专利名称：一种野菊花提取物的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种提取物的制备方法。
背景技术：
野菊花为菊科植物野菊(Chrysanthemum indicumL.)的干燥头状花序,收载于《中国药典2010年版一部》295页。具清热解毒、泻火平肝之功效。用于丁疮痈肿、目赤肿痛、 头痛眩晕。近年来，随着现代提取分离和波谱学技术以及现代药理学的飞速发展，对野菊花属植物的化学成分和生物活性的研究越来越深入。经化学分析，其主要成份为黄酮类、酚酸类及萜类等物质，是其发挥药理活性的物质基础。现代药理研究证实，野菊花提取物药理作用较为广泛(I)心、脑血管保护作用；具有增加冠脉流量，降低氧代谢，提高耐缺氧能力,对实验性心肌梗死的治疗作用,增加脑血流量,改善微循环,收缩血管作用。(2)对血液系统的作用；具有抗血小板聚集，增强纤维蛋白酶活性，降血脂、活血化瘀、抗动脉粥样硬化作用。(3)降压作用；(4)抗病原微生物作用；(5)促进白细胞吞噬功能；(6)其他作用。因此，现在研究较多的野菊花总黄酮作为药用活性部位具有极大的临床应用价值和市场开发价值。
目前，野菊花提取物的制备方法很多，但应用于工业生产的多为粗提物，提取物中总黄酮含量低，不能满足工业化生产的要求。发明内容
本发明是要解决现有野菊花提取物的制备方法制备的野菊花提取物用于工业生产的多为粗提物，提取物中总黄酮含量低，不能满足工业化生产的要求的问题，而提供了一种野菊花提取物的制备方法。
一种野菊花提取物的制备方法，具体是按照以下步骤制备的
一、取野菊花中药材，用去离子水煎煮3次，每次lh，第一次去离子水的质量是野菊花中药材的16 20倍，第二次去离子水的质量是野菊花中药材的12 16倍，第三次去离子水的质量是野菊花中药材的12 16倍，合并3次煎煮液，再浓缩至以70°C计相对密度为 I. 10 I. 14的清膏；
二、向步骤一获得的清膏内加水，加水后的体积与野菊花中药材的质量比为2L Ikg,再用质量浓度为10%的氢氧化钠溶液调节pH值至6. 5 7. 0，静置12tT24h，收集上清液，再用盐酸溶液调节pH值至2. O 3. 0，再静置12tT24h，收集上层液体；
三、将步骤二收集的上层液体过聚酰胺树脂柱，聚酰胺树脂与野菊花中药材的质量比为I :2. 5，再用去离子水进行洗脱，洗脱用的去离子水体积为6 10个柱体积，水洗液弃去后使用体积浓度为65°/Γ85%的乙醇溶液洗脱树脂柱，洗脱用的乙醇溶液体积是5个柱体积,收集乙醇洗脱液；
四、对乙醇洗脱液进行减压蒸馏回收乙醇，用氢氧化钠溶液调pH值6. (Γ7.0，浓缩，减压干燥，即得到野菊花提取物，完成野菊花提取物的制备方法。
本发明的有益效果是采用酸处理提取液的方法去除分子量较大的鞣质类物质， 运用聚酰胺树脂处理，采用体积浓度为80%乙醇洗脱，该工艺进一步去除大分子的蛋白、鞣质及树脂类物质，使得富集分子量较小的黄酮类物质。该发明的关键点是采用聚酰胺树脂处理之前，先采用酸处理提取液，使提取液中的黄酮及有机酸均已非成盐状态下进入树脂柱中，并且能够较完全的被树脂吸附，并且针对性较好。同时采用体积浓度为80%乙醇能够较完全的解吸黄酮。该工艺除乙醇外，不使用其他有机溶剂，使得工艺流程简单，生产设备要求较低，制造成本降低，同时该方法的的提取物收率较高超过2. 5%，该提取物总黄酮含量超过80%，达到国家中药注射剂原料的技术要求。该方法主要针对于黄酮类成分，使黄酮类成分富集且适用于工业化生产。
本发明方法获得的野菊花提取物中总黄酮含量以无水芦丁(C27H3tlO16)计，超过 80% ;单体成分蒙花苷(C28H32O14)含量超过15%。
本发明用于制备野菊花提取物，该提取物可作为中药注射剂原料或口服制剂的原料。
具体实施方式
本发明技术方案不局限于以下所列举的具体实施方式
，还包括各具体实施方式
之间的任意组合。
具体实施方式
一本实施方式一种野菊花提取物的制备方法，具体是按照以下步骤制备的
一、取野菊花中药材，用去离子水煎煮3次，每次lh，第一次去离子水的质量是野菊花中药材的16 20倍，第二次去离子水的质量是野菊花中药材的12 16倍，第三次去离子水的质量是野菊花中药材的12 16倍，合并3次煎煮液，再浓缩至以70°C计相对密度为 I. 10 I. 14的清膏；
二、向步骤一获得的清膏内加水，加水后的体积与野菊花中药材的质量比为2L Ikg,再用质量浓度为10%的氢氧化钠溶液调节pH值至6. 5 7. 0，静置12tT24h，收集上清液，再用盐酸溶液调节pH值至2. O 3. 0，再静置12tT24h，收集上层液体；
三、将步骤二收集的上层液体过聚酰胺树脂柱，聚酰胺树脂与野菊花中药材的质量比为I :2. 5，再用去离子水进行洗脱，洗脱用的去离子水体积为6 10个柱体积，水洗液弃去后使用体积浓度为65°/Γ85%的乙醇溶液洗脱树脂柱，洗脱用的乙醇溶液体积是5个柱体积,收集乙醇洗脱液；
四、对乙醇洗脱液进行减压蒸馏回收乙醇，用氢氧化钠溶液调pH值6. (Γ7.0，浓缩，减压干燥，即得到野菊花提取物，完成野菊花提取物的制备方法。
本实施方式采用酸处理提取液的方法去除分子量较大的鞣质类物质，运用聚酰胺树脂处理，采用体积浓度为80%乙醇洗脱，该工艺进一步去除大分子的蛋白、鞣质及树脂类物质，使得富集分子量较小的黄酮类物质。该发明的关键点是采用聚酰胺树脂处理之前，先采用酸处理提取液，使提取液中的黄酮及有机酸均已非成盐状态下进入树脂柱中，并且能够较完全的被树脂吸附，并且针对性较好。同时采用体积浓度为80%乙醇能够较完全的解吸黄酮。该工艺除乙醇外，不使用其他有机溶剂，使得工艺流程简单，生产设备要求较低，制造成本降低，同时该方法的的提取物收率较高超过2. 5%，该提取物总黄酮含量超过80%，达到国家中药注射剂原料的技术要求。该方法主要针对于黄酮类成分,使黄酮类成分富集且适用于工业化生产。
本实施方式获得的野菊花提取物中总黄酮含量以无水芦丁(C27H3tlO16)计，超过 80% ;单体成分蒙花苷(C28H32O14)含量超过15%。
具体实施方式
二 本实施方式与具体实施方式
一不同的是第一次去离子水的质量是野菊花中药材的If 19倍，第二次去离子水的质量是野菊花中药材的1Γ15倍，第三次去离子水的质量是野菊花中药材的1Γ15倍。其它与具体实施方式
一相同。
具体实施方式
三本实施方式与具体实施方式
一或二不同的是步骤二所述盐酸溶液的质量浓度为5%。其它与具体实施方式
一或二相同。
具体实施方式
四本实施方式与具体实施方式
一至三之一不同的是步骤三所述乙醇溶液的体积浓度为70°/Γ80%。其它与具体实施方式
一至三之一相同。
具体实施方式
五本实施方式与具体实施方式
一至三之一不同的是步骤三所述乙醇溶液的体积浓度为75%。其它与具体实施方式
一至三之一相同。
具体实施方式
六本实施方式与具体实施方式
一至五之一不同的是步骤四所述氢氧化钠溶液的质量浓度为10%。其它与具体实施方式
一至五之一相同。
具体实施方式
七本实施方式与具体实施方式
一至六之一不同的是步骤四中调 pH值6. 5飞.8。其它与具体实施方式
一至六之一相同。
具体实施方式
八本实施方式与具体实施方式
一至七之一不同的是步骤四所述减压干燥温度为60°C 80°C，减压干燥时间为6tTl0h。其它与具体实施方式
一至七之一相同。
具体实施方式
九本实施方式与具体实施方式
一至七之一不同的是步骤四所述减压干燥温度为65°C 75°C，减压干燥时间为7tT9h。其它与具体实施方式
一至七之一相同。
采用以下实施例验证本发明的有益效果
实施例一
本实施例一种野菊花提取物的制备方法，具体是按照以下步骤制备的
一、取IOOkg野菊花中药材，用去离子水煎煮3次，每次lh，第一次去离子水的质量是野菊花中药材的20倍，第二次去离子水的质量是野菊花中药材的16倍，第三次去离子水的质量是野菊花中药材的16倍，合并3次煎煮液，再浓缩至以70°C计相对密度为I. 10 I.14的清膏；
二、向步骤一获得的清膏内加水，加水后的体积为200L，再用质量浓度为10%的氢氧化钠溶液调节PH值至6. 5，静置24h，收集上清液，再用质量浓度为5%的盐酸溶液调节pH 值至2. 0，再静置24h，收集上层液体；
三、将步骤二收集的上层液体过聚酰胺树脂柱，聚酰胺树脂与野菊花中药材的质量比为I :2. 5，再用去离子水进行洗脱，洗脱用的去离子水体积为8个柱体积，水洗液弃去后使用体积浓度为80%的乙醇溶液洗脱树脂柱，洗脱用的乙醇溶液体积是5个柱体积，收集乙醇洗脱液；
四、对乙醇洗脱液进行减压蒸馏回收乙醇，用质量浓度为10%的氢氧化钠溶液调 pH值6. 5，浓缩，减压干燥，减压干燥温度为80°C，减压干燥时间为9h，即得到野菊花提取物，完成野菊花提取物的制备方法。
本实施例的提取物收率不少于2. 5%，主要成分为黄酮。该提取物组分情况的研究结果提取物中总黄酮含量以无水芦丁(C27H3tlO16)计，不少于80% ;单体成分蒙花苷 (C28H32O14)含量不少于15%。
主要成分的探索性研究
I材料、试验与试剂
高效液相色谱仪安捷伦1100系列液相色谱仪，配有在线脱气机；四元梯度洗脱泵；柱温箱。
蒙花苷化学对照品批号111528-200605
芦丁化学对照品批号110080-200707
由中国药品生物制品检定所提供
色谱柱 C18250X4. 6mm 5ym
试剂甲醇、乙腈色谱纯(DIKMA)
试药实施例一制备的野菊花提取物
批号:110601、110901、120401
2试验方法与结果
2. I试验方法
野菊花提取物质量控制采用紫外分光光度法测定总黄酮，高效液相法测定蒙花苷。
野菊花提取物中的大类成分主要是黄酮类成份，通过文献和标准品定位，初步认为野菊花提取物中含有蒙花苷等黄酮类成分，采用高效液相色谱法(中国药典2010年版一部附录VI D)进行含量测定。用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水-磷酸系统为流动相；检测波长为334nm。
2. 2试验结果
通过对部分已知成份进行含量测定，其含量结果见表2-1
2-1野菊花提取物质量控制含量测定结果
权利要求
1.一种野菊花提取物的制备方法，其特征在于一种野菊花提取物的制备方法，具体是按照以下步骤制备的一、取野菊花中药材，用去离子水煎煮3次，每次lh，第一次去离子水的质量是野菊花中药材的16 20倍，第二次去离子水的质量是野菊花中药材的12 16倍，第三次去离子水的质量是野菊花中药材的12 16倍，合并3次煎煮液，再浓缩至以70°C计相对密度为I. 10 I. 14的清膏；二、向步骤一获得的清膏内加水，加水后的体积与野菊花中药材的质量比为2L:1kg， 再用质量浓度为10%的氢氧化钠溶液调节pH值至6. 5 7. 0，静置12tT24h，收集上清液， 再用盐酸溶液调节pH值至2. O 3. 0，再静置12tT24h，收集上层液体；三、将步骤二收集的上层液体过聚酰胺树脂柱，聚酰胺树脂与野菊花中药材的质量比为I :2. 5，再用去离子水进行洗脱，洗脱用的去离子水体积为6 10个柱体积，水洗液弃去后使用体积浓度为65°/Γ85%的乙醇溶液洗脱树脂柱，洗脱用的乙醇溶液体积是5个柱体积，收集乙醇洗脱液；四、对乙醇洗脱液进行减压蒸馏回收乙醇，用氢氧化钠溶液调PH值6.(Γ7. 0，浓缩，减压干燥，即得到野菊花提取物，完成野菊花提取物的制备方法。
2.根据权利要求I所述的一种野菊花提取物的制备方法，其特征在于第一次去离子水的质量是野菊花中药材的If 19倍，第二次去离子水的质量是野菊花中药材的1Γ15倍，第三次去离子水的质量是野菊花中药材的1Γ15倍。
3.根据权利要求2所述的一种野菊花提取物的制备方法，其特征在于步骤二所述盐酸溶液的质量浓度为5%。
4.根据权利要求3所述的一种野菊花提取物的制备方法，其特征在于步骤三所述乙醇溶液的体积浓度为70°/Γ80%。
5.根据权利要求3所述的一种野菊花提取物的制备方法，其特征在于步骤三所述乙醇溶液的体积浓度为75%。
6.根据权利要求5所述的一种野菊花提取物的制备方法，其特征在于步骤四所述氢氧化钠溶液的质量浓度为10%。
7.根据权利要求6所述的一种野菊花提取物的制备方法，其特征在于步骤四中调pH值 6. 5^6. 8。
8.根据权利要求7所述的一种野菊花提取物的制备方法，其特征在于步骤四所述减压干燥温度为60°C 80°C，减压干燥时间为6tTl0h。
9.根据权利要求7所述的一种野菊花提取物的制备方法，其特征在于步骤四所述减压干燥温度为65°C 75°C，减压干燥时间为7h 9h。
全文摘要
一种野菊花提取物的制备方法，本发明涉及一种提取物的制备方法。本发明是要解决现有野菊花提取物的制备方法制备的野菊花提取物用于工业生产的多为粗提物，提取物中总黄酮含量低，不能满足工业化生产的要求的问题。方法如下一、去离子水煎煮野菊花中药材，浓缩清膏；二、清膏内加水，调pH值，收集上层液体；三、收集乙醇洗脱液；四、回收乙醇，调pH值，浓缩，减压干燥，得到野菊花提取物。本发明方法的提取物收率较高超过2.5％，获得的野菊花提取物中总黄酮含量以无水芦丁(C27H30O16)计，超过80％。本发明用于制备野菊花提取物，该提取物可作为中药注射剂原料或口服制剂的原料。
文档编号A61P7/02GK102920767SQ20121048281
公开日2013年2月13日 申请日期2012年11月23日 优先权日2012年11月23日
发明者刘文亮, 赛春梅, 秦绪江, 曲林, 凌雪宇, 单钰毓, 李殿明, 王英新 申请人:哈药集团中药二厂