专利名称：一种复方紫锥菊制剂及其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明属于植物药制品领域，涉及一种动物免疫增强剂，具体来说，涉及一种复方紫锥菊颗粒及其制备方法和应用。
背景技术：
紫锥菊是原产于北美和加拿大南部的一种松果菊属植物，我国部分地区有引种。紫锥菊中含多糖、多酚(包括菊苣酸、咖啡酸的衍生物)、黄酮类、精油、多炔、烷基胺和生物碱。具有提高免疫力及抗菌消炎作用。多糖类可以激发身体的细胞去对抗感染；多酚类、黄酮类及咖啡酸衍生物能提高机体的免疫力，它们能刺激免疫系统细胞活动，当这些细胞有活性时，白血球更迅速把引起疾病的侵略者包围，使病毒或细菌死亡，防止他们繁殖，或停止他们的活动。尤其是菊苣酸，是紫锥菊中极为重要的免疫活性成分之一。近年来的药理研究表明，菊苣酸具有增强免疫功能和抗炎作用，并能抑制透明质酸酶，保护胶原蛋白免受可导致降解的自由基的影响。国外有将紫锥菊及其制剂用于猪的繁殖与呼吸道综合征的治疗，国内临床试验也证实紫锥菊对猪的圆环病毒病、繁殖与呼吸道综合征以及鸡的传染性法氏囊炎、传染性支气管炎、非典型性新城疫等疾病有较好的疗效。然而，单独使用紫锥菊在治疗重度疾病时，仅靠刺激机体的免疫系统，提高机体的免疫力，其杀菌消炎作用较弱。治愈效果并不理想，因此，寻找能够与紫锥菊功能互补的其他类型的药物，与之构建复合制剂，则是进一步开发紫锥菊用途的另一条出路。溶溶菌酶又称胞壁质酶或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶，是一种能水解致病菌中黏多糖的碱性酶，具有杀菌作用的天然抗感染物质。主要通过破坏细胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡糖之间的P -I, 4糖苷键，使细胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，导致细胞壁破裂内容物逸出而使细菌溶解。溶菌酶还可与带负电荷的病毒蛋白直接结合，与DNA、RNA、脱辅基蛋白形成复盐，使病毒失活。该酶具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。溶菌酶的抗菌谱较广，不仅局限于革兰氏阳性菌，对部分革兰氏阴性菌也有抑制效果。溶菌酶的直接杀灭致病菌功能，能够弥补紫锥菊的不足。但溶菌酶本身无增强免疫力的作用，单用溶菌酶，对于长期感染细菌、病毒而导致的机能下降的机体，疗效不显著。而紫锥菊提高机体免疫力功能极强，能激发身体的细胞去对抗感染，刚好弥补溶菌酶的不足。然而，国内外对紫锥菊以及溶菌酶的复合研究仍然较少，两者多是单独使用。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种复方紫锥菊制剂，它以紫锥菊提取物与溶菌酶为有效成分，以蔗糖和糊精为辅料加工而成。本发明人经过抑菌试验对比和实际应用的药效对比筛选确定，上述紫锥菊提取物与溶菌酶的复方制剂中，有效成分紫锥菊提取物与溶菌酶的质量用量比例为(4 I ):Io其中，优选的紫锥菊提取物与溶菌酶的质量用量比例为3 : I。本发明所述的紫锥菊提取物与溶菌酶的复方制剂是一种复方颗粒制剂，其中，有效成分紫锥菊提取物与溶菌酶的总用量为20%，辅料蔗糖和糊精的总用量80%，其中，蔗糖用量为64%，糊精用量为16%。(本发明原料用量均以质量计，以下同)
本发明所述的紫锥菊提取物与溶菌酶的复方颗粒制剂的制备方法如下
取紫锥菊提取物与溶菌酶混合，加入混合物质量I. 2倍的纯化水，搅拌均匀，得紫锥菊提取物-溶菌酶混合液；再取糊精和蔗糖，混合均匀，投入流化床，然后在50°C条件下将紫 锥菊取物-溶菌酶混合液喷至糊精与蔗糖的混合物上，即获得有效成分为20%的复方紫锥菊颗粒制剂。也可以取紫锥菊提取物与溶菌酶混合，然后加入糊精和蔗糖，混合均匀，再加入混合物总质量30%的80%乙醇溶液，并混合均匀，制成紫锥菊提取物-溶菌酶软材,将此软材通过摇摆制粒机制得湿颗粒，再将湿颗粒在50°C烘干，即获得有效成分为20%的紫锥菊-溶菌酶复方颗粒制剂。本发明所提供的紫锥菊提取物与溶菌酶的复方制剂，是由本发明人研究制备的紫锥菊提取物与溶菌酶为有效成分，添加适当辅助成分复配加工制成的，所使用的紫锥菊提取物中，多酚含量> 8. 10%，菊苣酸含量> 5. 00% ;所使用的溶菌酶执行的卫生部部颁标准(生化药品第一册)标准，含量为6350单位/mg。上述复方紫锥菊制剂具有提高动物免疫力，抗菌、抗病毒功能，可用作预防和治疗动物疾病的药物。由于目前市场上的紫锥菊提取物的提取方法主要是简单的水浸和醇提取，致使提取效率偏低，存在某一有效成分含量偏高，而其余有效成分含量较低的缺点，从而影响了使用效果。为保证其疗效，本发明人研究提供了一种独特的提取方法，使所制得的提取物中的多糖、多酚及菊苣酸的含量都明显高于目前市场上常规方法所制得的紫锥菊提取物。本发明所提供的紫锥菊提取物是采用碱性乙醇溶液及溶菌酶对紫锥菊药材进行两次提取而获得的，其中多糖含量彡21. 50%，多酚含量彡8. 70%，菊苣酸含量彡5. 00%。本发明所提供的紫锥菊提取物的制备方法，是采用先将紫锥菊药材在pH为12的10 60%乙醇溶液中回流提取，然后，再将滤渣用1%的溶菌酶水溶液浸泡提取的两步提取方法。本发明所述的紫锥菊提取物的具体制备方法如下
取8份浓度为10%至60%的乙醇溶液(优选30%)，用Ca (OH) 2调节pH值至12，取I份紫锥菊药材，去杂质、粉碎，浸泡于上述碱性乙醇溶液中I小时，并回流提取3次，每次2小时，过滤，合并滤液，得滤液与滤渣两部分；滤渣加10倍量1%的溶菌酶水溶液，37°C浸泡12小时，过滤，弃去沉淀，滤液与之前的醇提液合并，得紫锥菊提取液。将滤液用HCl调节pH至4飞，静置3小时，过滤，沉淀干燥粉碎，得紫锥菊沉淀粉；滤液回收乙醇至无醇味，并浓缩至密度为I. 15g/ml，喷雾干燥，所得紫锥菊粉末与紫锥菊沉淀粉混合，得紫锥菊提取物(本发明中所涉及的用量份数或百分数除特别注明外，均为以质量份数或质量％计，以下同)。上述提取方法中，使用了 pH为12的碱性乙醇溶液对紫锥菊药材进行回流提取，有利于提高提取物中多酚及菊苣酸的含量，大大提高了所得提取物的有效性；植物细胞壁的主要成分为纤维素和果胶，溶菌酶可破坏其结构，在乙醇提取后的滤渣中，加入适量的溶菌酶，可以使紫锥菊细胞的细胞壁破坏，使其中的有效成分多糖、多酚和菊苣酸进一步释放出来，提高了紫锥菊的提取率。本发明还提供了一种复方紫锥菊制剂，将紫锥菊的提取物与溶菌酶作为主要有效成分，在有效的增效配比范围内，进行复配，使两者产生协同互补和增效作用，提高杀菌和抗病功能；添加辅料制成复方紫锥菊颗粒制剂，既可以使给药方便，又能改善紫锥菊的口味，还能便于贮藏、运输。紫锥菊能提高机体免疫力，激发身体的细胞去对抗感染，溶菌酶能直接杀灭致病菌，两者联用，即可提高机体免疫力，又能直接杀灭致病菌，起到消炎作用，标本兼治。本发明复合制剂，实现了紫锥菊与溶菌酶的联用，比单独使用任何一种的疗效更好，并且紫锥菊、溶菌酶与抗生素相比，在使用中均不会产生耐药性。溶菌酶的直接杀灭致病菌功能，能 够弥补紫锥菊的不足，但无增强免疫力的作用；单用溶菌酶，对于长期感染细菌、病毒而导致的机能下降的机体，疗效甚微，而紫锥菊提高机体免疫力功能极强，能激发身体的细胞去对抗感染，刚好弥补溶菌酶的不足。试验证明，两者联用，即可提高机体免疫力，又能直接杀灭致病菌，起到消炎作用，标本兼治，具有协同增效作用。单独使用紫锥菊在治疗重度疾病时，仅靠刺激机体的免疫系统，提高机体的免疫力，治愈效果并不理想，单独使用紫锥菊杀菌消炎作用甚微。而单独使用溶菌酶，由于溶菌酶无增强免疫力的作用，对于长期感染细菌、病毒而导致的机能下降的机体几无任何疗效。本发明所提供的复合紫锥菊制剂，实现了紫锥菊与溶菌酶的联用，比单独使用任何一种的疗效更好，并且紫锥菊、溶菌酶与抗生素相比，在使用中均不会产生耐药性，且无复发、无药物残留，安全性更高。临床试验结果显示，本发明的复方紫锥菊颗粒制剂对治疗鸡大肠杆菌病效果良好。具体用法用量如下
(I)预防疾病混饮每IOOOkg水中；复方紫锥菊颗粒制剂用量鸡IOOg ;猪500-100(^，连用10天。(2)治疗疾病混饮每IOOOkg水，复方紫锥菊颗粒制剂用量鸡200g ;猪1500-2500g，连用 5 天。下面结合试验方法来说明本发明的合理性。
具体实施例方式实施例一.本发明所述紫锥菊提取物与溶菌酶复方制剂的制备方法。实施例一 .I.紫锥菊提取物溶菌酶=4 : I复方颗粒制剂的制备
取紫锥菊提取物160g，溶菌酶40g，加纯化水240g，搅拌均匀，得紫锥菊提取物-溶菌酶混合液；再取糊精160g、蔗糖640g，混合均匀，投入流化床；然后在50°C条件下将紫锥菊取物-溶菌酶混合液喷至糊精与蔗糖的混合物上，即获得有效成分为20%的紫锥菊溶菌酶复方颗粒制剂；其中，紫锥菊提取物16%，溶菌酶4%，蔗糖64%，糊精16%。实施例一 .2.紫锥菊提取物溶菌酶=3 : I复方颗粒制剂的制备取紫锥菊提取物150g，溶菌酶50g，加纯化水240g，搅拌均匀，得紫锥菊提取物-溶菌酶混合液；再取糊精160g、蔗糖640g，混合均匀，投入流化床；然后在50°C条件下将紫锥菊取物-溶菌酶混合液喷至糊精与蔗糖的混合物上，即获得有效成分为20%的紫锥菊-溶菌酶复方颗粒制剂；其中，紫锥菊提取物15%，溶菌酶5%，蔗糖64%，糊精16%。实施例一 .3.紫锥菊提取物溶菌酶=1 : I复方颗粒制剂的制备
取紫锥菊提取物100g，溶菌酶100g，加纯化水240g，搅拌均匀，得紫锥菊提取物-溶菌酶混合液；再取糊精160g、蔗糖640g，混合均匀，投入流化床；然后在50°C条件下将紫锥菊取物-溶菌酶混合液喷至糊精与蔗糖的混合物上，即获得有效成分为20%的紫锥菊溶菌酶复方颗粒制剂；其中，紫锥菊提取物10%，溶菌酶10%，蔗糖64%，糊精16%。
实施例二 .本发明所述复方紫锥菊制剂中，有效成分紫锥菊提取物与溶菌酶的用量比例的优选及效果对比试验。实施例二 I.
不同比例的紫锥菊提取物与溶菌酶的复方制剂的体外抑制大肠杆菌的效果比较 (一)实验材料
试验菌株肉鸡源大肠杆菌。培养基111号培养基(按中国兽药典2010版一部制备)。复方制剂处方
处方I:紫锥菊提取物溶菌酶=5 : 1，
处方2:紫锥菊提取物溶菌酶=4 : 1，
处方3:紫锥菊提取物溶菌酶=3. 5 : 1，
处方4:紫锥菊提取物溶菌酶=3 : I，
处方5:紫锥菊提取物溶菌酶=2. 5 : 1，
处方6:紫锥菊提取物溶菌酶=2 : 1，
处方7:紫锥菊提取物溶菌酶=1.5 : 1，
处方8:紫锥菊提取物溶菌酶=1 : 1，
处方9:紫锥菊提取物溶菌酶=1 : 2，
分别制成有效成分含量20%的复合颗粒制剂，
阴性对照组生理盐水。取以上各处方的颗粒各100克，置于三角烧瓶中，加入无菌水100ml，搅溶，煮沸15分钟。1000转/分钟离心10分钟，取上清液，121°C灭菌15分钟，4°C冰箱保存备用。(二)实验内容
细菌平板的制备取直径约90mm，高16 17mm的平底双碟，分别注入60°C无菌III号培养基20ml，使在碟底内均匀摊布，放置水平台面上使凝固，作为底层。另取培养基适量加热溶化后，放冷至48 50°C，加入肉鸡源大肠杆菌悬液适量5ml，使在底层上均匀摊布，作为菌层。放置在水平台上冷却后，制成细菌平板。大肠杆菌对不同处方的药敏实验纸片法将以上不同处方的颗粒溶液制成药敏纸片，测定抑菌圈的大小。方法取直径为0. 6厘米的灭菌滤纸片在不同处方的颗粒溶液中浸泡40分钟，取出备用，在已制备好的细菌平板中，无菌操作放置药敏纸片，每种药物贴6片，然后将平板置37°C培养箱中培养24小时后测定抑菌圈的大小，取其平均值。并将其平均值与阴性对照组数据进行比较，并用SAS统计软件进行数据分析。(三)实验结果
权利要求
1.一种复方紫锥菊制剂，其特征在于有效成分紫锥菊提取物与溶菌酶的质量用量比例为(4 I ) : I。
2.如权利要求I所述的复方紫锥菊制剂，其特征在于有效成分紫锥菊提取物与溶菌酶的质量用量比例为3 :1。
3.如权利要求I所述的复方紫锥菊制剂，其特征在于是由20%有效成分与辅料蔗糖和糊精加工的一种20%复方颗粒制剂。
4.如权利要求3所述的复方紫锥菊制剂，其特征在于所说的复方颗粒制剂中，紫锥菊提取物与溶菌酶的用量比例为3:1，各组分的质量份数为紫锥菊提取物15%、溶菌酶5%、蔗糖64%、糊精16%。
5.如权利要求1-4所述的复方紫锥菊制剂的制备方法，其特征在于具体操作工艺步骤如下 取紫锥菊提取物与溶菌酶混合，加入混合物质量I. 2倍的纯化水，搅拌均匀，得紫锥菊提取物-溶菌酶混合液；再取糊精和蔗糖，混合均匀，投入流化床，然后在50°C条件下将紫锥菊取物-溶菌酶混合液喷至糊精与蔗糖的混合物上，即获得有效成分为20%的复方紫锥菊颗粒制剂。
6.如权利要求1-4所述的复方紫锥菊制剂，其特征在于所使用的紫锥菊提取物是采用碱性乙醇溶液及溶菌酶对紫锥菊药材进行两次提取获得；其中多糖含量> 21. 50%，多酚含量> 8. 10%，菊苣酸含量> 5. 00%。
7.如权利要求6所述复方紫锥菊制剂的制备方法，其特征在于采用先将紫锥菊药材在PH为12的10 60%乙醇溶液中回流提取，然后，再将滤渣用1%的溶菌酶水溶液浸泡提取的两步提取方法。
8.如权利要求6或7所述复方紫锥菊制剂的制备方法，其特征在于具体制备方法如下 取8份浓度为10%至60%的乙醇溶液，用Ca(OH)2调节pH值至12 ;将I份紫锥菊药材,去杂质、粉碎,浸泡于上述碱性乙醇溶液中I小时,并回流提取3次，每次2小时，过滤，合并滤液，得滤液与滤渣两部分；滤渣加10倍量1%的溶菌酶水溶液，37°C浸泡12小时，过滤，弃去沉淀，滤液与之前的醇提液合并，得紫锥菊提取液；将滤液用HCl调节pH至4飞，静置3小时，过滤，沉淀干燥粉碎，得紫锥菊沉淀粉；滤液回收乙醇至无醇味，并浓缩至密度为I.15g/ml，喷雾干燥，所得紫锥菊粉末与紫锥菊沉淀粉混合，得紫锥菊提取物。
9.如权利要求4-7所述的紫锥菊提取物与溶菌酶的复方颗粒制剂，其特征在于其具有提高动物免疫力，抗应激，杀菌、抗病毒功能，可用于制备预防和治疗猪的蓝耳病、流感、圆环病毒病及鸡传染性法氏囊炎、非典型性新城疫、传染性喉气管炎、传染性支气管炎、流感病毒疾病的药物。
10.如权利要求4-7所述的紫锥菊提取物与溶菌酶的复方颗粒制剂，其特征在于用作预防和治疗因大肠杆菌、沙门氏菌等感染引发的鸡病的药物。
全文摘要
本发明为一种复方紫锥菊制剂，其中有效成分紫锥菊提取物与溶菌酶的用量比例为(4～1) : 1，两者用量共占20%，辅料蔗糖占64%、糊精占16%。本发明中所选用的紫锥菊提取物，是采用碱性乙醇溶液及溶菌酶对紫锥菊药材进行两次提取获得；其中多糖含量≥21.50%，多酚含量≥8.10%，菊苣酸含量≥5.00%。本发明复合制剂具有提高动物免疫力，抗菌、抗病毒功能，可用作预防和治疗动物疾病特别是预防和治疗因大肠杆菌感染引发的鸡病的药物。
文档编号A61K38/47GK102772790SQ201210217520
公开日2012年11月14日 申请日期2012年6月28日 优先权日2012年6月28日
发明者冉蓉, 吴连勇, 孔梅, 崔进, 李成应, 王海挺, 王雅琪, 田玉柱 申请人:齐鲁动物保健品有限公司