专利名称：紫花地丁石油醚提取物及其药用用途的制作方法
技术领域：
本发明属中药领域，涉及中药紫花地丁石油醚提取物及其在制备治疗急性肺损伤药物中的用途。
背景技术：
急性肺损伤(acute lung injury, AU)是由心源性以外的各种肺内外致病因素导致的急性、进行性加重的呼吸困难、难治性低氧血症和肺水肿；临床表现为一种以肺血管内皮细胞及肺泡上皮细胞损伤为病理特征的常见非特异性免疫反应疾病，即全身炎症导致系统性功能障碍综合征在肺部的表现(章卓，万敬员，罗福玲.等.中草药，2008，39: 1196-1199)。本领域将诱发ALI的因素分为细菌性的和非细菌性。严重感染、败血症、创伤、中毒、大量输血、体外循环和弥漫性血管内凝血(DIC)等均可导致ALI的发生，其中以 严重感染最为常见，研究报道，严重阶段的ALI病死率高达40%(McIntyre RC, Pulido EJ,Bensard DD, et al. Crit Care Med, 2000，28: 3314-3331)。内毒素(LPS)是经典的诱发ALI模型的细菌性诱因之一，LPS进入体内后很容易被免疫防御系统识别，通过传递炎症反应的一些细胞介质引起肺部组织损伤，具体表现在单个核细胞等炎性细胞的浸润、多种细胞因子及黏附分子的过度表达等引发的肺毛细血管通透性增高和肺水肿。通过观察以上指标的变化可基本确认药物对急性肺损伤的治疗作用。紫花地丁为堇菜科植物紫花地丁 Viola yedoensis Makino的干燥全草，为常用中药(中国药典委员会.中华人民共和国药典，2005年版一部.北京化学工业出版社，2005)，其性寒，味微苦，具有清热解毒、凉血消肿等功效，用于治疗痈肿疔疮、乳痈肠痈、丹毒肿痛、毒蛇咬伤等症状。现代药理学研究表明，紫花地丁具有抗炎、抑菌、抗HIV病毒和调节免疫等作用。有文献报道紫花地丁水煎剂和乙醇提取物的乙酸乙酯部位对二甲苯诱发的小鼠耳肿胀有明显的抑制作用，对大肠杆菌、沙门氏菌、金色葡萄球菌、表皮葡萄球菌也均有较强的抑制作用(陈胡兰，汤沛然，陈兴.成都中医药大学学报，2008，31 (2): 52-53)。有研究表明，经体内外试验，紫花地丁水煎剂可下调实验小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能及分泌TNF-a的作用，表明紫花地丁水煎剂可通过调控小鼠巨噬细胞活性进而下调小鼠的免疫功能(李海涛，赵红，顾定伟，等.山东中医杂志，2004，23(10) : 617-619;李海涛，杨琳，章广玲，等.华北煤炭医学院学报，2004，6(5) : 553-554)。但上述研究均未涉及紫花地丁石油醚提取物对急性肺损伤的治疗作用。
发明内容
本发明的目的是提供中药紫花地丁石油醚提取物及其在制备治疗急性肺损伤药物中的用途。本发明所述的紫花地丁石油醚提取物来源于中药材是紫花地丁。紫花地丁为堇菜科植物紫花地丁 Viola yedoensis Makino的干燥全草,为常用中药(中国药典委员会.中华人民共和国药典，2005年版一部.北京化学工业出版社，2005)，其性寒，味微苦，具
有清热解毒、凉血消肿等功效。本发明的紫花地丁石油醚提取物经成分测定，其包括成分二氢猕猴桃内酯，3，7，11，15-四甲基-2-十六碳烯-I-醇，6，10，14-三甲基-2-十五烷酮，正十六碳酸，9-十六碳烯酸乙酯，十六酸乙酯，植醇，9Z，12Z, 15Z-十八碳三烯酸，9，12-十八碳二烯酸乙酯，9Z，12Z, 15Z-十八碳三烯酸乙酯和十八酸乙酯。
本发明的紫花地丁石油醚提取物通过下述方法制备，
干燥的紫花地丁药材(1000 g)，粉碎，加95%乙醇(2500 ml)加热回流提取(80。C)，3次，每次1-2 h，合并95%乙醇提取液，于80 ° C减压回收乙醇至干，加500 ml水悬浮溶解，用石油醚￠0-90 ° C)，萃取3-5次，合并石油醚萃取液，浓缩除去溶剂得石油醚提取物(30.85 g),得率 3. 07%。本发明的紫花地丁石油醚提取物进行了动物试验，分别以不同剂量2 mg/kg，4mg/kg ,8 mg/kg给药,结果证实,所述的紫花地丁石油醚提取物具有较强的治疗实验性急性肺损伤作用。I)紫花地丁石油醚提取物用于治疗急性肺损伤试验
(I)实验小鼠肺灌洗液单个核细胞计数
肺灌洗液离心，200耵生理盐水(NS)收集下层细胞沉积，打匀。0.05%龙胆紫染液稀释后，光学显微镜下计数单个核细胞数。结果显示，与模型组相比，不同剂量的紫花地丁石油醚提取物均可显著降低小鼠单个核细胞数的增多(P〈0. 001)。(2)实验小鼠肺灌洗液红细胞计数
肺灌洗液离心，200 W NS收集下层细胞沉积，打匀。红细胞计数液稀释后，光学显微镜下计数红细胞数。结果显示，与模型组相比，不同剂量的紫花地丁石油醚提取物均可显著降低小鼠红细胞数的增多(P〈0.01)。(3)实验小鼠肺湿重/干重比测定
右肺下叶置于滤纸，待滤纸吸干表面水分后称重，以此为湿重；之后放置在37 °C培养箱烘干(>72 h)，直到两次称重，重量不再变化，称得干重；计算肺组织湿重/干重比(即W/D)。结果显示，与模型组相比，不同剂量的紫花地丁石油醚提取物均可显著抑制小鼠肺湿重/干重比值的增高(P〈0. 01)。4)实验小鼠肺灌洗液总蛋白测定
考马斯亮蓝法检测蛋白含量。牛血清白蛋白作为标准蛋白溶液，制作标准曲线。小鼠肺灌洗液离心，取上清，用生理盐水稀释。考马斯染液中加入待测样品后，于自动酶标仪(Labsystems Dragon) 540 nm处读取吸收度(A)值,用标准曲线计算蛋白水平。结果显示，与模型组相比，不同剂量的紫花地丁石油醚提取物均可显著抑制小鼠肺肺灌洗液总蛋白水平的升高(P〈0. 001)。5)实验小鼠肺灌洗液MPO测定
小鼠肺灌洗液离心，取上清，按MPO试剂盒说明书进行检测。结果显示，与模型组相比，不同剂量紫花地丁石油醚提取物均可显著降低小鼠肺灌洗液MPO的增高(P〈0. 01)。6)实验小鼠肺灌洗液中TNF- a、IL-I ^和IL-6水平的测定
小鼠肺灌洗液离心，取上清，按细胞因子试剂盒说明书进行检测。结果显示，与模型组相比，8 mg/kg和4 mg/kg紫花地丁石油醚提取物均可显著降低小鼠肺灌洗液TNF-a、IL-I ^和IL-6水平的升高(P〈0. 01),2 mg/kg紫花地丁石油醚对小鼠肺灌洗液IL-I ^也有明显抑制作用(P〈0. 01)。本发明实验结果显示，所述的紫花地丁石油醚提取物对急性肺损伤有治疗作用，所述的紫花地丁石油醚提取物可显著降低肺组织水肿(湿重/干重比值)、明显抑制肺灌洗液中蛋白渗出、减少肺白细胞和红细胞聚集数量、降低髓过氧化物酶(MPO)活性、抑制肿瘤坏死因子(TNF-a)、白介素-10 (IL-IP)和白介素-6(IL_6)水平升高。，所述的紫花地丁石油醚提取物可能通过其抗炎机制，降低肺毛细血管通透性、减轻肺水肿和渗出、抑制肺部局部炎症反应，减少多种刺激因素引发的急性肺损伤，进一步可制成防治重症非典型性肺炎药物，防治细菌性肺炎药物或防治非细菌性肺炎的药物。表I为紫花地丁石油醚提取物对小鼠急性肺损伤模型各指标测定结果(X土SD)。表I
权利要求
1.紫花地丁石油醚提取物，其特征在于，其包括成分二氢猕猴桃内酯，3，7，11，15-四甲基-2-十六碳烯-I-醇,6，10, 14-三甲基-2-十五烧酮，正十六碳酸，9-十六碳烯酸乙酯，十六酸乙酯，植醇，9Z，12Z, 15Z-十八碳三烯酸，9，12-十八碳二烯酸乙酯，9Z, 12Z, 15Z-十八碳三烯酸乙酯和十八酸乙酯；通过下述方法制备， 干燥的紫花地丁药材，粉碎，加95%乙醇加热回流提取，80 ° C，3次，每次1-2 h，合并95%乙醇提取液，于80 ° C减压回收乙醇至干，加水悬浮溶解，用石油醚，60-90 ° C，萃取3-5次，合并石油醚萃取液，浓缩除去溶剂得石油醚提取物。
2.权利要求I所述的紫花地丁石油醚提取物在制备治疗急性肺损伤药物中的用途。
3.权利要求I所述的紫花地丁石油醚提取物在制备防治重症非典型性肺炎药物中的用途。
4.权利要求I所述的紫花地丁石油醚提取物在制备防治细菌性肺炎药物中的用途。
5.权利要求I所述的紫花地丁石油醚提取物在制备防治非细菌性肺炎药物中的用途。
全文摘要
本发明属中药领域，具体涉及紫花地丁石油醚提取物及其在制备防治急性肺损伤药物中的用途。本发明用石油醚分离提取紫花地丁，平均产物收率3.07%。所述紫花地丁石油醚提取物经整体实验证实，对小鼠急性肺损伤有明显的治疗作用。紫花地丁石油醚提取物可能通过其抗炎机制，降低肺的毛细血管通透性、减轻肺水肿、抑制肺部局部炎症反应，从而减少急性肺损伤。可用于制备防治细菌感染和非细菌感染等多种刺激因素引发的急性肺损伤药物。
文档编号A61P31/14GK102793804SQ20111014050
公开日2012年11月28日 申请日期2011年5月27日 优先权日2011年5月27日
发明者力弘, 程志红, 陈道峰, 谢俊云, 杜冬生, 章蕴毅 申请人:复旦大学