专利名称：将莫西沙星应用于耳的方法和组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及将莫西沙星应用于耳的方法和材料。更具体地，本发明特征为将莫西沙星应用于鼓膜的外、表皮面的方法和材料，用以治疗中耳疾病 。
背景技术：
中耳炎(OM)非常普遍，尤其是在儿童中。OM通常起始于上呼吸道病毒感染，其改变上呼吸道、咽鼓管和中耳的微环境，从而驻留于鼻咽的细菌侵入中耳并聚集于中耳。此侵入可使咽鼓管发炎并产生阻断，干扰中耳通气、压力平衡和耳引流。液体在正常充气中耳腔中聚集且压力增加，产生剧痛。在OM的严重病例中，声音感知结构可受损。持续性或复发性OM可由中耳内结束休眠的细菌引起，所述细菌通过薄生物膜与抗生素隔离。OM目前用抗生素和/或通过经鼓膜中的手术切口插入鼓膜穿刺管来治疗，从而使耳腔引流和减压。抗生素治疗受限于递送途径。抗生素可全身递送，但通常需要高剂量以在中耳内达到治疗水平(即高于最小抑菌浓度)，这种水平通常在明显时滞后达到。抗生素还可通过灌洗递送，或经滴剂进入耳道。这种递送途径可能难以控制，通常不能有效获得中耳内延长的抗生素治疗水平。抗生素还可通过注射递送，或用抗生素涂层材料插入中耳，但这种方法涉及刺穿或切割鼓膜，需要全身麻醉且可能损伤鼓膜。手术插入鼓膜穿刺管也会产生风险，包括鼓膜瘢痕(即鼓膜和中耳组织钙化)、听觉损失、持续性耳漏(即脓液从管内流出)和感染。国立卫生研究院的组成部分-国立失聪和其他沟通障碍研究院(NID⑶)近期启动了 $2，000，000资助计划以支持开发预防和治疗OM的替代策略及新方法。在对申请(RFA-DC-02-002)的要求中，NID⑶阐明(I) OM导致显著儿童发病率且日益影响公众健康；
(2)0M是急诊患者的主要原因；(3)0M是诊所就诊的第二大原因；(4)0M是儿童抗生素处方的主要原因，占门诊抗生素处方的40%以上；(5)0M是儿童听觉损失的主要原因；和(6)OM是儿童进行全身麻醉的主要原因。另外，NID⑶批评使用广谱抗生素治疗OM会造成可使导致OM的3种菌属(肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)、不可分型流感嗜血杆菌(Haemophilus inf luenzae)和卡他莫拉菌(Moraxella catarrhal is))中出现令人担忧的多重耐药菌。因此，许多一线和二线抗生素针对OM和包括肺炎及脑膜炎在内的其他疾病的效果日益降低。NID⑶得出结论“迫切需要开发研究、治疗和预防OM的新方法以1)减少OM发病率和相关费用；和2)保持用于治疗OM和其他常见严重疾病的抗生素功效。”发明概述本发明部分基于发现可配制含莫西沙星的组合物，从而能以液体样形式递送到鼓膜的外、表皮面，随之在递送后，转化成固体样凝胶状态以使所述组合物保持相对鼓膜定位。递送这种组合物到鼓膜可提供治疗中和内耳疾病(例如0M)的更有效方法。
一方面，提供将莫西沙星给予哺乳动物(例如，啮齿动物或人)的方法。所述方法包括将制剂应用于哺乳动物鼓膜表皮面，其中所述制剂包括增粘剂和莫西沙星，其中所述制剂粘度小于100，OOOcps，且其中所述制剂应用于鼓膜后产生的屈服应力足以相对鼓膜维持该制剂。所述增粘剂可以是结冷胶、N-异丙基丙烯酰胺与丙烯酸钠和n-N-烷基丙烯酰胺、聚丙烯酸与聚乙二醇、聚甲基丙烯酸与聚乙二醇、CARBOPOL. (聚丙烯酸)与羟丙基甲基纤维素、纤维醋法酯乳胶、藻酸钠或逆热固性凝胶如泊咯沙姆或泊洛沙胺。莫西沙星可跨鼓膜转移至中耳腔。所述至少一种药物试剂可包括抗生素且所述制剂还可包括抗炎剂、麻醉剂、粘附促进剂、渗透或穿透增强剂、生物粘附剂、吸湿剂、耳垢软化剂(ear war softener )或防腐剂。另一方面，采用的药盒包括制剂和指示所示制剂应用于鼓膜的说明书。这种制剂包括增粘剂和莫西沙星，其中所述制剂粘度小于100，OOOcps，且其中所述制剂应用于鼓膜后产生的屈服应力足以相对鼓膜维持该制剂。
还提供了包括应用于鼓膜外表面的制剂的啮齿动物(例如南美栗鼠)，其中所述制剂包括增粘剂和莫西沙星，其中所述制剂粘度小于100，OOOcps，且其中所述制剂产生的屈服应力足以相对鼓膜维持该制剂。除非另有定义，本文所用全部技术和科学术语具有与发明所属领域普通技术人员通常理解相同的意义。尽管与本文所述类似或等同的方法和材料可用于实施本发明，合适的方法和材料描述于下。本文提及的所有发表物、专利申请、专利和其他参考文献通过引用全文纳入本文。发生冲突时，以本说明书为准，包括定义。另外，材料、方法和实施例仅用于阐明而不意在限制。发明的其他特征和优点通过以下详述和权利要求将显而易见。
图I显示体外释放的莫西沙星含量的累积百分比。图2显示从2个大泡内(intrabulla)剂量水平去卷积的响应函数(N=9)。图3显示从大泡内高剂量水平去卷积的响应函数(N=3)。图4A显示组I和组2在外耳给药1%莫西胶(moxigel)后MEF中的莫西沙星浓度。图4B显示组3和组4在外耳给药1%莫西胶后MEF中的莫西沙星浓度。图5显示外耳给药1%莫西胶后MEF中的莫西沙星浓度(均值，SD) (N=23)。图6显示组I和组2在外耳给药3%莫西胶后MEF中的莫西沙星浓度。图7显示外耳给药3%莫西胶后MEF中的莫西沙星浓度(均值，SD) (N=13)。图8显示外耳给药1%和3%莫西胶后MEF中的莫西沙星浓度(均值，SD)。图9显不1%和3%莫西胶的Cmax和Tmax比较。图10显示外耳给药1%莫西胶后MEF中递送的累积量(N=23)。图IlA显示外耳给药1%莫西胶后MEF中的输入率。第I组，N=6;第2组，N=6。图IlB显示外耳给药1%莫西胶后MEF中的输入率。第3组，N=6;第4组，N=5。图12显示外耳给药3%莫西胶后MEF中递送的累积量(N=13)。图13显示外耳给药3%莫西胶后MEF中的输入率。第I组，N=6;第2组，N=7。图14显示外耳给药1%和3%莫西胶后MEF中的输入率。
图15显示外耳给药1%莫西胶后达到中耳液内目标浓度的时间和高于该浓度的持续时间。图16显示外耳给药3%莫西胶后达到中耳液内目标浓度的时间和高于该浓度的持续时间。图17显示外耳给药后3天内MEF中的AUIC。图18显示外耳给药后MEF中的Cmax/MIC。图19A显示50%IPM处理(N=9)后的MEF莫西沙星浓度(均值，SEM);图19B显示同一数据的对数形式。发明详述本发明一般提供使用含莫西沙星和一种或多种增粘剂的组合物将莫西沙星应用于耳的方法。特定配制组合物，从而其能以液体样状态即可流动形式递送到鼓膜的外、表皮面。然而，所述组合物在给予后转化成固体样状态，从而该组合物保持与鼓膜接触。因此，所述组合物保持相对鼓膜定位，莫西沙星可跨鼓膜转移到例如中耳腔，提供治疗中耳和内耳疾病(例如0M)的更有效方法。合适组合物还可包括其他组成，例如用于促进制剂粘附鼓膜和/或增加鼓膜渗透性从而提高莫西沙星穿透。与中耳炎相关的常见病原体包括肺炎链球菌、流感嗜血杆菌和卡他莫拉菌。这些生物对莫西沙星敏感；MIC90值分别为O. 13,0. 06和O. 06 μ g/ml。如本领域技术人员所理解，MIC90指抑制_生物生长所需的最小抑菌浓度。使用本文所述经鼓室递送莫西沙星的治疗目的是获得比MIC90值高>10倍(例如大于约O. 6 μ g/ml ;约O. 6-约I. 3 μ g/ml)的中耳液水平并维持此水平>24小时。这些目标浓度用本文所述莫西沙星凝胶制剂通过单次应用获得。本发明组合物在25° C的粘度小于100，000厘泊(cps)。粘度指组合物的流体阻力。体积为O. 5mL的组合物可于25。C通过合理受力而不需机械装置辅助在少于I分钟时间内穿过连接Ι-mL结核菌素注射器的19号针,其粘度通常小于100，OOOcps。可用粘度计(例如来自博勒菲(BiOokfield))以市售粘度标准测定组合物的粘度。本发明组合物还具有足以相对鼓膜维持制剂的最小屈服应力。屈服应力指应用于固体材料时引起固体材料显示持续变形而压力没有进一步增加的液体样表现的力量。本发明组合物的最小屈服应力取决于应用凝胶的厚度，但不依赖于该凝胶的几何形状和环境温度。如本文所用，组合物的最小屈服应力涉及厚度为4_且密度为lg/L的应用凝胶。屈服应力(O J表示为Otl=Pgh,其中P是密度，g是重力加速度,和h是层厚度。通常,最小屈服应力约为39帕斯卡(Pa)。本文所述方法还可用于估计组合物是否具有足以相对鼓膜维持的屈服应力。例如，测试组合物可给予动物如南美栗鼠的耳朵，可监控动物耳朵以测定该组合物是否转化成更类似固体状态并相对鼓膜维持。参见例如本文的实施例部分。增粘剂本文所用的增粘剂指增加液体粘度的聚合物或其他化学部分。本发明组合物包括合适的增粘剂时，允许该组合物在接触鼓膜后于25° C从液体样状态(例如可流动)转化成固体样状态(例如凝胶)，且可为非生物可降解，即不由哺乳动物中天然存在的化学物或酶分解，或为生物可降解。组合物包括在25° C有效产生小于100，OOOcps (例如，小于90，000,60, 000,30, 000,20, 000或10，OOOcps)的组合物粘度的增粘剂量，且一般在应用于鼓膜后的最小屈服应力为39Pa。通常，组合物包括O. 05-50%的增粘剂(例如，O. 15-25、5-45、10-40、12-37、15-35、17-33 或 20-30% 的增粘剂)。示例性增粘剂包括结冷胶(GELR1 TE15*或 KELCOGEN R0, CARBOPOL
940 (聚丙烯酸)与羟丙基甲基纤维素(HPMC)，N-异丙基丙烯酰胺(NiPAAm)与丙烯酸钠和n-N-烷基丙烯酰胺，聚丙烯酸与聚乙二醇(PEG)或聚甲基丙烯酸与PEG，纤维醋法酯乳胶(CAP )，藻酸钠，和非离子型表面活性剂如泊咯沙姆(P L U R O NIC )及洛泊沙胺(TETRONIC )可逆温度依赖性凝胶体系。结冷胶是伊乐藻假单胞菌(Pseudomonaselodea)分泌的天然聚合物，阴离子脱乙酰胞外多糖。所述四糖重复单元由一个a _L_鼠李糖、一个β-D-葡萄糖醛酸和两个β-D-葡萄糖部分组成。结冷胶的原位成胶机制是阳离子诱导(例如，存在钙离子)和温度依赖性(例如，生理温度)。结冷胶是热可逆的。CARBOPOL 940与HPMC以pH依赖性方式原位成胶。CARBOPOL 是成胶剂且HPMC用于提高凝胶粘度。NiPAAm与丙烯酸钠和n-N-烷基丙烯酰胺是可经历基于温度的可逆性溶胶-凝胶转化的三元共聚物水凝胶。丙烯酸钠和n-N-烷基丙烯酰胺用于改良水凝胶性质，具体为转变温度。认为聚丙烯酸与PEG或聚甲基丙烯酸与PEG基于氢键成胶。聚丙烯酸可溶于乙醇溶液且在注射后，乙醇扩散导致聚合物沉淀和溶液成胶。CAP是以pH依赖性方式成胶的纳米颗粒体系。活性化合物(莫西沙星)可部分吸附于聚合物颗粒表面。藻酸钠在钙或其他多价离子存在时成胶。非离子型表面活性剂如泊咯沙姆和洛泊沙胺特别有用。泊咯沙姆在制药领域熟知且描述于例如Polymers for Controlled Drug Delivery (《用于受控药物递送的聚合物》)，第 10 章(Peter J. Tarcha 编辑，1990)的 Irving R. Schmolka, Poloxamers in thePharmaceutical Industry (《制药工业中的泊咯沙姆》)。泊咯沙姆是三嵌段共聚物，因为它们由2种不同聚合物嵌段(即亲水性聚氧乙烯嵌段和疏水性聚氧丙烯嵌段)构成，配置成聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯的三嵌段。泊咯沙姆是一类具有环氧丙烷嵌段疏水物和环氧乙烷亲水物的嵌段共聚物表面活性剂。泊咯沙姆市售可得(例如，PLURONIC 多元醇来自BASF公司(BASF Corporation))。另外，泊咯沙姆可通过已知技术合成。鉴于泊咯沙姆的非生物降解性、其水溶性和其相对迅速的药物释放动力学，先前认为泊咯沙姆缺乏给予药物试剂的实用性(参见例如美国专利号6，201，072 )。然而，如本文所述，泊咯沙姆共有宜应用制剂于鼓膜的性质泊咯沙姆的水制剂显示逆热凝胶化或逆热固化。泊咯沙姆水制剂加热至超过其凝胶化温度时，其粘度增加并转化成凝胶。泊咯沙姆水制剂冷却到低于其凝胶化温度时，其粘度降低并转化成液体。凝胶和液体间的转变不涉及制剂化学组成的变化，且可逆并可重复。泊咯沙姆水制剂的凝胶-液体转变温度可由本领域普通技术人员用常规实验(例如，通过操控泊咯沙姆浓度、PH和制剂中存在其他成分)调整。在一些实施方式中，组合物具有大于环境温度且小于或等于鼓膜温度的凝胶化温度。这种组合物可通过个体耳道作为液体方便地应用且随后可相对鼓膜转化成凝胶，从而保持制剂中的莫西沙星紧邻鼓膜。莫西沙星本文所述组合物还包含莫西沙星或其盐。莫西沙星是具有化学式C21H24FN3O4的第三代合成氟喹诺酮。莫西沙星结合并抑制细菌酶DNA旋转酶(拓扑异构酶II)和拓扑异构酶IV，导致敏感细菌种类中DNA复制和修复的抑制及最终的细胞死亡。本文所述组合物中莫西沙星或其盐含量可为约O. 1%-约50% (例如，约O. 25%-约45%;约O. 5%-约25%;约O. 75%-约10%;约1%-约5%;或约1%-约3%)。莫西沙星盐包括例如但不限于，盐酸、硫酸、乙酸、乳酸、氢氧化钠和氢氧化钾。莫西凝胶组合物的其他组成在一些实施方式中，本文所述组合物包括增粘剂和莫西沙星以外的一种或多种化合物。例如，组合物可包括一种或多种药物试剂，包括例如肾上腺皮质激素(如皮质类固醇、类固醇)、镇痛剂、辅助镇痛剂、镇痛-麻醉剂、麻醉剂、莫西沙星以外的抗生素、抗细菌剂、抗感染剂、抗生素治疗佐剂，解毒剂、止吐剂、抗真菌剂、抗炎剂、抗眩晕剂、抗病毒剂、生物反应调节剂、细胞毒素、诊断用辅助药、免疫剂、免疫调节剂、蛋白、肽、和其他可用于治疗耳病的试剂。除了莫西沙星，本文所述组合物可包括一种或多种药物试剂。例如，为抗击细菌感 染、为减少组织炎症和为缓解刺激，组合物可包含莫西沙星、抗炎剂、和麻醉剂或镇痛剂。本领域技术人员可鉴定药物试剂并在需要时组合它们以获得所需效果。以下仅提供可能药物试剂的代表性列表。示例性肾上腺皮质激素包括倍他米松、可的松、地塞米松、氢化可的松、甲基强的松龙、帕拉米松、泼尼松龙、强的松和去炎松。示例性镇痛剂包括对乙酰氨基酚、阿司匹林、丁丙诺啡、布他比妥、布托啡诺、可待因、地佐辛、二氟尼柳、二氢可待因、依托度酸、非诺洛芬、芬太尼、氟喹氨苯酯、氢可酮、氢吗啡酮、布洛芬、酮基布洛芬、酮咯酸、左啡诺、水杨酸镁、甲氯芬那酸、甲灭酸、哌替啶、眠尔通、美沙酮、左美丙嗪、吗啡、纳布啡、萘普生、阿片、氧可酮、羟吗啡酮、镇痛新、苯巴比妥、丙氧芬、双水杨酯、和水杨酸钠。一种示例性辅助镇痛剂是咖啡因。示例性麻醉剂包括阿替卡因-肾上腺素、布比卡因、氯普鲁卡因、依替卡因、克他命、利多卡因、甲哌卡因、美索比妥、丙胺卡因、异丙酚、丙氧卡因、丁卡因和硫喷妥钠。一种示例性镇痛-麻醉剂是安替比林(antipiyrne)-苯坐卡因。示例性抗生素(除了莫西沙星以外)、抗菌剂和抗感染剂包括磺胺类药(例如，磺胺、磺胺嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺异恶唑、对氨基苯甲酸或磺胺醋酰)，甲氧苄氨嘧啶-磺胺甲恶唑，喹诺酮(例如，环丙沙星、氧氟沙星或萘啶酸)，内酰胺类抗生素如青霉素或头孢菌素，氨基糖甙类(例如，卡那霉素、妥布霉素、庆大霉素C、阿米卡星、新霉素、奈替米星、链霉素或万古霉素)、四环素、氣霉素和大环内酷类(例如，红霉素、克拉霉素或阿奇霉素)。合适青霉素的非限制性示例包括青霉素G、青霉素V、甲氧两林、苯唑两林、萘夫两林、氨苄青霉素和阿莫两林。合适头孢菌素的非限制性示例包括先锋霉素、头孢地尼、头孢唑啉、头孢氨苄、头孢羟氨苄(cefadroxal)、头孢羟唑、头孢两丁、头孢克洛、头孢尼两、头孢乐坦(cefoletan)、头孢噻厢、头孢唑厢、头孢曲松钠，头孢托仑和头孢批厢。用于治疗OM的示例性抗生素包括青霉素如阿莫两林和阿莫两林-克拉维酸(AUGMHNTIN );基于磺胺类的组合如红霉素-磺胺异恶唑(Pediazole)、甲氧苄氨嘧啶-磺胺甲恶唑(BACTRIM ,SEPTRA );大环内酯类/内酯类如阿奇霉素(ZITHROMAX )或克拉霉素(BIAXIN );第二代头孢菌素如头孢克洛(CECLOR )、头孢丙烯(CEFZIL )、头孢呋辛酯(CEFTIN )、或氯碳头孢(LORABK) );和第三代头孢菌素如头孢地尼(OMNICEF )、头孢克肟(SUPRAX )、头孢泊肟酯(VANTIN )、头孢布烯(CEDAX )、头孢托仑(SPECTRACEF )、和头孢曲松钠(ROCEPHIN )。合适的止吐剂包括安其敏、氯丙嗪、赛克利嗪、乘晕宁、苯海拉明、敌芬尼朵、多潘立酮、屈大麻酚、氟哌啶醇、羟嗪、氯苯甲嗪、甲氧氯普胺、大麻隆、昂丹司琼、奋乃静、普鲁氯嗪、异丙嗪、莨菪碱、硫乙拉嗪、三氟丙嗪、和曲美苄胺。示例性抗真菌剂包括两性霉素B、克清诺、克霉唑、氟康唑、氟胞嘧啶、灰黄霉素、酮康唑、咪康唑、和碘化钾。示例性抗炎剂包括醋酸铝、阿司匹林、倍他米松、丁苯羟酸、塞来昔布、地塞米松、双氯芬酸、依托度酸、氟比洛芬、氢化可的松、吲哚美辛、水杨酸镁、萘普生、泼尼松龙、罗非昔布、双水杨酯、苏灵大、和去炎松。示例性合适抗眩晕剂包括颠茄、乘晕宁、苯海拉明、敌芬尼朵、氯苯甲嗪、异丙嗪、和莨菪碱。示例 性合适抗病毒剂包括阿昔洛韦、金刚烷胺、地拉韦啶、地达诺新、依法韦仑、膦甲酸钠、更昔洛韦、茚地那韦、奈非那韦、病毒唑、利托那韦、扎两他滨、和齐多夫定。示例性生物反应调节剂包括阿地白介素、干扰素a-2a、干扰素a _2b、干扰素a_nl、干扰素α _η3、干扰素Y和左旋咪唑。示例性细胞毒性药物包括鬼白毒素和足叶草。示例性免疫剂包括流感病毒疫苗、多价肺炎球菌疫苗和免疫球蛋白。示例性免疫调节剂是干扰素Y。其他适用于发明的药物试剂包括倍他司汀(例如，用于治疗梅尼埃病中出现的恶心、头晕和耳鸣)、普鲁氯嗪和东莨菪碱。或者或另外，组合物可包括一种或多种下列化合物溶剂或稀释剂如盐水，生物粘附剂，渗透或穿透增强剂，吸湿剂，耳垢软化剂，防腐剂(例如抗氧化剂)或其他添加剂。这种化合物可以O. 01%-99%的量存在于组合物中(例如，O. 01-1，O. 01-10，O. 01-40，O. 01-60，O.01-80，O. 5-10，O. 5-40，O. 5-60, O. 5-80, 1-10, 1-40, 1-60, 1-80, 5-10, 5-40, 5-60, 5-80, 10-20，10-40，10-60，10-80，20-30，30-40，40-50，50-60，60-70，或 70-80%)。例如，组合物可包括一种或多种增粘剂(如PLURONIC F-127和CARBOPOL )，莫西沙星，和一种或多种渗透或穿透增强剂(如维生素E)。在其他实施方式中，组合物可包括一种或多种增粘剂，莫西沙星，和一种或多种耳垢软化剂。组合物还可包括包括一种或多种增粘剂，莫西沙星，一种或多种吸湿剂，和一种或多种防腐剂。应注意某些试剂可在制剂内履行不同作用。例如，CARBOPOL 可根据其浓度起增粘剂作用或作为生物粘附剂。维生素E可起渗透或穿透增强剂、防腐剂和抗氧化剂作用。生物粘附剂有利于组合物附着鼓膜。合适生物粘附剂包括水解胶体如阿拉伯树胶；琼脂；海藻酸盐(例如，海藻酸和藻酸钠)；CABOPOL ;羧甲基纤维素钠；羧甲基纤维素钙；右旋糖酐；明胶；瓜尔豆胶；肝素；透明质酸；羟乙基纤维素；刺梧桐胶；甲基纤维素；果胶；聚丙烯酸；聚乙二醇；聚-N-乙烯基-2-吡咯烷酮；和黄芪胶。渗透或穿透增强剂增加鼓膜的渗透性以使其对莫西沙星更透化。示例性渗透或穿透增强剂包括醇类(例如，乙醇或异丙醇)；多元醇(例如，正烷醇、柠檬烯、萜烯、二氧戊环、丙二醇、乙二醇、和甘油)；亚砜(例如，二甲亚砜、二甲基甲酰胺、十二烷基甲基亚砜、和二甲基乙酰胺)；酯(例如，肉豆蘧酸异丙酯/棕榈酸异丙酯，乙酸乙酯，乙酸丁酯，丙酸甲酯，和辛酸/癸酸三酸甘油酯)；酮；酰胺(例如，乙酰胺)；油酸盐(例如，三油精)；表面活性剂(例如，十二醇硫酸钠)；链烷酸(例如，辛酸)；内酰胺(例如，氮酮)；烷醇(例如，油醇)；二烷基氨基乙酸酯；多不饱和脂肪酸(例如，亚麻油酸、α-亚麻酸、和花生四烯酸)；油酸；鱼肝油；薄荷醇衍生物(例如，I-薄荷醇)；鲨烯；衍生自线性饱和脂肪醇的甘油单乙醚；黄酮(例如，洋甘菊芹菜素、木犀草素、和芹菜素7-0-β-葡萄糖苷)；维生素E (α-生育酚)和其酯及类似物；和Senkyu(川弯(Ligustici Chuanxiong Rhizome))醚提取物。吸湿剂如果糖、邻苯二甲酸和山梨醇，促进液体从中耳跨鼓膜移入凝胶基质。吸湿剂可有助于缓解与中耳积液和增压相关的疼痛，能使中耳内的莫西沙星浓缩成更小液体体积。耳垢软化剂(例如，多库酯、橄榄油、碳酸氢钠、尿素或过氧化氢)促进鼓膜与组合物间的接触。抗氧化剂如抗坏血酸和苯甲酸或其他防腐剂能用于延长制剂在存储期间的保存期。将组合物应用于鼓膜的方法发明组合物可经外耳道应用于鼓膜表皮面，以例如治疗中耳或内耳疾病(如0M)。发明组合物还可预防性应用(例如，用于防止中耳或内耳疾病发展)。组合物可靶向任何鼓膜部分，包括鼓膜下部即紧张部(pars tensa),或鼓膜上部即松弛部(pars flaccida)。成人中，鼓膜直径约为9-10mm，厚度为30-230 μ m(平均约100 μ m)。松弛部构成人和动物如猫、豚鼠及南美栗鼠中少于3%的鼓膜面积。在其他哺乳动物(例如，沙鼠、兔、大鼠和小鼠)中，松弛部构成10%-25%的鼓膜面积。薄表皮层(约15-30 μ m厚)覆盖人鼓膜，而厚表皮层(约75-150 μ m厚)覆盖其他人体区域。5-10层细胞覆盖松弛部，3-5层细胞覆盖紧张部。因 此，紧张部通常比鼓膜其他部分薄，可能对莫西沙星或另一药物试剂渗透性更高。本领域技术人员应理解紧张部的中间部分提供响应声音的主动振动区。可采用本领域已知任何方法将发明组合物应用于鼓膜。例如，组合物可用流体分配装置应用于鼓膜。分配装置通常具有与导管联接的储器，所述导管直接或间接接受来自储器的可流动组合物并将该组合物导入分配出口。普通技术人员可按常规从连接挠性管的注射器制作简单的分配装置。分配装置还可通过用流体导管取代鼓膜穿刺装置如CDTe窥器(美国怀俄明州凯斯普尔的沃尔斯精密仪器公司LLC (Walls Precision InstrumentsLLC))的针来制作。分配装置可连接气动或诊断耳镜头(例如，来自美国纽约州斯卡尼阿特勒斯市的Welch Allyn )以建立将组合物应用于鼓膜的精确平台。根据组合物和中耳或内耳疾病，可能需要在莫西沙星跨鼓膜转移后从耳中移除该组合物。这可用棉签或镊子手工完成。注射器或球还可用于注射水、盐水或其他生物相容水溶液以软化、溶解和/或排出制剂。在其他实施方式中，组合物可在一段时间后简单地脱离鼓膜并从耳中排出(例如在锻炼或沐浴中)。或者，可生物降解制剂可能不需从耳中移除。制品本文所述组合物可联合包装材料并作为制品或药盒出售。熟知生产制品的组分和方法。制品可联合一种或多种本文所述组合物。另外，制品还可包括一种或多种药物试剂、无菌水或盐水、药物载体、缓冲剂或流体分配装置。描述组合物如何递送至耳以治疗内耳或中耳疾病的标注或说明可包括在这类药盒中。组合物可以足以用于单次或多次给药的量并以预包装形式提供。本发明将通过下列实施例进一步描述，所述实施例不对权利要求所述的发明范围构成限制。
实施例实施例I-化学品和试剂盐酸莫西沙星粉末由爱尔康实验室公司(Alcon Labs, Inc.)(德克萨斯州沃思堡市)提供。普朗尼克(PluiOnic)F-127、盐酸环丙沙星、牛血清白蛋白、甲酸、肉豆蘧酸异丙酯、和磷酸二氢铵购自西格玛-奥德里奇公司(Sigma-Aldrich，密苏里州圣路易斯)。购买下列化学品并按收到的原样使用乙腈和甲醇来自博迪克和杰克逊实验室(Burdick andJackson Laboratories,密歇根州马斯基根)或飞世尔科技(Fisher Scientific,新泽西州费尔劳恩)；氯化钠来自马林克罗公司(Mailinckrodt, Inc.,肯塔基州巴黎)；磷酸氢二钠七水合物来自美国生化(United States Biochemical,俄亥俄州克利夫兰)；磷酸二氢钠来自飞世尔科技(新泽西州费尔劳恩)；丙二醇来自明尼苏达大学(明尼苏达州明尼阿波里斯);PEG 4000和PEG 6000来自鲁格化学公司(Ruger Chemical Co, Inc.，新泽西州林登)。溶剂是HPLC级，所有其他化学品是分析级。实施例2-微诱析探针采用CMA/20微透析探针(马萨诸塞州北切姆斯福德的CMA/微透析公司(CMA/MiciOdialysis))获得中耳液透析液样品。探针的聚碳酸酯膜具有20，000道尔顿的截留分 子量。探针的透析液膜长度为10mm。探针膜的外直径为O. 5mm。实施例3-人工中耳液(AMEF)咽鼓管阻塞的非感染南美栗鼠中积聚的浆液性中耳液(MEF)体积变化很大。就微透析积累足够MEF的成功率显著低于50%。这是由于需要配制模拟MEF的人工中耳液(AMEF)。对于外耳的凝胶制剂给药，磷酸盐缓冲盐水溶液(PBS，O. 015M磷酸盐，pH=7. 4)与3%牛血清白蛋白在探针临植入前滴注入南美栗鼠中耳大泡。实施例4-确认环丙沙星作为莫西沙星的反向透析校准物环丙沙星是莫西沙星的化学类似物，且两者都是喹诺酮类抗生素。环丙沙星具有与莫西沙星有点类似的物理和化学性质。因此，它选定为潜在的反向透析校准物。AMEF研究的体外同步损失以O. 4,0. 5,0. 6和O. 7μ I/分钟的灌注流速进行，透析液收集间隔为10分钟。透析液包含I μ g/ml的莫西沙星和环丙沙星。通过从整体中减去透析液与灌注液的浓度之比来测定各化合物损失。发现所有4个流速中莫西沙星的体外损失与环丙沙星没有显著差异，确认环丙沙星作为微透析校准物的效用。实施例5-测定人工和培养南美栗鼠中耳液内的游离(未结合)莫西沙星部分先前的内部研究显示人工中耳液(AMEF)在滴注入南美栗鼠中耳后18_24小时开始类似天然MEF并支持细菌生长。为了测定游离部分，从前一天滴注AMEF后的中耳收获液体，此液体称为培养中耳液(MEF )。通过超滤测定AMEF和頂EF中莫西沙星的蛋白结合。研究在生理温度(37° C)进行，名义浓度为220和492 μ g/ml。加入的120 μ I AMEF或MEF等分溶液置于Microcon 离心装置(马萨诸塞州贝德福德的密理博公司(Millipore Corporation))的顶部,用ClayAdams Triac 0200吊桶式转头离心机(新泽西州派西派尼市的BD公司(Becton, Dickinsonand Company))以2000Xg离心15-20分钟。为检测莫西沙星与Microcon 装置的非特异性结合程度(如果有)，在磷酸盐缓冲盐水中加入同一药物浓度并类似MEF等分样品经该装置离心。超滤液中浓度与MEF中总浓度的之比计算为莫西沙星的游离部分。实施例6-制剂开发基础制剂选择Pluronic F-127 (PF-127)作为形成热固性凝胶基底的聚合物。PF-127在较低温度溶于水形成溶液且当温度增加高于溶胶-凝胶转变温度时成胶。PF-127溶液在室温流动很快且遵循其所应用的表面轮廓。研究的初始制剂由溶于水的20%(w/v)PF-127构成。PF-127溶液由冷法制备。将称取量的PF-127缓慢加入到所需量的冷水(重量)中，温和搅拌并4° C保存过夜以使聚合物充分水合和溶解。转变温度测定将少量等分(100-200 μ I)最终制剂移入微量离心管。然后，管在水浴中室温孵育。水浴温度逐步增加。微量滴定管中凝胶溶液的弯液面在90°或更大角度倾斜时不扭曲，则认为发生凝胶化。发生凝胶化的2个温度值取作转变温度。基础制剂(20%PF-127)的转变温度为22-23° C。最终制剂的目标转变温度为28° C-32° C。添加剂测试几个添加剂以评价其对凝胶转变温度和其他性质的影响-这些包括乙醇、丙二醇、聚乙二醇4000 (PEG 4000) ,PEG 6000、和肉豆蘧酸异丙酯(IPM)。仅发现PEG 6000和乙醇显著提高凝胶基底的转变温度。表I和2显示PEG 6000和乙醇对20%PF-127溶液转变温度的影响。表I.含不同PEG 6000浓度的20%PF_127溶液的转变温度
权利要求
1.一种将莫西沙星给予哺乳动物中耳的方法，所述方法包括将制剂应用于所述哺乳动物鼓膜表皮面，其中所述制剂为水性且包括增粘剂和莫西沙星，其中所述制剂可流动且具有小于100，OOOcps的粘度，且其中所述制剂应用于所述鼓膜后形成凝胶，所述凝胶具有的屈服应力足以相对所述鼓膜维持所述制剂，其中所述莫西沙星跨所述鼓膜转移至中耳腔。
2.如权利要求I所述的方法，其特征在于，所述增粘剂是结冷胶。
3.如权利要求I所述的方法，其特征在于，所述增粘剂是N-异丙基丙烯酰胺与丙烯酸钠和n-N-烧基丙烯酰胺。
4.如权利要求I所述的方法，其特征在于，所述增粘剂是聚丙烯酸与聚乙二醇。
5.如权利要求I所述的方法，其特征在于，所述增粘剂是聚甲基丙烯酸与聚乙二醇。
6.如权利要求I所述的方法，其特征在于，所述增粘剂是聚丙烯酸与羟丙基甲基纤维素。
7.如权利要求I所述的方法，其特征在于，所述增粘剂是纤维醋法酯乳胶。
8.如权利要求I所述的方法，其特征在于，所述增粘剂是藻酸钠。
9.如权利要求I所述的方法，其特征在于，所述增粘剂是逆热固性凝胶。
10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述增粘剂是泊咯沙姆。
11.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述增粘剂是泊洛沙胺。
12.如权利要求I所述的方法，其特征在于，所述制剂还包括抗炎剂、麻醉剂、粘附促进齐U、渗透或穿透增强剂、生物粘附剂、吸湿剂、耳垢软化剂或防腐剂。
13.如权利要求I所述的方法，其特征在于，所述哺乳动物是人。
14.如权利要求I所述的方法，其特征在于，所述哺乳动物是啮齿动物。
15.如权利要求I所述的方法，其特征在于，所述莫西沙星以足以维持大于约O.6μ g/ml水平至少约24小时的量递送至中耳液。
16.一种包括制剂和指示所述制剂应用于鼓膜的说明书的药盒，其特征在于，所述制剂为水性且包括增粘剂和莫西沙星或其盐，其中所述制剂可流动且具有小于100，OOOcps的粘度，且其中所述制剂应用于所述鼓膜后形成凝胶，所述凝胶具有的屈服应力足以相对所述鼓膜维持所述制剂，其中所述制剂可使莫西沙星跨所述鼓膜转移至中耳腔。
17.如权利要求16所述的药盒，其特征在于，所述增粘剂是结冷胶。
18.如权利要求16所述的药盒，其特征在于，所述增粘剂是N-异丙基丙烯酰胺与丙烯酸钠和n-N-烷基丙烯酰胺。
19.如权利要求16所述的药盒，其特征在于，所述增粘剂是聚丙烯酸与聚乙二醇。
20.如权利要求16所述的药盒，其特征在于，所述增粘剂是聚甲基丙烯酸与聚乙二醇。
21.如权利要求16所述的药盒，其特征在于，所述增粘剂是CARBOPOL (聚丙烯酸)与羟丙基甲基纤维素。
22.如权利要求16所述的药盒，其特征在于，所述增粘剂是纤维醋法酯乳胶。
23.如权利要求16所述的药盒，其特征在于，所述增粘剂是藻酸钠。
24.如权利要求16所述的药盒，其特征在于，所述增粘剂是逆热固性凝胶。
25.如权利要求24所述的药盒，其特征在于，所述增粘剂是泊咯沙姆。
26.如权利要求24所述的药盒，其特征在于，所述增粘剂是泊洛沙胺。
27.如权利要求16所述的药盒，其特征在于，所述药盒还包括抗炎剂、麻醉剂、粘附促进剂 、渗透或穿透增强剂、生物粘附剂、吸湿剂、耳垢软化剂或防腐剂。
全文摘要
描述了将莫西沙星应用于耳的有用方法和材料。所述方法包括将含至少一种增粘剂和莫西沙星或其盐的组合物经耳道递送至鼓膜表皮面。所述组合物以可流动形式递送至鼓膜，且递送至鼓膜后变得足够粘，从而莫西沙星相对鼓膜定位。这种组合物可用于预防性和/或治疗性处理中耳和内耳病症，包括中耳炎。
文档编号A61K31/437GK102791270SQ201180012764
公开日2012年11月21日 申请日期2011年1月7日 优先权日2010年1月7日
发明者B·W·Y·张, G·M·沃尔, R·J·索恰克 申请人:明尼苏达大学董事会, 诺华有限公司