专利名称：一种提高荷叶黄酮未氧化率的方法
技术领域：
本发明涉及一种使药用化学成分不发生质变的方法，具体指一种提高荷叶黄酮未氧化率的方法。
背景技术：
黄酮类化合物是荷叶的主要活性成分，它 通常由两个具有酚羟基的苯环(A-与B-环)通过中央三碳原子相互连结而成的一系列化合物，主要包括异槲皮素、槲皮甙、莲甙、山奈酚等，荷叶黄酮类化合物具有多种生物活性，如调脂作用、抗氧化、抗衰老、清除自由基和抑制脂肪肝作用等，其主要作用有抗氧化、防护心血管及抑菌。荷叶黄酮类化合物由于具有巨大的资源优势、良好的药理活性和极低的毒性，有望成为一种非常有应用价值的药物。基于自由基理论，荷叶黄酮类化合物可以结合各种类型自由基与其他物质发生还原反应，从而使其具有良好的抗氧化活性。从荷叶黄酮类化合物的结构来看，其还原性是以消耗其自身氧化性为基础，因此保存其本来的生物活性具有重要的意义。现有技术中保护荷叶黄酮类化合物不被氧化的方法，通常是往荷叶渗滤液中添加一定量的保护剂，通过查阅已公开的文献，发现目前应用于保护荷叶黄铜类化合物不被氧化的保护剂基本都为葡萄糖酸内酯，将葡萄糖酸内酯与荷叶渗滤液混合，这种方法对荷叶黄铜类化合物的保护非常有限。由于荷叶黄铜类化合物良好的药理活性和极低的毒性，人们迫切渴望可以研究出一种可以提高荷叶黄铜类化合物未氧化率的保护剂，但是申请人查阅相关文件发现，虽然有学者指出可以将多种具有还原性质的物质组合来增加对荷叶黄铜类化合物的保护，但是应选取哪些物质进行混合以及按照什么样的比例进行混合才能既可以提高荷叶黄铜类化合物的未氧化率，又不会增加对人体有害的成分，破开荷叶黄铜类化合物的药理活性却一直未能得到解决。
发明内容
针对现有技术存在的上述问题，本发明要解决的技术问题是如何提供一种对荷叶黄铜类化合物不被氧化的保护效果好，同时对人体有不具有任何副作用的保护方法。解决该技术问题，本发明是这样实现的一种提高荷叶黄酮未氧化率的方法，包括
步骤I:复合保护剂由葡萄糖酸内酯、烟酰胺和植酸构成，所述葡萄糖酸内酯、烟酰胺和植酸的配比关系如下
葡萄糖酸内酯0. 05-0. 40g ；
烟酰胺0. 1-0. 5g ；
植酸10-60 μ L ；
步骤2 :将步骤I中制备的复合保护剂加入到IOOmL荷叶渗滤液中；步骤3 :采用磁力搅拌器对步骤2中加入复合保护剂的荷叶渗滤液搅拌10-15min，使所述复合保护剂与荷叶渗滤液充分混合。由于本技术方案中复合保护剂的各成分均为天然物质，其对人体的副作用非常小；另外该复合保护剂采用的多种天然物质进行一定比例的混合，当将该混合物质加入到IOOmL荷叶渗滤液中时，较大限度地发挥复合保护剂各成分的活性，因此对荷叶黄铜类化合物不被氧化的保护效果更好；本技术方案中采用磁力搅拌器对加入复合保护剂的荷叶渗滤液进行搅拌，使复合保护剂与荷叶渗滤液混合均匀，并使混合后混合液的温度均匀，更加有利于对荷叶渗滤液中荷叶黄铜类化合物的保护。进一步地，步骤I中复合保护剂中葡萄糖酸内酯、烟酰胺和植酸配比关系是葡萄糖酸内酯0. 28g，烟酰胺O. 444g，植酸54. O μ L0此时复合保护剂中各充分的活性能最大限度的发挥，该复合保护剂对荷叶渗滤液中荷叶黄铜类化合物的保护作用最强。
步骤3中采用磁力搅拌器对加入复合保护剂的荷叶渗滤液搅拌12min，使所述复合保护剂与荷叶渗滤液充分混合。当采用磁力搅拌器搅拌12min时，复合保护剂与荷叶渗滤液混合最充分，且混合液的温度最均匀。相对于现有技术，本发明具有如下优点与现有技术的单一物质保护剂葡萄糖酸内酯相比，本发明中的复合保护剂大大提高了荷叶黄酮类化合物的未氧化率，而且复合保护剂的各成分均为天然物质，其对人体的副作用非常小。
图I-葡萄糖-α -内酯对黄酮未氧化率的影响。图2-植酸对黄酮未氧化率的影响。图3-烟酰胺对黄酮未氧化率的影响。
具体实施例方式下面结合具体实施方式
对本发明作进一步详细说明。实施例I :一种提高荷叶黄酮未氧化率的方法，具体步骤如下，
步骤I:复合保护剂由葡萄糖酸内酯、烟酰胺和植酸构成，所述葡萄糖酸内酯、烟酰胺和植酸的配比关系为葡萄糖酸内酯葡萄糖酸内酯0. 28g，烟酰胺0.444g，植酸54. O μ L ；
步骤2 :将步骤I中制备的复合保护剂加入到IOOmL荷叶渗滤液中；
步骤3 :采用磁力搅拌器对步骤2中加入复合保护剂的荷叶渗滤液搅拌12min。取已经制备好的荷叶渗滤液2. O于10mL，向该荷叶渗滤液中依次加入2. Oml浓度为60%乙醇水溶液和2. OmL浓度为O. lmol/L的AlCl3水溶液，然后轻轻摇匀，再使用浓度为60%的乙醇定容至10mL，避光显色20min，使用浓度为60%的乙醇参比，最后测量上述加入乙醇水溶液和AlCl3水溶液的荷叶渗滤液对波长为417nm的光波的吸光度。再使用式
(I)计算荷叶渗滤液中荷叶黄酮的未氧化率
K =AZA0X 100% (I)在其他条件均相同，只是将加入的保护剂换成现有技术中的葡萄糖酸内酯，检测两种保护剂的保护作用下荷叶黄酮类化合物的未氧化率K的情况，具体见表I。表I
I实施例II葡萄糖酸内iF
保护剂加入量％萄糖酸内酯0.28!;，烟酰胺0.444!;，植酸54.(^10.3g —
荷叶黄酮类化合物的未氧化率K 196. 98%192. 3% 从表I可以看出，往IOOmL的荷叶渗滤液中加入质量基本相同的本实施例中的复合保护剂和现有技术中的d-葡萄糖酸-δ -内酯单一物质保护剂，在其他条件均相同的情况下，荷叶黄酮类化合物的未氧化率家相差较大。在其他条件都相同的情况下，只有加入的复合保护剂不同时，荷叶黄酮未氧化率具体为，见表2
表2
I实施例2 I实施例31实施例41实施例5 葡萄糖酸内酯(g)O- 05 0 32 0.4 0.5
烟酰胺(g)O. I 'O. 3 O. 5 0.6 —
植酸(μΟ~ 306070
搅拌时间(min)~ 131516
荷叶黄酮类化合物的未氧化率K \92. 98 \9 . 6 \93 +84. 16
从表2中可以看出，在其他条件都相同的情况下，当加入的复合保护剂的量接近实施
例1，且搅拌时间较长时，荷叶黄酮类化合物的未氧化率较高，当复合保护剂的的量与实施
例I相差较远时，搅拌时间较短时，荷叶黄酮类化合物的未氧化率略低，这说明负荷保护剂
各成分的配比关系为实施例I中所述的配比关系，且搅拌时间为12min时，复合保护剂能发
挥出最好保护作用。当复合保护剂的配比关系超出权利要求I所述的配比关系后，即使搅
拌时间提高，荷叶黄酮类化合物的未氧化率任然较低。查阅现有技术的资料可知，荷叶渗滤液中荷叶黄酮经氯化铝显色后在波长417nm处具有最大的吸收度，因此本发明中可以通过测定荷叶渗滤液中荷叶黄酮与氯化铝反应后溶液在417nm处的吸收度来判定荷叶黄酮的未氧化率。以下具体实施方式
中的荷叶采于重庆市，经清洗除杂，60°C 65°C烘干至水分含量6%，粉碎成-20目，荷叶粉末置于干燥器中备用；酒精为重庆东方化玻有限公司生产；无水氯化铝、葡萄糖酸内酯、烟酰胺和植酸为阿拉丁试剂有限公司生产。对荷叶进行粉碎的粉碎机为杭州赛旭食品机械有限公司生产；对荷叶进行清洗的AST-Q1024超声波清洗器为深圳市艾斯达工业自动化有限公司生产；称量下述各试剂采用的电子分析天平为梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司生产；对荷叶渗滤液对波长为417nm的光波的吸收度的检测使用的是安捷伦Varian Cary 50型紫外-可见分光光度计，其为驭诺实业(上海)有限公司生产。使用已经粉碎成-20目的荷叶制备荷叶渗滤液，使用荷叶制备荷叶渗滤液的技术是现有技术中已经非常成熟的技术。取上述已经制备好的荷叶渗滤液2. O于10mL，向该荷叶渗滤液中依次加入2. Oml浓度为60%乙醇水溶液和2. OmL浓度为O. lmol/L的AlCl3水溶液，然后轻轻摇匀，再使用浓度为60%的乙醇水定容至10mL，避光显色20min，以空白试剂为参比，最后测量上述加入乙醇水溶液和AlCl3水溶液的荷叶渗滤液在波长为417nm处的吸光度。再使用式(I)计算荷叶渗滤液中荷叶黄酮的未氧化率
K =AZA0X 100% (I)
式中K表示荷叶黄酮的未氧化率；4表示未加入本技术方案中的保护剂时荷叶渗滤液中荷叶黄酮在波长为417nm的光的吸光值；A为加入本技术方案中的保护剂放置36h后，荷叶渗滤液中荷叶黄酮在波长为417nm的吸光值。由于现有的荷叶黄酮类化合物保护剂都是由单一物质构成的，而这些单一物质保护剂要么保护效果不是很好，要么对人体的副作用较大，例如工业抗氧化剂亚硫酸盐对人体造成的不良影响。因此，申请人经过大量的实验和分析后认为，混合多天然种物质的复合保护剂既可以提高对荷叶黄酮类化合物的保护作用，还可以减少对人体的副作用。
下面先通过实验分析本发明技术方案中单独一种物质作为荷叶黄酮保护剂时对荷叶黄酮未氧化率的影响，然后再分析本发明技术方案即将这三种物质以适当的配比结合作为保护剂时对荷叶黄酮未氧化率的影响。一、本发明技术方案中单独一种物质作为荷叶黄酮保护剂时对荷叶黄酮未氧化率的影响。I、葡萄糖酸内酯对荷叶黄酮未氧化率的影响
取上述方法制备的荷叶渗滤液100ml，向该荷叶渗滤液中分别加入O. 100g、0. 300g、
O.500g、0. 700g、0. 900g的葡萄糖-a -内酯，放置36h，以空白试剂为参比，检测加入葡萄糖- a -内酯后荷叶渗滤液在417nm处的吸收度，并根据式(I)计算荷叶黄酮的未氧化率。并以荷叶黄酮的未氧化率为纵坐标，以葡萄糖酸内酯的加入量为横坐标绘制曲线图，具体见附图I所示。葡萄糖酸内酯溶于水生成葡萄糖酸，葡萄糖酸可以消耗水溶液中的溶解氧，使水中的溶解氧量减少，降低荷叶黄酮与游离氧接触的机会，从而对荷叶黄酮起到保护作用，因此人们一般都会认为葡萄糖酸内酯的加入量越多就能消耗荷叶渗滤液中越多的游离氧，那么对荷叶黄酮的保护就越强，因此荷叶黄酮的未氧化率就越高。但是，申请人经过实验和分析发现，荷叶渗滤液中荷叶黄酮的未氧化率并不是随着葡萄糖酸内酯加入量的增加呈逐渐上升的趋势，而是随着葡萄糖酸内酯加入量的增加呈现先升高后降低的趋势，当葡萄糖酸内酯加入量为O. 300g时，荷叶黄酮的未氧化率最高达到92. 3%。具体见附图I。2、植酸对荷叶黄酮未氧化率的影响
取上述方法制备的荷叶渗滤液100ml，向该荷叶渗滤液中分别加入O. 010%,O. 030%、
O.040%,O. 060%,O. 090%的植酸，放置36h，以空白试剂为参比，检测加入植酸后荷叶渗滤液在417nm处的吸收度，并根据式(I)计算荷叶黄酮的未氧化率。并以荷叶黄酮的未氧化率为纵坐标，以植酸的加入量为横坐标绘制曲线图，具体见附图2所示。植酸具有较强的还原性，当加入植酸时，可以有效的防止荷叶渗滤液中的荷叶黄酮被氧化，从而对荷叶黄酮起到保护作用，因此人们一般都会认为植酸的加入量越多，荷叶黄酮未氧化率越高，但是，申请人经过实验和分析发现，荷叶渗滤液中荷叶黄酮的未氧化率并不是随着植酸加入量的增加呈逐渐上升的趋势，而是随着植酸加入量的增加呈现先升高后降低的趋势，当植酸加入量为O. 050%时，荷叶黄酮的未氧化率最高达到94. 1%，具体见附图2。3、烟酰胺对荷叶黄酮未氧化率的影响取上述方法制备的荷叶渗滤液100ml，向该荷叶渗滤液中分别加入O. 100g、0. 300g、
O.500g、0. 700g、0. 900g的烟酰胺，放置36h，以空白试剂为参比，检测加入烟酰胺后荷叶渗滤液在417nm处的吸收度，并根据式(I)计算荷叶黄酮的未氧化率。并以荷叶黄酮的未氧化率为纵坐标，以烟酰胺酯的加入量为横坐标绘制曲线图，具体见附图3所示。烟酰胺是一种抗氧化剂，当向荷叶渗滤液中加入烟酰胺时，烟酰胺就会发挥其抗氧化作用，保护荷叶黄酮不被氧化，因此人们一般都会认为烟酰胺的加入量越多其抗氧化性就越强，荷叶黄酮被氧化的可用性就越小，因此荷叶黄酮的未氧化率就越高。但是，申请人经过实验和分析发现，荷叶渗滤液中荷叶黄酮的未氧化率并不是随着烟酰胺加入量的增加呈逐渐上升的趋势，而是随着烟酰胺加入量的增加呈现先升高而后基本保持不变的趋势，当烟酰胺加入量为O. 500g时，荷叶黄酮的未氧化率最高达到93. 0%，具体见附图3。二、本发明技术方案中三种物质适当配比时作为保护剂对荷叶黄酮未氧化率的影响。 申请人:在通过对葡萄糖酸内酯、烟酰胺和植酸分别对荷叶黄酮未氧化率的影响分析后，经过大量的实验得出，分别取使荷叶黄酮未氧化率最大时葡萄糖酸内酯、烟酰胺和植酸各自的加入量组合在一起，同时得到的荷叶渗滤液中得到的荷叶黄酮的未氧化率反而比单独加入其中一种时荷叶黄酮的未氧化率的最大值还小。因此，申请人做了大量的实验和分析后得知要最大限度的发挥三种物质的对荷叶黄酮的保护作用时，必须控制这三种物质加入到荷叶渗滤液中后，该荷叶渗滤液的PH值，使荷叶渗滤液呈弱酸性时最能发挥葡萄糖酸内酯、烟酰胺和植酸对荷叶黄酮的保护作用。葡萄糖酸内酯、烟酰胺和植酸三种物质只要经过恰当的配比就可以增强荷叶黄酮的未氧化率，葡萄糖酸内酯、烟酰胺和植酸的配比关系为葡萄糖酸内酯葡萄糖酸内 酯0. 28g，烟酰胺O. 444g，植酸54. OyL的关系配比时荷叶黄酮的未氧化率最高，为96. 98%，该荷叶黄酮的未氧化率超过了葡萄糖酸内酯、烟酰胺和植酸单独添加时荷叶黄酮的最大值。最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。
权利要求
1.一种提高荷叶黄酮未氧化率的方法，其特征在于，包括如下步骤 步骤I:复合保护剂由葡萄糖酸内酯、烟酰胺和植酸构成，所述葡萄糖酸内酯、烟酰胺和植酸的配比关系如下 葡萄糖酸内酯0. 05-0. 40g ； 烟酰胺0. 1-0. 5g ； 植酸10-60 μ L ； 步骤2 :将步骤I中制备的复合保护剂加入到IOOmL荷叶渗滤液中； 步骤3 :采用磁力搅拌器对步骤2中加入复合保护剂的荷叶渗滤液搅拌10-15min，使所述复合保护剂与荷叶渗滤液充分混合。
2.根据权利要求I所述的提高荷叶黄酮未氧化率的方法，其特征在于步骤I中复合保护剂中葡萄糖酸内酯、烟酰胺和植酸配比关系是葡萄糖酸内酯0. 28g，烟酰胺O. 444g，植酸54. O μ L0
3.根据权利要求I或2所述的提高荷叶黄酮未氧化率的方法，其特征在于步骤3中采用磁力搅拌器对加入复合保护剂的荷叶渗滤液搅拌12min，使所述复合保护剂与荷叶渗滤液充分混合。
全文摘要
本发明涉及一种使药用化学成分不发生质变的方法，具体指一种提高荷叶黄酮未氧化率的方法，该方法保护如下步骤，步骤1复合保护剂由葡萄糖酸内酯、烟酰胺和植酸构成，所述葡萄糖酸内酯、烟酰胺和植酸的配比关系如下葡萄糖酸内酯0.05-0.40g；烟酰胺0.1-0.5g；植酸10-60μL；步骤2将步骤1中制备的复合保护剂加入到100mL荷叶渗滤液中；步骤3采用磁力搅拌器对步骤2中加入复合保护剂的荷叶渗滤液搅拌10-15min，使所述复合保护剂与荷叶渗滤液充分混合。由于复合保护剂的各成分均为天然物质，对人体的副作用非常小，且对荷叶黄铜类化合物不被氧化的保护效果更好。
文档编号A61K127/00GK102764304SQ20121028998
公开日2012年11月7日 申请日期2012年8月15日 优先权日2012年8月15日
发明者丁海龙, 侯长军, 周荣灵, 张宿义, 徐前景, 沈才洪, 霍丹群 申请人:泸州品创科技有限公司, 重庆大学