外用组合物的制作方法

专利名称：外用组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及包含吡咯并喹啉醌(以下有时简称为“PQQ”)或其生理上可接受的盐、以及EDTA或其生理上可接受的盐，被用作化妆品、准药物或药物的外用组合物。
背景技术：
弾性蛋白在生物体内，广泛分布于韧带、血管壁、肺、皮肤的真皮以及关节等需要伸縮性的器官。弾性蛋白起到对这些器官的组织赋予弹性的作用，在皮肤中为了保持弾力或紧致等而发挥大的作用。已知弹性蛋白由于老化、紫外线、活性氧或压力等而其量缓慢減少。已知在皮肤中，由于弹性蛋白减少而缓慢丧失皮肤的弹性，产生皱纹或松弛，成为老化的ー个大原因。 作为分解而使弹性蛋白减少的弹性蛋白酶中、与存在于皮肤的真皮基质中的弹性蛋白的分解有关的弹性蛋白酶，已知来自嗜中性粒细胞的弹性蛋白酶和来自成纤维细胞的弾性蛋白酶，其中，已知来自成纤维细胞的弾性蛋白酶对构成与皮肤的弹性維持相关的弹性纤维的弾性蛋白进行分解。因此，预测通过抑制其活性，能得到高的抗皱纹效果。其中，若在化妆品、药物或食品等的组合物中混入金属，则不仅由于金属的种类而有害，而且不能保持例如利用羧基こ烯基聚合物等制备的洗液(lotion)状、乳液状或凝胶状的组合物的性状。因此,这些组合物中经常配合有作为螯合剂的EDTA。此外，已知EDTA对弹性蛋白酶活性具有抑制作用(专利文献I)，有时作为抗老化的活性成分添加到这些组合物中。此外，PQQ存在于动物、植物和微生物等广泛的生物界中，作为获得能量所必需的氧化还原的辅酶发挥作用。已知PQQ具有很多生理活性，能期待作为药物、化妆品或食品的有效成分的应用。作为这种生理活性，已知活性氧及自由基的除去作用、细胞增殖促进作用、紫外线吸收作用、神经生长因子产生促进作用、脑机能改善作用、生发作用、顔色改善作用、黑色素产生抑制及美白作用、线粒体活化作用以及抗疲劳作用等。专利文献I :日本特开2006-298812号

发明内容
本发明的目的在于，提供包含吡咯并喹啉醌或其生理上可接受的盐(以下有时简称为“其盐”)、以及EDTA或其盐，具有优异的弾性蛋白酶活性抑制作用的外用组合物。 本发明人为了解决上述课题进行研究，得到以下发现。(i)PQQ或其盐具有弹性蛋白酶活性抑制作用。(ii)若在包含EDTA或其盐的组合物中配合PQQ或其盐，则不能得到能从各成分具有的弾性蛋白酶活性抑制作用预测程度的弾性蛋白酶活性抑制作用。反而EDTA或其盐的弾性蛋白酶活性抑制作用衰减。(iii)在包含EDTA或其盐以及PQQ或其盐的组合物中进而配合选自由碳原子数为2 6、羟基数为2 4的多元醇和ニ元醇醚构成的组中的至少ー种含羟基化合物，使该含羟基化合物的含量相对于PQQ或其盐I重量份为5重量份以上，从而能有效地发挥EDTA或其盐以及PQQ或其盐分别具有的弾性蛋白酶活性抑制作用。本发明是基于上述发现而完成的，提供以下的外用组合物。第I项.ー种外用组合物，包含(a)吡咯并喹啉醌或其生理上可接受的盐、(b)EDTA或其生理上可接受的盐、以及(c)选自由碳原子数为2 6、羟基数为2 4的多元醇和ニ元醇醚构成的组中的至少ー种含羟基化合物，相对于吡咯并喹啉醌或其生理上可接受的盐(a) I重量份，含羟基化合物(c)的含量为5重量份以上。第2项.如第I项所述的外用组合物，相对于吡咯并喹啉醌或其生理上可接受的盐(a) I重量份，含有O. 00001 500重量份的EDTA或其生理上可接受的盐(b)。第3项.如第I项或第2项所述的外用组合物，相对于组合物的总量，含有 O. 00001 10重量％的吡咯并喹啉醌或其生理上可接受的盐(a)。第4项.如第I项 第3项中的任意一项所述的外用组合物，相对于组合物的总量，含有O. 0001 3重量％的EDTA或其生理上可接受的盐(b)。第5项.如第I项 第4项中的任意一项所述的外用组合物，上述含羟基化合物(c)为选自由丙ニ醇、1，3_ 丁ニ醇、ー缩ニ丙ニ醇、甘油、异戊ニ醇、双甘油、こニ醇单甲醚和ニ甘醇单こ醚构成的组中的至少ー种。第6项.如第I项 第5项中的任意一项所述的外用组合物，相对于组合物的总量，含有O. 01 97重量％的上述含羟基化合物(C)。第7项.ー种抑制方法，通过在包含(a)吡咯并喹啉醌或其生理上可接受的盐以及(b) EDTA或其生理上可接受的盐的组合物中添加(c)选自由碳原子数为2 6、羟基数为2 4的多元醇和ニ元醇醚构成的组中的至少ー种含羟基化合物，抑制(a)成分与(b)成分混合导致的(a)成分的弾性蛋白酶活性抑制作用的降低、或者(a)成分与(b)成分混合导致的(b)成分的弾性蛋白酶活性抑制作用的降低。第8项.如第7项所述的方法，添加有(C)选自由碳原子数为2 6、羟基数为2 4的多元醇和ニ元醇醚构成的组中的至少ー种含羟基化合物之后的上述组合物，相对于吡咯并喹啉醌或其生理上可接受的盐(a) I重量份，含有O. 00001 500重量份的EDTA或其生理上可接受的盐(b)。第9项.如第7项或第8项所述的方法，添加有(C)选自由碳原子数为2 6、羟基数为2 4的多元醇和ニ元醇醚构成的组中的至少ー种含羟基化合物之后的上述组合物，相对于组合物的总量，含有O. 00001 10重量％的吡咯并喹啉醌或其生理上可接受的盐(a)。第10项.如第7项 第9项中的任意一项所述的方法，添加有(C)选自由碳原子数为2 6、羟基数为2 4的多元醇和ニ元醇醚构成的组中的至少ー种含羟基化合物之后的上述组合物，相对于组合物的总量，含有O. 0001 3重量％的EDTA或其生理上可接受的盐(b)。第11项.如第7项 第10项中的任意一项所述的方法，上述含羟基化合物(C)为选自由丙ニ醇、1，3-丁ニ醇、ー缩ニ丙ニ醇、甘油、异戊ニ醇、双甘油、こニ醇单甲醚和ニ甘醇单こ醚构成的组中的至少ー种。
第12项.如第7项 第11项中的任意一项所述的方法，将上述含羟基化合物(C)以相对于添加有(c)选自由碳原子数为2 6、羟基数为2 4的多元醇和ニ元醇醚构成的组中的至少ー种含羟基化合物之后的上述组合物的总量的浓度为O. 01 97重量％的方式添加到上述组合物中。由于PQQ或其盐具有多种药理活性，能期待作为化妆品、药物或准药物的活性成分来使用。此外，本发明人发现，PQQ或其盐具有弾性蛋白酶活性抑制作用，是对弹性蛋白的減少所导致的皱纹或松弛等的预防或改善有用的成分。另ー方面，EDTA或其盐有时欲以螯合剂形式配合到化妆品、药物或准药物中。此夕卜，已知具有弾性蛋白酶活性抑制作用，还有时为了皱纹或松弛等的预防或改 善来添加。因此，还有时欲将PQQ或其盐和EDTA或其盐一起配合到它们的外用组合物中，此时，能期待组合有两者的弾性蛋白酶活性抑制作用的优异效果。然而，本发明人发现，在配合有PQQ或其盐和EDTA或其盐的组合物中，得不到能由各成分的弾性蛋白酶活性抑制作用预测的相加效应。此外发现，与単独EDTA或其盐的情况相比，弾性蛋白酶活性抑制作用反而变弱。本发明的组合物，除了 PQQ或其盐以及EDTA或其盐之外，包含选自由碳原子数为2 6、羟基数为2 4的多元醇和ニ元醇醚构成的组中的至少ー种含羟基化合物，相对于PQQ或其盐I重量份，该含羟基化合物的含量为5重量份以上，由此能有效地发挥PQQ或其盐以及EDTA或其盐分别具有的弾性蛋白酶活性抑制作用。其中，能有效地发挥来自成纤维细胞的弾性蛋白酶活性抑制作用。由此，可以有效地提高皮肤的弹力，对皮肤赋予紧致或光泽，预防或改善皮肤的松弛、皱纹、皮肤粗糙或灰暗。


图I为表示通过PQQ或其盐与EDTA或其盐的并用，弾性蛋白酶活性抑制作用降低的图。图2为表示通过ニ元醇醚添加，弹性蛋白酶活性抑制作用恢复的图。图3为表示通过多元醇或ニ元醇醚添加，弹性蛋白酶活性抑制作用恢复的图。
具体实施例方式以下对本发明进行具体说明。本发明的外用组合物包含(a)PQQ或其盐、(b) EDTA或其盐、以及(C)选自由碳原子数为2 6、羟基数为2 4的多元醇和ニ元醇醚构成的组中的至少ー种含羟基化合物，相对于PQQ或其盐(a) I重量份，含羟基化合物(C)的含量为5重量份以上。PQQ或其盐PQQ存在于动物、植物和微生物等多种生物体内，因此可以从各种生物中提取。此外，PQQ可以购入市售品。作为PQQ的盐，可以举出钠盐和钾盐等碱金属盐，钙盐和镁盐等碱土类金属盐等。盐中，优选为钠盐、钾盐、钙盐和镁盐。相对于组合物的总量，组合物中的PQQ或其盐的含量优选为O. 00001重量％以上，更优选为O. OOOl重量％以上，进ー步更优选为O. 001重量％以上。此外，优选为10重量％以下，更优选为5重量％以下，进ー步更优选为I重量％以下。若在上述范围内，则以化妆品、准药物或药物外用剂的通常用量就能充分得到PQQ或其盐的生理活性。此外，若在上述范围内，则在制剂中的溶解性良好，此外作为外用组合物的制剂也形成优异的制剂。此外，相对于组合物 的总量，组合物中的PQQ或其盐的含量例如优选为O. 00001 10重量％，更优选为O. 0001 5重量％，进ー步更优选为O. 001 I重量％。EDTA 或其盐作为EDTA的盐，可以举出EDTA的Na盐(2Na盐、3Na盐和4Na盐)、K盐(2K盐、3K盐和4K盐)以及Ca.Na盐(Ca*2Na盐)等。它们还可以为水合物。其中，从螯合化作用高的方面考虑，优选为EDTA的盐，更优选为EDTA的Na盐和K盐。EDTA或其盐可以単独使用一种或组合使用两种以上。相对于组合物的总量，本发明的外用组合物中的EDTA或其盐的含量优选为O. 0001重量％以上，更优选为O. 001重量％以上，进ー步更优选为O. 01重量％以上。此外，优选为3重量％以下，更优选为I重量％以下，进ー步更优选为O. 5重量％以下。相对于组合物的总量，本发明的外用组合物中的EDTA或其盐的含量例如优选为O. 0001 3重量％，更优选为O. 001 I重量％，进ー步更优选为O. 01 O. 5重量％。若EDTA或其盐的含量在上述范围内，则能充分得到弾性蛋白酶活性抑制作用、螯合化作用的同时，形成不易产生对皮肤的刺激的组合物。此外，对于EDTA或其盐的含量相对于PQQ或其盐的含量的比率，相对于PQQ或其盐I重量份，优选为O. 00001重量份以上，更优选为O. 0001重量份以上，进ー步更优选为O. 001重量份以上。此外，优选为500重量份以下，更优选为100重量份以下，进ー步更优选为10重量份以下。对于EDTA或其盐的含量相对于PQQ或其盐的含量的比率，相对于PQQ或其盐I重量份，例如优选为O. 00001 500重量份，更优选为O. 0001 100重量份，进ー步更优选为O. 001 10重量份。若EDTA或其盐的含量相对于PQQ或其盐的含量的比率在上述范围内，则能充分得到弾性蛋白酶活性抑制作用和螯合化作用的同时，形成不易产生对皮肤的刺激的组合物。多元醇本发明的组合物含有多元醇作为含羟基化合物时，使用碳原子数为2 6、羟基数为2 4的多元醇。具体地说，可以举出こニ醇、丙ニ醇、1，3_丙ニ醇(三亚甲基ニ醇)、1，2_ 丁ニ醇、1，3- 丁ニ醇、2，3- 丁ニ醇、1，4- 丁ニ醇(四亚甲基ニ醇)、2_ 丁烯-1，4- ニ醇、1，5-戊ニ醇(五亚甲基ニ醇)、1，2-戊ニ醇、异戊ニ醇(异戊基ニ醇)、己ニ醇和ー缩ニ丙ニ醇等ニ元醇，甘油和三羟甲基丙烷等三元醇，双甘油、季戊四醇和1，2，6_己三醇等四元醇等。其中，优选为丙ニ醇、1，3_ 丁ニ醇、ー缩ニ丙ニ醇、甘油、异戊ニ醇和双甘油，更优选为丙ニ醇、1，3-丁ニ醇、甘油和双甘油。ニ元醇醚本发明的组合物含有ニ元醇醚作为含羟基化合物时，作为ニ元醇醚，具体地说，可以举出こニ醇单甲醚、こニ醇单こ醚和こニ醇单丙醚等こニ醇类的ニ元醇醚，
ニ甘醇单甲醚、ニ甘醇单こ醚和ニ甘醇单丙醚等ニ甘醇类的ニ元醇醚，丙ニ醇单こ醚和丙ニ醇单丙醚等丙ニ醇类的ニ元醇醚，以及一缩ニ丙ニ醇单こ醚和ー缩ニ丙ニ醇单丙醚等ー缩ニ丙ニ醇类的ニ元醇醚等。其中，优选为こニ醇类以及ニ甘醇类的ニ元醇醚，更优选为こニ醇单甲醚和ニ甘醇单こ醚，特别优选为ニ甘醇单こ醚。选自由碳原子数为2 6、羟基数为2 4的多元醇和ニ元醇醚构成的组中的含羟基化合物可以单独使用一种或组合使用两种以上。
_3] 多元醇· ニ元醇醚的含量相对于组合物的总量，选自由碳原子数为2 6、羟基数为2 4的多元醇和ニ元 醇醚构成的组中的至少ー种含羟基化合物在组合物中的含量优选为O. 01重量％以上，更优选为O. I重量％以上,进ー步更优选为O. 5重量％以上。若在上述范围内，则能有效地发挥PQQ或其盐以及EDTA或其盐具有的弹性蛋白酶活性抑制作用。此外，相对于组合物的总量，组合物中的上述含羟基化合物的含量优选为97重量％以下，更优选为50重量％以下，进ー步更优选为30重量％以下。若在上述范围内，则形成良好使用感的组合物。此外，相对于组合物的总量，组合物中的上述含羟基化合物的含量例如优选为O. 01 97重量％，更优选为O. I 50重量％，进ー步更优选为O. 5 30重量％。多元醇· ニ元醇醚相对于PQQ或其盐的比率相对于PQQ或其盐I重量份，选自由碳原子数为2 6、羟基数为2 4的多元醇和ニ元醇醚构成的组中的至少ー种含羟基化合物的总量为5重量份以上即可。此外，优选为10重量份以上，更优选为20重量份以上。若在上述范围内，则能有效地发挥PQQ或其盐以及EDTA或其盐具有的弾性蛋白酶活性抑制作用。此外，对上述含羟基化合物的总量不特别限制，然而相对于PQQ或其盐I重量份，优选为800重量份以下，更优选为500重量份以下，进ー步更优选为300重量份以下。若在上述范围内，则能有效地发挥PQQ或其盐以及EDTA或其盐具有的弹性蛋白酶活性抑制作用，此外能得到良好的使用感。相对于PQQ或其盐I重量份，选自由碳原子数为2 6、羟基数为2 4的多元醇和ニ元醇醚构成的组中的至少ー种含羟基化合物的总量例如优选为5重量份 800重量份，更优选为10 500重量份，进ー步更优选为20 300重量份。制剂形杰本发明的外用组合物可以将PQQ或其盐、EDTA或其盐以及上述多元醇和/或ニ元醇醚与药物、准药物或化妆品中通常使用的基剂或载体以及根据需要的添加剂一起混合，从而可以形成药物、准药物或化妆品用的皮肤外用组合物。对药物用的皮肤外用组合物的形态不特别限定，可以举出例如液体剂、悬浮剂、乳齐U、霜剂、软膏剂、凝胶剂、搽剂、洗剂和气雾剂等。这些制剂可以根据第15次修改日本药典制剂总则中记载的方法等进行制备。其中，优选为液体剂、悬浮剂、乳剤、霜剂、软膏剂、凝胶剂、洗剂和气雾剂，更优选为霜剂、乳剂和凝胶剂。形成准药物或化妆品用的皮肤外用组合物时，可以形成与上述药物相同的形态。除此之外，可以举出粘着剂和使药液浸渗到无纺布中而成的片状制剂等。其中，优选为液体剂、悬浮剂、乳剂、霜剂、软膏剂、凝胶剂、洗剂和片状制剂，更优选为霜剂、乳剂和凝胶剂。如霜剂和乳剂那样，含有油性基剂和水性基剂时，可以为W/0型或0/W型，优选为
0/W 型。不含有水的基剂的情况下，优选为软膏剂以及含有上述说明的多元醇和/或ニ元醇醚作为基剂的液体剂。作为形成准药物或化妆品用的皮肤外用组合物时的用途，具体地说，可以举出例如化妆水、乳液、凝胶、乳霜、美容液、防晒用化妆品、面膜、护肤膜、护手霜、润肤露和润肤霜等基础化妆品，洗面奶、卸妆品、剃须剂、沐浴液、洗发水、护发素和护理液(treatment)等洗涤用化妆品，润唇膏和ロ红等ロ唇用化妆品，粉底和睫毛膏等彩妆化妆品，脱毛剂以及沐浴剂等。
基剂或载体作为基剂或载体，可以举出例如液体石蜡、角鲨烷、凡士林、胶态烃(液体石腊和聚こ烯的复合软膏基质(プラスチベース)等)、地蜡、α-烯经低聚物和轻质液体石蜡等烃，甲基聚硅氧烷、交联型甲基聚硅氧烷、高聚甲基聚硅氧烷、环状硅氧烷、烷基改性硅氧烷、交联型烷基改性硅氧烷、氨基改性硅氧烷、聚醚改性硅氧烷、聚甘油改性硅氧烷、交联型聚醚改性硅氧烷、交联型烷基聚醚改性硅氧烷、硅氧烷·烷基链共改性聚醚改性硅氧烷、硅氧烷·烷基链共改性聚甘油改性硅氧烷、聚醚改性支链硅氧烷、聚甘油改性支链硅氧烷、丙烯酸硅、苯基改性硅氧烷和硅氧烷树脂等硅油，鲸蜡醇、十六醇十八醇混合物、硬脂醇和二十ニ烷醇等高级醇，胆留醇、植物留醇和植物留醇羟基硬脂酸酯等留醇类，霍霍巴油、绣线菊籽油、向日葵油、葡萄籽油、椿油、角鲨烷、牛油果油和米胚芽油等植物油，羊毛脂、大西洋胄胸鲷油、角鲨烷和马油等动物油，こ基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、阳离子化瓜尔胶和こ酰化透明质酸等天然高分子衍生物，聚こ烯吡咯烷酮、羧基こ烯基聚合物和丙烯酸甲基丙烯酸烷基酯共聚物等合成高分子，角叉菜胶、海藻酸、纤维素、瓜尔胶、榲椁籽、糊精、茱萸烷胶和透明质酸等天然高分子，聚こ烯醇缩丁醛，聚こニ醇，ニ嚅烷，丁ニ醇己ニ酸聚酷，肉豆蘧酸异丙酷、肉豆蘧酸辛基十二烷基酯、棕榈酸异丙酯、棕榈酸鲸蜡酯、异壬酸异壬酯、四(2-こ基己酸)季戊四醇酯、霍霍巴油和三(辛酸/癸酸)甘油酯等酯类，糊精和麦芽糊精等多糖类，こ醇和异丙醇等低级醇，上述说明的碳原子数为2 6、羟基数为2 4的多元醇，上述说明的ニ元醇醚，琥珀酸、こ醇酸、葡糖酸和柠檬酸等有机酸，以及水等水性基剂等。
其中，优选多元醇、高级醇、烃、酯类、硅油和有机酸，更优选为多元醇。作为本发明组合物的优选例子，可以举出含有上述说明的多元醇作为基剂的液体剂、洗剂、霜剂、凝胶剂和乳剂。基剂或载体可以单独使用ー种或者组合使用两种以上。添加剂本发明的外用组合物中，在不损害本发明效果的范围内，可以添加药物、准药物或化妆品中可添加的公知的添加剤，可以添加例如抗氧化剂、表面活性剤、增稠剂、保存剂、PH调节剂、稳定剂、抗刺激剂、防腐剤、着色剂、香料和珠光剂等。作为抗氧化剂，可以举出例如ニ丁基羟基甲苯、丁基羟基茴香醚、山梨酸、亚硫酸钠、抗坏血酸、抗坏血酸衍生物、生育酚、生育酚衍生物、异抗坏血酸和L-半胱氨酸盐酸盐坐寸O作为表面活性剤，可以举出例如脱水山梨糖醇单异硬脂酸酷、脱水山梨糖醇单月桂酸酷、脱水山梨糖醇单棕榈酸酯、脱水山梨糖醇单硬脂酸酷、脱水山梨糖醇五(2-こ基己酸)双甘油酯和脱水山梨糖醇四(2-こ基己酸)双甘油酯等脱水山梨糖醇脂肪酸酯类，丙ニ醇单硬脂酸酯等丙ニ醇脂肪酸酯类，聚氧こ烯氢化蓖麻油40 (HC0-40)、聚氧こ烯氢化蓖麻油50(HC0-50)、聚氧こ烯氢化蓖麻油60(HC0-60)和聚氧こ烯氢化蓖麻油80等氢化蓖麻油衍生物，聚氧こ烯(20)脱水山梨糖醇单月桂酸酷(聚山梨醇酯20)、聚氧こ烯(20)脱水山梨糖醇单硬脂酸酯(聚山梨醇酯60)、聚氧こ烯(20)脱水山梨糖醇单油酸酯(聚山梨醇酷80)和聚氧こ烯(20)脱水山梨糖醇异硬脂酸酯等聚氧こ烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯类，聚氧こ烯单椰油脂肪酸甘油酷，甘油烷基醚，烷基葡萄糖苷，聚氧こ烯鲸蜡基醚等聚氧化烯烷基醚，硬脂胺和油胺等胺类，聚氧こ烯·甲基聚硅氧烷共聚物、月桂基PEG-9聚ニ甲基硅氧基こ基聚ニ甲基硅氧烷和PEG-9聚ニ甲基硅氧基こ基聚ニ甲基硅氧烷等硅氧烷类表面活性剂，磷脂、莎梵婷(Surfactin)和皂角苷等天然表面活性剤，硬脂酸ニこ基氨基こ基酰胺和硬脂酸ニこ基氨基丙基酰胺等脂肪酰胺胺，三月桂基胺、ニ甲基硬脂基胺和ニ -2-こ基己基胺等烷基胺，硬脂酸ニ甲基氨基丙基酰胺和月桂基羟基磺基甜菜碱等甜菜碱类两性表面活性剂等。作为增稠剂，可以举出例如瓜尔胶、槐豆胶、角叉菜胶、透明质酸、黄原胶、聚こ烯醇、聚こ烯基吡咯烷酮、羧基こ烯基聚合物、丙烯酸甲基丙烯酸烷基酯共聚物、聚こニ醇、膨润土、海藻酸、聚こ烯ニ醇、软骨素硫酸钠、甲基纤维素、こ基纤维素、羟こ基纤维素、羟甲基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素和羧こ基纤维素等纤维素类增稠剂等。作为防腐剂或保存剂，可以举出例如苯甲酸、苯甲酸钠、脱氢こ酸、脱氢こ酸钠、对羟基苯甲酸异丁酯、对羟基苯甲酸异丙酯、对羟基苯甲酸丁酷、对羟基苯甲酸こ酷、对羟基苯甲酸丙酷、对羟基苯甲酸苄酯、对羟基苯甲酸甲酷、苯氧基こ醇、苯甲醇、氯丁醇、山梨酸及其盐、葡糖酸氯己定、烷烃ニ醇和甘油脂肪酸酷等。作为pH调节剂，可以举出例如无机酸(盐酸和硫酸等)、有机酸(乳酸、乳酸钠、柠檬酸、柠檬酸钠、琥珀酸和琥珀酸钠等)、无机碱(氢氧化钾和氢氧化钠等)以及有机碱(三こ醇胺、ニ异丙醇胺和三异丙醇胺等)等。作为稳定剂，可以举出例如聚丙烯酸钠、ニ丁基羟基甲苯和丁基羟基茴香醚等。作为抗刺激剂，可以举出例如甘草提取物和海藻酸钠等。添加剂可以単独使用ー种或者组合使用两种以上。其它的活件成分本发明的外用组合物在不妨碍本发明效果的范围内，可以包含其它有效成分。作为有效成分的具体例，可以举出例如保湿成分、抗炎成分、抗菌成分、维生素类、肽或其衍生物、氨基酸或其衍生物、细胞赋活成分、抗老化成分、促进血液循环成分、角质软化成分、美白成分、收敛成分和紫外线防御成分等。
作为保湿成分，可以举出例如甘油、1，3-丁ニ醇、丙ニ醇、聚こニ醇和双甘油海藻糖等多元醇，透明质酸钠、肝素类似物质、软骨素硫酸钠、胶原、弾性蛋白、角蛋白、甲壳质和脱こ酰壳多糖等高分子化合物，甘氨酸、天冬氨酸和精氨酸等氨基酸，乳酸钠、尿素和吡咯烷酮羧酸钠等天然保湿因子，神经酰胺、胆留醇和磷脂等脂质，春黄菊提取物、北美金缕梅提取物、茶提取物和紫苏提取物等植物提取物等。作为抗炎成分，可以举出例如来源于植物(例如聚合草)的成分，尿囊素、甘草酸或其衍生物、氧化锌、盐酸吡哆醇、生育酚こ酸酷、水杨酸或其衍生物以及ε -氨基己酸等。作为抗菌或杀菌成分，可以举出例如氯己啶、水杨酸、苯扎氯铵、利凡诺、碘、间苯ニ酚、こ醇、苄索氯铵、阿达帕林、过氧化苯甲酰、克林达霉素、甲酚、葡萄糖酸及其衍生物、聚维酮碘、碘化钾、碘、异丙基甲基苯酚、三氯卡班、三氯生、感光素101号、感光素201号、对羟基苯甲酸酷、苯氧基こ醇、1，2-戊ニ醇、烷烃ニ醇、甘油脂肪酸酷、壬ニ酸、盐酸烷基ニ氨基甘氨酸、葡糖酸氯己定和堆苯酚磺酸锌等。作为维生素类，可以举出例如视黄醇、视黄醇こ酸酯和视黄醇棕榈酸酯等视黄醇衍生物、视黄醛、视黄酸、视黄酸甲酷、视黄酸こ酷、视黄醇视黄酸酷、d- δ -生育酚视黄酸酷、α -生育酚视黄酸酯和β -生育酚视黄酸酯等维生素A类，dl- α -生育酚、dl- α -生育 酚こ酸酷、dl- α -生育酚琥珀酸酷和dl- α -生育酚琥珀酸钙等维生素E类，核黄素、黄素单核苷酸、黄素腺嘌呤二核苷酸、核黄素丁酸酷、核黄素四丁酸酷、核黄素5’ -磷酸酯钠和核黄素四烟酸酯等维生素Β2类，dl-α -生育酚烟酸酷、烟酸苯甲酷、烟酸甲酷、烟酸β - 丁氧基こ酯和烟酸1-(4-甲基苯基)こ酯等烟酸类，抗坏血酸原-A、抗坏血酸硬脂酸酷、抗坏血酸棕榈酸酯和L-抗坏血酸ニ棕榈酸酯等维生素C类，甲基橙皮苷、麦角骨化醇和胆钙骨化醇等维生素D类，叶绿醌和法呢醌等维生素K类，ニ苯甲酰硫胺素、ニ苯甲酰硫胺素盐酸盐、硫胺素盐酸盐、硫胺素鲸蜡基盐酸盐、硫胺素硫氰酸盐、硫胺素月桂基盐酸盐、硫胺素硝酸盐、硫胺素单磷酸盐、硫胺素赖氨酸盐、硫胺素三磷酸盐、硫胺素单磷酸酯磷酸盐、硫胺素单磷酸酯、硫胺素ニ磷酸酯、硫胺素ニ磷酸酯盐酸盐、硫胺素三磷酸酯和硫胺素三磷酸酯单磷酸盐等维生素B I类，盐酸吡哆醇、こ酸吡哆醇、盐酸吡哆醛、5’-磷酸吡哆醛和盐酸吡哆胺等维生素B6类、氰钴胺、羟钴胺和脱氧腺苷钴胺等维生素B 12类，叶酸和蝶酰谷氨酸等叶酸类，烟酸和烟酰胺等烟酸类，泛酸、泛酸钙、泛醇(panthenol)、D-泛酰巯基こ胺、D-泛硫こ胺、辅酶A和泛醇こ醚等泛酸类，生物素和生物胞素等生物素类，抗坏血酸、抗坏血酸钠、脱氢抗坏血酸、抗坏血酸磷酸酯钠和抗坏血酸磷酸酯镁等抗坏血酸衍生物的维生素C类，以及Y-谷维醇、肉碱、阿魏酸、α-硫辛酸和乳清酸等维生素样作用因子等。作为肽或其衍生物，可以举出例如角蛋白分解肽、水解角蛋白、胶原、来自鱼的胶原、缺端胶原、明胶、弾性蛋白、弾性蛋白分解肽、胶原分解肽、水解胶原、羟丙基氯化铵水解胶原、弾性蛋白分解肽、贝壳硬蛋白分解肽、水解贝壳硬蛋白、乳蛋白分解肽、水解乳蛋白、月桂酰水解乳蛋白钠、大豆蛋白分解肽、水解大豆蛋白、小麦蛋白、小麦蛋白分解肽、水解小麦蛋白、酪蛋白分解肽以及酰化肽(棕榈酰低聚肽、棕榈酰基五肽和棕榈酰基四肽等)等。作为氨基酸或其衍生物，可以举出例如甜菜碱(三甲基甘氨酸)、脯氨酸、羟脯氨酸、精氨酸、赖氨酸、丝氨酸、氨基こ酸、丙氨酸、苯基丙氨酸、β -丙氨酸、苏氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、胱氨酸、蛋氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、组氨酸、牛磺酸、Y-氨基丁酸、Y-氨基-β-羟基丁酸、肉毒碱、肌肽和肌酸等。作为细胞赋活成分，可以举出例如Y-氨基丁酸和ε -氨基己酸等氨基酸类，视黄醇、硫胺、核黄素、盐酸吡哆醇和泛酸类等维生素类，こ醇酸和乳酸等α-羟基酸类，单宁，类黄酮，皂角苷，尿囊素和感光素301号等。
作为抗老化成分，可以举出例如潘氨酸、激动素、熊果酸、姜黄提取物、鞘氨醇衍生物、硅、硅酸、N-甲基-L-丝氨酸和甲羟戊酸内酯等。作为促进血液循环作用成分，可以举出例如来源于植物(例如人參、明日叶、山金车、银杏、茴香、蓝萼香茶菜(ヱンメイソウ)、オランダカシ、洋甘菊、罗马洋甘菊、胡萝卜、龙胆、牛蒡、稻、山楂、香 、锐刺山楂、欧洲刺柏、川；、日本猜牙菜、百里香、丁香、陈皮、当归、桃仁、橘皮、胡萝卜、大蒜、假叶树、葡萄、牡丹、七叶树、香蜂草、柚子、薏苡仁、迷迭香、玫瑰果、陈皮、当归、橘皮、桃、杏、核桃或玉米)的成分以及葡糖基橙皮苷等。作为角质软化成分，可以举出例如尿素、水杨酸、こ醇酸、果酸、植酸和碘等。作为美白成分，可以举出例如抗坏血酸及其衍生物、熊果苷、生育酚和凝血酸等。作为收敛成分，可以举出例如对苯酚磺酸锌、氧化锌、薄荷醇和こ醇等。
作为紫外线防御成分，可以举出例如对甲氧基肉桂酸2-こ基己酷、2-[4_( ニこ氨基)-2-轻基苯甲酰基]苯甲酸己酷、2,4,6-三[4-(2-こ基己氧羰基)苯胺基]-1,3,5-三嗪、叔丁基甲氧基ニ苯甲酰基甲烷、ニ亚苄基氧代咪唑烷丙酸こ基己酷、こ基己基三嗪酮、对氨基苯甲酸及其衍生物、对ニ甲基氨基苯甲酸辛酷、水杨酸こニ醇酯、ニ羟基ニ苯甲酮、氧化钛和氧化锌等。其它的有效成分可以单独使用一种或组合使用两种以上。使用方法本发明的外用组合物根据使用对象的皮肤的状态、年龄或性别等不同而不同，然而例如若为以下的方法即可。即，对皮肤I天数次(例如I 5次、优选I 3次)涂布适量(例如O. 05 5g)即可。此外，PQQ或其盐的I天用量例如以O. 0005 O. 05g、优选O. 001 O. 02g、更优选O. 002 O. Olg来涂布组合物即可。此外，涂布时间例如为I 6个月、优选3 6个月即可。本发明的外用组合物可以适用于具有皮肤的松弛、皱纹、皮肤粗糙或灰暗的人。此夕卜，可以适用于期待PQQ或其盐的生理活性，具有各种皮肤疾病或皮肤问题的人。此外，为了预防皮肤问题，具有正常皮肤的人也成为适合的使用対象。甚它本发明包含ー种抑制方法，通过在包含(a) PQQ或其盐以及(b) EDTA或其盐的组合物中添加(c)选自由碳原子数为2 6、羟基数为2 4的多元醇和ニ元醇醚构成的组中的至少ー种含羟基化合物，抑制(a)成分与(b)成分混合导致的(a)成分的弾性蛋白酶活性抑制作用的降低、或者(a)成分与(b)成分混合导致的(b)成分的弾性蛋白酶活性抑制作用的降低。该方法中的(a)成分、(b)成分和(C)成分的具体例，(a)成分、(b)成分和(c)成分的优选例，(a)成分、(b)成分和(C)成分的用量，(a)成分、(b)成分和(C)成分的使用比率，组合物中可以含有的基剂或载体，组合物中可以含有的添加剂，组合物中可以含有的其它有效成分以及组合物的制剂形态等如对本发明的外用组合物说明所述。[实施例]以下举出实施例对本发明进行更具体的说明，但是本发明不被这些实施例所限定。(I)弾性蛋白酶活性抑制效果的试验方法
如下所述对来自人成纤维细胞的弹性蛋白酶活性抑制率进行试验。使用含有10%胎牛血清的极限必需培养基(DMEM)将来自正常成人的皮肤成纤维细胞(NHDF、クラボゥ社制)以2X IO4细胞/孔的密度接种到细胞培养用的96孔微孔板(Corning)，在37°C、5% CO2培养箱中培养24小时。除去培养上清后，添加50 μ I的O. 5%Triton X-100水溶液，使用在室温下静置30分钟的液体作为粗酶液。向各孔内的粗酶液(50 μ I)中添加溶解有EDTA · 2Na (和光纯药エ业)、PQQ · 2Na等ー种或两种以上的成分的O. IM Tris盐酸缓冲液(pH8. O)溶液50 μ I。进ー步地，将包含I. 5mM的PMSF和5mM的弾性蛋白酶合成基质琥珀酰-丙氨酰-丙氨酰-丙氨酰-对硝基苯胺(ぺプチド研究所制)的O. IM Tris盐酸缓冲溶液(pH 8. O) 100 μ I添加到各孔内，使孔内总量为200μ 1，在37°C下于暗处静置2小吋。使用吸光光度计对来自成纤维细胞的弾性蛋白酶水解产生的对硝基苯胺形成的405nm的吸光度进行測定。 未添加受试药剂(仅缓冲液)时的吸光度的值设为C’，添加受试药剂时的吸光度的值设为S’，由下式算出弾性蛋白酶抑制率。来自成纤维细胞的弾性蛋白酶抑制率) = (1_(S’ /C’ )) XlOO(2)由于PQQ或其盐.与EDTA或其盐.的并用导致的弾性蛋白_活性抑制作用的降低制备下述表I所示组成的试验液，如(I)所述算出弾性蛋白酶活性抑制率。參考例I的EDTA-2Na的弹性蛋白酶活性抑制率为100时的相对值如表I和图I的㈧、⑶。[表I]
权利要求
1.ー种外用组合物，包含(a)吡咯并喹啉醌或其生理上可接受的盐、(b)EDTA或其生理上可接受的盐、以及(c)选自由碳原子数为2 6、羟基数为2 4的多元醇和ニ元醇醚构成的组中的至少ー种含羟基化合物，相对于吡咯并喹啉醌或其生理上可接受的盐(a) I重量份，含羟基化合物(c)的含量为5重量份以上。
2.根据权利要求I所述的外用组合物，相对于吡咯并喹啉醌或其生理上可接受的盐(a) I重量份，含有O. OOOOl 500重量份的EDTA或其生理上可接受的盐(b)。
3.根据权利要求I或2所述的外用组合物，相对于组合物的总量，含有O.00001 10重量％的吡咯并喹啉醌或其生理上可接受的盐(a)。
4.根据权利要求I 3中的任意一项所述的外用组合物，相对于组合物的总量，含有O.0001 3重量％的EDTA或其生理上可接受的盐(b)。
5.根据权利要求I 4中的任意一项所述的外用组合物，上述含羟基化合物(c)为选自由丙ニ醇、1，3-丁ニ醇、ー缩ニ丙ニ醇、甘油、异戊ニ醇、双甘油、こニ醇单甲醚和ニ甘醇单こ醚构成的组中的至少ー种。
全文摘要
本发明提供一种外用组合物，包含(a)吡咯并喹啉醌或其生理上可接受的盐、(b)EDTA或其生理上可接受的盐、以及(c)选自由碳原子数为2～6、羟基数为2～4的多元醇和二元醇醚构成的组中的至少一种含羟基化合物，相对于吡咯并喹啉醌或其生理上可接受的盐(a)1重量份，含羟基化合物(c)的含量为5重量份以上。
文档编号A61K31/4745GK102688155SQ201210068430
公开日2012年9月26日 申请日期2012年3月15日 优先权日2011年3月23日
发明者辻雅夫 申请人:日本乐敦制药株式会社