专利名称：用于治疗德戈斯病的方法和组合物的制作方法
技术领域：
本发明领域为医药、免疫学、分子生物学和蛋白质化学。 背景
德戈斯病(Degos，disease，也被称为Kohlmeier病和恶性萎缩性丘疹病(MAP))，是一种特征为在小血管到大血管中的血栓形成的罕见的血管病变(大约200例报告病例)。参见例如 Lester 和 Rapini (2009) Curr Opin Gastroenterol 25:66-73 及 Englert 等,(1984) Br Med J 576。尽管通常认为其具有未知病因，但是德戈斯病与病毒感染(例如B19细小病毒和HIV)和诸如红斑狼疮(LE)、皮肌炎和原发性抗磷脂综合征(APS)等自身免疫性疾病相关。参见例如，Crowson 等，(2002) J Cutan Pathol 29:596-601 ；Englert等，(1984),见上；Heymann (2009) J Am AcacI Dermatol 61:505-506 Durie 等,(1969)Arch Dermatol 100(5) :575-581 ；Tsao 等，(1997) J Am AcacI Dermatol 36:317-319 和Requena等，(1998) J Am Acad Dermatol迪:852-856。德戈斯病的一些形式可以是家族性的。参见例如，Katz 等，(1997) J Am AcacI Dermatol 37:480-484 和 Penault 等,(2004)Ann Derma to I Venereol 131:989_993。德戈斯病可以发生在任何年龄的患者中，然而其似乎以大约为3比I的比率相对于女人优先影响男人。参见例如，Katz等，(1997)，见上；Torrelo 等，(2002) Br J Derma to I 146:916-918 和 Wi I son 等,(2007) Pediatr Derma to I24(1):18-24。德戈斯病可以表现为良性的纯粹皮肤型，或作为侵袭性的多器官全身型，后者通常在诊断后一至十二年内致命。Scheinfeld (2007) Clin Exp Derm 迎:483_487。皮肤性德戈斯病的表型标志是在皮肤上出现一个或多个红斑状微红颜色的丘疹，所述丘疹结白色疤痕，中心萎缩。几乎所有全身型的德戈斯病的患者都出现死亡，所述患者在全身累及后的平均寿命预期为大约两到三年。参见例如，Scheinfeld (2007)，见上。患者通常死于有或没有脓毒性并发症的肠穿孔；然而，死亡或者可以源自肠梗塞、心肺衰竭和/或神经梗塞和出血。同样亦参见 High 等，(2004) J Am AcacI Dermatol 50 (6) : 895-899。尚未确定德戈斯病的标准医学治疗。许多治疗剂在治疗这种疾病中只有边缘的和/或不一致的成功。参见例如Scheinfeld (2007),见上。例如,一些德戈斯病患者受益于静脉注射免疫球蛋白治疗，但目前似乎没有办法来预测哪些患者会响应所述疗法，参见例如，Dyrsen 等，(2008) J Cutan Pathol 35 (增刊 I) : 20-25 Zhu 等,(2007) Br J Dermatol157(1) :206-207 和 De fceucker 等，(2008) Acta Clin Belg 63(2) :99-102 (摘要)。
鉴于前述，很明显需要新的途径和更好的方法来治疗德戈斯病患者。简沭
本公开内容至少部分地基于本发明人的以下发现，所述发现为补体抑制剂(即人源化抗C5抗体依库珠单抗)在治疗罹患全身型德戈斯病的患者方面高度有效。因此，本公开内容特征在于可用于预防和治疗德戈斯病的多种组合物和方法。在一个方面，本公开内容提供了用于治疗罹患德戈斯病的患者的方法，该方法包括给予罹患德戈斯病的患者足够治疗该疾病的量的补体抑制剂。在另一方面，本公开内容特征在于用于治疗罹患德戈斯病的患者的方法，所述方法包括以足够维持患者的降低的补体活性水平的量和频率，长期给予罹患德戈斯病的患者补体抑制剂，藉此治疗该疾病。在另一方面，本公开内容特征在于用于治疗德戈斯病的方法，所述方法包括将患者鉴定为患有或可能患有德戈斯病的患者；给予患者足够治疗这种疾病的量的补体抑制剂。在另一方面，本公开内容特征在于用于治疗或预防(例如，预防德戈斯病的发生或预防良性皮肤型德戈斯病发展成为更晚期的多器官和/或全身型疾病)的方法。所述方法包括给予有需要的患者足够治疗或预防所述疾病的量的补体抑制剂。在一些实施方案中，可以在治疗期间维持患者血液中的降低的补体激活水平的量和频率长期给予所述抑制剂。在本文所述任何方法的一些实施方案中，德戈斯病与B19细小病毒感染或人免疫缺陷病毒感染相关。在一些实施方案中，德戈斯病是特发性的。在本文所述任何方法的一些实施方案中，德戈斯病病理性影响胃肠道、中枢神经系统和心血管系统中的一种或多种。在一些实施方案中，德戈斯病是多器官的全身性的德戈斯病。在一些实施方案中，德戈斯病为该疾病的皮肤型。在本文所述任何方法的一些实施方案中，德戈斯病对选自以下的至少一种治疗为抗拒的抗炎剂、抗凝血剂、抗血栓药和静脉注射免疫球蛋白。抗炎药可以是例如选自以下中的一种皮质类固醇、苯基丁氮酮、硫唑嘌呤、甲氨蝶呤、环孢霉素(cyclosporine)、他克莫司和麦考酹酸酯(mycophenolate mofetil)。抗凝血剂或抗血栓药可以是例如选自氯批格雷、阿司匹林和双B密达莫中之一。在本文所述任何方法的一些实施方案中，补体抑制剂可以是例如选自多肽、多肽类似物、核酸、核酸类似物和小分子中的一种。在一些实施方案中，补体抑制剂可以是例如选自以下之一可溶的0 1、1^乂-0 1、]\0\04 、0)59、因子11、眼镜蛇毒因子、？^'-175、补体结合抑制素和K76 C00H。在本文所述任何方法的一些实施方案中，补体抑制剂抑制人补体组分蛋白的表达。在一些实施方案中，补体抑制剂可抑制补体蛋白的活性，所述补体蛋白例如但不限于补体组分Cls、补体组分Clr、C3转化酶、C5转化酶或C5b_9。在本文所述任何方法的一些实施方案中，补体抑制剂抑制人补体组分C5、C4、C3或C2的裂解。例如，补体抑制剂可抑制补体组分C5裂解成为C5a和C5b片段。在一些实施方案中，补体抑制剂是结合人补体组分蛋白(例如C5蛋白)的抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段与C5蛋白的a链结合。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段与C5的P链结合。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段与人补体组分C5的a链结合，其中所述抗体(i)抑制人体液中补体的激活；(ii)抑制纯化的人补体组分C5与人补体组分C3b或人补体组分C4b的结合；和(iii)不与人补体激活产物游离C5a结合。在一些实施方案中，抗体与包含SEQ ID N0:l_26中的任一个所描述的氨基酸序列或由所述氨基酸序列组成的人补体组分C5蛋白结合。在一些实施方案中，抑制剂是与补体组分C5的C5b片段结合的抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，抗体可以是单克隆抗体。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段可为选自以下之一人源化抗体、重组抗体、双抗体、嵌合化抗体或嵌合抗体、去免疫化人抗体、完全人抗体、单链抗体、Fv片段、Fd片段、Fab片段、Fab’片段和F (ab’)2片段。在本文所述任何方法的一些实施方案中，补体抑制剂是依库珠单抗或培克珠单 抗。在又一方面，本公开内容特征在于制品，所述制品含有包含标签的容器；和包含补体抑制剂的组合物，其中所述标签标示待将所述组合物给予患有、疑似患有德戈斯病或处于发展德戈斯病风险中的人。抑制剂可以是例如与人补体组分C5蛋白结合的抗体或其抗原结合片段。抑制剂可以是例如与诸如C5a或C5b等人补体组分C5蛋白片段结合的抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，制品包括一种或多种另外的活性剂，例如但不限于一种或多种抗炎剂、抗凝血剂或抗血栓药。本发明人同样发现，本文所述德戈斯病患者的血清中以及活组织检查的皮肤组织内具有升高水平的干扰素a水平。虽然不受任何特定理论或作用机制的约束，但由于干扰素a上调适应性和先天性免疫，增强任何抗原触发剂的作用，且业已报道给予外源干扰素a是皮肤血栓形成和溃疡的原因，本发明人相信，抑制干扰素a是用于治疗德戈斯病的有用策略。因此，在另一方面，本公开内容特征在于用于治疗罹患德戈斯病的患者的方法，该方法包括给予罹患德戈斯病的患者足够治疗这种疾病的量的干扰素a的抑制剂。在另一方面，本公开内容特征在于用于治疗罹患德戈斯病的患者的方法，该方法包括以足够维持患者的降低的干扰素a活性水平的量和频率，长期给予罹患德戈斯病的患者干扰素a的抑制剂，藉此治疗所述疾病。在另一方面，本公开内容特征在于用于治疗德戈斯病的方法，该方法包括鉴定患者为患有或可能患有德戈斯病的患者；和给予患者足够治疗这种疾病的量的干扰素a抑制剂。在另一方面，本公开内容特征在于用于治疗或预防(例如，预防德戈斯病的发生或预防良性皮肤型德戈斯病发展成为更晚期的多器官和/或全身型疾病)的方法。所述方法包括给予有需要的患者足够治疗或预防所述疾病的量的干扰素a抑制剂。在一些实施方案中，可以在治疗期间维持患者血液中降低的干扰素a表达或活性水平的量和频率，长期给予所述抑制剂。在一些实施方案中，干扰素a抑制剂可以是例如选自多肽、多肽类似物、核酸、核酸类似物和小分子中的一种。抑制剂可以例如抑制细胞的干扰素a或干扰素a受体的表达。抑制剂可以例如抑制干扰素a或干扰素a受体蛋白的活性。在一些实施方案中，干扰素a抑制剂与干扰素a结合。在一些实施方案中，干扰素a抑制剂与干扰素a受体结合。例如，在一些实施方案中，干扰素a抑制剂是与干扰素a或干扰素a受体结合的抗体(或其抗原结合片段)。所述抗体可以是单克隆抗体。所述抗体或其抗原结合片段可以是例如选自以下之一人源化抗体、重组抗体、双抗体、嵌合化抗体或嵌合抗体、去免疫化人抗体、完全人抗体、单链抗体、Fv片段、Fd片段、Fab片段、Fab’片段和F(ab’)2片段。在又一方面，本公开内容特征在于制品，其含有包含标签的容器；和包含干扰素 a抑制剂的组合物，其中标签标示待将所述组合物给予患有、疑似患有德戈斯病或处于发展德戈斯病风险中的人。干扰素a的抑制剂可以是例如任何本文中所述干扰素a的抑制齐U，例如与干扰素《或干扰素受体结合的抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，制品包括一种或多种另外的活性剂，例如但不限于抗炎剂、抗凝血剂或抗血栓药。在一些实施方案中，本文所述方法可以包括给予靶向B细胞的疗法(作为单一作用剂或与补体抑制剂和/或干扰素a抑制剂联合)。例如，本公开内容特征在于用于治疗或预防德戈斯病的方法，所述方法包括给予患有、疑似患有德戈斯病或处于发展德戈斯病风险中的患者治疗有效量的靶向B细胞的疗法。靶向B细胞的疗法可以是例如抗-CD20结合剂，例如但不限于抗-CD20抗体。可在本文所述方法中使用的被批准用于临床使用或处于临床开发的例示性治疗抗-CD20抗体包括但不限于利妥昔单抗(Biogen Idee) ,90Y_替伊莫单抗(Biogen Idee)、mI-托西莫单抗(GlaxoSmithKline)、奥法木单抗(Genmab)、TRU-015 (Trubion)、维妥珠单抗(veltuzumab) (IMMU-106, Immunomedics)、奥瑞珠单抗(Roche)和 AME-I33V (Applied Molecular Evolution)。参见例如Levene 等，(2005),见上；Burge 等，(2008) Clin Ther 30 (10) : 1806-1816 Kausar 等,(2009) Expert OpinBiol Ther 9(7) :889-895 :Morschhauser 等，(2009) J Clin Oncol 27(20) :3346-3353 ；和 Milani 及 astillo(2009) Curr Opin Mol Ther 11(2):200-207。在另一实例中，本文所述的任何方法，例如其中给予德戈斯病患者补体抑制剂和/或干扰素a抑制剂的方法，亦可包括给予诸如抗-CD20抗体等靶向B细胞的疗法。“多肽”、“肽”和“蛋白质”可交换使用，意即氨基酸的任何肽连接链，不论长度或翻译后修饰怎样。本文所述补体组分蛋白(例如补体组分C2、C3、C4或C5蛋白)可含有或为野生型蛋白，或可以是具有不超过50 (例如，不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、15、20、
25、30、35、40或50)个保守氨基酸取代的变体。保守取代通常包括在以下组别中的取代甘氨酸和丙氨酸；缬氨酸、异亮氨酸和亮氨酸；天冬氨酸和谷氨酸；天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸和苏氨酸；赖氨酸、组氨酸和精氨酸；和苯丙氨酸和酪氨酸。本文所述人补体组分蛋白也包括蛋白的“抗原性肽片段”，其比全长的未成熟蛋白(前蛋白原)短，但是保留全长蛋白在哺乳动物中诱导抗原应答的能力的至少10% (例如，至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少50%、至少55%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、至少99. 5%或100%或更多)。例如，C5蛋白的抗原性肽片段可以所述蛋白的任何片段，其比全长未成熟蛋白短并且保留全长蛋白在哺乳动物中诱导抗原应答的能力的至少10%。补体组分蛋白的抗原性肽片段包括所述蛋白的末端以及内部缺失变体。缺失变体可以缺少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、
12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸区段(两个或更多个氨基酸的区段)或非连续的单个氨基酸。抗原性肽片段的长度可以是至少6个(例如，至少7、8、9、10、11、12、13、14、15、
16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、
41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、250、300、350、400、450、500 或 600 或更多个)氨基酸残基(例如，SEQ ID NO: 1-11中任一个的至少6个连续氨基酸残基)。在一些实施方案中，人补体组分蛋白的抗原性肽片段的长度少于500个(例如，450、400、350、325、300、275、250、225、200、190、180、170、160、150、140、130、120、110、100、95、90 、85、80、75、70、65、60、50、49、48、
47、46、45、44、43、42、41、40、39、38、37、36、35、34、33、32、31、30、29、28、27、26、25、24、23、
22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8 或 7 个)氨基酸残基(例如，少于 SEQ IDNOil-Il中任一个的500个连续氨基酸残基)。在一些实施方案中，全长未成熟人补体组分蛋白(前C5蛋白原)的抗原性肽片段的长度是至少6个但少于500个氨基酸残基。在一些实施方案中，人补体组分C5蛋白可具有以下氨基酸序列，其与具有SEQ IDNO: I中所描述的氨基酸序列的人C5蛋白具有以下同一丨I"生或大于以下的同一丨I"生70 (例如 71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99 或 100) % 同一性。氨基酸序列同一性百分比(%)定义为在比对序列和引入空位(必要时)以达到最大序列同一性百分比后，与参比序列中的氨基酸相同的候选序列的氨基酸的百分比。为了测定序列同一性百分比目的的比对可以属于本领域技术内的多种方法实现，例如应用可公开获取的计算机软件例如 BLAST、BLAST-2、ALIGN、ALIGN-2 或 Megalign (DNASTAR)软件。对于测量比对的合适参数(包括在待比较序列的全长范围内实现最大比对所需的任何算法)，可通过已知方法确定。例示性人C5蛋白以及其抗原性肽片段的氨基酸序列为本领域所知，且在下文中陈述。在本公开内容中各处所用术语“抗体”，指通过本领域中已知和本文所述的多种方法的任一种产生的完全或完整的抗体(例如IgM、IgG、IgA、IgD或IgE)分子。术语“抗体”包括多克隆抗体、单克隆抗体、嵌合化抗体或嵌合抗体、人源化抗体、去免疫化人抗体和完全人抗体。抗体可以产生于或源自多种物种中的任何一种，例如哺乳动物，例如人、非人灵长类动物(例如猴子、狒狒或黑猩猩)、马、牛、猪、绵羊、山羊、狗、猫、兔、豚鼠、沙鼠、仓鼠、大鼠和小鼠。抗体可以是纯化的或重组的抗体。本文所用术语“抗体片段”、“抗原结合片段”或相似术语，指保留与抗原(例如补体组分C5蛋白)结合能力的抗体的片段,例如单链抗体、单链Fv片段(scFv)、Fd片段、Fab片段、Fab’片段或F(ab’ )2片段。scFv片段是包括衍生出scFv的抗体的重链和轻链的可变区两者的单一多肽链。此外，可将与补体组分蛋白(例如补体组分C5)结合的双抗体(Poljak (1994) Structure 2 (12) : 1121-1123 ；Hudson 等,(1999) J ImmunolMethods 23(1-2) :177-189,这两者的公开内容通过引用以其整体并入本文)和胞内抗体(Huston 等，(2001) Hum. Antibodies 10 (3~4) : 127-142 ;Wheeler 等,(2003) Mol Ther8(3) :355-366 ；Stocks (2004) Drug Discov Today 9(22) : 960-966 ;每一个的公开内容通过引用以其整体并入本文)纳入到本文所述组合物，和在本文所述方法中使用。除非另有定义，否则本文所用所有技术和科学术语具有与本公开内容所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同的含义。在发生冲突的情况下，以包括定义在内的本文件为准。以下阐述了优选的方法和材料，但与本文所述的方法和材料相似或等同的方法和材料亦可用于实践或检测本发明公开的方法和组合物。本文提及的所有出版物、专利申请、专利及其它参考文献通过引用以其整体结合。根据以下的阐述、实施例和权利要求，本公开内容的其它特征和优点，例如用于治疗或预防德戈斯病的方法，将是显而易见的。详沭
本公开内容提供含有人补体抑制剂(例如与人补体组分C5蛋白结合的抗体)的组合 物和使用所述组合物来治疗或预防德戈斯病的方法。尽管决无意限制，但下面详述了例示性的组合物(例如药物组合物和制剂)及使用所述组合物的方法，并将其在工作实施例中举例说明。补体涂径
补体系统与机体的其它免疫系统一起作用以抵抗细胞和病毒病原体的侵入。有至少25种补体蛋白，其作为血浆蛋白和膜辅因子的复杂集合而被发现。在脊椎动物血清里，血浆蛋白组成球蛋白的约10%。补体组分通过在一系列复杂而精确的酶裂解和膜结合事件中相互作用达到其免疫防御功能。所得的补体级联导致产生具有调理素的、免疫调节的和溶胞功能的产物。例如，在The Merck Manual第16版中提供与补体激活相关的生物活性的简明概述。补体级联经由经典途径、备选途径或凝集素途径进行。这些途径共享许多组分，并且尽管它们在其起始步骤上不同，但它们汇合并且共享相同的负责激活和破坏靶细胞的“末端补体”组分(C5至C9)。经典补体途径通常由抗体识别靶细胞上的抗原位点并与之结合来启动。备选途径可以是抗体不依赖性的，可以由病原体表面上的某些分子来启动。此外，凝集素途径通常用结合甘露糖的凝集素(MBL)与高甘露糖底物结合来启动。这些途径在某一点汇合，在该点由活性蛋白酶(其在每个途径中不同)裂解补体组分C3产生C3a和C3b。激活补体攻击的其它途径可随后在事件顺序中起作用，导致不同方面的补体功能。C3a是一种过敏毒素。C3b与细菌和其它细胞结合，也结合某些病毒和免疫复合物，并标记它们用于从循环中移除。(在该作用中称C3b为调理素)。通常认为C3b的调理素功能是补体系统的最重要抗感染作用。具阻断C3b功能的遗传损伤的患者易于受广泛的各种病原生物的感染，而具在补体级联较后顺序中的损伤的患者，即具阻断C5功能的损伤的患者，被发现只更易于感染奈瑟氏球菌属OVei^aria)，而且只是稍微更容易。C3b亦与对每一途径独特的其它组分形成复合物，以形成经典的或备选的C5转化酶，所述转化酶裂解C5成为C5a和C5b。由于C3对于备选和经典途径二者都是必不可少的，因此被视为补体反应顺序中的关键蛋白。通过血清蛋白酶因子I调节C3b的该性质，所述血清蛋白酶因子I作用于C3b以产生iC3b。尽管iC3b仍然作为调理素起作用，但不能形成活性C5转化酶。C5是在正常血清中发现的190 kDa的￠-球蛋白，其浓度大约75 u g/mL (0.4U M)。C5是糖基化的，且其质量的约I. 5-3%归因于碳水化合物。成熟的C5为通过二硫键与655个氨基酸的75 kDa的P链连接的999个氨基酸的115 kDa的a链的异型二聚体。C5作为单拷贝基因的单链前体蛋白产物合成(Haviland等，(1991) J Immunol 146:362-368)。该基因转录物的cDNA序列预知具有1658个氨基酸以及18个氨基酸的前导序列的分泌性前-C5前体(参见例如美国专利号6，355，245)。前-C5前体在氨基酸655和659后裂解，产生作为氨基末端片段的P链(上述序列的+1到655位氨基酸残基)和作为羧基末端片段的a链(上述序列的660-1658位氨基酸残基)，且在两者间删除4个氨基酸(上述序列的656-659位氨基酸残基)。C5a作为包含a链的前74个氨基酸(即上述序列的660-733位氨基酸残基)的氨基末端片段，由备选的或经典的C5转化酶裂解C5的a链而得。C5a的11 kDa质量的约20%归因于碳水化合物。转化酶作用的裂解位点是在或紧邻上述序列的733位氨基酸残基。可在或邻近该裂解位点结合的化合物，具有阻断C5转化酶接近该裂解位点的潜能，藉 此作为补体抑制剂起作用。C5也可借助C5转化酶活性之外的途径活化。限制性的胰蛋白酶消化(参见例如，Minta 和 Man (1997) J Immunol U豆1597-1602 及 Wetsel 和 Kolb (1982) J Immunol128:2209-2216)和酸处理(Yamamoto 和 Gewurz (1978) J Immunol 120: 2008 和 Damerau等，(1989) Molec Immunol 26:1133-1142)亦可裂解 C5，并产生活性 C5b。C5裂解释放C5a (其为有效的过敏毒素和趋化因子)，并导致溶胞的终末补体复合物C5b-9的形成。C5a和C5b-9亦通过放大下游的炎性因子的释放而具有多效性细胞活化特性，所述炎性因子例如水解酶、活性氧物质、花生四烯酸代谢物和各种细胞因子。C5b在靶细胞表面与C6、C7和C8结合形成C5b_8复合物。当结合一些C9分子时，形成膜攻击复合物(MAC，C5b-9,终末补体复合物一TCC)。当足够数量的MAC插入靶细胞膜时，其形成的开口(MAC孔)介导靶细胞的快速渗透性溶胞。较低的非溶胞浓度的MAC可以产生其它效应。特别是，小量的C5b-9复合物膜插入到内皮细胞和血小板可以引起有害的细胞活化。在一些情况下，活化可以在细胞溶胞之前。如上所述，C3a和C5a是过敏毒素。这些激活的补体组分可以触发肥大细胞脱粒，这使得从嗜碱性粒细胞和肥大细胞释放组胺和其它炎症介体，导致平滑肌收缩、血管通透性增加、白细胞激活以及包括导致细胞过多的细胞增殖在内的其它炎症现象。C5a亦起趋化肽的作用，所述趋化肽用于吸引促炎性粒细胞到补体激活位点。在支气管和肺泡上皮细胞及支气管平滑肌细胞的表面发现C5a受体。亦在嗜酸性粒细胞、肥大细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞和活化的淋巴细胞上发现C5a受体。组合物
本文所述组合物可含有人补体抑制剂。按照本公开内容，可利用与任何人补体组分结合或以其它方式阻断任何人补体组分的产生和/或活性的任何化合物。例如，补体抑制剂可以是例如小分子、核酸或核酸类似物、肽模拟物或并非核酸或蛋白的大分子。这些抑制剂包括但不限于有机小分子、RNA适体、L-RNA适体、Spiegelmer、反义化合物、双链RNA、小干扰RNA、锁定核酸抑制剂和肽核酸抑制剂。在一些实施方案中，补体抑制剂可以是蛋白或蛋白片段。在一些实施方案中，组合物含有对人补体组分特异的抗体。一些化合物包括针对补体组分Cl、C2、C3、C4、C5 (或其片段；见下述)、C6、C7、C8、C9、因子D、因子B、因子P、MBL,MASP-1或MASP-2的抗体，因此，其预防与C5a相关的过敏毒素活性的产生和/或预防与C5b相关的膜攻击复合物(MAC)的组装。在一些实施方案中，补体抑制剂抑制C5b-9复合物的活性和/或组装。例如，在一些实施方案中，抑制剂是与C6、C7、C8、C9或C5b之一结合的抗体或其抗原结合片段，由此预防MAC的组装和/或活性。组合物亦可含有天然存在的或可溶形式的补体抑制性化合物，例如CR1、LEX-CR1、MCP、DAF、⑶59、因子H、眼镜蛇毒因子、FUT-175、补体结合抑制素和K76 C00H。可以用于结合任何人补体组分或以其它方式阻断任何人补体组分的产生和/或活性的其它化合物包括但不限于蛋白质、蛋白质片段、肽、小分子、包括ARC187 (可自Archemix Corporation,Cambridge, MA市购)在内的RNA适体、L-RNA适体、SpiegeImer、反义化合物·、丝氨酸蛋白酶抑制剂、可以用于RNA干扰(RNAi)的分子例如包括小干扰RNA (siRNA)在内的双链RNA、锁定核酸(LNA)抑制剂、肽核酸(PNA)抑制剂等。在一些实施方案中，补体抑制剂抑制补体激活。例如，补体抑制剂可以结合并抑制Cl (例如Clq、Clr或Cls)的补体激活活性，或补体抑制剂可以结合并抑制C2、C3或C4(例如抑制其裂解)。在一些实施方案中，抑制剂抑制补体备选途径和/或经典途径的C3转化酶和/或C5转化酶的形成或组装。在一些实施方案中，补体抑制剂抑制终末补体的形成，例如C5b-9膜攻击复合物的形成。例如，抗体补体抑制剂可包括抗C5抗体。所述抗C5抗体可以直接与C5和/或C5b相互作用，由此抑制C5b的形成和/或生理功能。在一些实施方案中，本文所述组合物可以含有人补体组分C5的抑制剂(例如与人补体组分C5蛋白或其生物学活性片段例如C5a或C5b结合的抗体或其抗原结合片段)。本文所用“补体组分C5的抑制剂”是以下任何作用剂，其抑制⑴补体组分C5蛋白通过细胞的表达或适当的胞内运输或分泌；(ii) C5裂解片段C5a或C5b的活性(例如C5a与其同源细胞受体的结合或C5b与C6和/或末端补体复合物的其它组分的结合；见上述)；(iii)形成C5a或C5b的人C5蛋白的裂解；或(iv)补体组分C5蛋白通过细胞的适当胞内运输或分泌。抑制补体组分C5蛋白表达包括抑制编码人C5蛋白的基因的转录；增强编码人C5蛋白的mRNA的降解；抑制编码人C5蛋白的mRNA的翻译；增强人C5蛋白的降解；抑制前人C5蛋白原的适当的修饰加工；或抑制人C5蛋白通过细胞的适当运输或分泌。用于确定候选作用剂是否是人补体组分C5抑制剂的方法为本领域所知，并在本文中阐述。人补体组分C5的抑制剂可以是例如小分子、多肽、多肽类似物、核酸或核酸类似物。本文所用“小分子”，意指具有小于约6 kDa、最优选小于约2. 5 kDa分子量的物质。许多制药公司具有大量包含小分子阵列的化学和/或生物混合物文库，所述小分子通常是真菌、细菌或藻类提取物，可用本申请的任何测定来筛选。本申请预期尤其使用小化学物文库、肽文库或天然产物集合。Tan等描述了与微型化的基于细胞的测定相容的具有200万种以上合成化合物的文库ij Am Chem Soc (1998) 120:8565-8566) 在本申请范围内的是，可将这类文库用于筛选人补体组分C5的抑制剂。有很多可市购的化合物文库，例如Chembridge DIVERSet。亦可自学术研究者获得文库，例如NCI发育治疗学项目的Diversity集合。亦可以采用合理的药物设计。例如，合理药物设计可以利用关于人补体组分组分C5蛋白的晶体或溶液结构信息。参见例如以下文献中所述的结构=Hagemann等，(2008) J Biol Chem 283 (12) : 7763-75 和 Zuiderweg 等，(1989) Biochemistry28(1) : 172 - 85。亦可以基于已知化合物达到合理药物设计，所述化合物例如已知C5抑制剂(例如与人补体组分C5蛋白结合的抗体或其抗原结合片段)。肽模拟物可以是这样的化合物，其中修饰主题多肽的至少一部分，且肽模拟物的三维结构基本上保持与主题多肽一样。肽模拟物可以是本公开内容的主题多肽的类似物，其本身可以是在主题多肽序列内含有一个或多个取代或其它修饰的多肽。或者，主题多肽序列的至少一部分可以被非肽结构替换，使得主题多肽的三维结构基本上得以保留。换句话说，主题多肽序列中的1、2或3个氨基酸残基可以被非肽结构替换。此外，主题多肽的其它肽部分可以(但不是必需)被非肽结构替换。肽模拟物(肽和非肽基类似物两者)可以具有改良的特性(例如降低的蛋白水解、增加的保留或提高的生物利用度)。肽模拟物·通常具有改进的口服可用性，这使其尤其适合于治疗人或动物病症。应该注意的是，肽模拟物可具有或可不具有相似的二维化学结构，但是有着共同的三维结构特征和几何形状。每种肽模拟物可进一步具有一个或多个独特的另外的结合元件。可将核酸抑制剂用于降低内源基因例如编码人补体组分C5的基因的表达。核酸拮抗剂可以是例如siRNA、dsRNA、核酶、三股螺旋形成者(triple-helix former)、适体或反义核酸。siRNA是任选包括突出端的小双链RNA (dsRNA)。例如，siRNA的双链区域长度约为18-25个核苷酸，例如长度约19、20、21、22、23或24个核苷酸。在一些实施方案中，siRNA序列可以与靶mRNA精确地互补。dsRNA和siRNA尤其可以用于使哺乳动物细胞(例如人细胞)中的基因表达沉默。参见例如Clemens等，(2000) Proc Natl Acad Sci USA丑6499-6503 ;Billy 等，(2001) Proc Natl AcacI Sci USA 14428-14433 ;Elbashir等，(2001) Nature 411:494-8 ;Yang等，(2002) Proc Natl AcacI Sci USA 99:9942-9947和美国专利申请公开号 20030166282、20030143204、20040038278 和 20030224432。反义试剂可以包括例如约8-约80个核碱基(即约8-约80个核苷酸)，例如约8-约50个核碱基或约12-约30个核碱基。反义化合物包括核酶、外部指导序列(EGS)寡核苷酸(寡核苷酸酶(oligozyme))和与祀核酸杂交并调节其表达的其它短的催化性RNA或催化性寡核苷酸。反义化合物可包括一段与靶基因序列互补的至少8个连续核碱基。寡核苷酸不需要与其靶核酸序列100%互补以特异性杂交。寡核苷酸在以下情况时为可特异性杂交的所述寡核苷酸与靶标的结合干扰靶分子酸的正常功能而引起效用损失，并且在需要特异性结合的条件下存在足够程度的互补性以避免所述寡核苷酸与非靶序列的非特异性结合，这类条件即，在体内测定或治疗性处理情况中的生理条件，或者在体外测定情况中进行测定的条件。反义寡核苷酸与mRNA (例如编码人C5蛋白的mRNA)的杂交可以干扰mRNA的一种或多种正常功能。待干扰的mRNA的功能包括所有关键功能，例如RNA到蛋白翻译位点的易位、自RNA的蛋白翻译、产生一个或多个mRNA种类的RNA剪接及RNA可参与的催化活性。特定蛋白与RNA的结合也可通过反义寡核苷酸与所述RNA的杂交来干扰。例示性反义化合物包括与靶核酸特异性杂交的DNA或RNA序列，所述靶核酸例如编码人补体组分C5蛋白的mRNA。互补区域可自约8个核碱基延伸至约80个核碱基。所述化合物可以包括一个或多个修饰的核喊基。修饰核碱基可包括例如5_取代嘧啶类，例如5-碘尿嘧啶、5-碘胞嘧啶；和C5-丙炔基嘧啶类，例如C5-丙炔基胞嘧啶和C5-丙炔基尿嘧啶。其它适合的修饰核碱基包括例如7-取代-8-氮杂-7-脱氮杂嘌呤和7-取代-7-脱氮杂嘌呤，例如7-碘-7-脱氮杂嘌呤、7-氰基-7-脱氮杂嘌呤、7-氨基羰基-7-脱氮杂嘌呤。这些的实例包括6_氨基-7-碘-7-脱氮杂嘌呤、6-氨基-7-氰基-7-脱氮杂嘌呤、6-氨基-7-氨基羰基_7_脱氮杂嘌呤、2-氨基-6-羟基-7-碘-7-脱氮杂嘌呤、2-氨基-6-羟基-7-氰基-7-脱氮杂嘌呤和2-氨基-6-羟基-7-氨基羰基-7-脱氮杂嘌呤。参见例如美国专利号4，987，071、5，116，742和 5，093，246 ;“Antisense RNA and DNA, ” D. A. Melton,编辑，Cold SpringHarbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N. Y. (1988) ；Haselhoff 和 Gerlach (1988)Nature 334:585-59 Helene, C. (1991) Anti cancer Drug D 6:569-84 ；Helene (1992)Ann NY Acad Sci 660:27-36 和 Maher (1992) Bioassays 14 807-15 适体是可用于识别和特异性结合包括细胞表面蛋白在内的几乎所有分子的短寡核苷酸序列。配体通过指数富集的系统进化(SELEX)程序很有用，可以用于容易地鉴别所述适体。可制备在治疗和诊断学上重要的多种多样的蛋白的适体，所述蛋白例如生长因子和细胞表面抗原。这些寡核苷酸以与抗体相似的亲和力和特异性与其靶标结合。参见例如Ulrich (2006) Handb Exp Pharmacol 173:305-326 。在一些实施方案中，人C5抑制剂是与人补体组分C5蛋白结合的抗体或其抗原结合片段。(在下文中所述抗体有时可以被称为“抗C5抗体”)。在一些实施方案中，抗C5抗体与人前-C5前体蛋白的表位结合。例如，抗C5抗体可与包含SEQ ID NO: I (NCBI检索号AAA51925和Haviland等，见上)中所描述的氨基酸序列或由所述氨基酸序列组成的人补体组分C5蛋白中的表位结合。“表位”指蛋白(例如人补体组分C5蛋白)上抗体结合的位点。“重叠表位”包括至少一个(例如，2、3、4、5、或6个)共有氨基酸残基。在一些实施方案中，抗C5抗体与缺少前导序列的人前-C5前体蛋白中的表位结合。例如，抗C5抗体可以与包含SEQ ID NO: 2中所描述的氨基酸序列或由所述氨基酸序列组成的人补体组分C5蛋白中的表位结合，SEQ ID NO: 2为缺少氨基末端前导序列的人C5蛋白。在一些实施方案中，抗C5蛋白可以与人补体组分C5蛋白的a链上的表位结合。例如，抗C5抗体可以与在具有SEQ ID NO: 3中描述的氨基酸序列的蛋白内或与其重叠的表位结合，SEQ ID NO:3为人补体组分C5 a链蛋白。与C5的a链结合的抗体在例如Ames等，(1994) J Immunol 152:4572-4581 中阐述。在一些实施方案中，抗C5抗体可以与人补体组分C5蛋白的P链的表位结合。例如，抗C5抗体可以与在具有SEQ ID N0:4中所描述的氨基酸序列的蛋白内或与其重叠的表位结合，SEQ ID N0:4为人补体组分C5 ^链蛋白。与C5的P链结合的抗体在例如以下文献中阐述Moongkarndi 等，(1982) Immunobiol 162:397 ；Moongkarndi 等,(1983)Immunobiol 165:323 和 Mollnes 等,(1988) Scand J Immunol 28:307-312。在一些实施方案中，抗C5抗体可以与在人补体组分C5蛋白抗原性肽片段内或与其重叠的表位结合。例如，抗C5抗体可以与在人补体组分C5蛋白的抗原性肽片段内或与其重叠的表位结合，所述片段包含以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列组成VIDHQGTKSSKCVRQKVEGSS (SEQ ID NO:5)或 KSSKC (SEQ ID NO:6)。在一些实施方案中，抗C5抗体可以与在人补体组分C5蛋白的片段内或与其重叠的表位结合，所述片段包含任一个以下氨基酸序列(其是SEQ ID NO: I的例示性抗原性片段)或由其组成
权利要求
1.一种用于治疗罹患德戈斯病的患者的方法，所述方法包括以足够治疗所述疾病的量给予罹患德戈斯病的患者补体抑制剂。
2.一种用于治疗德戈斯病的患者的方法，所述方法包括长期以足够维持罹患德戈斯病的患者降低的补体活性水平的量和频率给予所述患者补体抑制剂，藉此治疗所述疾病。
3.一种用于治疗德戈斯病的方法，所述方法包括 鉴定患者为罹患或可能罹患德戈斯病的患者；和 以足够治疗所述疾病的量给予所述患者补体抑制剂。
4.权利要求1-3中任一项的方法，其中所述德戈斯病与B19细小病毒感染或人免疫缺陷病毒感染相关。
5.权利要求1-3中任一项的方法，其中所述德戈斯病为特发性的。
6.权利要求1-5中任一项的方法，其中所述德戈斯病病理地影响胃肠道。
7.权利要求1-6中任一项的方法，其中所述德戈斯病病理地影响中枢神经系统。
8.权利要求1-7中任一项的方法，其中所述德戈斯病病理地影响心血管系统。
9.权利要求1-8中任一项的方法，其中所述德戈斯病为多器官全身性德戈斯病。
10.权利要求1-9中任一项的方法，其中所述德戈斯病对选自以下的至少一种治疗为抗拒的抗炎剂、抗凝血剂、抗血栓药和静脉注射免疫球蛋白。
11.权利要求10的方法，其中所述抗炎药选自皮质类固醇、苯基丁氮酮、硫唑嘌呤、甲氨蝶呤、环孢菌素、他克莫司和麦考酚酸酯。
12.权利要求10的方法，其中所述抗凝血剂或抗血栓药选自氯吡格雷、阿司匹林和双嘧达莫。
13.权利要求1-12中任一项的方法，其中所述补体抑制剂选自多肽、多肽类似物、核酸、核酸类似物和小分子。
14.权利要求13的方法，其中所述补体抑制剂选自可溶性CR1、LEX-CRUMCP、DAF、CD59、因子H、眼镜蛇毒因子、FUT-175、补体结合抑制素和K76 COOH。
15.权利要求1-14中任一项的方法，其中所述补体抑制剂抑制人补体组分蛋白的表达。
16.权利要求1-14任一项的方法，其中所述补体抑制剂抑制补体组分Cls或补体组分Clr的激活或活性。
17.权利要求1-14中任一项的方法，其中所述补体抑制剂抑制人补体组分C5、C4、C3或C2的裂解。
18.权利要求17的方法，其中所述补体抑制剂抑制补体组分C5裂解为C5a和C5b片段。
19.权利要求1-13或15-18中任一项的方法，其中所述补体抑制剂是与人补体组分蛋白结合的抗体或其抗原结合片段。
20.权利要求19的方法，其中所述抗体或其抗原结合片段与人补体组分C5蛋白结合。
21.权利要求20的方法，其中所述抗体与所述补体组分C5蛋白的a链结合。
22.权利要求20或21的方法，其中所述抗体与人补体组分C5的a链结合，其中所述抗体(i)在人体液中抑制补体激活；(ii)抑制纯化的人补体组分C5与人补体组分C3b或人补体组分C4b的结合；和(iii)不与人补体激活产物游离C5a结合。
23.权利要求22的方法，其中所述抗体与所述具有SEQID NO: 1_26中任一个所描述的氨基酸序列的人补体组分C5蛋白结合。
24.权利要求13的方法，其中所述多肽包含与补体组分C5片段C5b结合的抗体或其抗原结合片段。
25.权利要求19-24中任一项的方法，其中所述抗体为单克隆抗体。
26.权利要求19-25中任一项的方法，其中所述抗体或其抗原结合片段选自人源化抗体、重组抗体、双抗体、嵌合化抗体或嵌合抗体、去免疫化人抗体、完全人抗体、单链抗体、Fv片段、Fd片段、Fab片段、Fab’片段和F(ab’)2片段。
27.权利要求1-12中任一项的方法，其中所述抑制剂为依库珠单抗。
28.权利要求1-12中任一项的方法，其中所述抑制剂为培克珠单抗。
29.一种制品，其包含 含有标签的容器；和 包含补体抑制剂的组合物，其中所述标签标示待将所述组合物给予患有、疑似患有德戈斯病或处于发展德戈斯病风险中的人。
30.权利要求29的制品，其中所述抑制剂是与人补体组分C5蛋白结合的抗体或其抗原结合片段。
31.权利要求29或30的制品，其中所述抑制剂是与人补体组分C5蛋白的片段结合的抗体或其抗原结合片段。
32.权利要求31的制品，其中所述人补体组分C5蛋白片段是C5a或C5b。
33.权利要求29-32中任一项的制品，其进一步包含一种或多种另外的活性剂。
34.权利要求33的制品，其中所述一种或多种另外的活性剂选自抗炎剂、抗凝血剂和抗血栓药。
35.一种用于治疗罹患德戈斯病的患者的方法，所述方法包括以足够治疗所述疾病的量给予罹患德戈斯病的患者干扰素a抑制剂。
36.一种用于治疗罹患德戈斯病的患者的方法，所述方法包括长期以足够维持罹患德戈斯病的患者降低的干扰素a表达水平或活性水平的量和频率给予所述患者干扰素a抑制剂,藉此治疗所述疾病。
37.一种用于治疗德戈斯病的方法，所述方法包括 鉴定患者为患有或可能患有德戈斯病的患者；和 给予所述患者足够治疗所述疾病的量的干扰素a抑制剂。
38.权利要求35-37中任一项的方法，其中所述德戈斯病是多器官全身型的德戈斯病。
39.权利要求35-38中任一项的方法，其中所述干扰素a抑制剂选自多肽、多肽类似物、核酸、核酸类似物和小分子。
40.权利要求35-39中任一项的方法，其中所述干扰素a抑制剂抑制细胞的干扰素a或干扰素a受体的表达。
41.权利要求35-39中任一项的方法，其中所述干扰素a抑制剂抑制干扰素a或干扰素a受体的活性。
42.权利要求35-39中任一项的方法，其中所述干扰素a抑制剂与干扰素a蛋白结
43.权利要求42的方法，其中所述干扰素a抑制剂是与干扰素a蛋白结合的抗体或其抗原结合片段。
44.权利要求35-39的方法，其中所述干扰素a抑制剂与干扰素a受体结合。
45.权利要求44的方法，其中所述干扰素a抑制剂是与干扰素a受体结合的抗体或其抗原结合片段。
46.权利要求43或45的方法，其中所述抗体是单克隆抗体。
47.权利要求46的方法，其中所述抗体或其抗原结合片段选自人源化抗体、重组抗体、双抗体、嵌合化抗体或嵌合抗体、去免疫化人抗体、完全人抗体、单链抗体、Fv片段、Fd片段、Fab片段、Fab’片段和F(ab’)2片段。
48.一种制品,其包含 包含标签的容器；和 包含干扰素a抑制剂的组合物，其中所述标签标示待将所述组合物给予患有、疑似患有德戈斯病或处于发展德戈斯病风险中的人。
49.权利要求48的制品，其中所述抑制剂是与干扰素a结合的抗体或其抗原结合片段。
50.权利要求48的制品，其中所述抑制剂是与干扰素a受体结合的抗体或其抗原结合片段。
51.权利要求48-50中任一项的制品，其进一步包含一种或多种另外的活性剂。
52.权利要求51的制品，其中所述一种或多种另外的活性剂选自抗炎剂、抗凝血剂和抗血栓药。
全文摘要
本公开内容尤其涉及含有人补体抑制剂和/或干扰素α抑制剂的组合物，以及所述组合物在用于治疗或预防受试者的德戈斯病的方法中的用途。在一些实施方案中，所述抑制剂为与人补体组分C5蛋白结合或与诸如C5a或C5b等C5生物活性片段结合的抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述抑制剂为与干扰素α结合或与干扰素α受体结合的抗体或其抗原结合片段。
文档编号A61P37/02GK102985106SQ201180022009
公开日2013年3月20日 申请日期2011年3月1日 优先权日2010年3月1日
发明者C.马格罗 申请人:阿雷克森制药公司