专利名称：银杏酚酸在制备治疗皮肤肿瘤的外用制剂中的用途的制作方法
技术领域：
本发明属于生物医药领域，具体涉及银杏酚酸在制备治疗皮肤肿瘤的外用制剂中的用途。
背景技术：
皮肤癌是人类常见的恶性肿瘤之一，在过去的二十年，人类皮肤肿瘤的发病率显著增加，并以每年4%的速率继续增长。皮肤鳞癌可发生于正常皮肤，亦可由日光性角化等癌前病变发展而来，其侵袭性和转移能力强，临床危害大。因此人们一直在探讨皮肤肿瘤的有效治疗方案。皮肤肿瘤可采用手术治疗、放射治疗、化学治疗、中医治疗等综合治疗方法。但某些患者不能接受手术治疗，且手术治疗、放射治疗、化学治疗对患者损害大，放化疗毒副作用明显，部分患者不能耐受。对于某些不适于接受皮肤外科手术治疗和放化疗，或者术
后需要预防复发的病例，选择适当有效的外用药物进行局部治疗非常重要；且外用药物比口服药物具有更好的安全性。因此，临床需要研制开发一种来源于天然、效果显著、无明显不良反应的治疗皮肤肿瘤的外用制剂，以减轻患者痛苦。开发此类治疗皮肤肿瘤的外用制剂产品具有良好的临床应用前景，对患者是十分有益和必要的。银杏是我国珍贵的药用植物，银杏的叶、果和外种皮等皆具有药用开发价值。据《本草纲目》记载，银杏性甘、苦、平、涩；有定喘止咳、止带浊、止痛之功；主治寒嗽痰喘、哮喘、小便频数、赤白带下、手足皲裂等。特别是近几十年来人们发现银杏叶中含有多种有效成分，主要有效成分为黄酮类和萜类内酯化合物，具有防治心脑血管疾病的功能。银杏酚酸为无色或淡黄色的油状或粉末状物质，是存在于银杏叶、果和外种皮中一类具有重要生理活性的组分。本发明所涉及的银杏酚酸为烷基或烯基苯酚酸类物质，根据分子中苯环上是否连接有羧基，将其分为银杏酸和银杏酚两大类。银杏酸是水杨酸分子在苯环C6位上有饱和或不饱和长链烷基的系列化合物，按化学结构可分为5种，侧链R为C13H27' C15H29' C15H31' C17H31 和 C17H33，对应的分子量分别为 320、346、348、372、374。银杏酚酸包括白果酸、氢化白果酸、白果新酸、白果亚酸、氢化白果亚酸、漆树酸、银杏酚、银杏二酚、白果醇等。银杏酚酸(银杏酸、银杏酚、银杏二酚)结构见下。
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V^r 5—⑴ I银杏酚酸的结构随着对银杏酚酸类物质研究的逐渐深入，发现银杏酚酸具有多种生物活性。已有研究表明，银杏酚酸对体外多种细菌有良好的抑制作用，能抑制部分农业病原菌的生长；银杏酚酸对部分内脏器官肿瘤细胞株的生长有良好的抑制作用。有关银杏酚酸的提取、分析及体外抗菌活性、抗农业病原菌和病原虫、抗部分内脏器官肿瘤已有文献报道。目前尚未见银杏酚酸在制备治疗皮肤肿瘤的外用制剂中的用途的报道。因此，有关银杏酚酸外用制剂治疗皮肤肿瘤新型药物的研究开发，以及对银杏资源的充分开发利用，将产生巨大的社会和经济效益。
发明内容
本发明的目的是提供银杏酚酸的新用途，即银杏酚酸在制备治疗皮肤肿瘤的外用制剂中的用途。它具有疗效显著和使用安全的特点。本发明的目的是这样实现的提供银杏酚酸在制备治疗皮肤肿瘤的外用制剂中的用途。所述银杏酚酸包括银杏酸、银杏酚、银杏二酚等，可通过化学分离方法，从银杏的叶、果、外种皮、根茎等部位的提取物中得到；或对银杏叶、果、外种皮、根茎提取加工产物在提取加工过程中剩余的废料中重新回收；或从其它植物含有本类化合物的各部分提取物中获得；或通过化学合成的方法获得。本发明要求保护该类化合物及其药学上可接受的盐、酯、溶剂化物、结晶形态等物质。还提供含有银杏酚酸的治疗皮肤肿瘤的药物外用制剂，含有银杏酚酸
O.001-80%，以重量百分比计，以及药学上常用的外用制剂基质或外用制剂可接受的载体。更进一步的，含有银杏酚酸O. 001-30 %，以重量百分比计。更进一步的，含有银杏酚酸O. 5_20%，以重量百分比计。按上述重量比范围取主药银杏酚酸、药学上常用的外用制剂基质或可接受的载体制备得到银杏酚酸外用制剂；以及包含银杏酚酸和任何物质组合用于治疗皮肤肿瘤的药物外用制剂。所述制剂是任何一种药剂学上所说的外用剂型，可以是液体制剂、膏霜剂、凝胶剂、粉剂、膜剂、洗剂、气雾喷雾剂、透皮吸收制剂、皮下注射剂等。本发明的有益效果是，药理药效学试验研究表明，本发明银杏酚酸外用制剂具有抑制皮肤肿瘤的发生和肿瘤增长、提高荷瘤小鼠生存率的作用，并能抑制皮肤癌细胞的增殖；对皮肤肿瘤具有显著的治疗作用。局部刺激性实验研究表明本发明安全，无皮肤刺激、过敏等不良反应。
具体实施例方式下面结合实施例，对本发明作进一步地描述。实施例I :银杏果外种皮中银杏酚酸提取工艺如下将银杏果外种皮剥离下来，晒干，用粉碎机将其粉碎。准确称取一定量经粉碎的银杏外种皮，加入料液比为I : 6(w/v)的80%乙醇，在水浴温度60°C下，搅拌浸提2次，每次提取时间4小时，(注加液后，烧杯口用保鲜膜封住，以防止乙醇的挥发)。浸提结束后，用抽滤器抽滤，收集滤液。用真空旋转蒸发仪浓缩滤液，条件为温度55°C，压强O. 008-0. 009MPa,减压浓缩。于60°C真空干燥，得银杏酚酸浸膏，性状为浅褐色浸膏，微臭，溶于醇，不溶于水；称重，并测定银杏酚酸含量(mg/g)。
银杏酚酸含量测定采用HPLC法进行测定。银杏酚酸的标准品溶液在100-1200 μ g/ml之间，相应峰面积与银杏酚酸质量浓度有显著的线性关系，制订了标准曲线。用无水乙醇(色谱纯)将银杏酚酸浸膏溶解，过滤。在柱温室温；流动相甲醇-水(9 : I, v/v);流速lml/min ;进样量20μ I ;检测波长310nm ;分析时间25min条件下测定浸膏中银杏酚酸含量。根据标样的保留时间进行定性，用外标法计算银杏酚酸的含量。浸膏中银杏酚酸含量为662. 30mg/g。银杏酚酸提取工艺和含量测定方法为公知公用的方法。凝胶剂的制备将卡波普IOg洒在500ml蒸懼水表面,溶胀过夜。称取甘油60g,丙二醇120ml，分别加入至溶胀好的卡波普中，迅速研磨均匀，得到透明的凝胶基质。取上述银杏酚酸浸膏40g，溶解于IOOml 95%乙醇溶液中，缓慢加入至凝胶基质中，搅拌均匀。再缓慢加入三乙醇胺15ml，补蒸馏水至足量lOOOg，即得淡黄色银杏酚酸凝胶lOOOg，银杏酚
酸含量为2. 65% (W/W)。分装于50支小管中，每支20g。凝胶剂制备工艺为公知公用的方法。实施例2 银杏果实白果中银杏酚酸提取工艺如下将白果去皮，放入组织捣碎机中粉碎。准确称取一定量经粉碎的白果，加入料液比为I : 10(w/v)的80%乙醇，在水浴温度60°C下，搅拌浸提2次，每次提取时间4小时，(注加液后，烧杯口用保鲜膜封住，以防止乙醇的挥发)。浸提结束后，离心(5000转/分，15分钟)，取上清液。用真空旋转蒸发仪浓缩上清液，条件为温度551，压强0. 008-0. 009MPa，减压浓缩，并于60°C真空干燥，得银杏酚酸浸膏，性状为浅褐色浸膏，微臭，溶于醇，不溶于水。称重，并测定银杏酚酸含量(mg/g)。银杏酚酸含量测定同实施例I。浸膏中银杏酚酸含量为503. 91mg/g。软膏剂的制备取上述银杏酚酸浸膏40g，溶解于IOOml 95%乙醇溶液中，再向其中加入三乙醇胺50ml，加温至70°C。将石蜡300g、硬脂酸300g、丙二醇IOOml分别加入搅拌融化，补蒸馏水至足量lOOOg，搅拌均匀至膏状，即得淡黄色银杏酚酸软膏lOOOg，银杏酚酸含量为2. 02% (W/W)。分装于50支小管中，每支20g。软膏剂制备工艺为公知公用的方法。实施例3 银杏叶中银杏酚酸提取工艺如下将银杏叶剪碎，放入粉碎机中将其粉碎。准确称取一定量经粉碎的银杏叶，加入料液比为I : 6(W/V)的80%乙醇，在水浴温度60°C下，搅拌浸提2次，每次提取时间4小时，(注加液后，烧杯口用保鲜膜封住，以防止乙醇的挥发)。浸提结束后，离心(5000转/分，15分钟)，取上清液。用真空旋转蒸发仪浓缩上清液，条件为温度55°C，压强0. 008-0. 009MPa，减压浓缩，并于60°C真空干燥，得银杏酚酸浸膏，性状为浅褐色浸膏，微臭，溶于醇，不溶于水。称重，并测定银杏酚酸含量(mg/g)。银杏酚酸含量测定同实施例I。浸膏中银杏酚酸含量为537. 68mg/g。酊剂的制备取上述银杏酚酸浸膏80g，溶解于600ml 95%乙醇溶液中，再向其中分别加入三乙醇胺50ml，丙二醇200ml搅拌，补95%乙醇溶液至足量1000ml，即得淡黄色银杏酚酸酊剂1000ml，银杏酚酸含量为4. 3% (W/V)。分装于50支小管中，每支20ml。酊剂制备工艺为公知公用的方法。实施例4
银杏果外种皮中银杏酚酸提取工艺和含量测定方法同实施例1，得银杏酚酸浸膏，银杏酚酸含量为655. 04mg/g。取银杏酚酸浸膏80g，按实施例I凝胶剂制备工艺制备银杏酚酸凝胶1000g，银杏酚酸含量为5.24% (W/W)。分装于50支小管中，每支20g。实施例5 银杏果实白果中银杏酚酸提取工艺同实施例2，含量测定方法同实施例1，得银杏酚酸浸膏，银杏酚酸含量为534. 39mg/g。取银杏酚酸浸膏10g，按实施例2软膏剂制备工艺制备银杏酚酸软膏1000g，银杏酚酸含量为O. 53% (W/W)。分装于50支小管中，每支20g。实施例6 银杏叶中银杏酚酸提取工艺同实施例3，含量测定方法同实施例1，得银杏酚酸浸膏，银杏酚酸含量为552. 47mg/g。取银杏酚酸浸膏200g，按实施例3酊剂制备工艺制备银
杏酚酸酊剂1000ml，银杏酚酸含量为11. 05% (W/V)。分装于50支小管中，每支20ml。实施例7 银杏果外种皮中银杏酚酸提取工艺和含量测定方法同实施例1，得银杏酚酸浸膏，银杏酚酸含量为634. 53mg/g。取银杏酚酸浸膏300g，按实施例3酊剂制备工艺制备银杏酚酸酊剂1000ml，银杏酚酸含量为19. 04% (W/V)。分装于50支小管中，每支20ml。实施例8 银杏叶中银杏酚酸提取工艺同实施例3，含量测定方法同实施例1，得银杏酚酸浸膏，银杏酚酸含量为549. 24mg/g。取银杏酚酸浸膏200g，按实施例I凝胶剂制备工艺制备银杏酚酸凝胶1000g，银杏酚酸含量为10. 98% (W/W)。分装于50支小管中，每支20g。实施例9 银杏果外种皮中银杏酚酸提取工艺和含量测定方法同实施例1，得银杏酚酸浸膏，银杏酚酸含量为672. 02mg/g。取银杏酚酸浸膏500g，按实施例3酊剂制备工艺制备银杏酚酸酊剂1000ml，银杏酚酸含量为33.6% (W/V)。分装于50支小管中，每支20ml。实施例10 银杏果实白果中银杏酚酸提取工艺同实施例2，含量测定方法同实施例1，得银杏酚酸浸膏，银杏酚酸含量为441. 93mg/g。取银杏酚酸浸膏lg，按实施例2软膏剂制备工艺制备银杏酚酸软膏1000g，银杏酚酸含量为0.044% (W/W)。分装于50支小管中，每支20g。用以上方法制成的银杏酚酸外用制剂，进行相关的药理药效学试验和局部刺激性安全性评价实验。下面是本发明的实验数据慢性应用窄谱中波紫外线(UVB)对各组小鼠背部剃毛部位皮肤进行照射，建立小鼠皮肤肿瘤模型，干预治疗小鼠皮肤肿瘤发生的数目及体积，进行比较分析；同时比较各组小鼠存活率。肿瘤计数自照射28周出现第一个肿瘤起至33周停止照射，每周分别计数各组小鼠皮肤肿瘤数目。肿瘤体积的测量与计算自照射28周出现第一个肿瘤起至33周停止，分别测量各鼠背部肿瘤的最大直径(a)及与之垂直的短径(b)，单位mm;运用公式(aXb2)/2计算肿瘤的体积，单位mm3。实验结果见表1，表2。结果表明，与模型组小鼠相比，本发明银杏酚酸组小鼠照射区皮肤肿瘤数目和肿瘤体积均明显下降，差异有统计学意义。模型组小鼠在实验过程中有一定比例的死亡，而本发明银杏酚酸组小鼠存活率达100%。说明本发明银杏酚酸外用制剂能有效地抑制慢性窄谱UVB照射所致小鼠皮肤肿瘤的发生和肿瘤增长，并能明显提闻荷瘤小鼠的生存率。
表I.对UVB照射33w小鼠存活率及皮肤肿瘤体积的影响
权利要求
1.银杏酚酸在制备治疗皮肤肿瘤的外用制剂中的用途。
2.如权利要求I所述的银杏酚酸外用制剂，为含有银杏酚酸的具有治疗皮肤肿瘤的药物外用制剂；以及包含银杏酚酸和任何物质组合用于治疗皮肤肿瘤的药物外用制剂；其特征是，所述制剂是任何一种药剂学上所说的外用剂型，可以是液体制剂、膏霜剂、凝胶剂、粉剂、膜剂、洗剂、气雾喷雾剂、透皮吸收制剂、皮下注射剂等。
3.如权利要求2所述的药物外用制剂，其特征是，含有银杏酚酸O.001-80%,以重量百分比计。
4.如权利要求2所述的药物外用制剂，其特征是，含有银杏酚酸O.001-30%，以重量百分比计。
5.如权利要求2所述的药物外用制剂，其特征是，含有银杏酚酸O.1-20%，以重量百分比计。
6.所述银杏酚酸包括银杏酸、银杏酚、银杏二酚等，可通过化学分离方法，从银杏的叶、果、外种皮、根茎等部位的提取物中得到；或对银杏叶、果、外种皮、根茎提取加工产物在提取加工过程中剩余的废料中重新回收；或从其它植物含有本类化合物的各部分提取物中获得；或通过化学合成的方法获得；包括银杏酚酸药学上可接受的盐、酯、溶剂化物，结晶形态的物质。
全文摘要
本发明涉及银杏酚酸在制备治疗皮肤肿瘤的外用制剂中的用途。所述银杏酚酸包括银杏酸、银杏酚、银杏二酚等，可通过化学分离方法，从银杏的叶、果、外种皮、根茎等部位的提取物中得到。含有银杏酚酸的治疗皮肤肿瘤的药物外用制剂，含银杏酚酸0.001-80％(以重量百分比计)，以及药学上常用的外用制剂基质或可接受的载体；所述制剂是任何一种药剂学上所说的外用剂型。药理学试验研究表明，本发明具有抑制皮肤肿瘤的发生、抑制皮肤癌细胞的增殖和肿瘤增长、提高生存率的作用；且使用安全无副作用，具有良好的临床应用前景。
文档编号A61P35/00GK102846677SQ201210292068
公开日2013年1月2日 申请日期2012年8月14日 优先权日2012年8月14日
发明者雷红, 王青 申请人:王青