专利名称：一种马桑内酯类物质的提纯方法
技术领域：
本发明属于天然产物分离领域，尤其是涉及一种应用超临界萃取法提纯马桑内酯类物质的方法。
背景技术：
马桑Cbriaria sinica Maxim.为马桑科马桑属植物，是多年生落叶有毒的小乔木或灌木。其自然资源丰富，在我国分布广泛。马桑根部药用，用于治风湿麻木、风火牙痛、痰饮、跌打损伤、烫火伤、急性结膜炎等。马桑全株有毒，在民间有用于土农药的记载，马桑提取物对多种咀嚼式害虫具有明显的拒食和胃毒作用，可用作植物农药。马桑内酯类化合物是马桑的主要活性成分，对中枢神经系统具有显著的药理作用。周莉君等研究表明马桑提取物对真菌抑制效果显著高于细菌，且醇提物抑菌效果优于水提物。张雁冰等通过对羟基马桑毒素和马桑亭的杀虫活性实验，表明羟基马桑毒素对小菜蛾具有明显的拒食作用。此外，马桑内酯类化合物还可用于点燃癫痫模型，具有安全性好、对脑无直接机械损伤等优点。现有马桑内酯类化合物的提取方法有醇提，石油醚萃取除杂，大孔树脂吸附，柱色谱及重结晶等方法得到。该方法能耗大，步骤繁多，制备量少。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种马桑内酯类物质的提纯方法，该方法操作简单，制备量大。本发明是通过以下技术方案实现的
一种马桑内酯类物质的提纯方法，其特征在于包含以下步骤
1)超临界萃取将马桑药材粉碎，过20目筛，置于萃取釜中，采用超临界CO2萃取，通入甲醇作为夹带剂参与萃取，收集萃取物；
2)石油醚脱脂向上述萃取物中加入3飞倍量石油醚回流提取2、次，离心分离固液， 得脱脂物；
3)柱层析将上述脱脂物进行硅胶柱层析，用氯仿-甲醇洗脱，高效液相监测，收集相应流分，浓缩干燥得到马桑内酯类物质。所述的马桑内酯类物质包括马桑毒素、羟基马桑毒素、马桑亭和马桑宁等物质。所述步骤1)中的萃取参数为萃取温度为^_40°C，萃取压力为20_30MPa，CO2流量为15-25L/h，萃取时间为2-4h，分离釜I温度为20_30°C，压力为6_12MPa，分离釜II温度为 8-15°C，压力为 4-8MPa。所述步骤3)中的硅胶粒度为10(Γ300目，洗脱剂氯仿-甲醇洗脱比例2 15 :5。本发明的积极效果是
(1)超临界萃取，萃取过程耗能低，萃取剂(X)2来源丰富、清洁无污染；
(2)本发明采用溶剂萃取法精制马桑内酯类物质，该法能快速的去处杂质，得到纯度高
3的马桑内酯类物质，工艺简单，成本低，效率高。下面将结合具体实施方式
进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
具体实施例方式下述实施例中硅胶柱层析采用高效液相监测接收洗脱液，具体方法如下(参照文献“马桑籽中马桑内酯类化合物的提取分离及其活性”)
高效液相色谱条件
色谱柱0DS 柱 Q50mmX4· 6mmX5Mm)；
流动相15%乙腈；
流速:lml/min ；
检测波长215nm ；
柱温室温。实施例1
取马桑干燥药材1kg，粉碎过20目筛，加入至萃取釜中，采用超临界CO2萃取，通入 200ml甲醇作为夹带剂参与萃取，设定萃取参数为萃取温度40°C，萃取压力20MPa，萃取时间2h，CO2通入的量为15L/h，设定分离釜I温度为20°C，压力为6MPa，分离釜II温度为8°C， 压力为4MPa，在分离釜II中收集萃取物，加入500ml石油醚回流提取4次，离心除去液体得马桑内酯类化合物粗提物；
取马桑内酯类化合物和等量硅胶混合，研勻，上硅胶(100目)柱层析，用氯仿-甲醇 (2-15:5)洗脱，每接收IOOml用高效液相色谱跟踪，收集目标流分，合并，减压回收试剂，得到精制的由马桑毒素、羟基马桑毒素、马桑亭和马桑宁等组成的马桑内酯类物质6. 7g。实施例2:
取马桑干燥药材1kg，粉碎过20目筛，加入至萃取釜中，采用超临界CO2萃取，通入 300ml甲醇作为夹带剂参与萃取，设定萃取参数为萃取温度40°C，萃取压力30MPa，萃取时间4h，CO2通入的量为25L/h，设定分离釜I温度为30°C，压力为12MPa，分离釜II温度为 15°C，压力为8MPa，在分离釜II中收集萃取物，加入800ml石油醚回流提取3次，离心除去液体得马桑内酯类化合物粗提物。取马桑内酯类化合物和等量硅胶混合，研勻，上硅胶(200目)柱层析，用氯仿-甲醇(2-15:5)洗脱，每接收IOOml用高效液相色谱跟踪，收集目标流分，合并，减压回收试剂， 得到精制的由马桑毒素、羟基马桑毒素、马桑亭和马桑宁等组成的马桑内酯类物质7. Sg。实施例3:
取马桑干燥药材^g，粉碎过20目筛，加入至萃取釜中，采用超临界CO2萃取，通入 1.2L甲醇作为夹带剂参与萃取，设定萃取参数为萃取温度30°C，萃取压力^MPa,萃取时间2. 5h，CO2通入的量为18L/h，设定分离釜I温度为22°C，压力为8MPa，分离釜II温度为 13°C，压力为6MPa，在分离釜II中收集萃取物，用2. 5L石油醚回流提取2次，离心除去液体得马桑内酯类化合物粗提物。取马桑内酯类化合物和等量硅胶混合，研勻，上硅胶(300目)柱层析，用氯仿-甲醇(2-15:5)洗脱，每接收IOOml用高效液相色谱跟踪，收集目标流分，合并，减压回收试剂，得到精制的由马桑毒素、羟基马桑毒素、马桑亭和马桑宁等组成的马桑内酯类物质33. 5g。实施例4:
取马桑干燥药材10kg，粉碎过20目筛，加入至萃取釜中，采用超临界(X)2萃取，通入2L 甲醇作为夹带剂参与萃取，设定萃取参数为萃取温度35°C，萃取压力20MPa，萃取时间池， CO2通入的量为22L/h，设定分离釜I温度为25°C，压力为lOMPa，分离釜II温度为14°C，压力为5MPa，在分离釜II中收集萃取物，用5L石油醚回流提取4次，离心除去液体得马桑内酯类化合物粗提物。取马桑内酯类化合物和等量硅胶混合，研勻，上硅胶(200目)柱层析，用氯仿-甲醇(2-15:5)洗脱，每接收IOOml用高效液相色谱跟踪，收集目标流分，合并，减压回收试剂， 得到精制的由马桑毒素、羟基马桑毒素、马桑亭和马桑宁等组成的马桑内酯类物质45. 7g。
权利要求
1.一种马桑内酯类物质的提纯方法，其特征在于包含以下步骤1)超临界萃取将马桑药材粉碎，过20目筛，置于萃取釜中，采用超临界CO2萃取，通入甲醇作为夹带剂参与萃取，收集萃取物；2)石油醚脱脂向上述萃取物中加入3飞倍量石油醚回流提取2、次，离心分离固液， 得脱脂物；3)柱层析将上述脱脂物进行硅胶柱层析，用氯仿-甲醇洗脱，高效液相监测，收集相应流分，浓缩干燥得到马桑内酯类物质。
2.如权利要求所述的一种马桑内酯类物质的提纯方法，其特征在于所述的马桑内酯类物质包括马桑毒素、羟基马桑毒素、马桑亭和马桑宁等物质。
3.如权利要求所述的一种马桑内酯类物质的提纯方法，其特征在于所述步骤1)中的萃取参数为萃取温度为^_40°C，萃取压力为20-30MPa，C02流量为15_25L/h，萃取时间为 2-4h，分离釜I温度为20-30°C，压力为6-12MPa，分离釜II温度为8_15°C，压力为4_8MPa。
4.如权利要求所述的一种马桑内酯类物质的提纯方法，其特征在于所述步骤3)中的硅胶粒度为ΚΚΓ300目，洗脱剂氯仿-甲醇洗脱比例2 15 :5。
全文摘要
本发明涉及了一种马桑内酯类物质的提纯方法，尤其是涉及一种应用超临界萃取法提纯马桑内酯类物质的方法，方法步骤包括取马桑药材粉碎，置于超临界萃取釜中，采用超临界CO2萃取，在分离釜中收集萃取物，用石油醚回流脱除脂溶性杂质，再采用硅胶柱层析，氯仿-甲醇洗脱，分离精制得马桑内酯类物质。本发明工艺流程简单、消耗低、效率高、简单易操作，可实现大量制备。
文档编号A61P31/10GK102327261SQ20111026427
公开日2012年1月25日 申请日期2011年9月8日 优先权日2011年9月8日
发明者刘东锋, 吴艳波 申请人:南京泽朗医药科技有限公司