专利名称：一种沃尼妙林脂质体的制备方法
技术领域：
本发明属于兽药技术领域，具体涉及一种沃尼妙林脂质体的制备方法。
背景技术：
沃尼妙林是新一代截短侧耳素类半合成抗生素，属二萜烯类，与泰妙菌素属同一类药物，是动物专用抗生素，主要用于防治猪、牛、羊及家禽的支原体病和革兰氏阳性菌感染。沃尼妙林的作用机制是在核糖体水平上抑制细菌蛋白质的合成，高浓度时也抑制RNA的合成。主要是抑菌，高浓度时也杀菌。抗菌谱广，对G+和G-菌有效，对霉形体属和螺旋体属高度有效。沃尼妙林的药动学特征是吸收快、吸收率高、药效好、生物利用度高，但有效血药浓度维持时间短，药物消除较快，休药期为Id。沃尼妙林的普通制剂，如预混剂，用药后在血 液及组织中均匀分布，没有靶向性，且药物进入血液循环后，要与蛋白结合，经受多种酶、组织、器官的代谢和排泄等，只有少量药物能够达到靶部位。如果要提高靶区的药物浓度，就必须增加剂量，这不仅增加成本，造成药物的浪费，也增大了药物的毒副作用和药物在体内的残留，增加了产生耐药性的可能性。
发明内容
本发明的目的是提供一种沃尼妙林脂质体的制备方法，从而增加其水溶性，延长药物的有效作用时间，增加其稳定性和靶向性，减少临床用药次数。为了实现以上目的，本发明所采用的技术方案是一种沃尼妙林脂质体的制备方法，包括以下步骤I)配制浓度为25mg/ml的NaHCO3溶液；2)配制柠檬酸缓冲液；3)空白脂质体的制备称取O. 3质量份的磷脂和O. I质量份的胆固醇，加入无水乙醇于60 70°C水浴中溶解，挥散乙醇成膜后，加入同温的柠檬酸缓冲液20份，60 70°C水浴中搅拌水化IOmin,后在30 60°C下搅拌40 50min,充分水化后补加蒸懼水至20份，所得脂质体溶液通过微孔滤膜过滤整粒；4)称取沃尼妙林原粉加入乙醇中搅拌至充分溶解，制成浓度为3mg/ml的沃尼妙林药液；5)主动载药依次取沃尼妙林药液、NaHCO3溶液加入到空白脂质体中混匀，70°C水浴中保温20min，随后立即用冷水降温，得脂质体粗品；6)低温高速离心处理步骤5)所得粗品，制得沃尼妙林脂质体。步骤2)中柠檬酸缓冲液的pH为3. O 6. O。步骤3)中微孔滤膜的孔径为O. 8 μ m。步骤5)中沃尼妙林药液、NaHCO3溶液和空白脂质体的体积比是1:1:4。步骤6)中低温高速离心的温度为4°C,转速为15000r/min,离心时间20min。
步骤6)中经低温高速离心处理后的精制沃尼妙林脂质体经浓缩，真空冻干，制得沃尼妙林脂质体冻干制剂。沃尼妙林脂质体经过无菌处理之后，4°C保存，而冻干制剂可常温保存，不仅保存时间长，而且便于运输。脂质体是将药物包封于类脂质双分子层内而形成的微型泡囊体，利用脂质体可以和细胞膜融合的特点，将药物送入细胞内部。脂质体具有类细胞结构，进入体内主要被网状内皮系统吞噬而激活机体自身的免疫功能，并改变包封药物的体内分布，使药物主要在肝、脾、肺和骨髓等组织器官中积蓄，从而提高药物的治疗指数，减少药物的治疗剂量和降低药物的毒性。脂质体的特点是具有靶向性和淋巴定向性，缓释作用，降低药物毒性，提高稳定性。本发明通过制备NaHCO3溶液、柠檬酸缓冲液、空白脂质体和沃尼妙林药液，主动载 药制备沃尼妙林脂质体，该方法简单易行，所需设施简单，原料易取，在实际生产中容易实施。通过将沃尼妙林制成脂质体的形式，提高其在水中的溶解度，延长该药物在体内的有效作用时间，增加其稳定性和靶向性，降低毒副作用，减少临床用药次数。
具体实施例方式以下结合具体实施方式
对本发明做详细说明实施例I本实施例沃尼妙林脂质体的制备方法，包括以下步骤I)配制浓度为25mg/ml的NaHCO3溶液；2)配制pH为6. O的柠檬酸缓冲液；3)空白脂质体的制备称取O. 3质量份的磷脂和O. I质量份的胆固醇，加入无水乙醇于60°C水浴中溶解，挥散乙醇成膜后，加入同温的柠檬酸缓冲液20份，60°C水浴中搅拌水化lOmin，后在30°C下搅拌50min，充分水化后补加蒸馏水至20份，所得脂质体溶液通过微孔滤膜过滤整粒；4)称取沃尼妙林原粉加入乙醇中搅拌至充分溶解，制成浓度为3mg/ml的沃尼妙林药液；5)主动载药按体积比为1:1:4的比例依次取沃尼妙林药液、NaHCO3溶液加入到空白脂质体中混勻，70°C水浴中保温20min，随后立即用冷水降温，得脂质体粗品；6)在4°C, 15000r/min转速条件下低温高速离心处理步骤5)所得粗品20min,制得沃尼妙林脂质体。实施例2本实施例沃尼妙林脂质体的制备方法，包括以下步骤I)配制浓度为25mg/ml的NaHCO3溶液；2)配制pH为4. 5的柠檬酸缓冲液；3)空白脂质体的制备称取O. 3质量份的磷脂和O. I质量份的胆固醇，加入无水乙醇于64°C水浴中溶解，挥散乙醇成膜后，加入同温的柠檬酸缓冲液20份，64°C水浴中搅拌水化IOmin,后在45°C下搅拌45min,充分水化后补加蒸懼水至20份,所得脂质体溶液通过微孔滤膜过滤整粒；
4)称取沃尼妙林原粉加入乙醇中搅拌至充分溶解，制成浓度为3mg/ml的沃尼妙林药液；5)主动载药按体积比为1:1:4的比例依次取沃尼妙林药液、NaHCO3溶液加入到空白脂质体中混勻，70°C水浴中保温20min，随后立即用冷水降温，得脂质体粗品；6)在4°C, 15000r/min转速条件下低温高速离心处理步骤5)所得粗品20min,制得沃尼妙林脂质体。实施例3本实施例沃尼妙林脂质体的制备 方法，包括以下步骤I)配制浓度为25mg/ml的NaHCO3溶液；2)配制pH为3. O的柠檬酸缓冲液；3)空白脂质体的制备称取O. 3质量份的磷脂和O. I质量份的胆固醇，加入无水乙醇于70°C水浴中溶解，挥散乙醇成膜后，加入同温的柠檬酸缓冲液20份，70°C水浴中搅拌水化lOmin，后在60°C下搅拌40min，充分水化后补加蒸馏水至20份，所得脂质体溶液通过微孔滤膜过滤整粒；4)称取沃尼妙林原粉加入乙醇中搅拌至充分溶解，制成浓度为3mg/ml的沃尼妙林药液；5)主动载药按体积比为1:1:4的比例依次取沃尼妙林药液、NaHCO3溶液加入到空白脂质体中混勻，70°C水浴中保温20min，随后立即用冷水降温，得脂质体粗品；6)在4°C，15000r/min转速条件下低温高速离心处理步骤5)所得粗品20min，制得沃尼妙林脂质体。包封率检测将沃尼妙林脂质体溶液取Iml于离心管中，经过4 °C低温15000r/min离心50min处理之后，取O. 5ml上清液，使用高效液相色谱测定，作为游离的沃尼妙林C ；另O. 5ml沉淀作为总的沃尼妙林C总，然后包封率=(C总-C游)/C总X 100%。三个实施例包封率统计表
Γ 实施例I实施例2实施例3-
包封率_85%_包封率_90%_包封率_82%临床实验河南省某个猪场，经过临床症状诊断、实验诊断等手段已确诊发生猪支原体肺炎的病猪群体，临床症状表现明显，咳嗽，流鼻涕，食欲减退等，实验室诊断为支原体，从病猪群中随机挑选100头，公母兼有，所挑选的猪个体重和精神状态差不多，分成四组，实施例1、2、3所制成的沃尼妙林脂质体和市售沃尼妙林(湖北武汉顶辉化工有限公司)进行治疗，本制剂按4ml/kg注射,结果记录如下治疗情况统计表
权利要求
1.一种沃尼妙林脂质体的制备方法，其特征在于包括以下步骤 O配制浓度为25mg/ml的NaHCO3溶液； 2)配制柠檬酸缓冲液； 3)空白脂质体的制备称取O.3质量份的磷脂和O. I质量份的胆固醇，加入无水乙醇于60 70°C水浴中溶解，挥散乙醇成膜后，加入同温的柠檬酸缓冲液20份，60 70°C水浴中搅拌水化IOmin,后在30 60°C下搅拌40 50min,充分水化后补加蒸懼水至20份,所得脂质体溶液通过微孔滤膜过滤整粒； 4)称取沃尼妙林原粉加入乙醇中搅拌至充分溶解,制成浓度为3mg/ml的沃尼妙林药液； 5)主动载药依次取沃尼妙林药液、NaHCO3溶液加入到空白脂质体中混匀，70°C水浴中保温20min，随后立即用冷水降温，得脂质体粗品； 6)低温高速离心处理步骤5)所得粗品，制得沃尼妙林脂质体。
2.根据权利要求I所述的沃尼妙林脂质体的制备方法，其特征在于步骤2)中柠檬酸缓冲液的pH为3.0 6. O。
3.根据权利要求I所述的沃尼妙林脂质体的制备方法，其特征在于步骤3)中微孔滤膜的孔径为0.8μπι。
4.根据权利要求I所述的沃尼妙林脂质体的制备方法，其特征在于步骤5)中沃尼妙林药液、NaHCO3溶液和空白脂质体的体积比是1:1:4。
5.根据权利要求I所述的沃尼妙林脂质体的制备方法，其特征在于步骤6)中低温高速离心的温度为4°C,转速为15000r/min,离心时间20min。
6.根据权利要求I所述的沃尼妙林脂质体的制备方法，其特征在于步骤6)中经低温高速离心处理后的精制沃尼妙林脂质体经浓缩，真空冻干，制得沃尼妙林脂质体冻干制剂。
全文摘要
本发明公开了一种沃尼妙林脂质体的制备方法，包括以下步骤1)配制NaHCO3溶液；2)配制柠檬酸缓冲液；3)空白脂质体的制备取磷脂和胆固醇加入无水乙醇于水浴中溶解，挥散乙醇成膜后加入柠檬酸缓冲液，充分水化后，所得脂质体溶液通过微孔滤膜过滤整粒；4)取沃尼妙林原粉加入乙醇中溶解制成沃尼妙林药液；5)主动载药依次取沃尼妙林药液、NaHCO3溶液加入到空白脂质体中混匀，得脂质体粗品；6)低温高速离心处理步骤5)所得粗品，制得沃尼妙林脂质体。本发明通过制备空白脂质体和主动载药，制得包封率高，临床效果好的沃尼妙林脂质体，该方法简单易行，增加药物在水中溶解度、有效作用时间、稳定性及靶向性。
文档编号A61K31/22GK102846548SQ20121031846
公开日2013年1月2日 申请日期2012年8月31日 优先权日2012年8月31日
发明者吴红云, 郭俊清, 李建正, 董晓盈 申请人:郑州后羿制药有限公司