一些实施方式中，将冲洗后的脂肪组织脱水到液体含量小于约1/2、1/3、或1/4倍 (优选约1/3倍)的脱水前所述未加工脂肪组织的第一部分的液体含量。在一些实施方式中，所述生理溶液可以是乳酸林格氏液、林格氏乙酸盐、生理盐水、磷酸盐缓冲的生理盐水、勃脉* (PLASMALYTE )溶液、晶体溶液和注射液体(IV fluid)、胶体溶液和注射液体、5%葡萄糖水(D5W)、哈特曼氏(hartmarm' s)溶液等。在一些实施方式中，该方法可以另外包括从脂肪组织的第二部分分离脂肪来源再生细胞群，以及使脱水的脂肪组织与所述分离的脂肪来源再生细胞群在允许所述分离的脂肪来源再生细胞群渗透入所述脱水的脂肪组织中的条件下相接触的步骤。在一些实施方式中，所述分离的脂肪来源再生细胞群在接触脱水的脂肪组织前没有经过离心。在一些实施方式中，所述分离的脂肪来源再生细胞群可以在本文上述所公开的装置中，例如，以在释放所述细胞的条件下从结缔组织基质释放细胞和包括胶原蛋白酶的酶溶液的方式，通过与所述装置的第一室中存在的脂肪组织接触而制备。在一些实施方式中，此类释放所述细胞的条件包括热、冷却、机械消化、超声波或激光辅助释放或现有技术中已知的以及第7390484 号美国专利所述的其他方法，第7390484号美国专利全部明确地并入本文中。在一些实施方式中，所述接触步骤可以在连接到所述第一装置上的第二装置(例如，与第一装置具有相同结构的装置)中进行。一些实施方式涉及脂肪组织移植物的生产方法，该方法包括获得未加工的脂肪组织的第一部分；将未加工的脂肪组织中的第一部分引入上述装置的第一室中；将生理清洗液加入到带有未加工的脂肪组织的第一室中以冲洗未加工的脂肪组织；以及从所述装置的第二室去除液体(例如，水、生理清洗液、血液、游离脂质等，或它们的任何组合)，从而干燥脂肪组织和减少游离脂质含量的步骤。在一些实施方式中，该方法可以另外包括从脂肪组织的第二部分分离脂肪来源再生细胞群，以及使脱水的脂肪组织与所述分离的脂肪来源再生细胞群在允许所述分离的脂肪来源再生细胞群渗透入所述脱水的脂肪组织中的条件下相接触的步骤。在一些实施方式中，所述分离的脂肪来源再生细胞群在接触脱水的脂肪组织前没有经过离心。在一些实施方式中，所述分离的脂肪来源再生细胞群可以在本文上述所公开的装置中，例如，以在释放所述细胞的条件下从结缔组织基质释放细胞和包括胶原蛋白酶的酶溶液的方式，通过与所述装置的第一室中存在的脂肪组织接触而制备。在一些实施方式中，此类释放所述细胞的条件包括热、冷却、机械消化、超声波或激光辅助释放或现有技术中已知的以及第7390484 号美国专利所述的其他方法，第7390484号美国专利全部明确地并入本文中。在一些实施方式中，所述接触步骤可以在连接到所述第一装置上的第二装置(例如，与第一装置具有相同结构的装置)中进行。


图1显示说明本文公开的示例性的移植物的补充方法的图。图2显示柔性收集容器的框图。图3图示用于优化脂肪组织移植物的示例性系统。所述移植物可以用脂肪来源再生细胞补充。图4图示系统300中的端口和适配器。图5显示系统300的外膜310。图6图示系统300的过滤器320。图7图示系统300的分离筛(screen) 330。图8图示系统300的示例性封口 311。图9为带有端口和适配器600的系统300的透视图。图10为与系统300的端口一起使用的组织端口组件600的剖视图。图11为与系统300的端口一起使用的组织端口组件600的剖视图。图12为与组织端口组件600 —起使用的帽610的剖视图。图13为用于优化脂肪组织移植物的示例性系统800的图解。图14A及图14B是示例性的组织富集装置的透视图。图14A显示带有第一室和第二室的用于移植的罐，所述第一室用于加工脂肪组织，所述第二室用于以脂消化物 (Iipodigestate)补充脂肪组织。图14B图示用于图14A所示的罐的示例性壳体/平台 (housing/platform)。图15为显示未加工的脂肪组织(对照)、由重力制备方法(重力)制备的脂肪组织、由离心法(离心)制备的脂肪组织，以及根据本文所述的方法和系统(纯移植物 (PureGraft))制备的干燥的脂肪组织的百分比含量水(V/V)的条形图。图16为显示未加工的脂肪组织(对照)、由重力制备方法(重力)制备的脂肪组织、由离心法(离心)制备的脂肪组织，以及根据本文所述的方法和系统(纯移植物 (PureGraft))制备的干燥的脂肪组织的百分比脂质含量(V/V)条形图。图17为显示将每克组织的红细胞(RBC)的含量标准化为根据本文所述的方法和系统(纯移植物(PureGraft))制备的移植物中每克组织存在的红细胞含量的条形图。显示了未加工的脂肪组织(对照)、由重力制备方法(重力)制备的脂肪组织和由离心法(离心)制备的脂肪组织以及根据本文所述的方法和系统(纯移植物(PureGraft))制备的脂肪组织的数据。
具体实施例方式本文公开的实施方式涉及单独或以脂肪来源的再生细胞(例如，包括脂肪来源干细胞，内皮细胞和/或祖细胞的细胞群)补充、增强或加强的脂肪组织移植物(例如，“脂肪移植物”)或脂肪组织植入物的生产方法和系统。本文公开的实施方式是部分基于可以用于快速制备及优化脂肪组织移植物和植入物，以及用于通过例如重力流，以及如需要，在离心、高压、真空过滤存在下制备脂肪来源再生细胞(例如，包括脂肪干细胞的细胞群)群富集的移植物和植入物的装置和系统的发现。本文如下所述，用本文公开的装置制备的脂肪组织移植物，与采用传统技术制备的移植物相比，具有降低的液体、血细胞和游离脂质或油
7含量的水平。特别地，使用本文所公开的装置制备的脂肪组织移植物不需要经受可能会导致细胞生活力下降和降低脂肪组织移植物保持力的强烈的机械力。使用本文所公开的装置可以得到更加可预测的以及稳定的脂肪组织植入物。本文所公开的实施方式也部分基于申请人发现完整的脂肪片段或“未加工的脂肪组织基质”可用于过滤、结合以及从而有效地原位浓缩经过部分或全部消化的分解的脂肪组织的溶液或悬浮液提供的脂肪来源再生细胞。在一些实施方式中，“干燥的脂肪组织”或“脱水的脂肪组织”，可用于过滤、结合以及从而有效地原位浓缩以脂肪消化物 (lipo-digestate)的形式提供的脂肪来源再生细胞。在一些实施方式中，在加入脂肪消化物(lipo-digestate)后，“未加工的脂肪组织基质”可以干燥或脱水。因此，在一些实施方式中，已经实现在脂肪组织移植物或脂肪移植物增大，补充或加强之前，分解的脂肪组织中的细胞成分的浓缩不再需要。下面详细描述本发明的优选实施方式，其实例在附图中说明。只要是可能的，在附图以及关于附图的说明或类似部分中使用相同或相似的参考编号。应当注意，附图是简化形式，而不是精确规模.在本文的公开内容中，仅为了方便和清楚起见，关于附图使用方向术语例如顶部、底部、左面、右面、向上、向下、在上面、在上方、在下面、在下方、后面和前面这样的方向术语不应当理解为是以任何方式对本发明的限制。虽然本文的公开提供了一些举例说明的实施方式，但是应当理解，提供这些实施方式只是为了举例说明，而不是限制性的。虽然讨论了示例性实施方式，但是应当理解，以下详细描述的目的是包括在如通过权利要求书所限定的本发明实质和范围内的所有变型、 替代方式和等同实施方式。可以结合本领域常用的各种细胞或组织分离技术来实施本发明，将所有这样的常用加工步骤包括在本文中只是因为这是理解本发明所必需的。干燥或脱水的脂肪组织本发明提供的一些实施方式涉及可以直接用在同源自体移植程序，例如同源自体移植或在移植前可以用细胞(如脂肪来源再生细胞，脂肪来源干细胞等)、添加剂等加强的干燥或脱水的脂肪组织移植物的生产方法。在某些情况下，术语“脂肪组织”可能指包括储存脂肪的结缔组织的脂肪。脂肪组织中含有若干再生细胞类型，其包括由结缔组织基质包裹的脂肪来源干细胞(“ADSCs”)、内皮祖细胞和前体细胞、周皮细胞、巨噬细胞、成纤维细胞、包括淋巴内皮细胞的淋巴细胞等， 在一些实施方式中，是从受试者中去除单位脂肪组织(unit)以产生脂肪组织移植物。“单位脂肪组织(unit of adipose tissue) ”是指脂肪组织的不连续的可测量的量，其可以通过确定单位的体积和/或重量的来测量。单位脂肪组织可指从受试者中去除的脂肪组织的全部量，或小于从受试者中去除的脂肪组织的全部量的量。因此，单位脂肪组织可与其他单位脂肪组织连接，形成具有各个单位的总和的重量或体积的单位脂肪组织。在一些实施方式中，将一个或多个单位脂肪组织从受试者中去除。本文所述的实施方式中使用的脂肪组织，可以通过本领域技术人员已知的任何方法获得。例如，可以通过抽吸辅助脂肪整复、超声辅助脂肪整复、脂肪切除术、激光脂肪整复、水射流脂肪整复等将脂肪组织从受试者中去除。此外，该程序可以包括此类程序的结合如脂肪切除术和抽吸辅助脂肪整复结合。优选地，脂肪组织以保留组织的生活力和细胞成分以及使收集的材料的潜在的传染性微生物如细菌和/或病毒的污染的可能性最小化的方式收集。因此，在优选的实施方式中，组织提取是以消毒或无菌的方式进行，以使污染最小化，例如，在封闭的无菌液体/组织通道中。在一些实施方式中，抽吸辅助脂肪整复用来从受试者中去除脂肪组织，从而提供可以与其他技术例如超声辅助脂肪整复联合，减少细胞或组织损伤可能性的收集组织的微创方法。对于抽吸辅助脂肪整复程序，通过将插管插入受试者中存在的脂肪组织储藏处内或其附近，接着将脂肪吸出到抽吸装置中来收集脂肪组织。在一个实施方式中，一个小插管可以与注射器连接，使用手动力量可以吸出脂肪组织。使用注射器或其他类似的装置可用于收获相对中等量的脂肪组织(例如，从0. Iml到数百毫升的脂肪组织)。采用这些相对小的装置的程序具有可以以仅局部麻醉而不是全身麻醉进行该程序的优势。超出该范围的更大体积的脂肪组织(例如，大于数百毫升)可能需要由供体或进行收集程序的人自行决定的全身麻醉。当期望去除更大体积的脂肪组织时，在该程序中可以采用相对较大的插管和自动抽吸装置。脂肪切除术程序包括并不仅限于，在被切除的组织的直接或间接的可视化下，通过去切除例如外科解剖去除包含组织(如皮肤)的脂肪组织的程序。在一些实施方式中， 这可能会作为程序的附带部分发生，也就是说，其中，手术的主要目的是去除组织(在肥胖治疗或整容手术中，如皮肤)，其中脂肪组织随着主要关心的组织得以去除。为在本文公开的方法中使用而收集的脂肪组织的量取决于许多变量，包括但不限于，供体的体重指数，易接近的脂肪组织收获点的可用性，伴随和已有的药物治疗和情况 (如抗凝治疗)，以及该组织将被收集的目的。已经证明脂肪组织移植体的植入是具有阈值效应的细胞剂量依赖性。因此，可能“越多越好”的一般原则将在由其他变量设置的限制范围内适用，并在可行的情况下，收获将收集尽可能多的组织。在一些实施方式中，例如在干燥或脱水的脂肪组织用来制造强化或补充的脂肪组织移植物的实施方式中，单位脂肪组织分割成部分。脂肪组织的第一部分未经消化，也根本未经加工或冲洗、清洗，以获得本文如下所述的干燥或脱水的脂肪组织。未加工的干燥或脱水的脂肪组织的第一部分可以作为以脂肪消化物脂肪消化物或来自第二部分的脂肪来源细胞浓缩群中存在的脂肪来源再生细胞(例如，包括脂肪来源干细胞和/或内皮细胞和/ 或祖细胞的细胞群)补充的移植物的基础。如下所述，一部分可以经加工以将脂肪来源再生细胞例如，包括脂肪来源干细胞和/或内皮细胞和/或祖细胞的细胞群从结缔组织基质中释放或释出，以获得脂肪消化物或包括再生细胞或干细胞的脂肪来源细胞浓缩群。在一些实施方式中，两个不同的单位脂肪组织，例如，从受试者的相同或不同区域，或从不同受试者中收集。如下所述，一个单位可以经加工获得脂肪消化物或包含再生细胞或干细胞的脂肪来源细胞浓缩群，其他单位可以作为以脂肪来源再生细胞(例如，脂肪消化物和/或包括脂肪来源干细胞和/或内皮细胞和/或祖细胞的细胞群)补充的脂肪移植物的基础。在一个实施方式中，一个或两个单位脂肪组织可以在本发明的装置和系统中低温保存，使得递送移植物到受试者与组织的收获在时间上可以分开。在一个此类实施方式中，一个或两个脂肪组织单位可以在本发明的装置和系统中低温保存，其中装置的室是由在如下所述的低温保存、低温储存、解冻以及随后的使用过程中保持机械和结构的完整性的材料制造的。 在另一个此类实施方式中，在用在本文所述的移植物或植入物的强化之前，脂肪消化物或包含包括脂肪来源干细胞的再生细胞的脂肪来源细胞浓缩群可以低温保存。
如参照“干燥的脂肪组织”使用的术语“干燥”，是指与来自同一受试者和同一位置的未加工的脂肪组织相比在干燥的脂肪组织中存在的具有较低的液体含量的脂肪组织单位(例如，取自与干燥的脂肪组织相同的受试者和相同的位点的单位脂肪组织的(W/W))， 例如，水或其他液体(例如，肿胀液)。如参照“脱水的脂肪组织，，使用的术语“脱水，，与来自同一受试者和同一位置的未加工的脂肪组织相比在脱水的脂肪组织中存在的具有较低的液体含量的单位脂肪组织(例如，取自与脱水的脂肪组织相同的受试者和相同的位点的单位脂肪组织的(W/W))，例如，水或其他液体(例如，肿胀液)。本文使用的“等效单位”，可以指来自一个受试者的等体积或重量的脂肪组织。例如，等效单位可以指来自一个受试者的等体积(或重量)的脂肪组织。在一些实施方式中， 等效单位可以意味着从相同或不同的受试者，从同一个位置(例如，臀部、腹部、大腿、背部等)获得的等体积(或重量)。“未加工的脂肪组织”，是指尚未部分或完全分解的脂肪组织，即未受到机械和/或酶分解的脂肪组织。因此，未加工的组织包含了完整的包括结合脂肪来源再生细胞的结缔组织的组织片段。本文所用“脂肪来源再生细胞”，是指从脂肪组织中获得的任何引起或促进完全或局部的再生、修复或器官、组织或生理单位或系统的结构或功能的替代，从而提供治疗、组织或美容益处的细胞。再生细胞的例子包括脂肪来源干细胞(“ADSCs”)、内皮细胞、内皮前体细胞、内皮祖细胞、巨噬细胞、成纤维细胞、周皮细胞、平滑肌细胞、前脂肪细胞、分化或去分化的脂肪细胞、角质细胞、单能和多能祖细胞和前体细胞(及其子代)和淋巴细胞。在一些实施方式中，干燥或脱水的脂肪组织具有未加工的脂肪组织的等效单位的约 1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、12%、15%、20%、25%、30%、35%、 40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%或 95% (或在此范围之间任何％)液体含量(按体积和/或重量计算)。例如，干燥脂肪组织可以小于未加工的等效单位的脂肪组织的液体含量大于或等于约1.5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、 10倍(或此范围之间的任何数字)液体含量。同样，参照“脱水的脂肪组织”，所用的术语 “脱水”是指在“脱水的脂肪组织”中存在的与未加工的脂肪组织或未加工的等效单位的脂肪组织相比较低的水含量。在一些实施方式中，脱水脂肪组织可以具有大于或等于约1%、 2%,3%,4%,5%,6%,7%,8%,9% ,10%,12%,15%,20%,25%,30%,35%,40%,45%, 50%、55%、60%、65%、70%、80%、90%或95% (或在这个范围之间的任何％ )的未加工的等效单位的脂肪组织或通过离心或其他常规方法制备的等效单位的脂肪组织的含量水。例如，干脂肪组织可以具有小于未加工的等效单位的脂肪组织的大于或等于约1. 5倍、2倍、3 倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍(或此范围之间的任何数字)的含水量。在一些实施方式中，本文所述的“干燥”或“脱水”的脂肪组织可以含有与未加工的等效单位的脂肪组织相比较低的脂质和/或红细胞或白细胞的含量或百分比。在一些实施方式中，干燥或脱水的脂肪组织可以具有小于约1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、 10% ,12% ,15%,20%,25%,30%,35%,40%,45%,50%,55%,60%,65%,70%,80%, 90%、95%或99% (或此范围之间的任何％)(或在这个范围之间的任何数值)的在未加工的等效单位的脂肪组织和/或使用离心法，例如切除的组织在固定角度的离心机中旋转的方法或其他传统的制备技术加工的等效单位的脂肪组织中的白细胞。例如，在一些实施方
10式中，干燥或脱水的脂肪组织可以包含小于约75 %、小于80 %、小于85 %、小于90 %、小于 95%、或更小或在这个范围之间的任何％的在等效单位的脂肪组织中的白细胞数。在一些实施方式中，本文提供干燥或脱水的脂肪组织可以具有小于约1%、2%、 3 %,10 %,12 %,15 %,20 %,25 %,30 %,35 %,40 %,45 50%、55%、60%、65%、70%、80%、90%或95% (或在这个范围之间的任何％ )(或在这个范围之间的任何数值)的未加工的脂肪组织或使用离心法例如切除的组织在固定角度的离心机中旋转的方法或其他常规制备方法制备的等效单位的脂肪组织中的红细胞。例如，在一些实施方式中，本文公开的系统所生产的脂肪组织移植物包含小于约75%、小于 80%、小于85%、小于90%、小于95%、甚至更小或在这个范围之间的任何％的在等效单位的脂肪组织中的红细胞数。在一些实施方式中，本文所公开的干燥或脱水的脂肪组织移植物具有小于约1 %、 2%,3%,4%,5%,6%,7%,8%,9% ,10% ,12% ,15%,20%,25%,30%,35%,40%,45%, 50%、55%、60%、65%、70%、80%、90%或95% (或在这个范围之间的任何％ )(或在这个范围之间的任何数字)的未加工的脂肪组织或由常规的离心方法例如切除的组织在固定角度的离心机中旋转的方法制备的等效单位的脂肪组织中的脂质。例如，在一些实施方式中，本文所公开的干燥或脱水的脂肪组织移植物包含小于约75%、小于80%、小于85%、小于90%、小于95%、甚至更小或在此之间的任何％的在未加工的等效单位的脂肪组织中存在的游离脂肪含量的百分比。在一些实施方式中，干燥的或脱水的脂肪组织由在如下文进一步详细描述的包括过滤器和分离器的装置中提供未加工的脂肪组织而获得。该过滤器可以将装置划分为两个内部室，从而限定第一室和第二室或子系统。将脂肪组织引入到装置的第一室或子系统，优选地不进入装置的第二室。该过滤器具有多个允许自由流动的液体，如，水、肿胀液、清洗液 (如乳酸林格氏液、生理盐水、PLASMALTYE )、游离脂质、油、血细胞、从脂肪组织裂解的细胞以及血液成分进入第二室，但孔径是使得保留非分解的脂肪组织和组织片段的小孔。 第二室可以包括在下面进一步详细描述的由脂质吸走和/或液体吸走(例如，从第一室中吸引液体的网络状设计)材料制成的分离器。在优选实施方式中，分离器是由多孔性材料制成，其中分离器的小孔大于过滤器的小孔。第一室内未加工的脂肪组织用生理清洗液冲洗或清洗。在优选实施方式中，生理清洗液无菌引入该装置。在一些实施方式中，清洗液引入第一室。在一些实施方式中，清洗液引入第二室，并通过过滤器进入第二室，从而与其中的脂肪组织接触。在一些实施方式中，清洗液引入到第一室和第二室。在一些实施方式中，为了便于从第一室的脂肪组织中清洗和分离游离脂质、红细胞、白细胞和肿胀液，搅动(例如，颠倒、挤压或轻轻摇动装置)脂肪组织和清洗液。在其他实施方式中，第一室的脂肪组织与在未搅动的情况下允许从装置的第一室排出或流出的清洗液接触，例如通过重力或芯吸力(wicking force)。在一些实施方式中，用来冲洗脂肪组织的清洗液的体积可以大于脂肪组织的体积。仅通过举例的方式，在一些实施方式中，大于或等于约Iml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml、7ml、 8ml、9ml、10ml、15ml、20ml、25ml、30ml、50ml、100ml、150ml、200ml、250ml、300ml、350ml、 400ml、450ml、500ml、550ml、600ml、650ml、700ml、750ml、800ml、850ml、900ml、950ml、1000ml、1100ml、1500ml、2000ml或在这些体积之间的任何量的可以用于冲洗未加工的脂肪
组织的清洗液。在清洗或冲洗步骤中，液体，例如清洗液、游离脂质、油、血细胞、来自脂肪组织的裂解细胞和血液成分通过装置的第一室和第二室之间的过滤器的小孔。因此，第二室变成充满液体。在第二室的分离器可以起到吸入和保留从第一室进入第二室的液体的作用，例如，起到毛细管的作用。水、肿胀液、血液和来自第一室的贮藏在脂肪组织中的游离脂质的运动使干燥的脂肪组织燥和脱水。液体通过端口从第二室中去除。在一些实施方法中，利用泵和真空将液体从第二室中去除。在一些实施方式中，允许液体从端口排出脱离第二室。参照图2-图13在下面进一步详细讨论制造干燥或脱水的脂肪组织以及补充或强化的脂肪组织移植物的示例性装置。在一些实施方式中，添加清洗液和从第二室去除内容物的步骤被重复1次、2次、3 次、4次、5次、6次、7次、8次、9次、10次或以上。可以将干燥或脱水的脂肪组织从第一室去除(优选无菌)，并且直接给予受试者。 在一些实施方式中，在给予受试者之前，干燥或脱水的脂肪组织经过进一步加工(例如，通过在下面进一步详细描述的添加剂的添加)。补充后的脂肪组织移植物本文所述是生产补充、增强或强化的脂肪组织移植物的方法和系统，例如，其中移植物是未加工的脂肪组织或干燥或脱水的脂肪组织。例如，在本文所述的某些方法中，以额外的脂肪来源再生细胞或脂肪来源干细胞，例如，脂肪消化物或包含再生细胞或干细胞的脂肪来源细胞浓缩群补充强化或补充的脂肪组织移植物。优选地，额外的脂肪来源再生细胞或脂肪来源干细胞从同一受试者中获得。在一些实施方式中，额外的脂肪来源再生细胞或脂肪来源干细胞可以从不同受试者中获得。通过本文所述的一些方法，例如，消化后的脂肪组织提取细胞(lipoaspirate) (“脂肪消化物”)直接应用到未加工的脂肪组织、干燥的脂肪组织、脱水的脂肪组织或未加工的脂肪组织基质上，未加工的脂肪组织、干燥的脂肪组织、脱水的脂肪组织或未加工的脂肪组织基质用作过滤器或筛子保留脂肪消化物中存在的成分(例如，脂肪来源再生细胞， 如包括脂肪来源干细胞和/或内皮细胞和/或祖细胞的细胞群)。通过这种加工，在未经过额外的可能是繁琐的，费时费力的，并且可能对细胞生活力有影响的纯化或分离步骤的情况下，可以快速制备已经以脂肪来源再生细胞(例如，包含脂肪来源干细胞和/或内皮细胞和/或祖细胞的细胞群)浓缩、补充或强化的脂肪组织移植物、植入物或脂肪移植物。通过本文所述的方法中的一些方法，例如，通过包含再生细胞或干细胞的脂肪来源细胞浓缩群直接应用到未加工的脂肪组织、干燥的脂肪组织、脱水的脂肪组织或未加工的脂肪组织基质和未加工的脂肪组织、干燥的脂肪组织、脱水的脂肪组织。与分离、纯化和浓缩脂肪来源再生细胞的现有的方法相比，本文公开的一些方法使用未加工的脂肪组织、干燥的脂肪组织或脱水的脂肪组织的完整的基质，轻轻地过滤以及在原位，即在基质本身，浓缩脂肪来源再生细胞，这样做避免由离心法、膜、凝胶或梯度过滤以及脂肪消化物的其他机械操作带来的细胞损伤。此外，本文所述的方法促进遍及脂肪组织移植物的外源性脂肪来源再生细胞(例如，包括脂肪来源干细胞和/或内皮细胞和/ 或祖细胞的细胞群)的平均或实质上完全的分布。
本文中所使用的“再生细胞组合物”或“脂肪消化物(lipo-digestate) ”是指组织例如脂肪组织经过清洗并且至少经过部分分解之后在大量的液体中代表性地存在的细胞成分。例如，在一些实施方式中，再生细胞组合物分或脂肪消化物可以包含细胞溶液，该细胞溶液包括包含脂肪来源再生细胞，例如干细胞的脂肪来源细胞群。在一些实施方式中，再生细胞成分可以包含多种不同类型的再生细胞，包括ADSCs、内皮细胞、内皮前体细胞、内皮祖细胞、巨噬细胞、成纤维细胞、周皮细胞、平滑肌细胞、前脂肪细胞、分化或去分化的脂肪细胞、角质细胞、单能和多能祖细胞和前体细胞(及其子代)和淋巴细胞。在一些实施方式中，再生细胞成分包括仅一个、仅两个、仅三个、仅四个或更多类型的再生细胞。在一些实施方式中，再生细胞成分和脂肪消化物可以还包含一个或更多的可能是存在于组织片段中的污染物，如胶原蛋白。在一些实施方式中，脂质体消化物或再生细胞溶液实质上不存在完整的脂肪组织片段。本文所使用的“干细胞”，是指具有分化成各种其他类型的细胞的潜力，执行一个或多个特定功能，并具有自我更新能力的多能再生细胞。本文公开的干细胞中的一些可以是多能性的。本文所使用的“祖细胞”，是指具有分化成不止一个细胞类型的潜力的多能再生细胞。本文所使用的“祖细胞”还指具有分化成仅一个细胞类型的潜力，执行一个或多个特定的功能以及具有有限的或没有自我更新能力的单能再生细胞。尤其，本文所使用的“内皮祖细胞”是指具有分化成血管内皮细胞的潜力的多能或单能细胞。本文所使用的“前体细胞”，是指具有分化成一种细胞类型的潜力的单能再生细胞。前体细胞及其子代可以保持广泛的增殖能力，例如，淋巴细胞和内皮细胞，其可以在适宜条件下增殖。本文所使用的“干细胞数量”或“干细胞频率”是指在克隆形成分析中观察到的克隆数，在克隆形成分析中脂肪来源细胞(ADC)以低细胞密度(< 10，000细胞/孔)铺板并且生长在支持MSC生长的生长培养基上(例如，辅以10%小牛血清、5%马血清和抗生素/ 抗菌剂的DMEM/F12培养基)。培养物可以用苏木精染色，染色之后，细胞可以生长两个星期。超过50个细胞的克隆算作CFU-F。干细胞频率是按照铺板的每100个有核细胞中观察到的CFU-F数量计算(例如；在以1，000个有核的ADC细胞起始的平板上计数的15个克隆计算出干细胞频率为1.5% )，干细胞的数量是按照干细胞频率乘以获得的有核的ADC 细胞总数计算。高百分比的从ADC细胞生长的CFU-F表达骨髓来源干细胞(Barry等人， 1999)也表达的细胞表面分子⑶105。⑶105也由脂肪组织来源干细胞(Zuk等人，2002) 表达。在一些实施方式中，脂肪组织可以根据本文所述的方法经过加工来获得脂肪消化物和/或脂肪来源细胞的浓缩群，其中细胞的至少0. 2%,0. 3%,0. 4%,0. 5%,0. 6%,0. %、 0. 8%,0. 9%U. 0%,2%,3%,4%,5%,6%,7%,8%,9%,10%,11 %>12%U3%U4%,
30%,35%,40%,45%,50%,55%,60%,65%,70%,75%,80%,85%,90%,95%,96%, 97^^98^^99%或100%是干细胞或脂肪消化物的其他类型的再生细胞或浓缩的脂肪来源细胞群。优选地，在具有封闭的液体/组织通道以避免任何与外部环境的触接和消除来自环境的污染的可能性的无菌的封闭的系统中，脂肪组织经过加工来生产脂肪消化物或再生细胞溶液。现有技术中已知用于加工脂肪组织和生产脂肪消化物的装置。在优选的实施方式中，脂肪组织经过加工生产脂肪消化物，同时在一些实施方式中，使用例如在第7390484 号美国专利中所述的以引用的方式全部明确并入本文中的装置保持完全封闭的系统。在一些优选实施方式中，脂肪组织加工程序不包括离心、淘洗或任何用于浓缩包括脂肪来源再生细胞的细胞群的其他机械方法，这些方法引起或有可能导致在再生细胞组合物/脂肪消化物中的再生细胞生活力下降。在一些实施方式中，获得脂肪消化物的过程包括从用于生产脂肪消化物或浓缩的脂肪来源细胞群的部分或单位脂肪组织中去除或耗尽成熟的充满脂肪的脂肪细胞组合物的组织。在一些实施方式中，脂肪组织经过一系列的清洗和分解步骤，其中该组织经过第一次冲洗以减少游离脂质的存在(从破裂的脂肪细胞释放的)和外周血成分(在组织收获过程中从切断的血管释放的)。例如，在一些实施方式中，脂肪组织与等渗盐水，如磷酸盐缓冲生理盐水或其他生理溶液混合，(例如，巴克斯特公司PLASMALYTE ,雅培研究室诺莫索@( NORMOSO ),或乳酸盐林格溶液)。然后，清洗后的组织可以分解成游离的完整的脂肪细胞和来自结缔组织基质的其他细胞群。在某些实施方式中，整个脂肪细胞成分或非再生细胞成分是从脂肪组织的再生细胞成分中分离的。在其他实施方式中，只有脂肪成分的一部分或多部分是从再生细胞中分离的。完整的脂肪组织片段可以通过几种方法，包括但不仅限于过滤、倾析或沉淀等从游离脂质和细胞中分离。优选地，消化后的组织未经过离心或淘洗。在一些实施方式中，用来生产脂肪消化物的脂肪组织完全被分解，而在其他实施方式中，其只有部分被分解。完整的脂肪组织片段，例如，来自未加工或清洗的脂肪组织的，可以使用包括机械力(切碎或剪切力)，单一或组合的蛋白水解酶如胶原蛋白酶、胰蛋白酶、脂肪酶，第5952215号美国专利公开的裂解酶HI和胃蛋白酶或机械和酶法的结合的任何常规技术或方法进行分解。可以用于分解脂肪组织的利用胶原蛋白酶的另外的方法由第 5830714 号和第 5952215 号美国专利以及 Williams, S. K.，S. McKenney 等人(1995 年)“用于脂肪组织分解的胶原蛋白酶多选择和纯化(Collagenase lot selection and purification for adipose tissue digestion)”细胞移植(Cell Transplant)4(3) 281-9公开。在一些实施方式中，如Twentyman，P. R.和J. Μ. Yuhas (1980) “细菌的中性蛋白酶用于分解小鼠肿瘤和多细胞肿瘤球状体的用途(Use of bacterial neutral protease for disaggregation of mouse tumours and multicellular tumor spheroids)"Cancer Lett 9(3) :225-8所公开的，代替胶原蛋白酶或除胶原蛋白酶外，中性蛋白酶可以用于分解组织。在一些实施方式中，如Russell，S. W.，W. F. Doe等人(1976)“在实体鼠新生物中的炎症细胞.组成的炎症细胞的肿瘤分解以及识别anflammatory cells in solid murine neoplasms. Tumor disaggregation and identification of constituent inflammatory cells) "Int J Cancerl8(3) :322-30所公开的，用酶的组合物，例如胶原蛋白酶和胰蛋白酶的组合物分解脂肪组织。在一些实施方式中，如在Engelholm，S. Α.，Μ. Spang-Thomsen， 等人(1985) “通过结合机械和酶方法分解人类实体瘤(Disaggregation of human solid tumours by combined mechanical and enzymatic methods)" Br J Cancer 51(1) :93-8 公开的，利用酶例如胰蛋白酶和机械离解的结合可以分解脂肪组织。在一些实施方式中，脂肪组织的一部分经过完全分解以分离来自成熟的脂肪细胞
14和结缔组织的脂肪来源再生细胞(例如，脂肪来源干细胞)。在一些实施方式中，脂肪组织的一部分仅经过部分分解。例如，可以用一种或多种酶进行部分分解，从脂肪组织的至少部分中相对于否则酶将留在其上以完全降解该份脂肪组织的大量时间及早地去除该一种或多种酶。这样的过程可能需要更少的加工时间。在一些实施方式中，脂肪组织的部分或单位脂肪组织用无菌缓冲生理盐水冲洗和在足以提供适当分解的胶原蛋白酶浓度、温度和时间下与胶原蛋白酶孵育。优选地，用于分解的酶由有关当局批准供人类使用(例如，美国食品和药物管理局(Food and Drug Administration))，并且没有微生物和污染物，如内毒素。适合的胶原蛋白酶制剂包括重组和非重组胶原蛋白酶。重组胶原蛋白酶可以从F.霍夫曼罗氏有限公司，印第安纳州印第安纳波利斯(F.Hoffmann-La Roche Ltd, Indianapolis, Ind)和/或发展生物制作公司，纽约布鲁克(Adyance Biofactures Corp.，Lynbrook，N. Y.)获得。非重组胶原蛋白酶也可以如第6475764号美国专利公开的方法获得。例如，在一些实施方式中，脂肪组织用从约0. 5 μ g/ml至约100 μ g/ml、例如， 10 μ g/ml至约50 μ g/ml的胶原蛋白酶溶液处理，并在从约30°C至约38°C孵育约20分钟至约60分钟。根据胶原蛋白酶的来源，这些参数会不同，通过实验研究得以优化，以验证该系统在适当的时间表内在提取所需的细胞群方面是有效地。例如，在一些实施方式中，组织与包括胶原蛋白酶的溶液在约37°C，孵育10-15分钟。在分解之后，可以清洗/冲洗脂肪消化物以除去分解过程中的添加剂和/或副产品，例如，胶原蛋白酶和/或其他酶分解剂以及新释放出的游离脂质。在一些实施方式中，在使脂肪消化物渗透入未加工的干燥或脱水的脂肪组织的条件下，脂肪消化物可以应用于未加工的干燥的或脱水的脂肪组织的部分。例如，在一些实施方式，脂肪消化物可以重悬，在未加工的脂肪组织、干燥的脂肪组织或脱水的脂肪组织的部分之上(或下)分层和利用重力脂肪消化物经由未加工的脂肪组织(或干燥的或脱水的脂肪组织)得以过滤。在一些实施方式中，脂肪消化物经未加工的脂肪组织被泵送，例如使用蠕动泵，真空等。在一些实施方式中，将脂肪消化物添加到未加工的脂肪组织以产生混合物，经过机械或手动搅动或摇动混合物。由于脂肪消化物经由未加工的脂肪组织过滤或与未加工的脂肪组织混合，脂肪来源再生细胞可以由结缔组织基质结合，生理盐水和其它液体流过组织，从而产生以脂肪来源再生细胞(例如包括干细胞的脂肪来源再生细胞)补充或加强的脂肪移植物或植入物。在一些实施方式中，例如，生理盐水、成熟的脂肪细胞、红细胞等的流动得以去除到废物箱。用于产生补充的脂肪组织移植物的系统和装置在下面更详细讨论，该方法的实施方式在图1所示的示意图中得以描述。图1显示用于制备补充的脂肪组织移植物的示例性途径的示意图。在第一步中， 通过进口向封闭/无菌的容器(例如，可折叠的柔性袋或如本文其他地方描述的刚性容器) 中提供单位脂肪组织。如本文所述，脂肪组织在容器内经冲洗/清洗以及消化同时保持封闭的系统。在图1所示的实施方式中，第一个容器具有进口和出口。如图1所示的第一个容器具有进口和出口，然而，技术人员将理解本文所述的装置可以包括多个，即，1、2、3、4、 5、6、7、8、9、10，或更多的进口和出口。优选地，进口和出口配置为无菌添加和/或去除第一个容器中的内容物(例如，组织、添加剂、溶液等)。在图1公开的实施方式中，在第二容器(例如，可折叠的柔性袋或如本文其他地方所述的刚性容器)中提供第二脂肪组织单元或第一脂肪组织单元的部分。在图1所示的实施方式中，第二个容器有一个进口或多个进口，以及一个出口或多个出口。第二个容器的进口配置为将内容物(例如，脂肪消化物或脂肪来源细胞浓缩群)添加到容器中，优选地，同时保持封闭的无菌液体通道。出口配置为从第二容器去除内容物，例如，多余的清洗液、游离脂质脂、血液等。如图1所示的实施方式，在消化之后，脂肪消化物和非分解的脂肪组织片段和游离脂质在第一个容器内形成不同层。允许脂肪消化物层通过密闭容器的出口离开(例如， 通过如图1所示的泵或真空)以及，例如，通过保持封闭的系统的导管进入到包含单独的未加工或清洗的干燥或脱水的脂肪组织的容器中。在使脂肪消化物或在脂肪消化物或脂肪来源细胞浓缩群中分离的脂肪来源再生细胞渗透入脂肪组织的条件下，来自第一容器的脂肪消化物与未加工的，干燥或脱水的脂肪组织混合。在图1中，再生细胞经由未加工的或干燥的脂肪组织泵送以产生补充的脂肪组织移植物。在一些实施方式中，任何多余的脂肪消化物或浓缩的脂肪来源细胞溶液通过在第二容器中设置无菌环在第二个容器中经由未加工的、干燥或脱水的脂肪组织循环，其中多余的再生细胞溶液或脂肪消化物经由离开端口(出口)排入通向储藏脂肪组织的容器的进入端口(进口)的导管。应当理解在制造本文所述的强化或补充的脂肪组织移植物中，用于生产脂肪消化物或浓缩的脂肪来源细胞溶液，并用于作为脂肪组织移植物的基本成分或基础的各单位脂肪组织或各脂肪组织的部分的体积可以是相等的，或者他们可以是不同的。例如，用于制造脂肪消化物的脂肪组织的体积可以比其他单位脂肪组织的体积多至少大于或等于约10%、 20 % ,30 % ,40 % ,50 % ,60 % ,70 % ,80 % ,90 % UOO % UlO % ,120 % ,130 % ,140 % ,150 %, 160% ,170% ,180% ,190%,200,210%,220%,230%,240%,250%,260%,270%,280%, 290%、300%，或这个范围之间任何数。在一些实施方式中，用于制造脂肪消化物的脂肪组织的体积比其他单位脂肪组织的体积少至少大于或等于约lO^JO^JO^dO^jO^、 60 %,70 %,80 %,90 %U00 %U10 %U20 %U30 %U40 %U50 %U60 %,170 %,180 190%、200、210%、220%、230%、240%、250%、260%、270%、280%、290%、300%，或在此范围之间的任何数。在一些实施方式中，脂肪消化物移植物组织的比例为0.25 1， 0.5 1,0. 75 1,1 1,1. 25 1,1. 5 1,1. 75 1 或 2 1，或在这个范围之间的何任数。优选地，脂肪消化物移植物组织的比例小于约1 1，如0.5 1或0.25 1。在一些实施方式中，部分加工的脂肪组织(例如，消化的脂源细胞 (Iipoaspirate)或再生细胞溶液)，和/或部分未加工的脂肪组织、干燥的脂肪组织、脱水的脂肪组织和/或本文所述的以脂肪来源再生细胞的补充的脂肪组织移植物可以与添加齐U，例如其他细胞、组织、组织碎片、脱矿物质骨、或因子或试剂，例如裂解脂肪细胞和/或红细胞添加剂组合，强化，补充，增强或混合。例如，在一些实施方式，加工的脂肪组织的部分，和/或未加工的脂肪组织(或干燥的或脱水的脂肪组织)的部分，和/或本文所述的以脂肪来源再生细胞补充的脂肪组织移植物可以与生长因子添加剂如胰岛素或药物例如西厄格列酮(thiaglitazone)类药物、抗生素、生物活性或惰性化合物例如凝固酶、细胞重团聚抑制剂、可吸收塑料支架或旨在增强细胞群的递送、功效、耐受性或功能的其他添加剂组合，补充或混合。
在某些实施方式中，未加工的脂肪组织、干燥的脂肪组织、脱水的脂肪组织，脂肪消化物和/或补充的脂肪组织移植物可以以一个或多个细胞分化剂添加剂，例如细胞因子和生长因子补充。在一些实施方式中，将一个或多个细胞分化剂，例如细胞因子和生长因子，即来自脂肪组织移植物的不同的成分分别地提供给接受脂肪组织移植的受试者。例如， 在一些实施方式中，组合物以血管生成(anigiogenic)剂或因子补充。在一些实施方式中， 将作为添加剂的血管生成因子提供给本文所述的未加工的脂肪组织、干燥的脂肪组织、脱水的脂肪组织、脂肪消化物和/或补充的脂肪移植物。如本文所使用，术语“血管生成”是指通过从现有的血管和组织生成新的血管的过程(Folkman，19%)。本文中所使用的“血管生成因子”或“血管生成蛋白”是指任何能够促进来自现有的血管的新血管生长(“血管生成”)的已知的蛋白质、肽或其他试剂。用在本发明中适合的血管生成因子包括，但不仅限于，胎盘生长因子(Luttun等人，2002)，巨噬细胞集落刺激因子(Aharinejad等人，1995)， 粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(Buschmarm等人，2003年)，血管内皮生长因子(VEGF)-A、 VEGF-A, VEGF-B, VEGF-C, VEGF-D, VEGF-E (Mints 等人，2002)，神经黏连因子(Wang 等人， 2003 年)，成纤维细胞生长因子(FGF)，FGF-2 (bFGF)、FGF-3、FGF4、FGF-5、FGF-6 (Botta 等人，2000)，血管生成素1，血管生成素2 (Sundberg等人，2002)，促红细胞生成素(Ribatti等人，2003)，BMP-2、BMP4、BMP-7 (Carano 和 FiIvaroff，2003 年)，TGF-β (Xiong 等人，2002 年)、IGF-I (Shigematsu等人，1999)、骨桥蛋白(Asou 等人，2001)，多效蛋白(Pleiotropin) (Beecken 等人，2000)，激活素(Lamouille 等人，200 ，内皮素 1 (Bagnato 和 Spinella， 2003年)及其组合。血管生成因子可以单独起作用，或与另一个组合起作用。在组合时，血管生成因子还可以协同作用，即因子的并用效果大于各个因子分别作用的效果的总和。“血管生成因子”或“血管生成蛋白”还包括此类因子的功能类似物。功能类似物包括，例如，因子的功能部分。功能类似物还包括与因子的受体结合的抗独特型抗体，因此，在促进血管生成中模仿因子的活性。产生这种抗独特型抗体的方法在现有技术中是众所周知的并且得以描述，例如在W097/23510中，其内容以引用的方式全部明确并入本文中。本文公开的实施方式中有用的血管生成因子，可以或从任何合适的来源生产或获得。例如，因子可以从它们的天然来源纯化，或合成生产或通过重组表达。因子可作为蛋白质组合物、以编码因子的表达质粒的形式或与本文公开的成分混合形式给予受试者。合适的表达质粒的构建是众所周知的。构建表达质粒的合适的载体，包括例如腺病毒载体、逆转录病毒载体、腺伴随病毒载体、RNA载体、脂质体、阳离子脂质、慢病毒载体和转座子。在一些实施方式中，为美容、组织或治疗目的的来源，以改变、增强或补充组合物的功能这样一种方式，加工的脂肪组织，如脂肪消化物或再生细胞溶液的细胞，未加工的脂肪组织，干燥的脂肪组织，脱水的脂肪组织的细胞，或本文所述的补充的脂肪组织移植物的细胞，也可以通过DNA插入或通过放置于细胞培养中得以修饰。例如，Mosca, J. D.， J. K. Hendricks等(2000年)“间质干细胞作为基因传递载体(Mesenchymal stem cells as vehicle for gene delivery) "Clin Orthop (379Suppl) :S71_90 所公开的，干细胞的基因转化技术是本领域普通技术人员已知的，Walther，W.和U. Mein(2000). “用于基因转化的病毒载体在人类疾病治疗中它们的用途的综论(Viral vectors for gene transfer -.a review of their use in the treatment of human disease) "Drugs 60(2) :249-71,以及 Athanasopoulos，T.，S. Fabb 等人(2000) “基于腺伴随病毒的基因
17治疗载体对获得性或遗传性疾病的特性和应用(综论)(Gene therapy vectors based on adeno-associated virus characteristics and applications to acquired and inherited disease (review)) "Int J MoI Med 6(4) :363-75所公开的，可以包括病毒转染技术，更具体，腺伴随病毒基因转化技术。如Muramatsu，Τ.，A. Nakamura,等人(1998) “体内电穿孔将非病毒基因转化到活动物的组织中的强大并且方便的方法(综论)(In vivo electroporation -.a powerful and convenient means of nonviral gene transfer to tissue of living animals (Review)) ” Int J MoI Med 1 (1) :55-62 所公开的，基于非病毒的技术也可以得以进行。在优选实施方式中，加工的组织的细胞没有经过培养。更优选地，加工的组织的细胞保持在封闭的无菌的系统中直到使用他们，例如，直到它们被装载在递送装置中或与未加工的或干燥的或脱水的脂肪组织组合或直接递送到受试者中。脂肪组织移植物给予除了获得细胞和/或组织的受试者以外的受试者的实施方式中，可以将一个或多个免疫抑制剂添加剂给予接受移植物的受试者以减少，优选地，预防移植排斥。适合本文所公开的方法的免疫抑制剂的例子包括抑制T-cell/B-cell共刺激途径的试剂，如干扰T细胞和B细胞通过CTLA4与B7途径耦合的试剂，如公布号为 20020182211的美国专利所公开的。其他例子包括环孢霉素、霉酚酸酯(myophenylate mofetil)、雷帕霉素(rapamicin)、抗胸腺细胞球蛋白。通过本文公开的方法生产的补充的脂肪组织移植物可以直接给予受试者。本文中所使用的术语“给予”、“引入”、“递送”、“放置”和“移植”互换使用，并且是指通过导致植入物或脂肪移植在所需位点至少部分定位的方法或途径，将本文所公开的组合物例如补充的脂肪移植物放置入受试者中。在一些实施方式中，在给药前没有从系统中去除或没有暴露在产生补充的脂肪组织移植物的系统或装置的外部环境中的情况下，补充的脂肪组织移植物(例如，补充脂肪来源再生细胞的脂肪移植物)可以给予受试者。提供封闭的系统降低给予受试者的物质的污染的可能性。因此，加工脂肪组织和产生补充的脂肪组织移植物同时保持封闭的系统提供超过现有方法的优点，因为活性细胞群更可能是无菌的。在这样的实施方式中，脂肪消化物或补充的脂肪组织移植物暴露到外部环境或从系统中去除的唯一时间是将补充的细胞或移植物移入应用装置以及给予受试者时。在一个实施方式中，应用装置也可以是封闭的系统的一部分。因此，在一些实施方式中，脂肪消化物或补充的脂肪组织移植物没有经过用于培养的加工或冷冻保存。在一些实施方式中，将未加工的组织、干燥的脂肪组织、脱水的脂肪组织、脂肪消化物和/或补充的脂肪组织移植物的至少部分得以储存供以后植入/注入。例如，本文所公开的组合物(即未加工的组织、干燥的脂肪组织、脱水的脂肪组织、脂肪消化物、浓缩的细胞脂肪来源的细胞群和/或补充的脂肪组织移植物)可以划分成一个以上等份或单位使得为以后的应用组合物的部分得以保留而将该部分直接应用到病人。为通过例如皮下技术放置入受试者，在加工结束后，补充或强化的脂肪组织移植物可以装载入传递装置，如注射器、支架、可吸收胶囊或植入物。换句话说，通过本领域普通技术人员已知的任何手段，可以将补充、增强或强化的脂肪移植物或植入物放置入病人中， 例如，可以将它们引入真皮(皮下)中，引入组织间隔中，或引入组织(如乳房、臀部等)中或其他位置。优选地，装载发生同时保持封闭的系统。优选的实施方式，包括由针、导管放置，或通过联合添加剂的直接外科植入，例如预成型的基质或可吸收的乳房形胶囊。
本文所用的术语“受试者”包括温血动物，优选包括人类的哺乳动物。在优选的实施方式中，受试者是灵长类动物。在甚至更优选的实施方式中，受试者是人。用于生产干燥的脂肪组织移植物和补充的脂肪组织移植物的装置如上所述，本文所提供的是用于制造干燥或脱水的脂肪组织和补充或强化的脂肪组织移植物的装置和/或系统，借助于图2所示的是用于生产适合以脂肪来源再生细胞补充的脂肪组织移植物的示例性系统，该系统包括柔性收集容器200，例如，具有将该袋分隔成第一内部室280和第二个内部室四0的滤网层210的医疗级收集袋。在一些实施方式中，过滤器可以包含允许内容物例如，成熟的脂肪细胞、红细胞、生理盐水，从第一内部室通过到第二内部室的多个开口或小孔，优选地过滤器的小孔大于约30μπι。例如，在一些实施方式中，过滤器的多个开口可以约大于，小于或等于30 μ m、35 μ m、40 μ m、50 μ m、60 μ m、 70 μ m、80 μ m、90 μ m、100 μ m, 110 μ m、120 μ m、130 μ m、140 μ m、150 μ m、160 μ m、170 μ m、 180 μ m、190 μ m、200 μ m、210 μ m、220 μ m、230 μ m、240 μ m、250 μ m、260 μ m、270 μ m、280 μ m、 290 μ m、以及300 μ m或此范围之间的任何数。例如，在一些实施方式中，过滤器210的多个开口可以在约30 μ m至500 μ m之间(例如，约60 μ m-300 μ m、如74-约265 μ m)。在一些实施方式中，第一内部室280包括两个端口 220，230。在一些实施方式中， 第二内部室290包括一个端口 M0。在一些实施方式中，柔性收集容器200包括用于清洗或冲洗液的清洗容器250，清洗容器250经由端口 220可操作地连接到内部收集室280使经由封闭液体通道从容器250到内部室观0的溶液通过成为可能。在一些实施方式中，240 端口可操作地连接到废物袋260，内容物，例如红细胞、生理盐水和成熟的脂肪细胞通过废物袋260从内部室四0中去除。在一些实施方式中，将脂肪组织经由端口 220添加到柔性收集室200。在一些实施方式中，将冲洗液，例如乳酸林格溶液，经由端口 230添加到第一内部室。然后例如，在机械摇臂或其他搅动装置上搅动或摇动柔性收集容器。将红细胞、多余的冲洗液、裂解的细胞以及成熟的脂肪细胞和脂质从室280存在的组织中去除。在一些实施方式中，系统配置为允许将脂肪消化物无菌添加到储存冲洗后的脂肪组织的内部室观0中。例如，柔性收集容器200可以包含额外的提供至内部室观0的无菌进入通道的端口，经由该端口脂肪消化物可以得以定位。图3至图13显示本文所公开的用于生产优化的脂肪组织移植物的系统的其他实施方式。图3和图4显示系统300的示例性构造，系统300提供了控制脂肪组织移植物的水合的封闭的无菌的过程，例如将干燥或脱水的脂肪组织装箱。例如，由于液体从移植的组织中的再吸收或吸收进入人体，植入后常见的与制备的脂肪组织植入物相关的问题涉及植入物行为的不可预测性。正如下面所讨论的，系统300提供了具有与常规获得的脂肪组织移植物相比，通过产生较干的移植物，减少这种变异性的能力的控制器。此外，这个较干的脂肪组织移植物或植入物可以选择地以脂肪消化物(或包括再生细胞的浓缩的脂肪来源细胞群)补充，或直接给予受试者。图3和图4显示用于制备较干的或脱水的脂肪组织的系统300的一个实施方式的构造。系统300包括密封起来形成系统300的外层的第一外壳310和第二外壳340 (共同地以及可替换称作“外壳(outer shells) ”或“外壳(outer shell) ”)。图5显示系统300使用的示例性外壳310(或340)。正如下面所讨论的，外壳310，340可贴附，连接或密封起来形成柔性可折叠的袋。图8显示可用于制造系统300的示例性封口 311的细节。第一外壳 310和第二外壳340可以由现有技术中已知的任何医疗级柔性材料，例如医疗级的USP类 VI或医疗级乙基乙烯基乙酸酯(EVA)制成。在一些实施方式中，形成第一外壳和第二外壳的柔性材料可以由可以与自身结合的材料制成。在其他实施方式中，形成第一外壳和第二外壳的柔性材料可以是任何可以与自身结合以及能够捕获和/或密封系统或子系统中存在的任何其他材料的材料。外壳也可以由可以承受低温保存的材料制成。外壳也可以由透明或彩色的耐高压加热的材料、生物相容性的材料，耐体液的材料和/或可灭菌例如辐射、 环氧乙烷或干热的材料制成。仅通过举例的方式，材料可以是医疗级EVA。在优选实施方式中，材料可以是可结合自身以及捕获其他材料的材料，例如，系统中存在的过滤器。通过本文进一步描述的过程，例如射频焊接法可以完成结合。在某些实施方式中，如图3至图13所示的系统300中， 外壳可以由沿外壳周边的双热封口而封口密封起来。外壳或任何子系统可以使用本领域技术人员已知的胶粘剂密封。可以考虑包括它们的作用机制的要使用的粘合剂的类型。例如， 可以使用通过损失溶剂硬化的粘合剂、通过失水硬化的粘合剂、通过冷却硬化的粘合剂、通过化学反应硬化的粘合剂、不硬化粘合剂-压敏胶粘合剂。可以考虑例如通过物理吸附的粘附、化学结合的粘附、粘附静电理论、机械连锁、通过相互扩散的附着力、弱边界层和压力敏感粘附等机制。将要连接的表面也必须得到处理，如表面形貌，表面热力学和表面化学分析。为最佳的密封要连接的某些表面可能还需要特别的预处理。例如可以考虑对金属的适当的预处理，对无机材料的预处理，对塑料的预处理和对柔性体的预处理。在一些实施方式中，产生的系统和子系统有利地具备使他们能够承受压力的机械性能。因此，必须进行粘接接头的球形压力分析以及有限元分析。也必须评估粘接接头的耐久性。例如，必须考虑减少光氧化降解的添加剂。在潮湿的环境中，对于金属结构接头的行为必须予以考虑。还必须考虑水和粘合剂，水和粘合剂界面，其他液体及木材接头。在一些实施方式中，利用常规超声波、结合测试仪、快速扫描方法和粘附特性测量法，可能需要进行无损检测。胶着地结合的接头的影响行为也可能需要进行评估。例如，可以评估粘合齐_胶着地结合的接头的冲击试验，在高效率负载下的粘合剂的特性以及受冲击负载的胶着地结合的接头的变化和应力分布。也可能希望评估粘结结合的断裂力学。例如，能源失效标准、应力强度、能量释放率、热力学、内在的以及实际的粘合能量、断裂能和耐用性的评价。可评估的其他因素包括疲劳、减振、连接类似和不同的材料以及粘接复合材料。在一个特定的实施方式中，使用射频(RF)焊接可以密封系统的外壳或任何子系统或任何适当组合。射频焊接也称为介电或高频(HF)焊接。RF焊接是应用无线电频率将材料融合在一起的过程。由此产生的焊缝可以像原始材料一样牢固。射频焊接依赖于被焊接材料的某些性质以造成在快速交变电场中热的产生。具体来说，这个过程涉及使被连接的部分经受在两个金属条之间施加的高频率(13-lOOMHz)的电磁场导致材料加热而融合在一起。使用这种技术，只有某些材料可焊接。聚氯乙烯(PVC)和聚氨酯是由射频工艺焊接的最常见的热塑性塑料。虽然可能需要特殊的条件，包括尼龙、聚酯(PET)、乙烯-醋酸乙烯共聚物(EVA)和一些丙烯腈-丁二烯-苯乙烯(ABQ树脂的其他聚合物的射频焊接是可能的。例如除了射频功率，如果使用预热的焊接条，尼龙和PET是可焊性的。射频焊接可能不适合聚四氟乙烯(PTFE)、聚碳酸酯、聚苯乙烯、聚乙烯或聚丙烯。然而，已经开发了特级聚
20烯烃，它具有被射频焊接的能力。射频焊接的主要功能是在两个或多个薄板材料厚度上形成接合。通过合并与焊接面临近的刀口，这个过程可以同时焊接和切割材料。刀口充分地压紧热塑料以使多余的废料被撕下，因此这个过程通常被称为撕裂密封焊接。其他片的材料焊接到产品表面也是可能的。在一些实施方式中，系统和子系统也可以使用超声波焊接密封。当通过超声波焊接结合材料时，所需的能量以机械振动的形式出现。焊接工具(sonotrode)将焊接的部分连接，并且在纵向方向移动它。要焊接部分保持静态。同时，要结合的部分压在一起。静态和动态力的同时作用，导致该部分的融合，而无需使用额外的材料。此过程可以在连接可在本文所述系统中使用的塑料和金属的工业规模中使用。对塑料的超声波焊接，在结合区域的热升高是由机械振动的吸收、连接区域的振动反射以及该部分的表面摩擦而产生。振动垂直地引入。在收缩区域产生摩擦热，使物料局部塑料化，在很短的时间内使两部分之间的不溶性连接成形。前提条件是两个被加工件具有近似相当的熔点。超声波焊接中接头质量是非常均勻的，因为能量转移和释放的内部的热量保持不变，并且限制在连接区域。为了获得最佳结果，连接区域得以准备以使它们适合超声波焊接。除了塑料焊接，超声波也可以用来铆接本文所述的系统的被加工件，或将需要的金属部件嵌入到塑料中。技术人员应当理解，本文所公开的系统可以由除了上面所述的柔性材料以外的材料制成。例如，在一些实施方式中，本文所述的系统或系统部件可以由金属制造。在这样实施方式中，超声波金属焊接可用于连接或将系统部件彼此粘上。与其他过程不同，要焊接的部分没有加热到熔点，而是由施加压力和高频机械振动连接。与塑料焊接相比，水平引入超声波金属焊接过程中使用的机械振动。具体来说，在超声波金属焊接过程中，涉及静力、振荡剪切力和焊接区域的温度适度增加的复杂的过程被引发。这些因素的大小取决于工件的厚度、其表面结构、其机械性能。工件放置在在焊接过程中以高频率(通常为20kHz或35kHz 或40kHz)振荡的固定的机件之间，即铁砧和焊接模具。最常用的振荡频率(工作频率)为 20kHz。这个频率在人耳听的见的频率之上，也允许的最大限度地利用能源。只需要少量的能量的焊接过程，可以使用35kHz或40kHz的工作频率。图3至图13所示的示例性系统300包括由在外壳310和外壳340之间插入过滤材料320创建的第一子系统和第二的子系统或第一室和第二室。第一子系统或室是指由外壳 310和过滤材料320之间的区域限定，第二子系统或室是由过滤材料320和外壳340之间的区域限定。在某些实施方式中，沿系统300周边的双热封口捕获过滤材料320使得在系统 300内形成两个不同的子系统或室。过滤材料可以包括多个开口，理想地能使或允许某些内容物的大部分，例如，液体、肿胀液、红细胞、清洗液(如生理盐水，乳酸林格氏液等)、细胞碎片通过以及能使或允许某些内容物的大部分，例如，成熟的脂肪细胞、再生细胞、干细胞、 祖细胞和结缔组织的保留。通过和保留的成分将由过滤材料的开口的大小来决定，也就是说，一般比开口小的成分将通过，比开口大的成分将予以保留。因此，过滤材料可基于感兴趣的成分的大小选择。可以理解这取决于系统的条件，例如，压力、空气流量、粘度等，将通过的比过滤材料的开口小的成分的数量或百分比，和将保留的比开口大的成分的数量或百分可以有所不同。优选地，过滤材料具有允许内部或子系统之间的液体传递的多个小孔。小孔使插入在一个子系统中的组合物(或其成分)扩散到另一个子系统中，或反之亦然。优选地，小孔位于任何可使用的过滤器的表面的大幅区域。示例性过滤器如图6所示。任何允许多余的液体、红血细胞或细胞碎片的过滤器可以在系统300中使用。例如，任何保留脂肪细胞、再生细胞和干细胞，或结缔组织的过滤可以得以使用。一些实施方式提供了系统300，其中过滤材料320的小孔可以在从约1 μ m左右到约750 μ m范围内， 例如，10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、 210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390、 400、410、420、430、440、450、460、470、480、490、500、510、520、530、540、550、560、570、580、 590、600、610、620、630、640、650、660、670、680、690、700、710、720、730、740 或 750 μ m 或在这之间的任何数字或范围。优选地，过滤材料的多个开口或小孔为大于40μπ 。例如，在一个实施方式中，过滤材料320的多个开口可以为74 μ m。在其他实施方式中，多个开口的范围可以从约73至约264 μ m。如图3至图13所示，在一些实施方式中，第二子系统或室，S卩，以上所述的过滤材料320和外壳340之间的区域可进一步分为两个子系统，使得形成第三子系统或室。例如， 在过滤材料320和外壳340之间插入分离器330，如分离筛、网眼或过滤器。示例性的包括分离筛(screen)的分离器如图7所示。第二和第三的子系统或室可以包含来自第一个子系统的溶液、废水、废物，碎片和其他不需要的物质。在某些实施方式中，第二和第三的子系统或室是部分彼此不同的。在一些实施方式中，第二和第三的子系统或室是完全彼此不同的。例如，在一些实施方式中，分离器330，例如，分离筛具有自由度，或在第三子系统中完全自由活动以致形成与第二子系统不是完全分开的第三子系统。在其他实施方式中，第二和第三子系统彼此是完全不同的，其中使用任何现有技术中已知的或本文所述的连接机制， 例如，粘合连接、射频焊接、超声波焊接、分离器，例如，分离筛在外层310和340之间捕获。 技术人员将容易理解可以用来粘上系统300的不同层，例如，第一和第二的外壳，过滤器和分离器的几种方法可以选择以确保最佳的密封强度。在一些实施方式中，分离器330 (例如，分离筛)配置为使过滤材料320和外壳340 之间的接触最小化。最小化接触防止在组织加工(例如，当在袋内真空发展时)过程中过滤材料320和外壳340彼此粘附。因此，分离筛330在过滤材料320和外壳340之间创建空间。在某些实施方式中，分离器可以包括在外壳340和过滤器320之间创建空间的肋材、 框架和其他装置。在其他实施方式中，外壳340的面向过滤材料320的一侧可以具有某种构造以创建必要的空间，从而避免明显的分离器的需要。系统的过滤器和外壳之间的空间的创建产生在袋内从脂肪组织拉、吸引或吸走多余的液体到第二和/或第三子系统的力。 然后多余的液体可以被引导入废物箱。优选地，由分离器创建的空间，例如，分离筛330，和 /或用于产生分离器的材料也得以设计、配置或选择为吸走脂肪组织中存在的脂质，从而帮助从第一子系统或室的组织中去除脂质和液体，进一步干燥或脱水组织。在某些实施方式中，分离器330是由多孔性物质制成和/或由包括多个开口或小孔。在某些实施方式中，分离器330的多个小孔可以为约300至约3000 μ m或在此范围之间的任何数，如约500至约2000 μ m。优选地，多个开口或小孔具有大于或等于约300 μ m、 400 μ m、500 μ m、600 μ m、700 μ m、800 μ m、900 μ m、1000 μ m、1100 μ m、1200 μ m、1300 μ m、 1400 μm、1400 μm、1500 μm、1600 μm、1700 μ m、1800 μm、1900 μ m、2000 μm、2100 μ m、2200 μ m、2300 μ m、2400 μ m、2500 μ m、2600 μ m、2700 μ m、2800 μ m、2900 μ m、3000 μ m、或在
这个范围之间的任何数的直径。在一个实施方式中，多个开口为约ΙΟΟΟμπι。在一些实施方式中，分离器是由具有开口面积大于或等于约10%、12%、14%、16%、1%、20%、22%、 24%,26%,28%,30%,32%, 35%,36%,38%,40%,42%,44%,46%,48%,50%,52%, 讨％、56%、58%、60%、62%、65%或在此范围内的任何％的多孔材料制成。技术人员应当理解，大尺寸的小孔允许材料从第一室更快转移到或排入第二室中，分离器的孔径可以调整以平衡吸走和/或排出或过滤性能。在一些实施方式中，液体和脂质吸附到或填充多孔分离器的开口。申请人取得了惊人的发现，在一些实施方式，包含比过滤材料的小孔大的小孔的分离器促进从脂肪组织和系统的第一室中去除液体。因此，在一些实施方式，分离器， 例如，分离筛330是一种多孔性物质，其中，小孔具有比如上所述的过滤材料320大的直径或尺寸。在一些实施方式中，分离器包括捕获或吸走脂质和/或液体的生物相容性材料。 例如，分离器，可以由聚酯、尼龙、人造丝、硝酸纤维素和醋酸纤维素制成。在一些实施方式中，分离器是由柔性材料制成，以及在一些实施方式，分离器由硬质材料制成。优选地，分离器由聚酯网，例如，具有ΙΟΟΟμπι的孔径的聚酯网制成。图3至图13所示，系统300可以包括一个或多个允许将材料添加到系统或从系统中去除材料的端口。例如，如图3、图4、图8和图9所示的系统300有3个独立的端口。端口 400和端口 500是与第一个子系统连通，例如，外壳310和过滤材料320之间的区域。端口 600与第二和/或第三子系统，例如，过滤材料320和分离筛330之间的区域和/或分离筛330和外壳340之间的区域连通。然而，在一些实施方式中，该系统可以包括只有一个端口，或只有两个端口，例如，一个进口和一个出口。在其他实施方式中，该系统可以包括多于三个端口，例如，4、5、6、7、8、9、10个或更多的端口。一般情况下，端口包括至少一个从外界延伸到系统或子系统的内部或反之亦然的孔。该孔具有沿接头处的气密和水密封口。如下文进一步描述的，在一些实施方式中，端口配置为与一个或多个连接器、导管、端口组件、适配器、帽或注射器连接。端口可以设置添加各种液体，例如清洗和冲洗液以及去除此类液体和污水的进入点。优选地，端口可以密封(例如，用阀)。在一些实施方式中，端口可以用夹子手动密封。 在一些实施方式中，端口可以用帽密封。在一些实施方式中，端口包括自密封的阀，例如，提供液体或内容物的单向流动，但不是从系统内室流出的变形的阀。在其他实施方式中，变形的阀提供双向流动。变形的阀可以由现有技术中已知的任何变形的材料，如橡胶、氯丁橡胶、有机硅、聚氨酯等制成。在一些实施方式中，端口包括鲁尔激活阀。在一些实施方式中， 端口位于当竖直支撑系统时，一个或多个端口定位于下方使得液体和污水出口在与重力、 吸力或压力的协助下排出的这样的系统中。本发明的系统300也可以使用其他端口，例如， 排气孔，向系统或子系统等添加材料或气体的端口。系统或子系统上的端口可以配置为直接或间接(即通过适配器)与用来从源头身体吸取脂肪物质使得脂肪组织直接厌氧输送到系统中的注射器或导管关联或连接。同样， 导管或注射器可能连接到用于精制的组织的厌氧移植的端口。因此，在一些实施方式中，系统或子系统上的端口配置为直接或间接与一次性或可重复使用的注射器连接。例如，在一些实施方式中，端口配置为直接或间接与Icc注射器、2cc注射器、5cc注射器、IOcc注射器、20cc注射器、50cc注射器、60cc注射器、IOOcc注射器、250cc注射器等连接。在一些实施方式中，端口配置为直接或间接与具有大直流喷嘴的注射器例如Toomey注射器连接。在一些实施方式中，系统300包括组织进入口组件700，以方便无菌递送到第一室或子系统或从第一室或子系统去除内容物(例如，脂肪组织)(参见例如，图9)。示例性组织进入口组件700在图10和11更详细地显示。在一些实施方式中，组织进入口组件包括大圆柱形内孔开口 710。内孔710的大尺寸方便递送和去除组织进入第一室。可变形的塑料阀720可提供防止材料通过开口 710进入端口主体730的屏障。可变形的塑料阀720可配置为打开并且允许内容物通过孔流入组织进入口的主体730，通过插入其中的注射器尖端通向系统的第一室(未显示)。可变形的塑料阀720在从阀上去除注射器尖端的情况下返回到关闭的默认状态，从而在不使用时封闭端口和阻塞任何内容物(例如，组织或液体) 流出组织进入口的主体。在一些实施方式，当该端口不使用时，组织进入口组件配置为连接帽740以提供额外的密封。示例性帽740的更详细说明在图12中显示。在一些实施方式中，组织进入口组件是从系统300上可拆卸的。在一些实施方式中，组织进入口组件粘上或连接到系统300，例如通过如UV粘合剂等粘合剂。在一些实施中，组织进入口组件可以配置为与适配器或连接器互相连接。在一些实施方式中，适配器或连接器配置为将注射器尖端连接到系统的端口。如上所述，通过举例的方式，适配器如组织端口组件可以是整体的或可从端口拆卸的。在一些实施方式中，适配器或连接器包括鲁尔连接器。在一些实施方式中，适配器或连接器包括包含可变形的阀的移动适配器。在一些实施方式中，系统的端口可以包括，或配置为连接到不只一个流动通道的组件，例如，Y形连接器等上。在一些实施方式中，Y形连接器配置为允许根据需要通过夹紧 Y形连接器的各自的腔或流动通道阻塞一个或两个流动通道。在一些实施方式中，Y形连接器包括位于Y形连接器的公共以及各自的流动通道的接合点的开关，该开关可以调整以使能根据需要同时流过每个各自的流道，一个流道，或者阻塞两个流道。在一些实施方式中，该系统的端口，可以连接到导管或管，以使能液体沟通一个或多个系统或子系统，同时保持封闭的通道。例如，在一些实施方式中，系统300可以选择包括一个废物袋(未显示)、废物容器(未显示)、废导管(未显示)和/或废物箱(未显示)。 在某些实施方式中，所有的子系统都彼此液体沟通。在其他实施方式中，子系统都不彼此液体沟通。在一个特定的实施方式中，一个子系统与其他两个子系统封离，其中两个子系统彼此液体沟通。优选地，考虑到系统为任何尺寸或形状和适应各自不同的体积的，包括子系统的整个系统是柔性的。可选择地，整个系统、子系统和相关部件可以是刚性的。或者，一些子系统和相关部件可以是柔性，而其他子系统及相关部件可以是刚性的。图13说明，包括与其他系统和子系统的液体连接的系统300-1的系统800的示例性实施方式。如图13所示，端口 400-1和500-1可以分别连接到清洗液源810-1和废物袋 820-1。系统300-1可以与类似的系统300-2连接，同时保持封闭的通道。脂肪组织是引入本文以上所述的系统300-1和300-2的第一室，例如，分别通过组织进入/去除端口 600-1 和600-2。系统300-2的脂肪组织用于产生如上所述的干燥或脱水移植物。系统300-1的脂肪组织经加工产生脂肪消化物或包括再生细胞的浓缩的脂肪来源细胞群。端口 500-1或替代端口(未显示)可以连接到溶液源，例如，配置为将清洗液和/或酶无菌引入用于组织冲洗和消化的系统300-1的第二室的810-1。端口 400-1可以连接到废物袋820-1。第一室300-1的脂肪消化物，通过连接端口 600-1和600-2同时保持封闭的系统的导管(未显示)，可以无菌转移到系统300-2的第一室内的干燥或脱水的脂肪组织。本文所公开的系统可以产生与来由如离心和/或传统的重力分离方法已加工的自同一受试者的同一位点的相同量的脂肪组织相比具有显著降低的不良物质，如红细胞、 白细胞和脂质的脂肪组织移植物和植入物。在一些实施方式中，使用本文公开的系统生产的脂肪组织移植物具有与从相同受试者相同位点已切除的并用离心的方法，例如，其中切除的组织是在一个固定角度离心机中旋转制备的等效单位的脂肪组织中存在的相比，至少约议、2乂、3乂、4乂、5乂、6乂、7乂、8乂、9乂、1(^(或在这个范围之间任何数)的较少的白血细胞。例如，在一些实施方式中，在本文所公开的系统中生产的脂肪组织移植物含有低于来自同一个体的等效单位脂肪组织中的白血细胞数量的75 %、80 %、85 %、90 %、95 %或更少，或在此之间的任何％。在一些实施方式中，使用本文公开的系统生产的脂肪组织移植物具有与从相同受试者相同位点已切除的并用离心的方法，例如，其中切除的组织是在一个固定角度离心机中旋转制备的等效单位的脂肪组织中存在的相比，少至少约1X、2X、3X、4X、5X、6X、7X、8X、 9X、IOX(或在这个范围之间任何数)的红细胞。例如，在一些实施方式中，在本文所公开的系统中生产的脂肪组织移植物含有低于来自同一个体的等效单位脂肪组织中的红细胞数量的75 %、少于80 %、少于85 %、少于90 %、少于95 %或更少，或在此之间的任何％。在一些实施方式中，使用本文公开的系统生产的脂肪组织移植物具有与从相同受试者相同位点已切除的并用离心的方法，例如，其中切除的组织是在一个固定角度离心机中旋转制备的等效单位的脂肪组织中存在的相比，少至少约1X、2X、3X、4X、5X、6X、7X、8X、 9X、IOX(或在这个范围之间任何数)的脂质。例如，在一些实施方式中，在本文所公开的系统中生产的脂肪组织移植物含有低于来自同一个体的等效单位脂肪组织中的脂质数量的 75 %、少于80 %、少于85 %、少于90 %、少于95 %或更少，或在此之间的任何％。除了生产具有较少的不良成分的脂肪组织移植物的能力外，由本文公开的系统产生的移植物还可以展示出促进与脂肪来源再生细胞的补充和/或植入物的保留的水合特性。具体来说，如本文所述制备的脂肪组织移植物的水合状态比分离自同一受试者同一位点并且单独使用重量分离法制备的等效单位脂肪组织移植物小的水合。技术人员应当理解，然而，在一些实施方式中，可以设计具有不是由两个不同的外壳密封在一起组成的而是一个无缝袋的柔性袋的系统。过滤器可密封，连接或粘贴在无缝袋内，在袋的内部限定第一个和第二个子系统或室。图14显示生产的补充、增强或强化的脂肪移植物或脂肪组织植入物的示例性的装置100。图14A显示了包括至少两个室20，30的罐10的透视图。室20可用于从未加工的组织生产脂肪消化物。第二室30可用于接收和存储未加工的脂肪组织以用作在产生补充的脂肪组织移植物中的脂肪移植物。在图14中显示的实施方式中，每个室20，30具有配置为接收未加工的脂肪组织的组织进入端口 40，50。然而，应当理解在一些实施方式中，罐10仅具有一个组织进入端口。 在一些实施方式中，组织进入端口 40，50配置为可操作连接到插管(未显示)，使得在抽脂术中脂肪来源细胞直接进入到室20，30。例如，组织进入端口 40，50可以经由管子与插管(未显示)连接限定组织排放管。在一些实施方式中，导管可以是整体的、一次性的抽脂手术插管，管子可以是柔性管子。插管可以标注插入到受试者中从受试者中去除脂肪组织的大小。系统中所使用的管子可以能够承受与抽吸辅助抽脂相关的负压以减少倒塌的可能性。抽吸装置(未显示)，如注射器或电真空，除其他方面外，可以与罐10连接，并且配置为提供足够的负压以从受试者中吸出组织。罐10的室20，30可以物理上相互分离，使得室20 (例如，含有脂肪消化物的室) 的内容物流动到其他室30(例如，含脂肪移植物的室)受到控制。在一些实施方式中，室是在液体连接中，例如，通过可以封离的端口以确保只在需要的时候内容物从一个室流动到其他室。例如，在一些实施方式中，内容物通过导管从一个室20流动到另一个室30发生。 可选的导管可以包括一个或多个夹子(未显示)，以控制系统的各个部件之间的物质流动。 夹子可以用来通过有效密封系统的不同区域而维持系统无菌。可选择地，可选的导管可以包括一个或多个控制通过系统的物质流动的阀。该阀可以为机电挤压阀、气动阀、液压阀或机械阀。在一些实施方式中，阀可以由可以与杠杆连接的控制系统激活或驱动。杠杆可以手动操纵和/或自动操纵，例如，通过加工装置在预定的激活条件下激活阀。在某些自动化的实施方式中，阀的激活可以是部分自动化的以及部分受制于用户的喜好，使得这样的过程可以是优化的。在其他的实施方式中，某些阀可手动地激活以及其他阀通过加工装置自动地激活。阀也可与一个或多个泵，如蠕动泵或容积泵(未显示)一起使用。导管和/或阀也可以包括能够在流过该系统的各种液体组合物和液体水平之中区分的传感器，如光学传感器、超声波传感器、压力传感器等。在一些实施方式中，一个或两个室可以包含一个或多个用于去除废物(例如生理盐水、成熟的脂肪细胞、红细胞等)，添加成分(例如清洗液、酶、细胞等)或用于空气进入或放出的端口 60。在一些实施方式中，室30可以包括端口或配置为无菌去除补充的脂肪移植物的出口 70。出口 70结构可以在适当的条件下传递来自室30的组合物(例如，补充的脂肪移植)到受试者。例如，在一些实施方式中，注射器可以用来取回组合物，并且出口 70 在不影响系统或组合物的无菌的情况下能够容纳注射器针头。在另外的实施方式中，出口可以与配置为给予但不取回组合物的装置连接，如施加正压给予组合物的导管，以通过导管转移组合物。因此，出口 70可以配置为允许室30包含的组合物传递到导管(未显示)。 在其他实施方式中，出口 70可以包含或以封闭的系统方式连接到给予组合物的装置，如注射器的针头或通过施加正压给予组合物的导管。在一些实施方式中，罐10的一个或两个室20，30可配置为无菌接收溶液和试剂， 如清洗液(生理盐水等)、分解剂或其他试剂或添加剂。该装置可以配置为以无菌的方式保持他们的内容物的容器，例如，可折叠的袋，如用在临床环境中的IV袋。这些容器可以具有与一个或两个室20，30相连接的导管。例如，可以将器件配置为保持冲洗或清洗剂(如 PBS,PLASMALYTE 、NORMOSO 或乳酸林格氏液)可以无菌传递到室20，30这样的容器。在一些实施方式中，可以将装置100配置为保持分解剂与罐10连接以递送分解剂到室20内部的这样的容器。通过任何现有技术公认的方式，包括施加到容器的外面的重力流压力，或放置一个正排量泵到导管上，溶液和试剂可以递送到罐的室20，30的内部。在自动化实施方式中，加工装置在由用户最初输入的信息的基础上计算各种参数，例如，盐水的量和时间，或用于清洗所需的循环的时间和数量，以及分解剂的浓度或量和分解所需的时间
26(例如，正在加工的组织的量)。可选择地，数量、时间等可以由用户手动操纵。在一些实施方式中，装置配置为搅动或摇动罐的一个或两个室。例如，在一些实施方式中，装置包括在分解过程中配置为搅动室20的内容物的轨道运动平台80。罐10的部件可以由与生物液体或组织非反应活性的以及与在加工生物液体和组织中使用的试剂非反应活性的材料制成。此外，制成各种部件的材料应能承受灭菌，如通过高压灭菌和辐射包括但不限于或Y射线辐射。在一些实施方式中，罐是由一次性材料制成。在一些实施方式中，罐由非一次性材料制成，其可以不只一次使用。通过举例的方式， 管子和导管柄可以由任何合适的材料，如聚乙烯制成。导管可以是由不锈钢制成。例如， 在一些实施方式中，罐是由丙烯酸聚碳酸酯、ABS、乙烯-醋酸乙烯，苯乙烯-丁二烯共聚物 (SBC)制成。优选地，该装置的液体通道是无发热原的，即适合血液用途，没有疾病传输危险。在一些实施方式中，罐10由使用户可以直观地判断存在室中的组织的近似量的材料制成。在一些实施方式中，该装置包括一个或多个温度控制装置(未显示)将其放置以调整系统的一个或多个室20，30内所含的物质的温度。温度控制装置可以是加热器，冷却器或两者，即，它可以能在加热器和冷却器之间切换。温度装置可以调整通过装置100的任何物质的温度，包括组织、分解剂、再悬浮剂、冲洗剂、清洗剂或添加剂。例如，加热脂肪组织有利于分解而冷却再生细胞输出有望保持生活力。另外，如果需要预热试剂以获得最佳的组织加工，温度装置的作用将是保持预先确定的温度，而不是增加或减少的温度。在一些实施方式中，装置100可以得以自动化。在一些实施方式中，装置100可以包括加工装置(例如，微处理器或个人计算机)和基于用户输入提供系统控制逻辑以运行以及自动化一个或多个加工步骤得相关的软件程序。在某些实施方式中，通过存在在加工装置中软件，系统的一个或多个方面可以是用户可编程的。加工装置可以具有一个或多个在只读存储器(ROM)中的预编程的软件程序。例如，加工装置中可以为加工血液定做的具有预编程的软件，加工脂肪组织获得少量的再生细胞的另一程序和加工脂肪组织获得大量的再生细胞的另一个程序。加工装置也可以具有预编程的软件，其根据用户输入的相关信息，如所需的再生细胞的数量以及各种后加工操作等，给用户提供适当的参数以优化加工。在一些实施方式中，该软件可以使步骤自动化如通过控制系统的泵和阀，控制液体和组织沿特定导管通道进入和外出；控制正确的顺序和/或激活方向；用压力传感器检测堵塞；混合机制，测量利用体积机制将沿着一个特定通道移动的组织和/或液体的量；利用加热控制装置保持各个组合物的温度；用时间和软件机制整合分解过程。下面的例子用于展示这项技术可以得以应用的特定的状态和情况，并不是为了限制本发明的范围和公开的内容中所包含的权利要求。许多出版物和专利数已在上文中引用。每个出版物和专利以引用的方式全部并入本文中。下面的示例比较使用本文公开的系统获得的脂肪组织移植物与由重力分离和离心生产的等效单位的脂肪组织移植物的纯度和水合。实施例1从诊所办公室收集从10个人类受试者(N= 10)，通过吸脂(N = 5)、激光(N = 3) 或抽脂(Body-jet)收获(N = 2)的方法吸出的脂肪组织。所述吸出的组织样本被随机分为四组⑴对照；⑵重力分离；⑶离心；⑷纯移植* (PUREGRAFT )组织移植物制品。直接对对照样品进行了分析，没有进一步处理。在重力分离组中的样品在60mL注射器放置 10分钟。丢弃样品的液体部分，对剩余的脂肪组织进行分析。对于离心组，样品装入放置在 IEC固定角度转子离心机内的加帽的IOml注射器中以3000rpm(约1200g)离心3分钟。在脂肪组织的顶部的游离的脂质通过抽吸被去除，离心后下层物质(infranatant)排出，对剩余的移植物组织进行分析。PUREGRAFT 组样品在本文上述的系统300(PUreGraftTM)中清洗。简单地说，将组织引入如上所述的系统300的第一室。该组织用2X150ml乳酸林格氏液清洗。多余的液体和脂质被允许从系统的第二室排出。干燥的组织通过组织进入端口移出并用于结果分析。来自四组中的每个组的移植物组织随后于15ml锥形管中一式三份，在400g下离心5分钟，以将移植物分成四个成分游离脂质、脂肪组织、液体和包含红细胞和白细胞的细胞片状沉淀物(pellet)。记录并且按照总移植物组织的百分比计算脂质层和液体层的量。每个样品的脂质层和液体层的量得以测量，并用于计算不同制品的液体含量和脂质含量。如图15所示，使用本文描述的方法和系统(PureGraft)制备的脂肪组织，当与未加工的脂肪组织(对照)或由传统的重力法(重力)加工的脂肪组织相比时，具有显著降低的含水量。具体地，使用本发明的系统制备的组织的平均液体含量为9. 3士0.9%。这显著(P <0. 001)低于重力分离制备的组织1 士 1.8%)。如图16所示，使用本文所述的方法和系统(PureGraft)制备的脂肪组织具有比未加工的脂肪组织(对照)、由传统的重力方法制备的脂肪组织(重力)和由传统的离心法制备的脂肪组织(离心)显著降低的脂质的百分含量(V/V)。具体来说，与对照(未处理)组织(11.5 士 1.5%，P<0. 001)、重力分离 (8. 9士 1.3% P <0.001)以及离心(9. 6士 1.8%，p< 0.001)相比，使用本发明的系统制备的样品中残留的游离脂质的水平平均为0. 8士0. 3%游离脂质。需要注意的是，在开始制备移植物的过程中观察到的游离脂质去除之后，测量在由离心制备的移植物中观察到的游离脂质含量(移植物量的平均9.6%)。也就是说，将移植物分离成其多个组成部分后明显的游离脂质是新释放的。这表明，离心制备的移植材料包含受损的脂肪细胞，所述脂肪细胞在将第二个离心应用于将移植物分离成它的四个组成部分的过程中释放它们的脂质。将相同的第二个离心步骤应用到本发明的系统制备的移植物释放明显较少的游离脂质(与9. 6% 相比0.8%的量)的事实表明在本发明的系统中制备的移植物包含较少的受损的脂肪细胞。为评估移植物的纯度，来自每个组织移植物的样品从管中移出，通过用库尔特计数器(Coulter counter)计数每克组织的红细胞和白细胞来分析血液内容物。所得数据与对照组标准化，表示为每克未加工的移植物组织的RBC或WBC含量的相对百分比。所有数据均表示为平均士标准误差均值(SEM)。研究者t检验用来比较每个移植物的制备方法之间的差异。如图17所示的数据表明，与未加工的脂肪组织(对照)、由传统的重力制备方法制备的脂肪组织(重力)和由传统的离心法(离心)制备的脂肪组织相比，使用本文所公开的方法和系统(PureGraft)制备的脂肪组织具有每克组织显著少的红血细胞(红细胞(RBC))。因此，使用本发明的系统的制备从移植物去除98. 1 士0. 01%的红细胞，而在重力分离和离心分别去除47. 8 士 7. 0%和53. 2 士 5. 4%的红细胞。同样，通过重力白细胞含量减少了 58. 7 士 13. 7 %，通过离心白细胞含量减少了 69. 7 士 5. 2%以及使用本发明的系统白细胞含量减少了 96. 80士0.01%。
水、脂质/成熟的脂肪细胞和血细胞的存在能导致移植体积随着时间的损失。在图15-图17中显示的数据表明本文所述的系统对干燥或脱水的脂肪组织移植物或植入物的制备是有用的。下面的实施例描述通过本文所述的方法生产脂肪组织植入物或以脂肪来源再生细胞补充的移植物。实施例2需要或想要乳房植入物的患者经鉴定或选择。从患者中移出单位脂肪组织，并且将单位脂肪组织提供给脂肪来源干细胞加工单元，优选地，该单元保持封闭的、无菌液体/ 组织通道。例如，插管(cannula)连接到脂肪来源干细胞加工单元的组织收集容器或室(例如，柔性袋)，同时保持无菌的液体/组织通道。抽脂术通过已建立的技术进行，从受试者中移出脂肪组织，并且被移出的未加工的脂肪组织被引入到组织收集容器/室。脂肪组织的第一部分用PBS冲洗，直到基本上所有的生理盐水、红细胞、成熟的脂肪细胞得以去除(例如，连续清洗直到该组织不再是看得见的红色)，以及将清洗污水-废物，例如生理盐水、红血细胞、成熟的脂肪细胞通过连接到组织收集容器或室同时保持封闭的无菌液体/组织通道的端口而无菌去除。在一些实施方式中，废物端口由管道(conduit)连接到废物收集容器，所述废物收集容器可配置为连接到真空源，管道(conduit)和/或废物收集容器可以包含一个或多个阀。然后冲洗后的脂肪组织的第一部分可以存储在组织收集容器/室或转移到进一步加工的储存容器或室。如上所述，在第二室中单位脂肪组织的第二部分用磷酸缓冲液(PBQ冲洗直到所述组织不再是看得见的红色。可选择地，如上所述由抽脂术获得的脂肪组织经冲洗和清洗，然后分割成第一和第二部分。第一部分被保留作为用于添加脂肪来源再生细胞的基质使用，并且第二部分是用来产生如下的脂肪来源再生细胞的悬浮液。包括胶原蛋白酶的酶溶液无菌添加到所述组织的第二部分，同时保持封闭的无菌液体/组织通道。所述组织在 37°C经振荡培养约1小时。允许混合物沉淀，以致脂肪消化物/脂肪来源再生细胞溶液与未消化的脂肪组织和脂质物理分离。产生的脂肪消化物从脂肪组织的第二部分通过管道 (conduit)移出，同时保持封闭的、无菌的液体/组织通道。然后，分离的脂肪消化物通过管道(conduit)被泵送，所述管道通过封闭的通路与第一室相连。所述脂肪消化物在第一室的未加工的脂肪组织的第一部分之上或穿过所述第一部分被泵送。所述脂肪消化物的非细胞成分流过未加工的脂肪组织的第一部分进入废物容器中，同时保持封闭的无菌液体/组织通道。利用重力或真空源脂肪消化物可以通过未加工的脂肪组织的第一部分得到过滤。在一些实施方式中，所述脂肪消化物可以在未加工的脂肪组织的第一部分的上面得以分层，所述脂肪消化物中存在的脂肪来源再生细胞利用离心可以被迫进入未加工的脂肪组织的第一部分的基质中(例如，在100、200、300、400、 500、600、700或800g下旋转桶离心)。所述脂肪消化物的脂肪来源再生细胞由结缔组织片段结合，产生以脂肪来源再生细胞补充的脂肪移植物。然后补充或强化的脂肪移植物可以以或不以具有人类乳房的形状的可吸收的外壳或胶囊材料提供给受试者。实施例3制备如实施例1所述的以脂肪来源再生细胞补充的脂肪移植物。以脂肪来源再生细胞补充的脂肪移植物给予受试者的面部、臀部、胸部或小腿(calves)，或纠正任何软组织缺陷。实施例4需要或想要脂肪移植物的患者经鉴定或选择。从如本文所述的或本领域已知的患者去除单位脂肪组织。为了优化移植物，系统300经定向并且连接到系统的废物袋(未显示)放在地板上。脂肪组织通过组织进入端口 600引入系统300，所述组织进入端口 600 提供外部环境和第一个子系统内部之间的传递。可以使用Toomey或其他本领域工人的注射器通过该端口注入脂源细胞(lipoaspirate)。这可以重复直到已经添加的组织所需的量-注意不要超过第一个子系统的最大量。一旦脂源细胞已添加，排放管上的弹簧节流夹 (未显示)关闭。通过打开轮固定夹(wheel clamp)(未显示)经由端口或经由无菌IV管将清洗和/或冲洗溶液如乳酸林格溶液或生理盐水引入系统300。添加的清洗或冲洗溶液的量可以变化。通常，将足够的清洗液引入系统以致将第一个子系统中的脂源细胞的大多数或其他组织淹没。添加150ml清洗液，如乳酸林格溶液。接着，关闭所述轮固定夹，并且在短的时间内如15秒手动摇动。摇动可以以倒置、旋转、振动等形式，该系统由外部工具， 如振动平台或定轨振荡器等摇动。所述组织经过彻底清洗后(如通过观察或预确定的时间间隔确定)，打开排水夹管阀(未显示)或端口，在重力下，废水通过过滤材料320和分离筛330。所述废水允许排出一段时间，例如，3分钟。所述循环可以重复多次。该循环可以重复共四次的清洗。在最后的清洗循环后，废物应允许排出5至10分钟。一般来说，废液的最大排出发生在排水约10分钟后。因此，基本上没有血、肿胀液和游离脂质的更干燥的清洗后的脂肪移植物得以产生，没有对机械设备的要求在封闭的无菌系统中易于操作。此夕卜，这个过程可以在像20分钟这样少的时间内完成，并且外科医生可以通过改变时间的长短控制所需的水合水平，在最后一步该系统允许排放。如果需要富集通过使用系统300获得的具有脂肪来源再生细胞(ADRCs)的脂肪移植物，通过本文所述的或现有技术中已知的任何方法(如使用CELUTI 系统)获得的 ADRC，可以通过靠近乳酸钠林格袋的端口添加，并且用乳酸钠林格溶液或其他合适的溶液驱赶5秒或者5秒以上。如本文所述，然后所述系统可以摇动，例如15秒，然后将ADRC增强的脂肪移植物根据需要可以注入或放回至患者中。等同本领域的技术人员应当意识到或者能够确定使用仅仅常规实验，许多本文所述的发明的具体实施方式
的等同。这样的等同意图为由下列权利要求包括。
30
权利要求
1.用于制备用于脂肪组织移植物的组织的装置，其包含具有第一室和第二室的柔性可折叠袋，所述第一室和第二室由包括小孔的过滤器来限定；位于所述第二室内的分离器；连接到柔性可折叠袋的进口，其中，所述进口配置为允许将脂肪组织无菌引入所述第一室；以及连接到柔性可折叠袋的出口，其中，所述出口配置为从所述第二室中无菌去除液体和细胞。
2.根据权利要求1所述的装置，其中，所述分离器为在所述第二室中自由浮动的多孔结构。
3.根据权利要求1所述的装置，其中，所述分离器为在所述第二室中限定第三室的多孔结构。
4.根据权利要求2-3中任一项所述的装置，其中，所述袋包含由双热封口连接的第一外壳和第二外壳。
5.根据权利要求4中任一项所述的装置，其中，所述过滤器由双热封口连接到第一外壳和第二外壳。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的装置，其中，所述分离器包含脂质芯吸材料。
7.根据权利要求6所述的装置，其中，所述脂质芯吸材料为聚酯网筛。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的装置，其中，所述分离器包含大于所述过滤器的小孔的多个小孔。
9.根据权利要求8所述的装置，其中，所述第二过滤器的孔径是所述过滤器的孔径的约5、6、7、8、9或10倍或者大于所述过滤器孔径的约5、6、7、8、9或10倍。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的装置，其中，所述过滤器的孔径大于或等于约 30 μ m0
11.根据权利要求1-10中任一项所述的装置，其中，所述过滤器的孔径为在约30μ m至约200 μ m之间。
12.根据权利要求1-11中任一项所述的装置，其中，所述分离器包含小孔，并且其中所述分离器的孔径为在约300 μ m至2000 μ m之间。
13.根据权利要求1-11中任一项所述的装置，其中，所述进口配置为与适配器可拆连接，所述适配器配置为与注射筒的尖端可拆连接。
14.根据权利要求13所述的装置，其中，所述进口配置为允许物质进入所述端口，但不允许物质从所述端口排出。
15.根据权利要求14所述的装置，其中，所述进口包括可变形的塑料阀。
16.根据权利要求13所述的装置，其中，所述注射筒是60mL导管注射筒。
17.根据权利要求1-16中任一项所述的装置，其中，所述进口配置为与插管连接，同时保持无菌液体/组织通道。
18.根据权利要求1-17中任一项所述的装置，进一步包含第二装置，所述第二装置包含与所述装置连接的脂肪来源再生细胞的分离装置。
19.根据权利要求18所述的装置，其中，所述第二装置包含权利要求1-17中任一项所述的装置。
20.根据权利要求18所述的装置，其中，所述第二装置通过管道与权利要求1-17所述的装置连接，所述管道配置为将自所述第二装置分离的脂肪来源再生细胞转移到权利要求 1-17所述的装置的第一室中。
21.根据权利要求20所述的装置，其中，所述管道包含Y形连接。
22.脂肪组织移植物的制造方法，其包括(a)获得未加工的脂肪组织的第一部分；(b)将所述未加工的脂肪组织的第一部分引入权利要求1-17中任一项所述的第一装置的第一室中；(c)通过添加生理清洗溶液到第一室冲洗所述未加工的脂肪组织的第一部分；以及(d)从所述第一装置的第二室去除液体从而干燥脂肪组织，其中所述液体选自由水、生理清洗液、血液和游离脂质或它们的任意组合所组成的组中。
23.根据权利要求22所述的方法，其中，所述生理溶液选自由乳酸林格氏液、哈特曼氏溶液、生理盐水和PLASMALYTE 溶液所组成的组中。
24.根据权利要求22所述的方法，其中，所述(c)的干燥的脂肪组织被脱水到小于引入步骤前所述未加工的脂肪组织的第一部分的液体含量的约1/2、1/3或1/4倍。
25.根据权利要求22所述的方法，其中，所述(c)的干燥的脂肪组织被脱水到小于引入步骤前所述未加工的脂肪组织的第一部分的液体含量的约1/3。
26.根据权利要求22-25中任一项所述的方法，其进一步包括从脂肪组织的第二部分分离脂肪来源再生细胞群以及将(d)的脱水的脂肪组织与分离的脂肪来源再生细胞群在允许所述分离的脂肪来源再生细胞群渗入所述(d)的脱水的脂肪组织中的条件下相接触。
27.根据权利要求沈所述的方法，其中，所述分离的脂肪来源再生细胞群在接触所述 (c)的脱水的脂肪组织之前没有经过离心。
28.根据权利要求沈-27中任一项所述的方法，其中，所述分离的脂肪来源再生细胞群在权利要求1-17中任一项所述的第二装置中，通过与带有胶原蛋白酶的所述第二装置的第一室中存在的脂肪组织在释放所述细胞的条件下接触得以制备。
29.根据权利要求观所述的方法，其中，所述接触步骤在与所述第一装置连接的权利要求1-17中任一项所述的第二装置中进行。
全文摘要
本文公开了用于将来自细胞悬浮液的细胞浓缩到未加工的组织(例如脂肪组织)中的方法和系统。本文还公开了优化组织和细胞富集的移植物的水合的系统。
文档编号A61F2/02GK102458302SQ201080029915
公开日2012年5月16日 申请日期2010年4月30日 优先权日2009年5月1日
发明者卢卡斯·福尔纳斯, 阿尔文·彼得森 申请人:再生医疗技术公司