专利名称：负载溶菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种长效安全的抗菌纳米材料的制备方法，具体涉及一种负载溶菌酶的壳聚糖/ Y -聚谷氨酸复合纳米粒子的制备方法，属于医药工程技术领域。
背景技术：
溶菌酶(lysozyme)又称胞壁质酶或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶，是一种能水解致病菌中粘多糖的碱性酶。主要通过破坏细胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡糖之间的β_1，4糖苷键，使细胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，导致细胞壁破裂，内容物溢出而使细菌溶解。溶菌酶还可与带负电荷的病毒蛋白直接结合，与DNA、RNA、脱辅基蛋白形成复盐，使病毒失活。因此，溶菌酶具有抗菌、消炎和抗病毒的作用，并且不产生耐药性，所以溶菌酶在一定程度上可以代替抗生素，具有较大的应用潜力。口服给药要受到两种首过效应的影响，即胃肠道上皮细胞中酶系的降解、代谢及肝中各酶系的生物代谢。许多药物很大一部分因首过效应而代谢失效，如肽类和蛋白类药物等。为获得良好的治疗效果，通常不得不将口服给药改为注射等其它给药途径。由于通过注射途径的非靶向药物均匀分布在全身循环中，到达病灶之前，要经过同蛋白结合、排泄、代谢、分解等步骤，所以最终只有少量药物能达到病灶。靶向给药的目的就是提高靶区的药物浓度，从而提高药物的利用率、疗效以及降低药物的副作用，这一直是医药领域一项重要的研究课题。纳米药物载体的研究能有效地解决这些问题。
高聚物纳米材料作为药物载体已经获得广泛研究。其中合成的可生物降解高分子材料，如聚己内酯和聚乳酸等，由于其良好的生物相容性颇受关注。然而用聚己内酯和聚乳酸制备的纳米材料由于其疏水性，对于亲水性药物的输送效果不显著。因此，对于亲水性药物容菌酶的包埋，可以选择壳聚糖和Y-聚谷氨酸(Y-PGA)作为载体材料，通过壳聚糖和
Y-聚谷氨酸之间发生离子交联，制备纳米载体。这种纳米载体的优点是不使用有毒溶剂，制备条件较缓和。这可以避免有机溶剂的存在导致溶解酶不稳定，因为有机溶剂会使蛋白或肽类物质发生降解。壳聚糖由于其独特的性质倍受人们关注。其中，壳聚糖来源丰富，并且有很好的抗菌性，是其备受关注的焦点。壳聚糖是甲壳素脱乙酰化的产物，通常脱乙酰度达到50%-95%之间就可以成为很好的壳聚糖。壳聚糖基本结构单元为壳二糖，壳聚糖是D-氨基葡萄糖通过β -1，4糖苷键结合而成的多糖，化学名为聚(2-氨基-2-脱氧-β -D-葡萄糖)，是自然界中唯一存在的带正电的天然多糖，它无毒副作用，具有良好的生物相容性、生物可降解性、吸湿性和保湿性，有明显的抗菌抑菌作用，具有表面多孔结构，是良好的药物缓释剂和保水齐U，其形成和结构式可表示为
权利要求
1.一种负载溶菌酶的壳聚糖/ Y -聚谷氨酸复合纳米粒子的制备方法，其特征在于所述制备方法是以质量比为20 5^16 Γ5 Γ8的壳聚糖、Y-聚谷氨酸、三聚磷酸钠和溶菌酶为原料，具体包括如下步骤 (1)将O.5^5. Omg/mL的Y -聚谷氨酸水溶液与O. 5^5. Omg/mL的溶菌酶水溶液混合，不断搅拌至有蓝色荧光出现并稳定存在，即得到Y-聚谷氨酸/溶菌酶复合纳米粒子溶液； (2)取步骤(I)得到的Y-聚谷氨酸/溶菌酶复合纳米粒子溶液滴于O. 5^5. Omg/mL的壳聚糖醋酸水溶液中，所述壳聚糖醋酸水溶液中壳聚糖浓度为O. 5^5. Omg/mL，醋酸体积浓度为1-3% ;再滴加浓度为O. 5^5. Omg/mL的三聚磷酸钠水溶液，不断搅拌至有蓝色荧光出现并稳定存在，离心，取沉淀冷冻干燥，即得负载溶菌酶的壳聚糖/Y-聚谷氨酸复合纳米粒子。
2.根据权利要求1所述的负载溶菌酶的壳聚糖/Y -聚谷氨酸复合纳米粒子的制备方法，其特征在于所述的壳聚糖的脱乙酰度为85% 95%，分子量15 150万。
3.根据权利要求1所述的负载溶菌酶的壳聚糖/Y -聚谷氨酸复合纳米粒子的制备方法，其特征在于所述的Y-聚谷氨酸纯度在92.0%与99%之间，分子量100 145万。
4.根据权利要求f3之一所述的负载溶菌酶的壳聚糖/ Y -聚谷氨酸复合纳米粒子的制备方法，其特征在于原料壳聚糖、Y-聚谷氨酸、三聚磷酸钠和溶菌酶的质量比为20 12 16 :3 5 4. 8 8。
全文摘要
本发明公开了一种负载溶菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子的制备方法，所述制备方法具体包括如下步骤(1)将0.5~5.0mg/mL的γ-聚谷氨酸水溶液与0.5~5.0mg/mL的溶菌酶水溶液混合，不断搅拌至有蓝色荧光出现并稳定存在，即得到γ-聚谷氨酸/溶菌酶复合纳米粒子溶液；(2)取γ-聚谷氨酸/溶菌酶复合纳米粒子溶液滴于0.5~5.0mg/mL的壳聚糖醋酸水溶液中；再滴加浓度为0.5~5.0mg/mL的三聚磷酸钠水溶液，不断搅拌至有蓝色荧光出现并稳定存在，得到负载溶菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子。本发明操作简单，制得的负载溶菌酶的壳聚糖/γ-聚谷氨酸复合纳米粒子可以调节溶菌酶释放速度，具有良好的热稳定性，增加了溶菌酶治疗的安全性、高效性和可靠性，是比较优良的载药纳米体系。
文档编号A61P31/12GK103041377SQ20121035316
公开日2013年4月17日 申请日期2012年9月20日 优先权日2012年9月20日
发明者孙燕, 柳永, 符思达, 吴骏, 刘学粉, 余虹 申请人:杭州师范大学, 浙江省农业科学院