癌发病抑制剂、抗体产生能力增强剂及肝炎治疗剂的制作方法
【专利摘要】本发明的课题在于提供癌发病抑制剂、抗体产生能力增强剂及肝炎治疗剂；本发明人发现：通过给药NK细胞，抑制健康人的癌的发病，并通过将NK细胞和疫苗给药给患者，使抗体产生能力增强，由此完成了本发明。
【专利说明】癌发病抑制剂、抗体产生能力增强剂及肝炎治疗剂
【技术领域】
[0001]本发明涉及含有自然杀伤(以下称为NK)细胞作为有效成分的癌发病抑制剂、含有NK细胞作为有效成分的抗体产生能力增强剂、组合作为有效成分的NK细胞和作为有效成分的肝炎疫苗而得到的肝炎治疗剂、包括给药NK细胞的工序的癌发病抑制方法、包括给药NK细胞及疫苗的工序的抗体产生能力增强方法、以及包括给药NK细胞及肝炎疫苗的工序的肝炎治疗方法。
【背景技术】
[0002](关于癌症预防)
[0003]目前，癌症已经成为主要的死亡原因，因此，不仅用于治疗癌症的药品的开发，而且使癌症的危险因子和抑制因子明朗化、并通过排除或吸取这些因子而应用于癌症预防的活动也越发活跃起来。作为代表·性的致癌的危险因子，已知有吸烟等生活习惯、肝炎病毒(肝癌)、细小病毒(子宫颈癌)、幽门螺杆菌(胃癌)等的持续感染。作为通过排除该危险因子而最终应用于癌症预防的例子，有用于阻止B型肝炎病毒和细小病毒感染的预防疫苗疗法。
[0004]另一方面，关于抑制因子，对食品进行了大规模的流行病学调查。另外，研究报告发现，在药品中，非留体性抗炎药能减少患大肠癌的风险，选择性雌激素受体调节剂(SERM:Selective Estrogen Modulator)能减少患乳癌的风险。
[0005]作为这些食品或药品的预防癌症的机理，推定为癌细胞的增殖抑制、凋亡诱导、对激素受体的修饰、或者癌细胞的免疫感受性的提高等。
[0006]这些预防癌症的见解是基于如何抑制从正常细胞向癌细胞的变异、癌细胞的增殖和转移之类的癌细胞方面的因子的视点来考虑的。另一方面，理论上也可以从与致癌相抗衡的生物体方面的因子、即肿瘤免疫学的见解出发，按照以下方式通过强化免疫监视能力来抑制癌发病。
[0007](关于免疫系统)
[0008]在20世纪中期，Burnet通过使用小鼠进行的实验，提倡存在免疫监视机构，该免疫监视机构为:免疫系统发现癌前细胞(precanceixnis)并将其排除，由此阻止向癌症的恶化，从而维持个体稳态。之后，通过开发转基因小鼠模型，证明了免疫监视机构确实存在，根据Dunn等的免疫编辑(Immunoediting)学说,整理出直至致癌与免疫系统的复杂的关联和过程(非专利文献 I:Nat.1mmunl.2002 ；3:991)。
[0009]根据免疫编辑学说，将直至致癌的过程分为“清除”(elimination)— “平衡”(equilibrium)— “逃逸”(escape)三个阶段，尤其是最初的“清除”与免疫监视学说大致同义，是在初期的癌细胞尚未形成大的集团之前将其排除的过程。在该过程的前半段，作为自然免疫细胞的NK细胞、NKT细胞、Y δ T细胞、巨噬细胞、树突细胞分别协力发挥作用，排除肿瘤细胞。在后半段，树突细胞发挥如下作用，即，使T细胞识别癌抗原，产生癌抗原特异辅助性T细胞、细胞毒性T细胞的克隆，获得性免疫能够排除仅靠自然免疫无法排除的癌细胞。
[0010]在接下来的“平衡”阶段，即使是保持正常免疫功能的生物体也会进行免疫原性低的癌细胞的选择，最终使癌细胞获得免疫抵抗性，癌细胞逐渐增殖。
[0011]第3阶段的“逃逸”是免疫系统已经无法识别癌细胞而导致癌组织急速增大、临床上所见为癌症的阶段。
[0012]由于从“平衡”起越向后发展越难抑制癌症的发展，因此，为了抑制癌症而在最初的“清除”阶段可靠地去除癌细胞是很重要的。但是，由于年龄增长、精神压力等，自然免疫细胞、获得性免疫细胞的功能降低，无法充分发挥癌细胞的排除能力。例如，随着年龄的增力口，NK细胞的细胞毒活性或干扰素Y产生能力也会减弱，而据研究报告发现，观察100岁以上的超长寿命者的免疫能力时，自然免疫系统的NK细胞和NKT细胞的功能维持在较高水平(非专利文献 2 J.Clin.1mmunol.2009 ；29:416)。
[0013](癌发病抑制手段)
[0014]目前研究报告所显示的癌发病抑制手段均局限在直接作用于癌细胞而抑制其发展的食品、营养补品(硒、维生素等)、抗炎药、SERM(选择性雌激素调节剂)，其抑制效果未必高。另外，对因年龄增长等而导致的疫苗效果减弱的对策也停留在增加疫苗佐剂或疫苗的I次给药量、给药次数上。
[0015](关于肝炎)
[0016]感染B型肝炎病毒的慢性肝炎患者在全世界有3亿6千万人，作为肝硬化、肝癌的预备人群已成为很大的问题。虽然尝试了将用于预防的B型肝炎疫苗作为B型慢性肝炎的“治疗”疫苗与病毒增殖抑制剂组合使用，但并未观察到令人满意的临床改善效果(非专利文献 3:Vaccine2007 ；25:8585、非专利文献 4:Hepat.Res.Treat.2010 ；2010:817580)。
[0017]进而，如新的DNA疫苗(非专利文献5:Gene Ther.2006 ; 13:1110)或免疫复合体疫苗(非专利文献6 =PLoS 0ne2008 ；3:e2565)的临床试验那样，也正在探寻开发“治疗”疫苗疗法。
[0018]但是，成问题的是:存在即使给药通常的HB疫苗其抗体效价也不升高或极难升高的集团(例如60岁以上的男性)。
[0019]并且，在肝炎的治疗中一般使用干扰素。但是，治疗效果因患者不同而有差异，需要确立新的治疗方法。
[0020](关于抗体产生增强剂)
[0021]关于抗体产生增强剂公开有如下的研究报告。
[0022]专利文献1，其公开了 “以茶多糖类为有效成分的抗体产生诱导剂”。
[0023]专利文献2，其公开了 “以含有蛋白为特征的疫苗的抗体产生能力增强剂”。
[0024]但是，在上述文献中并没有公开或启示关于“包含NK细胞的抗体产生增强剂”的内容。并且，很多研究报告显示，NK细胞会抑制抗体产生能力(非专利文献7:Cell.1mmunol.1995 ；161:42)。即，在以往的见解中，一般认为NK细胞会抑制抗体产生能力。
[0025]现有技术文献
[0026]专利文献
[0027]专利文献1:日本特开2006-340698号
[0028]专利文献2:日本特开平5-124972号[0029]非专利文献
[0030]非专利文献I:Nat.1mmunl.2002 ；3:991
[0031]非专利文献2 J.Clin.1mmunol.2009 ；29:416
[0032]非专利文献3:Vaccine2007 ；25:8585
[0033]非专利文献4:Hepat.Res.Treat.2010 ；2010:817580
[0034]非专利文献5:Gene Ther.2006 ; 13:1110
[0035]非专利文献6:PLoS 0ne2008 ；3:e2565
[0036]非专利文献7:Cell.1mmunol.1995 ；161:42
【发明内容】
[0037]在癌细胞的“清除”过程中，NK细胞、NKT细胞、Y δ T细胞、巨噬细胞、树突细胞、T细胞这些各种各样的免疫细胞参与该过程，但是并不清楚哪个免疫细胞在癌细胞的排除中起主要作用。
[0038]因此，本发明人等认为“如果能判明该主要的免疫担当细胞，通过人为地提高其功能，从而免疫监视能力提高，能够使“清除”过程再强化，进而通过实施该再强化，与未强化的情况相比，最终能够期待癌发病的降低”。
[0039]进而，本发明人等基于“在先前所述的疫苗疗法中，也与癌发病同样，随着年龄的增加，NK细胞、树突细胞的功能降低和幼稚T细胞、B细胞的减少会降低针对外来抗原的免疫反应能力，事实上，在B型肝炎 疫苗中，一部分健康人、HIV阳性患者、透析患者、酒精中毒患者无法诱导抗体，被指出无反应性或低反应性”这一见解，认为这种无反应性或低反应性最终会增加慢性肝炎、肝癌的风险。
[0040]进而，本发明人认为“通过再次提高成为无反应性或低反应性的原因的降低的免疫反应能力，从而诱导疫苗效果，最终能够预防癌症、尤其是肝癌”。
[0041]因此，基于上述见解，本发明人所做的课题为:提供一种癌发病抑制剂、抗体产生能力增强剂及肝炎治疗剂。
[0042]本发明人为了解决上述课题进行了深入研究后发现，通过给药NK细胞，抑制癌的发病，并通过将NK细胞和疫苗给药给患者，使抗体产生能力增强，由此完成了本发明。
[0043]即，本发明如下。
[0044]1.一种健康人用癌发病抑制剂，其包含作为有效成分的NK细胞。
[0045]2.根据上述I所述的健康人用癌发病抑制剂，其中，上述NK细胞为活化NK细胞。
[0046]3.一种健康人的癌发病抑制方法，其特征在于，将活化NK细胞给药给健康人。
[0047]4.根据上述3所述的癌发病抑制方法，其中，上述活化NK细胞为源自上述健康人的NK细胞。
[0048]5.一种疫苗的抗体产生能力增强剂，其包含作为有效成分的NK细胞。
[0049]6.根据上述5所述的抗体产生能力增强剂，其中，上述疫苗为肝炎疫苗。
[0050]7.根据上述6所述的抗体产生能力增强剂，其中，上述肝炎疫苗为B型肝炎疫苗。
[0051]8.根据上述5?7中任一项所述的抗体产生能力增强剂，其中，上述NK细胞为活化NK细胞。
[0052]9.一种肝炎治疗剂，其特征在于，其组合有作为有效成分的NK细胞和作为有效成分的肝炎疫苗。
[0053]10.根据上述9所述的肝炎治疗剂，其中，上述肝炎疫苗为B型肝炎疫苗。
[0054]11.一种肝炎治疗用试剂盒，其包含疫苗的抗体产生能力增强剂和肝炎疫苗，所述疫苗的抗体产生能力增强剂含有作为有效成分的NK细胞。
[0055]12.根据上述11所述的肝炎治疗用试剂盒，其中，上述肝炎疫苗为B型肝炎疫苗。
[0056]13.一种患者的疫苗的抗体产生能力增强方法，其包括以下的工序(I) (2)或⑴，⑵'。
[0057](I)将活化NK细胞给药给患者的工序
[0058](2)将疫苗给 药给该患者的工序
[0059](I)'将疫苗给药给患者的工序
[0060](2V将活化NK细胞给药给该患者的工序
[0061]14.根据上述13所述的抗体产生能力增强方法，其中，上述活化NK细胞为源自上述患者的NK细胞。
[0062]15.根据上述13或14所述的抗体产生能力增强方法，其中，上述疫苗为肝炎疫苗。
[0063]16.根据上述15所述的抗体产生能力增强方法，其中，上述肝炎疫苗为B型肝炎疫苗。
[0064]17.一种肝炎治疗方法，其包括以下的工序⑴(2)或⑴，(2)'。
[0065](I)将活化NK细胞给药给患者的工序
[0066](2)将疫苗给药给该患者的工序
[0067](I)'将疫苗给药给患者的工序
[0068](2V将活化NK细胞给药给该患者的工序
[0069]18.根据上述17所述的肝炎治疗方法，其中，上述活化NK细胞为源自上述患者的NK细胞。
[0070]19.根据上述17或18所述的肝炎治疗方法，其中，上述肝炎为B型肝炎。
[0071](发明效果)
[0072]根据本发明的癌发病抑制剂及癌发病抑制方法，抑制了健康人的癌的发病。进而，根据本发明的抗体产生能力增强剂及抗体产生能力增强法方法，即使对于仅利用疫苗难以提升抗体效价的病例，也能够使抗体效价升高。
【专利附图】
【附图说明】
[0073]图1是给药的NK细胞数的测量结果(实施例二)。
[0074]图2是给药淋巴细胞亚群的解析结果(实施例二 )。
[0075]图3是NK细胞给药组和非给药组的年龄的分布(实施例二)。
[0076]图4是NK细胞给药组和非给药组的NK细胞冻结保存期间(实施例2)。
[0077]图5是NK细胞给药组的各健康人的分布(实施例二 )。
[0078]图6是NK细胞非给药组的各健康人的分布(实施例二)。
[0079]图7是NK细胞给药组和非给药组的癌发病率的结果(实施例二)。
[0080]图8是各种癌发病抑制率的结果(实施例二)。
[0081]图9是NK细胞给药组和T淋巴细胞给药组中给药的NK细胞数的比较(实施例三)。
[0082]图10是通过给药活化NK细胞而带来的HBs疫苗效果增强结果(实施例三)。
[0083]图11是通过给药活化T细胞而带来的HBs疫苗效果增强结果(实施例三)。
【具体实施方式】
[0084](NK 细胞)
[0085]本发明中使用的NK(natural killer、自然杀伤)细胞也可以利用通过自身公知的方法获得的任意NK细胞。但是，优选使用活化NK细胞。
[0086]另外，NK细胞的提供者(供体)和NK细胞的被提供者(受体)优选为同物种。例如，供体为人时，受体为人。
[0087]另外，NK细胞的提供者和NK细胞的被提供者更优选为同一个体。例如，供体为提供者X时，受体为提供者X。
[0088](NK细胞的获得方法)
[0089]本发明中使用的NK细胞可以通过自身公知的方法来获得(参照:表I)。NK细胞从由外周血、淋巴结、胸腺、骨髄、肿瘤、胸水、腹水或脐带血采集的单核细胞、更优选从外周血单核细胞诱导而获得。
[0090]例如，可以利用比重离心法从外周血回收包含NK细胞的单核细胞。另外，例如，可以使用针对在NK细胞上特异性表达的细胞表面标志的抗体，通过细胞分选仪、筛选(panning)、抗体磁珠法等分离NK细胞。
[0091][表 I]
[0092]NK细胞的培养和增殖方法
[0093]
【权利要求】
1.一种健康人用癌发病抑制剂，其特征在于，包含作为有效成分的NK细胞。
2.根据权利要求1所述的健康人用癌发病抑制剂，其特征在于，所述NK细胞为活化NK细胞。
3.一种健康人的癌发病抑制方法，其特征在于，将活化NK细胞给药给健康人。
4.根据权利要求3所述的癌发病抑制方法，其特征在于，所述活化NK细胞为源自所述健康人的NK细胞。
5.一种疫苗的抗体产生能力增强剂，其特征在于，包含作为有效成分的NK细胞。
6.根据权利要求5所述的抗体产生能力增强剂，其特征在于，所述疫苗为肝炎疫苗。
7.根据权利要求6所述的抗体产生能力增强剂，其特征在于，所述肝炎疫苗为B型肝炎疫苗。
8.根据权利要求5?7中任一项所述的抗体产生能力增强剂，其特征在于，所述NK细胞为活化NK细胞。
9.一种肝炎治疗剂，其特征在于，其组合有作为有效成分的NK细胞和作为有效成分的肝炎疫苗。
10.根据权利要求9所述的肝炎治疗剂，其特征在于，所述肝炎疫苗为B型肝炎疫苗。
11.一种肝炎治疗用试剂盒，其特征在于，其包含疫苗的抗体产生能力增强剂和肝炎疫苗，所述疫苗的抗体产生能力增强剂含有作为有效成分的NK细胞。
12.根据权利要求 11所述的肝炎治疗用试剂盒，其特征在于，所述肝炎疫苗为B型肝炎疫苗。
13.—种患者的疫苗的抗体产生能力增强方法，其特征在于，其包括以下的工序(I)(2)或(I)，(2V，即 (1)将活化NK细胞给药给患者的工序 (2)将疫苗给药给该患者的工序 (IV将疫苗给药给患者的工序 (2),将活化NK细胞给药给该患者的工序。
14.根据权利要求13所述的抗体产生能力增强方法，其特征在于，所述活化NK细胞为源自所述患者的NK细胞。
15.根据权利要求13或14所述的抗体产生能力增强方法，其特征在于，所述疫苗为肝炎疫苗。
16.根据权利要求15所述的抗体产生能力增强方法，其特征在于，所述肝炎疫苗为B型肝炎疫苗。
17.一种肝炎治疗方法，其特征在于，其包括以下的工序(I) (2)或(I)，(2)，，即 (1)将活化NK细胞给药给患者的工序 (2)将疫苗给药给该患者的工序 (IV将疫苗给药给患者的工序 (2),将活化NK细胞给药给该患者的工序。
18.根据权利要求17所述的肝炎治疗方法，其特征在于，所述活化NK细胞为源自所述患者的NK细胞。
19.根据权利要求17或18所述的肝炎治疗方法，其特征在于，所述肝炎为B型肝炎。
【文档编号】A61K35/12GK103429248SQ201180068795
【公开日】2013年12月4日 申请日期:2011年3月2日 优先权日:2011年3月2日
【发明者】益山纯一, 藤田实彦 申请人:株式会社赛莱克斯, 益山纯一, 藤田实彦