专利名称：去甲基斑蝥酸钠磷脂复合物的脂质微球注射液及制备方法
技术领域：
本发明涉及一种脂质微球注射液及其制备方法，具体涉及一种含有去甲基斑蝥酸钠磷脂复合物脂质微球注射液及其制备方法，属医药技术领域。
背景技术：
抗癌新药去甲基斑蝥素(Norcantharidin，NCTD),由斑蝥素去除1，2位甲基而得。 去甲基斑蝥酸钠为去甲斑蝥素直接水解制得的钠盐，其仅在少数有机溶剂(如丙酮、乙酸乙酯)及热水中溶解，在冷水及油中的溶解度很低。与斑蝥素相比，去甲基斑蝥酸钠的泌尿系统刺激作用大大降低，同时具有较斑蝥素更为显著的升高白细胞作用。去甲基斑蝥酸钠为细胞周期特异性药物，阻断于M周期，并影响其周期运行速度。临床上主要应用于肝癌、食道癌、胃癌、贲门癌等术前用药或联合化疗，可用于白细胞降低及乙型肝炎。目前，去甲基斑蝥酸钠主要以片剂和去甲基斑蝥酸钠注射剂应用于临床。去甲基斑蝥酸钠虽然明显减轻了斑蝥素的毒性，但并未完全消除。动物实验研究结果显示，给药剂量增大到一定程度时，肾脏和肝脏组织出现病理变化。使用剂量的严格限制也严重阻碍了药物疗效的发挥。临床使用时部分患者在静脉给药每日超过20mg或口服每日超过30mg时即出现不良反应，口服不良反应主要表现为恶心、呕吐、头晕等症状。由于注射液为碱性溶液，其PH值约为8，远大于血液pH值(7. 35 7. 45)，因此对血管壁刺激较大，易引起化学性静脉炎；且由于药物本身具有较强刺激性，亦可引起血管痉挛，血液减少，相对局部斑蝥酸钠浓度增大，加重静脉炎，且若输液速度大于血液流速，则静脉炎的发生率明显增高。主要不良反应表现为易引起静脉炎症，静脉部红、肿、热、痛，沿静脉走行长条状发红，如有渗出则红肿成块状，活动受限，经热敷理疗处理好转治愈。因此在临床用于外周浅静脉输液时， 发生浅静脉炎的比例相当高，有的病人拒绝用该药治疗，影响药物在临床上正常使用。鉴于此，为使去甲基斑蝥酸钠更好地发挥临床疗效，研究和开发新剂型，以新剂型的高效、低毒的优势充分发挥去甲基斑蝥酸钠抗肿瘤活性并降低毒副作用，这无疑将对进一步促进和推广去甲基斑蝥素在临床中的应用具有重要意义。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是克服现有技术之缺陷提供一种去甲基斑蝥酸钠磷脂复合物脂质微球注射液，该去甲基斑蝥酸钠磷脂复合物脂质微球注射液具有低血管刺激性和低毒性等特点。进一步，本发明提供该去甲基斑蝥酸钠磷脂复合物脂质微球注射液得制备方法。本发明所述技术问题是由以下技术方案实现的。—种去甲基斑蝥酸钠磷脂复合物脂质微球注射液，该注射液含有去甲基斑蝥酸钠磷脂复合物、脂溶性介质、表面活性剂和水。所述的去甲斑蝥酸钠磷脂复合物由去甲基斑蝥酸钠和磷脂在有机溶剂中进行复合而成。所述的去甲基斑蝥酸钠和磷脂的摩尔比为1 1:10。所述的磷脂选自天然磷脂或合成磷脂中的一种或几种。所述天然磷脂为卵磷脂、豆磷脂、胆固醇、胆酸类或壳聚糖；所述合成磷脂为磷脂酰甘油酯或二硬脂酰磷脂酰胆碱。所述去甲基斑蝥酸钠是去甲基斑蝥素或由去甲基斑蝥素在制剂制备过程中经过反应生成的去甲基斑蝥酸钠。所述的有机溶剂为乙酸乙酯、四氢呋喃、二氯甲烷、三氯甲烷、丙酮、二甲基亚砜、正己烷、环己烷、甲醇、乙醇、 异丙醇、正丁醇。所述的脂溶性介质包括油相和油溶性乳化剂；所述的油相包括矿物油、植物油、动物油或其混合物；所述的油溶性乳化剂是选自天然材料或合成材料中的一种或几种；所述的油相优选是中链脂肪酸甘油三酯、大豆油、红花油、玉米油或其混合物；所述的天然材料优选是是卵磷脂、豆磷脂、胆固醇、油酸类、胆酸类或壳聚糖；所述的合成材料优选是是磷脂酰甘油酯、二硬脂酰磷脂酰胆碱。所述的表面活性剂选自磷脂、吐温、泊洛沙姆、油酸钠、油酸、胆酸、去氧胆酸或其混合物。所述的磷脂选自卵磷脂、豆磷脂或其混合物；所述的吐温选自吐温20，吐温40，吐温60，吐温80，吐温85，或者是以上不同规格的任意比例混合物；所述的泊洛沙姆为泊洛沙姆 188。所述的去甲基斑蝥酸钠磷脂复合物脂质微球注射液，还可以含有等渗调节剂、PH 调节剂和金属螯合剂。所述等渗调节剂为甘油，山梨醇，甘露醇，葡萄糖或其混合物；所述PH调节剂为氢氧化钠，盐酸或缓冲盐或其混合物；所述金属螯合剂为依地酸二钠，依地酸钠钙或其混合物。本发明的去甲基斑蝥酸钠磷脂复合物脂质微球注射液，以重量百分比计优选组成为
去甲斑蝥酸钠磷脂复合物(以去甲基斑蝥素计)0. 01% 5% ；
脂溶性介质5% 30% ；
表面活性剂0. 5% 5% ；
等渗调节剂0. 5% 5% ；
pH调节剂0. 01% 1% ；
金属螯合剂0% 1% ；
其余为注射用水。更优选为
去甲基斑蝥酸钠复合物(以去甲基斑蝥素计)0. 05 % 0. 4% ；
脂溶性介质10% 20% ；
表面活性剂0. 5% 5% ；
等渗调节剂1% 3% ；
pH调节剂0. 01% 1% ；
金属螯合剂0. 005% 0. 03% ；
其余为注射用水。最优选为
去甲基斑蝥酸钠复合物(以去甲基斑蝥素计)0. 2%； 脂溶性介质 10% ；卵磷脂1. 2% ；
甘油2. 5% ；
油酸钠0. 03% ；
泊洛沙姆188 0. 2% ； 依地酸二钠 0. 02% ； 其余为注射用水；
其中所述脂溶性介质为中链脂肪酸甘油三酯(MCT)，大豆油，红花油，玉米油或其混合物。本发明提供了一种去甲基斑蝥酸钠磷脂复合物脂质微球注射液的制备方法，其特征在于包括如下步骤
(1)去甲基斑蝥酸钠磷脂复合物的制备取去甲基斑蝥酸钠和磷脂，将其加到有机溶剂中，25 70°C加热回流0. 5 3小时，至溶液澄清透明；取出溶液进行减压旋转蒸发以除去有机溶剂，最后置于真空干燥机或冷冻干燥机中进行干燥；
(2)将处方量的去甲基斑蝥酸钠磷脂复合物、脂溶性介质在60 80°C的条件下加热搅拌，直至磷脂复合物全部溶于脂溶性介质中，得油相；
(3)将处方量的表面活性剂和等渗调节剂加入适量注射用水在60 80°C的条件下加热搅拌至全部溶解作为水相；
(4)利用组织捣碎机，缓慢将水相加入油相或将油相加入水相中，以每分钟10，000 20,000转搅拌3 5分钟，即得粗乳；
(5)将粗乳转移至高压乳勻机中，在600 1200bar，30°C 60°C条件下勻化3 10
次；
(6)取上述乳剂灌封于输液瓶中，充氮，115°C下灭菌30min或121°C灭菌15min。更优选的制备方法为
(1)去甲基斑蝥酸钠磷脂复合物的制备取去甲基斑蝥酸钠2g，大豆磷脂6g，加入乙酸乙酯100ml，60°C复合1小时后，旋转蒸发出去乙酸乙酯，经真空干燥12小时以上 (20-30°C),即得载药大豆磷脂复合物，密闭包装，放入冰箱冷藏保存；
(2)将处方量的去甲基斑蝥酸钠磷脂复合物和大豆油MCT=3:1，在70°C的条件下加热搅拌，直至磷脂复合物全部溶于油相中；
(3)将处方量的甘油、油酸钠、吐温80和依地酸二钠加入适量注射用水在70°C的条件下加热搅拌至全部溶解作为水相；
(4)将油相加入至水相中，置于高速组织捣碎机中1，0000 2，0000rmp搅拌3_5分钟；
(5)以0.1 mol化―1氢氧化钠或盐酸溶液调节pH值至6.0 8.0，注射用水稀释定容至处方量，转移至高压均质机中，以600 1000 bar压力均质6 10次；
(6)充氮气，灌封。采用高压旋转121°C灭菌15分钟。本发明所述甲基斑蝥酸钠磷脂复合物脂质微球注射液是一种供静脉输液用的含去甲基斑蝥酸钠的水包油亚微乳剂，构成水包油亚微乳剂的组合物与脂质微球注射液的组合物相同。本发明所述去甲基斑蝥酸钠磷脂复合物脂质微球注射液中去甲基斑蝥酸钠在油相或油水两相的界面膜中分布应在80%以上，其余部分去甲基斑蝥酸钠分布于水相及油相中。本发明所述去甲基斑蝥酸钠磷脂复合物脂质微球注射液首先将去甲基斑蝥酸钠与磷脂复合，将在油、水中均难溶的药物去甲基斑蝥酸钠载入磷脂层中，去甲基斑蝥酸钠在油水两相的界面膜和油相中的分布大大提高，提高了药物在制剂中的包封率，实现界面膜载药，提高了其脂溶性，提高了药物在制剂中的载药量、降低了其毒性并使其在体内能够靶向释药。而后利用磷脂复合物制备去甲斑蝥酸钠磷脂复合物脂质微球注射液，降低了去甲基斑蝥酸钠的血管刺激性，提高疗效并降低毒副作用，因而具有一定的创新性和较强的实用性。实验研究表明去甲斑蝥酸钠脂质微球注射液与注射液相比，急性毒性明显减小。大鼠静脉给予去甲斑蝥酸钠脂质微球注射液与其溶液型注射液后，去甲斑蝥酸钠的血药时间曲线见图1，去甲斑蝥酸钠在心脏、肝脏、肾脏及不同时间各组织中的药物分布图见图2-图 7。
图1 NCTD血药一时间曲线1去甲斑蝥酸钠脂质微球注射液2去甲斑蝥酸钠溶液型注射液
图2 NCTD心脏中药物浓度一时间曲线1去甲斑蝥酸钠脂质微球注射液2去甲斑蝥酸钠溶液型注射液
图3 NCTD肝中药物浓度一时间曲线1去甲斑蝥酸钠脂质微球注射液2去甲斑蝥酸钠溶液型注射液
图4 NCTD肾中药物浓度一时间曲线1去甲斑蝥酸钠脂质微球注射液2去甲斑蝥酸钠溶液型注射液
图5 给药0.5小时的大鼠体内各组织药物分布图1去甲斑蝥酸钠脂质微球注射液 2去甲斑蝥酸钠溶液型注射液
图6给药6小时的大鼠体内各组织药物分布图1去甲斑蝥酸钠脂质微球注射液2 去甲斑蝥酸钠溶液型注射液
图7给药M h后大鼠体内各组织AUC值1去甲斑蝥酸钠脂质微球注射液2去甲斑蝥酸钠溶液型注射液。
具体实施例方式下面结合具体实施方式
对本发明作进一步说明，实例仅为提供解释性说明，不意味着以任何方式对本发明的保护范围予以限制。实施例1去甲基斑蝥酸钠原料的制备
去甲基斑蝥酸钠虽然有注射液，但是都是从去甲斑蝥素直接水解制得钠盐水溶液。其原料药没有生产和销售。而从去甲斑蝥素制备去甲斑蝥酸钠是一个最基本的有机反应，因此，我们参照文献报道，以去甲斑蝥素为原料，经过水解成盐，脱水，洗涤，干燥，制得去甲斑蝥酸钠。反应式如下
权利要求
1.一种去甲基斑蝥酸钠磷脂复合物脂质微球注射液，其特征在于该注射液含有去甲基斑蝥酸钠磷脂复合物、脂溶性介质、表面活性剂和水。
2.根据权利要求1所述的去甲基斑蝥酸钠磷脂复合物脂质微球注射液，其特征在于所述的去甲斑蝥酸钠磷脂复合物由去甲基斑蝥酸钠和磷脂在有机溶剂中进行复合而成。
3.根据权利要求2所述的去甲基斑蝥酸钠磷脂复合物脂质微球注射液，其特征在于所述去甲基斑蝥酸钠是去甲基斑蝥素或由去甲基斑蝥素在制剂制备过程中经过反应生成的去甲基斑蝥酸钠；所述的有机溶剂为乙酸乙酯、四氢呋喃、二氯甲烷、三氯甲烷、丙酮、二甲基亚砜、正己烷、环己烷、甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇。
4.根据权利要求3所述的去甲基斑蝥酸钠磷脂复合物脂质微球注射液，其特征在于所述的去甲基斑蝥酸钠和磷脂的摩尔比为1 1 :10。
5.根据权利要求4所述的去甲基斑蝥酸钠磷脂复合物脂质微球注射液，其特征在于所述的磷脂选自天然磷脂或合成磷脂中的一种或几种。
6.根据权利要求5所述的去甲基斑蝥酸钠磷脂复合物脂质微球注射液，其特征在于所述天然磷脂为卵磷脂、豆磷脂、胆固醇、胆酸类或壳聚糖；所述合成磷脂为磷脂酰甘油酯或二硬脂酰磷脂酰胆碱。
7.根据权利要求1所述的去甲基斑蝥酸钠磷脂复合物脂质微球注射液，其特征在于所述的脂溶性介质包括油相和油溶性乳化剂。
8.根据权利要求7所述的去甲基斑蝥酸钠磷脂复合物脂质微球注射液，其特征在于所述的油相包括矿物油、植物油、动物油或其混合物；所述的油溶性乳化剂是选自天然材料或合成材料中的一种或几种。
9.根据权利要求8所述的去甲基斑蝥酸钠磷脂复合物脂质微球注射液，其特征在于所述的油相是中链脂肪酸甘油三酯、大豆油、红花油、玉米油或其混合物；所述的天然材料是卵磷脂、豆磷脂、胆固醇、油酸类、胆酸类或壳聚糖；所述的合成材料是磷脂酰甘油酯、二硬脂酰磷脂酰胆碱。
10.根据权利要求1所述的去甲基斑蝥酸钠磷脂复合物脂质微球注射液，其特征在于所述的表面活性剂选自磷脂、吐温、泊洛沙姆、油酸钠、油酸、胆酸、去氧胆酸或其混合物。
11.根据权利要求15所述的去甲基斑蝥酸钠磷脂复合物脂质微球注射液，其特征在于所述的磷脂选自卵磷脂、豆磷脂或其混合物；所述的吐温选自吐温20，吐温40，吐温60，吐温80，吐温85，或者是以上不同规格的任意比例混合物；所述的泊洛沙姆为泊洛沙姆188。
12.根据权利要求1-11中任一权利要求所述的去甲基斑蝥酸钠磷脂复合物脂质微球注射液，其特征在于还含有等渗调节剂、PH调节剂和金属螯合剂。
13.根据权利要求12所述的去甲基斑蝥酸钠磷脂复合物脂质微球注射液，其特征在于所述等渗调节剂为甘油，山梨醇，甘露醇，葡萄糖或其混合物；所述PH调节剂为氢氧化钠， 盐酸或缓冲盐或其混合物；所述金属螯合剂为依地酸二钠，依地酸钠钙或其混合物。
14.根据权利要求13所述的去甲基斑蝥酸钠磷脂复合物脂质微球注射液，其特征在于该注射液以重量百分比计含有下述组分去甲斑蝥酸钠磷脂复合物(以去甲基斑蝥素计)0. 01% 5% ；脂溶性介质5% 30% ；表面活性剂0. 5% 5% ；等渗调节剂0. 5% 5% ； pH调节剂0. 01% 1% ； 金属螯合剂0% 1% ； 其余为注射用水。
15.根据权利要求14所述的去甲基斑蝥酸钠磷脂复合物脂质微球注射液，其特征在于该注射液以重量百分比计含有下述组分去甲基斑蝥酸钠复合物(以去甲基斑蝥素计)0. 05 % 0. 4% ；脂溶性介质10% 20% ；表面活性剂0. 5% 5% ；等渗调节剂1% 3% ；pH调节剂0. 01% 1% ；金属螯合剂0. 005% 0. 03% ；其余为注射用水。
16.根据权利要求15所述的去甲基斑蝥酸钠磷脂复合物脂质微球注射液，其特征在于该注射液的组成以重量百分比计为去甲基斑蝥酸钠复合物(以去甲基斑蝥素计)0. 2%；脂溶性介质 10% ；卵磷脂1. 2% ；甘油2. 5% ；油酸钠0. 03% ；泊洛沙姆188 0. 2% ；依地酸二钠 0. 02% ；其余为注射用水；其中所述脂溶性介质为中链脂肪酸甘油三酯(MCT)，大豆油，红花油，玉米油或其混合物。
17.权利要求1-16中的脂质微球注射液，其特征在于去甲基斑蝥酸钠在油相或油水两相的界面膜中分布应在80%以上，其余部分去甲基斑蝥酸钠分布于水相中。
18.权利要求1-16中的脂质微球注射液，其特征在于是一种供静脉输液用的含去甲基斑蝥酸钠的水包油亚微乳剂，构成水包油亚微乳剂的组合物与脂质微球注射液的组合物相同。
19.一种去甲基斑蝥酸钠磷脂复合物脂质微球注射液的制备方法，其特征在于包括如下步骤(1)去甲基斑蝥酸钠磷脂复合物的制备取去甲基斑蝥酸钠和磷脂，将其加到有机溶剂中，25 70°C加热回流0. 5 3小时，至溶液澄清透明；取出溶液进行减压旋转蒸发以除去有机溶剂，最后置于真空干燥机或冷冻干燥机中进行干燥；(2)将处方量的去甲基斑蝥酸钠磷脂复合物、脂溶性介质在60 80°C的条件下加热搅拌，直至磷脂复合物全部溶于脂溶性介质中，得油相；(3)将处方量的表面活性剂和等渗调节剂加入适量注射用水在60 80°C的条件下加热搅拌至全部溶解作为水相；(4)利用组织捣碎机，缓慢将水相加入油相或将油相加入水相中，以每分钟10，000 20,000转搅拌3 5分钟，即得粗乳；(5)将粗乳转移至高压乳勻机中，在600 1200bar，30°C 60°C条件下勻化3 10次；(6)取上述乳剂灌封于输液瓶中，充氮，115°C下灭菌30min或121°C灭菌15min。
20.根据权利要求19所述的制备方法，其特征在于包含以下步骤(1)去甲基斑蝥酸钠磷脂复合物的制备取去甲基斑蝥酸钠2g，大豆磷脂6g，加入乙酸乙酯100ml，60°C复合1小时后，旋转蒸发出去乙酸乙酯，经真空干燥12小时以上 (20-30°C),即得载药大豆磷脂复合物，密闭包装，放入冰箱冷藏保存；(2)将处方量的去甲基斑蝥酸钠磷脂复合物和大豆油MCT=3:1，在70°C的条件下加热搅拌，直至磷脂复合物全部溶于油相中；(3)将处方量的甘油、油酸钠、吐温80和依地酸二钠加入适量注射用水在70°C的条件下加热搅拌至全部溶解作为水相；(4)将油相加入至水相中，置于高速组织捣碎机中1，0000 2，OOOOrmp搅拌3-5分钟；(5)以0.1 mol — 1氢氧化钠或盐酸溶液调节pH值至6. 0 8. 0，注射用水稀释定容至处方量，转移至高压均质机中，以600 1000 bar压力均质6 10次；(6)充氮气，灌封，采用高压旋转121°C灭菌15分钟。
全文摘要
本发明公开了一种去甲基斑蝥酸钠磷脂复合物脂质微球注射液及其制备方法。该注射液含有去甲基斑蝥酸钠磷脂复合物、脂溶性介质、表面活性剂等成份。本发明甲斑蝥酸钠磷脂复合物中，甲基斑蝥酸钠和磷脂的摩尔比为1～110。本发明制备的甲斑蝥酸钠磷脂复合物，使甲基斑蝥酸钠在油水两相的界面膜和油相中的分布大大提高，提高了药物在制剂中的包封率，实现界面膜载药，提高了其脂溶性，提高了药物在制剂中的载药量、降低了其毒性并使其在体内能够靶向释药。用本发明磷脂复合物制备的脂质微球注射液，降低了去甲基斑蝥酸钠的血管刺激性，提高疗效并降低毒副作用。
文档编号A61K47/28GK102319214SQ201110267058
公开日2012年1月18日 申请日期2011年9月9日 优先权日2011年9月9日
发明者何海冰, 唐星, 王艳娇, 蔡翠芳 申请人:沈阳药科大学