专利名称：野山椒根茎总生物碱的提取方法和口腔药用组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及野山椒根茎总生物碱及其提取方法，以该总生物碱作为活性成分的口腔药用组合物，及其在治疗和(或)预防虫牙、龋齿和牙痛的药物制备中的用途。
背景技术：
目前，可用于治疗虫牙、龋齿和牙痛的药物以及用于预防虫牙、龋齿和牙痛的口腔用品(如牙膏、漱口水、口香糖等)较多。但目前的药物基本上只是对、龋齿和牙痛的发病起抑制作用，解决不了反复发病的问题，也就是只能治标不能治本，对于较严重的情况，一般是用手术处理，但仍然存在复发的问题。因此，一但患了、龋齿和牙痛，即使作过药物或手术治疗，平时都需要在饮食上注意，才能尽可能地减少牙病的复发。这是目前虫牙患者特别苦恼的事。而对于预防、龋齿和牙痛的各种口腔用品，在实际应用中，能够真正起到预防作用已经很不错了，能起到治疗作用的还未见应用。野山椒(Zanthoxylum simulans Hance)傣族语麻献，在汉语中也称为芸香科植物野花椒，别名麻感。《西双版纳傣药志》所述的药材基源生态环境生于海拔500m以下的灌丛中，亦有栽培。资源分布分布于云南西双版纳等地。采收和储藏7-8月采收成熟的果实，除去杂质，晒干根也可入药。《中华本草傣药卷》所述性味辛；温；有小毒；归经胃经；性味根味微麻，气香，性热，入火、风塔。功能主治根、茎通气除寒，解毒，消肿止痛用于胃寒腹痛，牙痛，风湿痹痛。现有技术中已经被鉴定的存在于野山椒根茎中的碱类化合物有根含生物碱茵芋碱(skimmianine)，加锡弥罗果碱(edulinine)，左旋-7-去羟基日巴里尼定(ribalinine)， 阿瑞罗甫碱(araliopsine) ο根皮含二氢白屈菜红碱(dihydrochelerythrine)，氧化白屈菜红碱(oxychelerythrine), N-乙酉先基番荡枝碱(N-acetylanonaine), Y -崖椒碱 (Y -fagarine),白屈菜红碱(chelerythrine),木兰花碱(magnoflorine), 8_ 甲氧基—N—甲基二甲吡喃并喹啉酮(8-methoxy-N-methylflindersine)和木脂素芝麻素(sesamine)，还含 β-谷甾醇(β-sitosterol) ο野山椒根茎提取物同属植物的化学成分主要有生物碱，酰胺，木脂素，挥发油等， 并筛选出具有温中止痛，杀虫止痒等药理作用的活性成分，但对本种的化学成分研究尚未见到详细报道，只对其化学成分进行了初步研究，分离出10种化合物其中的茵芋碱 (skimmianine)，加锡弥罗果碱(edulinine)，左旋-7-去羟基日巴里尼定(ribalinine)， 阿 卷罗甫碱(araliopsine)，二 S白屈菜红碱(dihydrochelerythrine)，氧化白屈菜红碱(oxychelerythrine), N-乙酉先基番荡枝碱(N-acetylanonaine), Y _崖椒碱 (Y-fagarine),白屈菜红碱(chelerythrine),木兰花碱(magnoflorine)为已知生物碱，其余3个分别为8-甲氧基-N-甲基二甲吡喃并喹啉酮(8-methoxy-N-methylf lindersine) 和木脂素芝麻素(sesamine)，还含β-谷留醇(β-sitosterol)，只是经过化学和光谱分析鉴定。茵芋碱(skimmianine)，加锡弥罗果碱(edulinine)为已知生物碱，具有较强的镇痛效应和抑制神经中枢作用，具有与温中止痛，杀虫止痒活性相关的内酰氨结构。因此改进野山椒根茎提取物中的总生物碱的提取和纯化工艺，对于更好的利用野山椒根茎提取物总生物碱具有非常重要的意义。
发明内容
本发明的目的之一是提供以总生物碱碱类化合物为主要成分野山椒根茎提取物；本发明还提供上述野山椒根茎总生物碱的制备方法；本发明还提供包括这种野山椒根茎总生物碱以及药学上可接受的载体或赋形剂的口腔药用组合物；本发明还提供上述野山椒根茎总生物碱在治疗和(或)预防虫牙、龋齿和牙痛的药物制备中的用途以及在口腔用品中的应用。本发明提供的一种野山椒根茎总生物碱的提取方法，是指采用任何方法从植物野山椒(Zanthoxylum simulans Hance)中提取获得的，以生物碱碱类化合物作为主要成分 (或主要功效成分)的提取物，其特征在于所述的野山椒根茎生物碱是脂溶性的，通过亲脂性有机溶剂，从野山椒根茎中提取获得的碱类化合物之总重量占提取物总重量的50% …90%，提取物中各种碱类化合物之间的含量比例可以与天然植物的含量比例一致，也可以不一致，所述的碱类化合物是指具有化学结构，属于碱类的化合物以及其它形式的衍生物。所述的野山椒根茎作原料，采用含水或不含水的亲脂性有机溶剂作提取溶剂，所述的提取及纯化处理过程包括①取野山椒根茎药材，粉碎，过筛，收集20…40目粒度的粗粉，得A品备用；②向A品中加入A品总量5⑴10倍量的60%…80%乙醇作为提取溶剂，密闭浸泡野山椒根茎粉碎料粗粉24h ；③在35°C下热回流，用索氏提取器反复提取3…5次，每次0. 5 - 3小时，静置、过滤，合并滤液，澄清，得澄明提取液；④在25°C和2MPa条件下，采用平均孔径为0. 25pm的膜对的上述澄明提取液进行微滤，渗透通量为400⑴650L/h · m3 ；⑤再将滤过液依次通过20万分子量超滤及200分子量纳滤，弃去20万分子量以上膜上液及200分子量纳滤膜下液，收集纳滤膜上液，浓缩至相对密度0.9…1.40，得浓缩液；⑥将60 %…80 %乙醇提取液和浓缩液混合，放置沉淀，抽滤，滤液回收甲醇后得B
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BFI ；⑦kphadex LH-20柱色谱纯化选用kphadex LH-20柱，进行色谱纯化，上样前， 柱用两倍柱容积的80%乙醇平衡；
⑧洗脱液先为60%乙醇，洗脱，继而用70%乙醇洗脱，再用80%乙醇洗脱，收集 80%乙醇洗脱液；⑨浓缩得干燥品，用丙酮处理，得淡黄色粉末；⑩提取少量的总生物碱液，用kphadex LH_20吸附柱色谱鉴定生物碱有效成分。所述的亲脂性有机溶剂为含水或不含水的甲醇、乙醇、丙酮之一种或几种任意比例的混合物，其中乙醇含量为80%。所述的吸附柱色谱中的吸附剂为硅胶或氧化铝，检测的标准品为喹啉。在上述的总生物碱的提取方法中，较好的步骤②是向A品中加入A品总量8…10 倍量的80%乙醇作为提取溶剂，密闭浸泡野山椒根茎粉碎料粗粉Mh ；本发明的另一方面是提供用于治疗和(或)预防虫牙、龋齿和牙痛的口腔药用组合物，其包括有效治疗量的野山椒根茎总生物碱以及药学上可接受的载体或赋形剂的口腔药用组合物。所述的包括野山椒根茎总生物碱以及药学上可接受的载体或赋形剂，将提取物总生物碱按常规制剂工艺制成临床用的喷剂、胶囊剂、软胶囊剂、片剂、颗粒剂。与现有技术比较，本发明是采用野山椒根茎为原料制成药物及口腔用品，制作简单，对虫牙、龋齿和牙痛的治疗和预防效果好。1、易于制作、应用；2、其药物对虫牙、龋齿和牙痛的治疗效果好，痊愈率高，基本不复发3、其口腔用品不但预防效果好，还可起到比较好的治疗作用的特点。
具体实施例方式下面结合具体实施例对本发明作进一步详细说明本发明提供的一种野山椒根茎总生物碱的提取方法，是指采用任何方法从植物野山椒(Zanthoxylum simulans Hance)中提取获得的，以生物碱碱类化合物作为主要成分 (或主要功效成分)的提取物，其特征在于所述的野山椒根茎生物碱是脂溶性的，通过亲脂性有机溶剂，从野山椒根茎中提取获得的碱类化合物之总重量占提取物总重量的50% …90%，提取物中各种碱类化合物之间的含量比例可以与天然植物的含量比例一致，也可以不一致，所述的碱类化合物是指具有化学结构，属于碱类的化合物以及其它形式的衍生物。实施例1按以下步骤进行总生物碱的提取。①取野山椒根茎药材7Kg作为原料，粉碎，过筛，收集20 - 40目粒度的粗粉，得A 品备用；②向A品中加入56Kg的70%乙醇作为提取溶剂，密闭浸泡野山椒根茎粉碎料粗粉 24h ；野山椒根茎原料经粗粉碎、浸润后，由于溶剂的流动浸出，促使固、液两相产生较高的相对运动速度，扩散边界层变得更薄，加快了药材中溶质向溶剂中的扩散，提高浸出效率。③在35°C下热回流，用索氏提取器反复提取3…5次，每次0. 5…3小时，静置、过滤，合并滤液，澄清，得澄明提取液；
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④在25°C和2MPa条件下，采用平均孔径为0. 25pm的膜对的上述澄明提取液进行微滤，渗透通量为400⑴650L/h · m3 ；⑤再将滤过液依次通过20万分子量超滤及200分子量纳滤，弃去20万分子量以上膜上液及200分子量纳滤膜下液，收集纳滤膜上液，浓缩至相对密度0.9…1.40，得浓缩液；由于浸出温度较煎煮法低，既可预防药材内淀粉、胶体物质过度糊化、膨胀，影响溶质渗出，又可避免因其大量浸出而造成分离、浓缩困难；⑥将70%乙醇提取液和浓缩液混合，放置沉淀，抽滤，滤液回收甲醇后得B品；⑦kphadex LH-20柱色谱纯化选用kphadex LH-20柱，进行色谱纯化，上样前， 柱用两倍柱容积的80%乙醇平衡；野山椒根茎总生物碱提取液中尚存在大量的靴质、蛋白质、淀粉、细菌、热原等大分子物质以及许多微粒、亚微粒和絮状物等，它们不但没有药效作用，而且严重影响产品质量，普通分离方法(如沉降、过滤等)不仅难以除尽，而且容易损耗有效成分甚至浪费大量的有机溶媒。选择合适的超滤膜可将上述杂质有效除去，而又不损失有效成分、提高消毒液的澄明度和稳定性。⑧洗脱液先为60 %乙醇，洗脱，继而用70 %乙醇洗脱，再用80 %乙醇洗脱，收集 80%乙醇洗脱液；⑨浓缩得干燥品，用丙酮处理，得淡黄色粉末；⑩提取少量的总生物碱液，用kphadex LH-20吸附柱色谱鉴定生物碱有效成分。羟丙基葡聚糖凝胶kphadeX LH 一 20可在极性有机溶剂或他们与水组成的混合溶剂中膨润使用。苯环上所带的一 OH越多，极性越强，在kphadex LH-20上滞留的时间越长，碱性物质比酸性或中性物质在kphadex LH-20上滞留的时间更长。故本项目的中野山椒根茎总生物碱能很好地与酸性、中性成分进行分离。按常规胶囊剂制备工艺，取提取物总生物碱90Kg，预胶化淀粉适量，将总生物碱粉碎过80目筛，备用，准确称取处方量的总生物碱及预胶化淀粉，混合均勻，填充于空心胶囊壳中，得100万粒胶囊，每粒含总生物碱90mg。口服，每日2次，每次2粒。实施例2按以下步骤进行总生物碱的提取。①取野山椒根茎药材7Kg作为原料，粉碎，过筛，收集20 - 40目粒度的粗粉，得A 品备用；②向A品中加入50Kg的70%乙醇作为提取溶剂，密闭浸泡野山椒根茎粉碎料粗粉 24h ；以下步骤同实施例1，将70%乙醇提取液和浓缩液混合，放置沉淀，抽滤，滤液回收甲醇后得B品；浓缩得干燥品，用丙酮处理，得即得提取物总生物碱。按常规软胶囊剂制备工艺，取提取物总生物碱90Kg，植物油适量，软胶囊囊材适量，将总生物碱粉碎过80目筛，备用，准确称取处方量的总生物碱，加植物油适量，使总生物碱混悬在植物油中或与植物油混合成稠膏状，采用轧制法，填充于较胶囊中，得100万粒软胶囊，每粒含总生物碱90mg。口服每日2次，每次2粒。
实施例3按以下步骤进行总生物碱的提取。①取野山椒根茎药材7Kg作为原料，粉碎，过筛，收集20 - 40目粒度的粗粉，得A 品备用；②向A品中加入63Kg的80 %乙醇作为提取溶剂，密闭浸泡野山椒根茎粉碎料粗粉 24h ；以下步骤同实施例1，将80%乙醇提取液和浓缩液混合，放置沉淀，抽滤，滤液回收甲醇后得B品；浓缩得干燥品，用丙酮处理，得即得提取物总生物碱。按常规片剂制备工艺，取提取物总生物碱90Kg，淀粉48Kg，微晶纤维素33Kg，羧甲基淀粉钠6. 6Kg，10% PVP乙醇液适量，硬脂酸镁2. Ig，将总生物碱粉碎过80目蹄，备用， 准确称取处方量的总生物碱、淀粉及微晶纤维素，混勻，加10% PVP乙醇液，制软材，将软材用16…20目蹄，制粒，40…80°C干燥，加入处方量的羧甲基淀粉钠及硬脂酸镁，混勻，20目筛整粒，测颗粒含量，确定片重，压片，包衣，得100万片，每片含总生物碱90mg。口服，每日 2次，每次2片。实施例4按以下步骤进行总生物碱的提取。①取野山椒根茎药材7Kg作为原料，粉碎，过筛，收集20 - 40目粒度的粗粉，得A 品备用；②向A品中加入70Kg的80%乙醇作为提取溶剂，密闭浸泡野山椒根茎粉碎料粗粉 24h ；以下步骤同实施例1，将80%乙醇提取液和浓缩液混合，放置沉淀，抽滤，滤液回收甲醇后得B品；浓缩得干燥品，用丙酮处理，得即得提取物总生物碱。按常规颗粒剂制备工艺，取提取物总生物碱180Kg，可溶性淀粉88Kg，糖精钠 2. 2Kg, 10% PVP乙醇液适量，将总生物碱粉碎过80目筛，备用，准确称取处方量的总生物碱、可溶性淀粉及糖精钠，混勻，加10% PVP乙醇液，制软材，将软材用16 - 20目筛，制粒， 40…80°C干燥，20目筛整粒，测颗粒含量，确定每袋装量，得100万袋颗粒，每袋含总生物碱 ISOmgo热水冲服，每日2次，每次1袋。实施例5按以下步骤进行总生物碱的提取。①取野山椒根茎药材7Kg作为原料，粉碎，过筛，收集20 - 40目粒度的粗粉，得A 品备用；②向A品中加入70Kg的80%乙醇作为提取溶剂，密闭浸泡野山椒根茎粉碎料粗粉 24h ；以下步骤同实施例1，将80%乙醇提取液和浓缩液混合，放置沉淀，抽滤，滤液回收甲醇后得B品；按常规喷剂制备工艺，取提取物总生物碱50Kg的滤液，装入包装瓶内或带有喷射头的包装瓶内，每瓶100g，得到500瓶本发明的另一方面是提供用于治疗和(或)预防虫牙、龋齿和牙痛的口腔药用组合物，其包括有效治疗量的野山椒根茎总生物碱以及药学上可接受的载体或赋形剂的口腔药用组合物。
本发明的口腔药用组合物所述的包括野山椒根茎总生物碱以及药学上可接受的载体或赋形剂，将提取物总生物碱按常规制剂工艺制成临床用的喷剂、胶囊剂、软胶囊剂、 片剂、颗粒剂。本发明的临床试验数据如下一、急性经口毒性试验a、受试物——将样品用蒸馏水配制成250mg/ml ；b、试验动物——小鼠20只c、饲料——全价营养鼠料d、试验方法——将小鼠按性别分为两组，每组十只，禁食过夜后(自由饮水)一次经口灌胃，剂量5000mg/Kg，灌胃量0. 4ml/20go染毒后，继续禁食3小时并观察14天，记录各种动物中毒反应和死亡数，依据化学物质急性毒性分级标准判断该受试物的毒性级别。二、多次皮肤刺激性试验a、试验动物——白色家兔四只，均为雄性，体重2kg⑴3kgob、饲料——全价营养兔料；C、试验方法正式实验前Mh，使用弯头剪刀将动物背部脊柱两侧毛剪掉，去毛范围3cmX 3cm。正式实验——取受试物0. 5ml涂抹在动物左侧去毛皮肤上(另一侧作对照)，涂抹面积2. 5cmX2. 5cm，每天涂抹一次，连续涂抹14天。从第二天开始每次涂抹前剪毛，并用清水清除残留受试物，1小时后观察动物皮肤反应，依据《化妆品卫生规范》评分。三、结果a、急性经口毒性试验附表为本发明的喷剂对小鼠急性经口毒性试验结果
权利要求
1.一种野山椒根茎总生物碱的提取方法和口腔药用组合物，是指采用任何方法从植物野山椒根茎(Zanthoxylum simulans Hance)中提取获得的，以生物碱碱类化合物作为主要成分(或主要功效成分)的提取物，其特征在于所述的野山椒根茎总生物碱是脂溶性的， 通过亲脂性有机溶剂，从野山椒根茎中提取获得的碱类化合物之总重量占提取物总重量的 50%…90%，提取物中各种碱类化合物之间的含量比例可以与天然植物的含量比例一致， 也可以不一致，所述的碱类化合物是指具有化学结构，属于碱类化合物以及其它形式的衍生物。
2.根据权利要求1所述的总生物碱的提取方法，其特征在于，用野山椒根茎作原料，采用含水或不含水的亲脂性有机溶剂作提取溶剂，所述的提取及纯化处理过程包括①取野山椒根茎药材，粉碎过筛，收集20…40目粒度的粗粉，得A品备用；②向A品中加入A品总量5⑴10倍量的60%…80%乙醇作为提取溶剂，密闭浸泡野山椒根茎粉碎料粗粉24h ；③在35°C下热回流，用索氏提取器反复提取3- 5次，每次0. 5…3小时，静置、过滤， 合并滤液，澄清，得澄明提取液；④在25°C和条件下，采用平均孔径为0.25pm的膜对的上述澄明提取液进行微滤， 渗透通量为400⑴650L/h · m3 ；⑤再将滤过液依次通过20万分子量超滤及200分子量纳滤，弃去20万分子量以上膜上液及200分子量纳滤膜下液，收集纳滤膜上液，浓缩至相对密度0. 9…1. 40，得浓缩液；⑥将60%…80%乙醇提取液和浓缩液混合，放置沉淀，抽滤，滤液回收甲醇后得B品；⑦kphadexLH-20柱色谱纯化选用kphadex LH-20柱，进行色谱纯化，上样前，柱用两倍柱容积的80%乙醇平衡；⑧洗脱液先用60%乙醇，洗脱，继而用70%乙醇洗脱，再用80%乙醇洗脱，收集80%乙醇洗脱液；⑨浓缩得干燥品，用丙酮处理，得淡黄色粉末；⑩提取少量的总生物碱液，用kphadexLH-20吸附柱色谱鉴定生物碱有效成分。
3.根据权利要求1、2所述的总生物碱的提取方法，其特征在于所述的亲脂性有机溶剂为含水或不含水的甲醇、乙醇、丙酮之一种或几种任意比例的混合物。
4.根据权利要求2所述的总生物碱的提取方法，其特征在于所述的所述的吸附柱色谱中的吸附剂为硅胶或氧化铝，检测的标准品为喹啉。
5.根据权利要求1所述总生物碱的口腔药用组合物，其特征在于，包括野山椒根茎总生物碱以及药学上可接受的载体或赋形剂，将提取物总生物碱按常规制剂工艺制成临床用的喷剂、胶囊剂、软胶囊剂、片剂、颗粒剂。
全文摘要
用野山椒根茎总生物碱的提取方法和口腔药用组合物，是以野山椒根茎为原料，取其提取物制成药剂。本发明具有易于制作、应用；其药物对虫牙、龋齿和牙痛的治疗效果好，痊愈率高，基本不复发；其口腔药物不但预防效果好，还可起到比较好的治疗作用的特点。
文档编号A61K125/00GK102423358SQ20111036574
公开日2012年4月25日 申请日期2011年11月18日 优先权日2011年11月18日
发明者邱宏亮 申请人:邱宏亮