专利名称：一种阿维a有关物质的分离及测定方法
技术领域：
本发明涉及一种药物的分析方法，特别是用高效液相色谱法分离阿维A及其三个 顺式异构体以及一个乙基取代物，并进行定量测定的方法。
背景技术：
在药物分析中所称的“有关物质(related substances) ”是指特定药物中不是主 要组成物，但与成份相关的物质。因此有关物质检测是控制药品质量的重要指标。化合物9- (4-甲氧基-2，3，6-三甲基苯基)_3，7_ 二甲基_2，4，6，8-壬四烯酸) 的结构中存在多个共轭双键，因此存在多种顺反式异构体。全反式9- (4-甲氧基-2，3，6-三甲基苯基)_3，7_ 二甲基_2，4，6，8-壬四烯酸) 的商品名为阿维A，是一种皮肤病用药，临床上用于治疗严重银屑病及角化不良症。在合成阿维A的产物中，往往会同时产生多种异构体，如ll，13-di-Cis、ll-Cis和 13-cis三种异构体。同时阿维A的合成产物中，还极易产生乙基取代物(即13位被乙基取 代所形成的杂质)。在合成阿维A时，由于化学反应的复杂性，在产生阿维A的同时易产生阿维A有关 物质，如阿维A顺式异构体、乙基取代物。由于阿维A的顺式异构体、乙基取代物的结构与 阿维A非常相近，分离十分困难，更难于定量。欧洲药典的分析方法是使用HPLC-cartridge PAH色谱柱的色谱方法，存在许多问 题，乙基取代物与阿维A主峰不能分离，上述三种顺式异构体虽然可以与阿维A主峰分离， 但各个顺式异构体之间因完全重叠而不能互相分离。因此，用欧洲药典的方法，无法对其中 存在的各顺式异构体分别定量，也无法测定其中杂质乙基取代物的含量。在原料药的生产中，为了确保药品的质量，往往不仅需要测定原料药主药的含量， 而且还需要控制药物中有关物质的量。阿维A的分析测定中，所称“有关物质”就是上述顺 式异构体以及乙基取代物。因此需要有一种好的方法，能够对阿维A的“有关物质”进行分 离并定量，这对阿维A质量的控制具有非常重要的意义。
发明内容
本发明的目的是提供一种对阿维A及其顺式异构体及乙基取代物进行分离和定 量测定的方法。本发明人经过多次试验，筛选出了合适的高效液相色谱分析中色谱柱、流动相等 条件，达到了上述发明目的。本发明提供了一种阿维A三种顺式异构体及13-乙基取代物分离并定量测定的 方法，其特征在于采用高效液相色谱法，色谱柱填料是十八烷基硅烷键合硅胶，流动相由 0.2% 1.5% (V/V)乙酸水溶液和有机溶剂组成，所述乙酸水溶液和有机溶剂的比例(V/ V)为10^-25% 75% 90% ；采用梯度洗脱，根据出峰顺序可将阿维A与三种顺式 异构体及13-乙基取代物分离并定性测定，峰1为ll，13-di-cis、峰2为13-cis、峰3为11-cis、峰4为阿维A、峰5为13-乙基取代物。所述有机溶剂是低级醇或低级腈，优选甲醇、乙腈、乙醇中的一种或多种。所述的乙酸水溶液优选浓度为0.2^-0.5 ^在本发明的一个实例中，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(色谱柱ZORBAX ODS 4.6Χ250_ 5 μ m)；以0.5%乙酸水溶液甲醇(17 83)为流动相；检测波长为360nm。 取ll，13-di-cis、ll-cis、13-cis阿维A异构体适量，加少量四氢呋喃溶解并用甲醇稀释成 每Iml约0. Img的溶液；取13-乙基取代物适量，加少量四氢呋喃溶解并用甲醇稀释成每 Iml约0. 2mg的溶液；分别取上述两种溶液适量与阿维A溶液混合后，按上述色谱条件进样 20 μ 1，记录色谱图。按出峰顺序，峰1为ll，13-di-cis、峰2为13_cis、峰3为ll_cis、峰 4为阿维A、峰5为13-乙基取代物。理论板数按阿维A峰计算不低于5000，阿维A主峰和 相邻顺式异构体及13-乙基取代物的分离度不低于1. 5。用本发明的方法不仅可将阿维A的三种顺式异构体及乙基取代物进行有效分离， 还能够定量测定其三种顺式异构体ll，13-di-Cis、ll-Cis和13-cis的含量以及13-乙基 取代物的含量。表1本发明方法与欧洲药典方法测定结果对比
权利要求
1.一种对阿维A顺式异构体和13-乙基取代物进行分离和测定的方法，其特征在于 使用十八烷基硅烷键合硅胶作色谱柱的固定相，流动相由0.2% 1.5% (V/V)乙酸水溶液 和有机溶剂组成，所述乙酸水溶液和有机溶剂的比例(V/V)为10% 25% 75% 90%; 采用梯度洗脱，根据出峰顺序可对阿维A与三种顺式异构体及13-乙基取代物定性，峰1为 11，13-di-cis、峰2为13-cis、峰3为11-cis、峰4为阿维A、峰5为13-乙基取代物。
2.权利要求1所述的方法，对阿维A及其顺式异构体和13-乙基取代物定量的方法是， 分别量取所述峰1、峰2、峰3、峰4和峰5的面积，按外标法计算出阿维A中顺式异构体及乙 基取代物的含量。
3.权利要求1或2所述的方法，其中，所述有机溶剂是低级醇或低级腈。
4.权利要求3所述的方法，其中，所述有机溶剂选自甲醇、乙腈或乙醇中的一种或多种。
5.权利要求1或2所述的方法，其中，所述的乙酸水溶液中乙酸的浓度为0.2% 0. 5%。
全文摘要
一种阿维A有关物质——顺式异构体及13-乙基取代物的分离和定量测定方法，使用十八烷基硅烷键合硅胶作色谱柱的固定相，流动相由乙酸水溶液和有机溶剂组成，采用梯度洗脱，可将阿维A顺式异构体及13-乙基取代物进行分离并测定其含量。本方法简便可行，重现性好。
文档编号G01N30/02GK102109500SQ20091024405
公开日2011年6月29日 申请日期2009年12月28日 优先权日2009年12月28日
发明者吴芸, 沈红梅 申请人:重庆华邦胜凯制药有限公司