专利名称：一种复方油佐剂及其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及疫苗佐剂技术领域，特别涉及一种复方油佐剂，还涉及所述复方油佐剂的制备方法及应用。
背景技术：
油性佐剂疫苗是已公知的可有效强化免疫性的疫苗，是目前国内外疫苗市场上产品最多的类型之一，油乳剂疫苗有三种类型油包水(W/0)型、水包油(0/W)型和水包油包水(ff/0/ff)型。油包水(W/0)型应用最普遍，是分三步骤，首先通过将司本-85加入白油中、吐温-80加入抗原水溶液中，再将二者混合物进行乳化制备而成。其显著优点是可获得高水平持久的免疫增强效果。缺点是较粘稠，注射较困难。同时由于疫苗中白油含量相对较高，常常导致严重的接种副反应、形成无菌性化脓损害和接种部位周围的肉芽肿，可产生外 部可见的浮肿、肿胀、硬结和坏死。而且怀疑在接种部位有留存的可能，这便妨碍了疫苗的使用。水包油(0/W)型是为减少乳剂中油含量建立此法，但未普遍应用。该剂型优点是粘度低，易于注射，缺点是免疫原性弱，仅诱导动物体内产生较弱的免疫应答，在人用疫苗应用方面已有商业化应用，如MF59佐剂用于流感疫苗的制作，但是在动物疫苗上尚未推广应用。水包油包水(W/0/W)剂型兼具有W/0型和0/W型的优点，效果很好。常规的做法是先制备W/0型疫苗，再经第二次分散到水相中制备而成。目的是降低黏度，既便于注射又具有良好的免疫原性。但制备技术上难度较大，疫苗稳定性差，如能克服此缺点，它是最理想的乳剂疫苗。国内外公认的最好此类佐剂为ISA206(法国SEPPIC公司生产)。它通过自乳化技术，直接将ISA206与抗原水溶液混合、乳化，一步法即可制备出W/0/W型乳剂疫苗，解决了 W/0/W型乳剂疫苗制备难的问题，而且具有一定的稳定性，在全球范围内得到了广泛应用。其不足之处为所制备的W/0/W型乳剂疫苗稳定性还不太令人满意，而且价格昂贵。专利“一种自乳化疫苗佐剂及其制备方法”(ZL 200510037639. 8)公布了一系列W/0/W型乳剂疫苗的制备方法，但是其配方复杂，田间试验时有副反应发生。而且稳定性不足12个月，不能满足生产实际需要，也未见其商品化使用。因此，建立稳定、简便、价廉的W/0/W型乳剂工艺具有极其重要的现实意义和市场价值。
发明内容
为了解决以上油性佐剂疫苗配方复杂、稳定性差、价格昂贵的问题，本发明提供了一种配方简单、稳定性好、价格便宜的复方油佐剂。本发明的另一个目的是提供所述复方油佐剂的制备方法。本发明还提供了所述复方油佐剂的应用。本发明是通过以下措施实现的
本发明的复方油佐剂，由白油、油醇聚氧乙烯醚(C18H35O (CH2CH2O)n-H)和聚氧乙烯醚硬脂酸酯三种成分组成。其中，白油所占质量比为80%-95%，油醇聚氧乙烯醚所占质量比为1%-10%，聚氧乙烯醚硬脂酸酯所占质量比为1%-10%。油醇聚氧乙烯醚分子量为400-600，聚氧乙烯醚硬脂酸酯分子量为400-600。所用原料的重量百分比优选白油88-92%，油醇聚氧乙烯醚5-9%，聚氧乙烯醚硬脂酸酯1_5%。所述的复方油佐剂，更优选白油90%，油醇聚氧乙烯醚7%，聚氧乙烯醚硬脂酸酯
3% ο本发明复方油佐剂的制备方法分别称取处方量的白油、油醇聚氧乙烯醚和聚氧乙烯醚硬脂酸酯，均匀混合而成。
所述的复方油佐剂在制备动物疫苗中的应用。所述的应用，将复方油佐剂预热，与抗原溶液混合，乳化均匀。
所述的应用,优选复方油佐剂与抗原溶液按质量比I I. 5:1混合。所述抗原溶液优选为猪圆环病毒液，灭活前每毫升病毒液病毒含量> IO5-5TCID500所述抗原溶液为优选为猪口蹄疫抗原水溶液,灭活前每O. 2毫升病毒液病毒含量彡 IO7 0LD500本发明复方油佐剂的使用方法本发明对抗原的种类没有限制，对乳化的装置也没有限制。通用W/0/W型乳剂疫苗的制备方法是，将本发明复方油佐剂预热25°C以上，与抗原水溶液(室温)按质量比I I. 5:1进行混合，乳化5 30分钟即可。本发明的有益效果本发明应用自乳化原理，开发了一种新复方油佐剂，该复方油佐剂与抗原水溶液经过手摇、磁力搅拌或机械挤压乳化等乳化工艺均可制作成稳定的W/0/W型乳剂疫苗，成功解决了 w/0/w型乳剂疫苗制备困难的难题，所制备的乳剂疫苗既便于注射又具有良好的免疫原性，而且稳定性比ISA206所制各的W/0/W型乳剂疫苗更好。
具体实施例方式以下通过具体实施例对本发明的技术方案进行详细解释，但下述实施例并不对本发明进行任何的限制。实施例I 复方油佐剂在猪口蹄疫疫苗中的应用 (O复方油佐剂的制备
分别称取白油17. 4g，油醇聚氧乙烯醚I. 6g和聚氧乙烯醚硬脂酸酯I. Og (三者的质量分数分别为87%、8%和5%)，放入IOOmL洁净玻璃瓶中、摇匀。115°C、20min灭菌后，室温保
存备用。(2)猪口蹄疫病毒液的制备
按照《兽用生物质量质量标准汇编》(2006-2008)，相关要求制备灭活的猪口蹄疫抗原水溶液，灭活前每O. 2晕升病毒液病毒含量应> IO7' 0LD50O(3)猪口蹄疫疫苗的制备
在无菌操作情况下，将上述(I)中制备的复方油佐剂加热至30°C，取15g放入50mL的烧杯中，另取(2)中制备的猪口蹄疫灭活病毒液15g也放入该烧杯中，同时加入磁力转子置磁力搅拌器(含加热功能)上进行搅拌乳化，转速为2000转每分钟，温度保持30°C，搅拌30分钟，即成，命名疫苗I。同法用法国SEPPIC公司生产的ISA206佐剂替代本发明的复方油佐剂，制备对照疫苗，命名对照疫苗A。
(4)疫苗物理性状和免疫活性的比较见表I。表I疫苗I和对照疫苗A的比较
权利要求
1.一种复方油佐剂，其特征是所用原料的重量百分比如下 白油80-95%， 油醇聚氧こ烯醚1_10%， 聚氧こ烯醚硬脂酸酯 1-10%; 所述油醇聚氧こ烯醚分子量为400-600,所述聚氧こ烯醚硬脂酸酯分子量为400-600。
2.根据权利要求I所述的复方油佐剂，其特征是所用原料的重量百分比如下 白油88-92%， 油醇聚氧こ烯醚5-9%， 聚氧こ烯醚硬脂酸酯 1_5%。
3.根据权利要求I所述的复方油佐剂，其特征是所用原料的重量百分比如下白油90%， 油醇聚氧こ烯醚7%， 聚氧こ烯醚硬脂酸酯 3%。
4.一种权利要求1-3中任一项所述的复方油佐剂的制备方法，其特征是将原料混合均匀。
5.—种权利要求1-3中任一项所述的复方油佐剂在制备动物疫苗中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征是将复方油佐剂预热，与抗原溶液混合，乳化均匀。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征是复方油佐剂与抗原溶液按质量比I I.5:1混合。
8.根据权利要求5或6所述的应用，其特征在于所述抗原溶液为猪圆环病毒液，灭活前姆晕升病毒液病毒含量> IO5' 5TCID50O
9.根据权利要求5或6所述的应用，其特征在于所述抗原溶液为猪ロ蹄疫抗原水溶液，灭活前姆0. 2晕升病毒液病毒含量> IO7'0LD50O
全文摘要
本发明涉及疫苗佐剂技术领域，特别涉及一种复方油佐剂，由白油、油醇聚氧乙烯醚和聚氧乙烯醚硬脂酸酯三种成分组成。白油占80%-95%，油醇聚氧乙烯醚占1%-10%，聚氧乙烯醚硬脂酸酯占1%-10%。油醇聚氧乙烯醚分子量为400-600，聚氧乙烯醚硬脂酸酯分子量为400-600。分别称取处方量的白油、油醇聚氧乙烯醚和聚氧乙烯醚硬脂酸酯，均匀混合而成。复方油佐剂在制备动物疫苗中的应用。本发明成功解决了W/O/W型乳剂疫苗制备困难的难题，所制备的乳剂疫苗既便于注射又具有良好的免疫原性，而且稳定性比ISA206所制各的W/O/W型乳剂疫苗更好。
文档编号A61K39/12GK102813922SQ201210332409
公开日2012年12月12日 申请日期2012年9月11日 优先权日2012年9月11日
发明者王金宝, 杜以军, 齐静, 吴家强, 李俊, 黄保华, 丛晓燕, 任素芳, 孙文博, 时建立, 郭立辉, 吕伟 申请人:山东省农业科学院畜牧兽医研究所