去除树叶中脂类物质的分离方法

去除树叶中脂类物质的分离方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及树叶中有机污染物质的检测技术领域，特别是指一种去除树叶中脂类物质的分离方法。
【背景技术】
[0002]通过干、湿沉降于树叶表面的蜡质层，树叶能吸收和富集大气中的多种有机污染物质。因此树叶能够作为被动采样器以获得大气中持久性有机污染物的来源、时空分布、毒性等信息。
[0003]目前，树叶中有机污染物质常用的检测方法为气相色谱质谱法。由于树叶的基质复杂，含有大量物理化学性质不同的基质成分，在检测过程中存在由共萃取脂类引起的严重的基质干扰。因此在检测前常通过凝胶渗透色谱、凝胶渗透色谱联用固相萃取、柱层析等方法去除树叶中的脂类物质。但这些方法都具有耗时、耗力、耗溶剂、操作复杂、不能完全去除脂类物质的缺点，使得对树叶中有机污染物质的检测结果的准确度降低。

【发明内容】

[0004]本发明的目的是为了克服技术存在的不足而提供一种简便、快速、有效的去除树叶中脂类物质的的分离方法。经该方法处理后，去除了树叶中大部分脂类物质，避免了有机污染物质检测过程中脂类物质的干扰，使检测能够有较高的准确度和灵敏度。
[0005]为实现上述的目的而采用的技术方案是:
一种去除树叶中脂类物质的分离方法，包括如下步骤:
固相萃取:将植物叶经二氯甲烷超声萃取的萃取液经填装了吸附剂的固相萃取柱净化、洗脱，去除磷脂、糖脂和留类脂类物质；
气流吹扫微萃取:将上述经固相萃取得到的洗脱液浓缩后经气流吹扫微萃取仪萃取，去除烯萜类脂类物质，得到树叶的气相色谱质谱分析样品。
[0006]进一步地，所述的固相萃取的吸附剂为硅胶和氧化铝。
[0007]进一步地，所述的固相萃取柱下层的吸附剂为1.5 g硅胶和上层的吸附剂为0.8 g
氧化铝。
[0008]进一步地，所述固相萃取的洗脱过程为先弃去正己烷3 mL，再用正己烷与二氯甲烷体积比1:1的混合溶剂6 mL洗脱。
[0009]进一步地，所述气流吹扫微萃取的温度为300 V，所述气流吹扫微萃取的时间为5min，所述气流吹扫微萃取的萃取溶剂为正己烷。
[0010]进一步地，所述的将气流吹扫微萃取的萃取液定容至10yL,得到树叶的气相色谱质谱分析样品。
[0011]本发明采取固相萃取和气流吹扫微萃取两个过程，分步去除树叶中大部分脂类物质。固相萃取利用目标物与脂类物质的极性差异，导致其在固定相与洗脱相间分配系数不同，达到去除与目标物极性不同的脂类物质的目的。气流吹扫微萃取是近年来开发的一种集萃取、净化、浓缩于一体的净化方法。气流吹扫微萃取利用目标物与脂类物质的沸点差异，去除与目标物沸点不同的脂类物质。气流吹扫微萃取与固相萃取机理互补，将俩者联用可以有效的去除树叶中的脂类物质，相对于现有技术，如通过凝胶渗透色谱、凝胶渗透色谱联用固相萃取、柱层析等方法去除树叶中的脂类物质而言，本发明更加简便、快速。本发明去除了树叶中大部分脂类物质，避免了有机污染物质检测过程中脂类物质的干扰，使检测能够有较高的准确度和灵敏度。
【附图说明】
[0012]图1为柳树叶样品未经除脂的萃取液的液相色谱图。
[0013]图2为柳树叶样品经吸附剂为硅胶和氧化铝的固相萃取柱净化(洗脱溶剂为正己烷和二氯甲烷体积比1:1的混合溶剂)的液相色谱图。
[0014]图3为柳树叶样品未经除脂的萃取液的气相色谱质谱图。
[0015]图4为柳树叶样品经吸附剂为硅胶的固相萃取柱净化(洗脱溶剂为正己烷和二氯甲烷体积比1:1的混合溶剂)的气相色谱质谱图。
[0016]图5为柳树叶样品经吸附剂为硅胶和氧化铝的固相萃取柱净化(洗脱溶剂为正己烷和二氯甲烷体积比1:1的混合溶剂)的气相色谱质谱图。
[0017]图6为柳树叶样品经洗脱过程为用正己烷洗脱(弃掉)，再用正己烷和二氯甲烷体积比1:1的混合溶剂洗脱的气相色谱质谱图。
[0018]图7为柳树叶样品经气流吹扫微萃取净化的气相色谱质谱图。
[0019]图8为本发明实施例得到的白桦树叶萃取液的气相色谱质谱图。
[0020]图9为本发明实施例得到的白桦树叶经固相萃取净化的气相色谱质谱图。
[0021]图10为本发明实施例得到的白桦树叶经固相萃取联用气流吹扫微萃取净化的气相色谱质谱图。
【具体实施方式】
[0022]一种去除树叶中脂类物质的分离方法，包括固相萃取和气流吹扫微萃取步骤，
固相萃取:首先将树叶样品经二氯甲烷超声萃取的萃取液经填装了吸附剂的固相萃取柱净化去除磷脂、糖脂和留类脂类物质。对固相萃取的吸附剂优选结果:下层为1.5 g硅胶、上层为0.8 g氧化铝，去除磷脂、糖脂类、留醇类脂类物质。对固相萃取的洗脱过程优选结果:先弃去正己烷3 mL,再用正己烷与二氯甲烷体积比1:1的混合溶剂6 mL洗脱，去除甾类脂类物质。本发明对所述固相萃取的玻璃柱没有特殊的限制，采用内径为1.5 cm左右的柱筒即可，如可以使用金坛市明阳玻璃制品厂的10 mL玻璃注射器的针筒。
[0023]气流吹扫微萃取:将上述固相萃取的洗脱液浓缩后经气流吹扫微萃取仪萃取，去除烯萜类脂类物质。为了使样品适用于气相色谱质谱分析，所述气流吹扫微萃取的温度为300 °C，所述气流吹扫微萃取的时间为5 min，所述气流吹扫微萃取的萃取溶剂为正己烷；将气流吹扫微萃取的萃取液定容至100 μ L，得到树叶气相色谱质谱分析样品。
[0024]为了进一步说明本发明，下面结合实施例对本发明提供的脂类物质的去除方法进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。
[0025]下述实施例采用的试剂与仪器: 试剂:正己烷、二氯甲烷，均为色谱级，购自于Caledon公司，硅胶、氧化铝，均为色谱级，购于Supelco公司。无水硫酸钠，纯度99.999%的氮气购于大连大特气体有限公司。
[0026]仪器:气相色谱与质谱联用仪GC/MS2010(日本岛津公司)，100 μ L和250 μ L微型注射器(美国HAMIL TON公司)，超声波清洗器AS20500AH型(天津AU-TO-SCIENCE), ΜΕ-101多功能微萃取仪，GF-3000电子天平，进样垫(日本岛津公司)，聚四氟乙烯管。
[0027]本实施例检测的树叶样品为白桦树叶。
[0028]准确称取白桦树叶样品3份，每份0.5 go放入20 mL样品瓶中，加入4 mL 二氯甲烷超声萃取三次，每次15分钟，合并萃取液。将其中俩份浓缩至I mL，经固相萃取柱净化，吸附剂分别为1.5 g硅胶(下层)和氧化铝0.8 g (上层)，用正己烷洗脱(弃去3 mL)用正己烷与二氯甲烷体积比1:1的混合溶剂6 mL洗脱，将其中一份洗脱液定容至10 mL作为气相色谱质谱分析的样品，另一份浓缩至I mL。
[0029]取10 μ L浓缩的洗脱液放入ME-101多功能微萃取仪的样品管中，将样品管放入样品池中，用隔垫将样品池口密封，将200 yL内插管放在冷凝器的支持架上，用聚四氟乙烯管连接两根针，一端放进200 UL内插管内，至刚好到达衬管底部为止，另一端沿着密封垫插入样品池中，至刚好穿过密封垫下部为止，在200 yL衬管中加入50 yL左右的正己烷萃取溶剂，打开氮气，气流速率2.0 mL/min为定值，吹扫5 s后开始萃取，设置萃取时间为5 min，样品池的加热温度分别为300°C，萃取相的温度为_4°C。萃取完成后，定容至100 UL，作为气相色谱质谱分析的样品。
[0030]将另一份萃取液定容至10 mL，作为气相色谱质谱分析的样品。
[0031]取2yL分析样品进气相色谱/质谱(GC/MS)分析，气相色谱条件:
色谱柱:DB-5MS 毛细石英柱(30mX 0.25mmX 0.25 μ m)；
流动相:氦气，流速:1 mL/min ;不分流进样；进样口温度:280°C，程序升温由80°C开始，保持2 min，以20°C/min的速率升至100°C，再以10°C/min的速率升至200°C，再以20°C/min的速率升至280°C，保持21 min ;质谱条件:离子源温度:200°C ;接口温度:2800C ;离子化模式:EI ;电子能量:70eV。
[0032]有关结果、对比参看图1 —图10，其中，由图8 —图10中可以看出，经本发明处理后，去除了树叶中大部分脂类物质，避免了有机污染物质检测过程中脂类物质的干扰，使检测具有较高的准确度和灵敏度。
【主权项】
1.一种去除树叶中脂类物质的分离方法，包括如下步骤: 固相萃取:将植物叶经二氯甲烷超声萃取的萃取液经填装了吸附剂的固相萃取柱净化、洗脱，去除磷脂、糖脂和留类脂类物质； 气流吹扫微萃取:将上述经固相萃取得到的洗脱液浓缩后经气流吹扫微萃取仪萃取，去除烯萜类脂类物质，得到树叶的气相色谱质谱分析样品。
2.根据权利要求1所述的一种去除树叶中脂类物质的分离方法，其特征在于所述的固相萃取的吸附剂为硅胶和氧化铝。
3.根据权利要求1所述的一种去除树叶中脂类物质的分离方法，其特征在于所述的固相萃取柱下层的吸附剂为1.5 g硅胶和上层的吸附剂为0.8 g氧化铝。
4.根据权利要求1所述的一种去除树叶中脂类物质的分离方法，其特征在于所述固相萃取的洗脱过程为先弃去正己烷3 mL，再用正己烷与二氯甲烷体积比1:1的混合溶剂6 mL洗脱。
5.根据权利要求1所述的一种去除树叶中脂类物质的分离方法，其特征在于所述气流吹扫微萃取的温度为300 0C，所述气流吹扫微萃取的时间为5 min，所述气流吹扫微萃取的萃取溶剂为正己烷。
6.根据权利要求1所述的一种去除树叶中脂类物质的分离方法，其特征在于所述的将气流吹扫微萃取的萃取液定容至100 μ L，得到树叶的气相色谱质谱分析样品。
【专利摘要】本发明公开了一种去除树叶中脂类物质的分离方法，包括固相萃取和气流吹扫微萃取步骤：将植物叶经二氯甲烷超声萃取的萃取液经填装了吸附剂的固相萃取柱净化、洗脱，去除磷脂、糖脂和甾类脂类物质，其中，吸附剂为下层的1.5g硅胶和上层的0.8g氧化铝，洗脱过程为先弃去正己烷3mL，再用正己烷与二氯甲烷体积比1:1的混合溶剂6mL洗脱；再将上述经固相萃取得到的洗脱液浓缩后经气流吹扫微萃取仪萃取，去除烯萜类脂类物质，得到树叶的气相色谱质谱分析样品。经本发明处理后，去除了树叶中大部分脂类物质，避免了有机污染物质检测过程中脂类物质的干扰，使检测具有较高的准确度和灵敏度（图10）。
【IPC分类】G01N30-14
【公开号】CN104678030
【申请号】CN201510118318
【发明人】李东浩, 李会杰, 王洪军
【申请人】延边大学
【公开日】2015年6月3日
【申请日】2015年3月18日