SP肽或其衍生物在制备预防或治疗哮喘的药物中的应用的制作方法与工艺

本发明属于医药技术领域，具体而言，本发明涉及SP肽或其衍生物在制备预防或治疗哮喘的药物中的应用，尤其涉及该SP肽或其衍生物在制备预防或治疗过敏性哮喘的药物中的应用。

背景技术：
哮喘是一种常见呼吸系统疾病，其发病机制包括：变态反应、气道慢性炎症、气道高反应性、气道神经调节失常、遗传机制、呼吸道病毒感染、神经信号转导机制和气道重构及其相互作用等，主要表现为发作性的喘息、气急、胸闷或咳嗽等症状，或原有症状急剧加重，常有呼吸困难，以呼气流量降低为其特征，常因接触变应原、刺激物或呼吸道感染诱发。其程度轻重不一，病情加重，可在数小时或数天内出现，偶尔可在数分钟内即危及生命。近年来，由各种过敏原(例如：花粉、粉尘、尘螨等)诱发的过敏性哮喘越来越引起人们的关注，所以针对哮喘的有效药物的研究也成为本领域的主要研究课题之一。本发明人在中国专利CN1194986C和CN1216075C中披露了一种7P肽或其衍生物(简称7P肽或其衍生物，本发明中名称为SP肽或其衍生物)，是一种最初根据丙型肝炎病毒而设计的免疫原性肽，并证明所述7P肽或其衍生物具有诱导细胞因子r-IFN，IL-4，IL-10水平升高和抗体产生的功能，r-IFN是Th1分泌的细胞因子，是人体免疫系统抵抗病毒感染的主要细胞因子之一，针对HCV(丙型肝炎病毒)的清除具有相当重要的意义，因此该7P肽或其衍生物具有预防和/或治疗丙型肝炎的作用。进一步的，本发明人在专利申请CN101822816A中公开了所述7P肽或其衍生物在预防和治疗肺炎中的用途，并且具体记载该7P肽及其衍生物通过降低TNF-α水平对肺炎的治疗。所以，已经有的研究报道可以知道，7P肽具有降低肺炎患者的TNF-α水平，以及具有提高丙型肝炎患者细胞因子IL-4水平的作用。而所述肽或其衍生物是否具有预防哮喘发病以及改善哮喘疾病症状尚没有报道。

技术实现要素：
本发明提供了上述SP肽或其衍生物在制备预防或治疗哮喘的药物中的应用，为哮喘类疾病的治疗和预防提供了新的临床方法，也拓宽了该SP肽的潜在药用领域。本发明还提供了利用所述SP肽或其衍生物治疗或预防哮喘的方法，通过向患者施用含有治疗有效量的所述肽或其衍生物的药物，能有效预防哮喘发生，并能显著改善哮喘的病变症状的目的。本发明还提供了上述SP肽或其衍生物在制备降低哮喘患者IL-13水平和IL-4水平的药物中的应用。本发明提供了如式I所示的SP肽或其衍生物在制备预防或治疗哮喘的药物中的应用：Xaa1-Gln-Xaa2-Xaa3-Thr-Ser-Gly-Xaa4(式I)其中，Xaa1为缺失、Ala、Gly、Val、Leu或Ile，Xaa2为Thr或Ser，Xaa3为Tyr、Phe或Trp，而且Xaa4为缺失、Ala、Gly、Val、Leu、Ile或Pro；所述衍生物包括所述肽在药学上可接受的盐或酯。发明人的研究证明，施用有效剂量的所述SP肽或其衍生物能够有效预防或治疗哮喘，尤其能预防或治疗过敏性哮喘。上述式I所示的SP肽或其衍生物的基本结构和组成即为发明人在之前的研究中所得到的7P肽或其衍生物，在本发明中称为SP肽或其衍生物。根据在先专利的记载，所述SP肽或其衍生物可通过本领域技术人员熟知的固相合成法或液相合成法合成，也可通过基因工程融合表达并提纯获得。在本文中，所述“药学上可接受的酯”指适于与人或动物的组织接触而且无过多的毒性、刺激或变态反应等的酯。通常，酯化修饰后能降低机体中的蛋白酶对肽的水解。对本发明的肽的末端氨基、羧基或侧链基团进行修饰可以形成药学上可接受的酯。对氨基酸侧链基团的修饰包括但不限于苏氨酸、丝氨酸侧链羟基与羧酸发生的酯化反应。优选氨基酸末端基团用蛋白质化学领域的技术人员已知的保护性基团保护起来，如乙酰基、三氟乙酰基、Fmoc(9-芴基-甲氧羰基)、Boc(叔丁氧羰基)、Alloc(烯丙氧羰基)、C1-3烷基、C6-12芳烷基等。有关该SP肽(即在先专利中的7P肽)的药用酯在PCT/CN2006/001176中有详细说明，因此将该在先公开申请文件中的相关内容并入本案作为参考。在本发明的具体实施方式中，发明人发现，本发明的肽不经修饰也足以在生理条件下用于治疗或预防哮喘，因此优选不对式I多肽N末端的氨基和C末端的羧基以及氨基酸侧链基团进行修饰，即N末端的化学基团仍旧为第一个氨基酸上的α-氨基(-NHB2B)，C末端的化学基团是C末端氨基酸的羧基(-COOH)。在本文中，所述“药学上可接受的盐”指适于与人或动物的组织接触而且无过多的毒性、刺激或变态反应等的盐。药学上可接受的盐是本领域熟知的。这种盐可以在本发明多肽的最终分离和纯化的过程中制备，也可以将所述的肽与适当的有机或无机酸或碱反应单独制备。代表性酸加成盐包括但不限于乙酸盐、二己酸盐、藻酸盐、柠檬酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、富马酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、烟酸盐、2-萘磺酸盐、草酸盐、3-苯基丙酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、磷酸盐、谷氨酸盐、碳酸氢盐、对甲苯磺酸盐和十一烷酸盐。能用于形成药学上可接受盐的优选的酸是盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、草酸、马来酸、琥珀酸和柠檬酸。药学上可接受的碱加成盐中的阳离子包括但不限于碱金属或碱土金属离子如锂、钠、钾、钙和镁等，季铵阳离子(如四甲基铵、四乙基铵等)、以及铵、甲基胺、二甲基胺、三甲基胺、三乙基胺、二乙基胺、乙基胺、二乙胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌啶、哌嗪等的阳离子。优选的碱加成盐包括磷酸盐、三羟甲基氨基甲烷(tris)和乙酸盐。这些盐一般能够增加多肽的溶解性，而且所形成的盐基本上不改变多肽的活性。总之，根据本发明的方案，所述预防和/或治疗哮喘的药物可以是直接采用所述肽(SP肽)，也可以是采用所述SP肽的药用盐或药用酯形式的药物制剂。进一步的，所述SP肽或其衍生物为式Ⅱ所示的肽或其药学上可接受的盐或酯：Gly-Gln-Thr-Tyr-Thr-Ser-Gly(式Ⅱ)根据本领域公知的氨基酸表示方式，式Ⅱ所示的SP肽还可以缩写为GQTYTSG。在本发明的方案中，所述肽或其衍生物可根据预防和/或治疗目的，以及施用途径采用适当的制剂形式，例如：注射剂、(注射用)冻干粉、喷雾剂、口服溶液、口服混悬液、片剂、胶囊、肠溶片、丸剂、粉剂、颗粒剂、缓释剂(可控制药剂有效成分缓慢释放的剂型)或控释剂(可控制药剂有效成分释放的剂型)等制剂，所述制剂中可包含常规的药学上可接受的载体，所述“药学上可接受的载体”指无毒固态、半固态或液态填充剂、稀释剂、佐剂、包裹材料或其他制剂辅料，例如：生理盐水、等渗葡萄糖溶液、缓冲盐水、甘油、乙醇及上述溶液的组合。本发明的方案中优选以注射方式施用由所述肽或其衍生物制成的药物，即，使用注射针剂或冻干粉针剂是优选的，以生理盐水作为载体溶解即可。进一步的，所述注射制剂中含有治疗有效量为200-3000μg所述肽或其衍生物。更进一步的，所述注射制剂中含有治疗有效量为250-2500μg所述肽或其衍生物。本发明提供的一种治疗或预防哮喘的方法，包括，向患者施用含有治疗有效量的上述式I所示的肽或其衍生物的药物，所述衍生物包括所述肽在药学上可接受的盐或酯。根据本发明的优选方案，所述治疗用药中作为有效成分的肽或其衍生物可以为上述式Ⅱ所示的SP肽或其药学上可接受的盐或酯。上述含有治疗有效量的SP肽或其衍生物的药物(所述肽或其衍生物作为有效成分)能够有效预防或治疗哮喘，尤其能预防或治疗过敏性哮喘。进一步的，在哮喘发病后向患者施用所述药物进行哮喘的治疗；或在接触哮喘致敏源1-48小时内，优选的1-24小时向患者施用所述药物进行哮喘的预防。所述患者为有哮喘过敏史或有哮喘疾病的人。在本发明的一个实施方式中，向患者施用含有治疗有效量为200-3000μg的所述SP肽或其衍生物的药物。进一步优选的，向患者施用含有治疗有效量为250-2500μg的所述SP肽或其衍生物的药物。所述治疗有效量是针对一般成人体重、单次施用的有效量。在本发明的一个实施方式中，优选以注射方式施用含有治疗有效量的所述肽或其衍生物的药物。进一步的，优选对患者以单位制剂的剂量给药，所述单位制剂为满足一次给药所需有效成分的制剂，常见的单位制剂如一单位(片)片剂、一单位(针)针剂或粉针剂等，其中有效成分的含量为一次给药所需的量。患者一次施用所需的药物的量可以方便地通过计算患者的体重和该患者一次用药所需单位体重剂量的乘积得到。例如，在制备药物的过程中，一般认为成人体重为50-90kg，可以用该体重值来计算。实验动物与人的单位体重剂量可以通过等效剂量换算关系来计算。例如，根据的本领域普通技术人员所公知的实验动物与人的等效剂量换算关系(可参见FDA、SFDA等药品管理机构的指导意见，也可参见(黄继汉等，药理试验中动物间和动物与人体间的等效剂量换算，中国临床药理学与治疗学,2004Sep；9(9):1069-1072)可从实验动物的剂量推导出人的有效剂量。在本发明的实施方式中，可以使用按照人和小鼠的体表面积折算系数0.1来换算人和小鼠的剂量。根据本发明实施方式，所述单位制剂中所述肽或其衍生物以50-300μg/kg小鼠剂量施用至小鼠时治疗效果较好，当以60-250μg/kg小鼠剂量，例如250μg/kg或125μg/kg小鼠剂量施用至小鼠时治疗效果更佳。制药商可以根据上述换算方法得到用于人的单位制剂中的有效成分含量，用以应用于其制药过程中。在本发明的技术方案中，根据等效剂量换算关系以及人的常规体重，并且综合用药安全、成本和药效，优选的，所述单位制剂中含有200-3000μg剂量的所述肽或其衍生物，更优选含有250-2500μg剂量的所述肽或其衍生物。根据本发明的研究，虽然本发明人在专利申请CN101822816A中公开了所述7P肽或其衍生物(即本发明的SP肽或其衍生物)能降低肺炎患者TNF-α的水平，但在过敏性哮喘中通常是IL-4和IL-13等细胞因子诱发哮喘而TNF-α等炎症因子加重哮喘，IL-13和IL-4在诱导哮喘发病中的作用已得到了充分研究证实，IL-13在肺组织的高表达可诱导炎症、粘液高分泌、上下皮纤维化、嗜酸粒细胞活化/趋化因子的产生和气道高反应。IL-4的表达可增加上皮细胞上血管细胞黏附分子的表达，诱导气道上皮细胞产生内毒素，最终使嗜酸粒细胞对气道的损害加重，促进气道炎症。经本申请人研究发现，将所述SP肽或其衍生物用于预防或治疗哮喘，可有效改善哮喘病变症状，特别是过敏性哮喘的病变症状，在本发明的实施例中，使用本领域常规手段诱导出过敏性哮喘小鼠模型，即用卵白蛋白联合佐剂诱导出过敏性哮喘小鼠模型来说明上述SP肽或其衍生物对于过敏性哮喘的作用，从以下实施例的数据可以看出，应用所述SP肽或其衍生物的组(包括SP肽预防给药高、中、低剂量组和SP肽治疗给药高、中、低剂量组)，相比于模型组，均表现出显著减轻的IL-13水平和IL-4水平，以及显著改善的肺组织病变程度。表明SP肽或其衍生物具有显著的预防或治疗哮喘的作用。因此，本发明进一步提供了，如式I所示的SP肽或其衍生物在制备降低哮喘患者IL-13水平和IL-4水平的药物中的应用：Xaa1-Gln-Xaa2-Xaa3-Thr-Ser-Gly-Xaa4(式I)其中，Xaa1为缺失、Ala、Gly、Val、Leu或Ile，Xaa2为Thr或Ser，Xaa3为Tyr、Phe或Trp，而且Xaa4为缺失、Ala、Gly、Val、Leu、Ile或Pro；所述衍生物包括所述肽在药学上可接受的盐或酯。进一步的，所述肽或其衍生物为式Ⅱ所示的肽或其药学上可接受的盐或酯：Gly-Gln-Thr-Tyr-Thr-Ser-Gly(式Ⅱ)。进一步的，所述药物为单位制剂或注射制剂。进一步的，所述单位制剂或注射制剂中含有治疗有效量为200-3000μg所述肽或其衍生物。更进一步的，其中所述单位制剂或注射制剂中含有治疗有效量为250-2500μg所述肽或其衍生物。为了便于理解，以下将通过具体的实施例对本发明进行详细地描述。需要特别指出的是，具体实例仅是为了说明，并不构成对本发明范围的限制。显然本领域的普通技术人员可以根据本文说明，在本发明的范围内对本发明做出各种各样的修正和改变，这些修正和改变也纳入本发明的范围内。另外，本发明引用了公开文献，这些文献也是为了更清楚地描述本发明，它们的全文内容均纳入本发明而作为本发明说明书的一部分。附图说明图1SP肽对各组小鼠的血清中IL-13水平和IL-4水平的影响。图2SP肽对各组小鼠的肺组织匀浆中IL-13水平和IL-4水平的影响。图3各组小鼠的肺组织病变程度综合评分。图4显示实施例1中空白对照组小鼠肺组织病理变化。图5显示实施例1中模型组小鼠肺组织病理变化。图6显示实施例1中阳性药物组小鼠肺组织病理变化。图7显示实施例1中SP肽预防给药低剂量组小鼠肺组织病理变化。图8显示实施例1中SP肽预防给药中剂量组小鼠肺组织病理变化。图9显示实施例1中SP肽预防给药高剂量组小鼠肺组织病理变化。图10显示实施例1中SP肽治疗给药低剂量组小鼠肺组织病理变化。图11显示实施例1中SP肽治疗给药中剂量组小鼠肺组织病理变化。图12显示实施例1中SP肽治疗给药高剂量组小鼠肺组织病理变化。具体实施方式实施例1SP肽对小鼠哮喘的保护作用1.实验材料1.1动物：清洁级ICR小鼠，体重18g～22g，雌雄各半，购自南通大学实验动物中心。1.2药物、试剂及仪器：使用通过固相肽合成方法，由413A型自动肽合成仪(购自PerkinElmer公司)合成的以下序列的肽：GQTYTSG(以下称为SP肽)，具体的合成步骤请参见PCT/CN2006/001176中实施例1的记载，使用时用生理盐水溶解。阳性对照药：地塞米松注射液，购自贵州华圣制药有限公司，规格：5mg/ml/支，人日用量10mg/70kg.d。卵白蛋白(AlbuminEgg)，购自Sigma公司。小鼠IL-13ELISAKit,购自上海上海蓝基生物科技有限公司。BIO-RAD680伯乐酶标仪。1.3分组及药物剂量ICR小鼠，雌雄各半，随机分为9组，小鼠每组10只，分别为：1)空白对照组(施用与模型组等体积的生理盐水)；2)模型组(施用使用生理盐水配制的卵白蛋白和氢氧化铝溶液)；3)阳性药物组(施用与模型组等体积的地塞米松注射液，剂量为0.9μg/kg·d)；4)SP肽预防给药高剂量组、5)SP肽预防给药中剂量组、6)SP肽预防给药低剂量组(施用卵白蛋白和氢氧化铝，以及剂量分别为250μg/kg·d，125μg/kg·d，62.5μg/kg·d的SP肽，用生理盐水配置成需要浓度的SP肽溶液)。7)SP肽治疗给药高剂量组、8)SP肽治疗给药中剂量组、9)SP肽治疗给药低剂量组(施用卵白蛋白和氢氧化铝，以及剂量分别为250μg/kg·d，125μg/kg·d，62.5μg/kg·d的SP肽，用生理盐水配置成需要浓度的SP肽溶液)。SP肽各剂量组均皮下注射给药，小鼠每10g体重给药0.1ml的SP肽溶液，空白对照组使用等量的生理盐水(小鼠每10g体重给予0.1ml生理盐水)，阳性药物组腹腔注射给药，小鼠每10g体重给药0.1ml的阳性药物。2.试验方法2.1实验方案：致敏液的配制：以10ug卵白蛋白和2mg氢氧化铝溶于0.5mL生理盐水的比例配制，现配现用。按照以下方式对各组小鼠进行给药，给药期间，每天向各组小鼠正常喂食。在第1、7、14天，对除空白对照组外的其余各组小鼠(模型组、预防给药组、治疗给药组、阳性药物组)，腹腔注射0.5ml新鲜配制的所述致敏液。空白对照组腹腔注射等体积的生理盐水。从第21天起(即第4周起)，对除空白对照组外的其余各组小鼠，每隔3天置于16L密闭容器中，通过超声雾化使小鼠吸入1wt％卵白蛋白生理盐水，吸入时间为25min/d,雾化流量为3ml/min,每周2次，以激发哮喘，直到第19周结束。空白对照组小鼠用等体积的生理盐水腹腔进行雾化。其中，预防给药组(SP肽预防给药高剂量组、SP肽预防给药中剂量组、SP肽预防给药低剂量组)在第一次腹腔注射致敏液1小时后(即第1天起)，在小鼠的右后肢皮下注射相应剂量的SP肽，隔天给药一次，共给药15次。第15周第1天，随机抽取模型组、预防给药组、治疗给药组、阳性药物组中各5只小鼠，经病理学检查，除预防给药组外，其余小组哮喘小鼠模型成功。同一天起，对治疗给药组(治疗给药SP高剂量组、治疗给药SP中剂量组、治疗给药SP低剂量组)的小鼠，右后肢皮下注射相应剂量的SP肽,隔天给药一次，共给药15次。同一天起，对阳性药物组的小鼠，腹腔注射相应0.1ml/10g小鼠体重的地塞米松注射液，隔天给药一次，共给药15次。关于实验结果的测定，所有小鼠在最后一次雾化吸入(第19周)后6h摘眼球取血处死，收集血清，-70℃保存备用。采用双抗体夹心ELISA法，使用小鼠IL-13ELISA检测试剂盒检测血清IL-13水平，将IL-13标准品用试剂盒中的稀释液进行倍比稀释，然后按照试剂盒说明书进行操作。计算出标准曲线，从标准曲线上读出所测样本的数值，再乘以稀释倍数，即得出样本血清中IL-13的水平值。类似于IL-13的方式，通过IL-4标准品的标准曲线，获得样本血清中IL-4的水平值。并收集完血清后,将小鼠肺先用冰生理盐水浸泡冲洗后,取小鼠左肺上叶用10％中性福尔马林固定，石蜡包埋，切片，HE染色，再经梯度乙醇脱水，二甲苯透明，以中性树胶封片，进行病理组织学检查包括：肺组织是否表现为肺内小支气管、血管周围间质水肿，以及炎细胞浸润，肺泡腔是否清晰、是否有渗出物，肺泡壁充血是否增厚，以及炎细胞的主要类型等。肺组织匀浆的制备：取完小鼠左肺上叶后，从剩余的新鲜肺组织取大约0.04g放入研磨器中，加入400ul冰PBS(10℅浓度)，按组别分别在冰上逐个研磨，然后吸取研磨物，离心取上清进行检测。在酶标包被板上的待测样品孔中先加样品稀释液40ul，然后再加待测小鼠肺组织匀浆样品10ul(待测1：5倍稀释)。然后同血清样本按照ELISA试剂盒说明检测小鼠肺组织匀浆中IL-4、IL-13。根据肺组织病变(包括小支气管、血管周围间质水肿，肺泡壁充血或气肿)由轻到重的程度分别标记为1分，2分，3分，4分，无明显病变为0分，极轻度病变为0.5分，累加所有分数，并计算出每组每只动物的均分(±SD)，分值越高提示病变程度越重。对病变评分结果进行两个样本比较的秩和检验，与模型组进行比较。2.2数据处理：对所有数据进行数据处理，对病理学评分采用秩和检验，其他数据采用t检验，并统计分析结果。3.结果3.1小鼠血清以及肺组织匀浆中IL-13水平和IL-4水平图1和图2分别表示了SP肽对各组小鼠的血清以及肺组织匀浆中IL-13水平和IL-4水平的影响，其中给药量如上述1.3中所述，图1和图2中的结果为各组小鼠的平均值。从图1和图2可以看出，卵白蛋白联合佐剂氢氧化铝致敏引起的过敏性哮喘小鼠模型组的血清及肺组织匀浆中IL-13水平和IL-4水平显著升高(P<0.01)，根据下面病理组织学检查可知，IL-13水平和IL-4水平升高诱发了小鼠支气管哮喘，表明卵白蛋白联合佐剂氢氧化铝致敏引起的小鼠支气管哮喘可通过释放IL-13和IL-14引发。而SP肽治疗给药高、中、低剂量组及SP肽预防给药高、中剂量组小鼠的血清及肺组织匀浆中IL-13和IL-14水平相比模型组均有显著降低(*P＜0.05,**P＜0.01)。3.2肺组织切片结果分析由图4可以看出，空白对照组小鼠肺内小血管周围组织间隙增宽，无炎细胞浸润(如图4箭头所示)。由图5可以看出，模型组小鼠肺内小血管周围间质重度水肿并有大量炎细胞浸润(如图5箭头所示)，炎细胞以嗜酸性粒细胞和单个核细胞为主，肺泡腔清晰、无渗出物。由图6可以看出，阳性药物组小鼠肺间质轻度水肿并且少量炎细胞浸润(如图6箭头所示)，炎细胞以嗜酸性粒细胞和单个核细胞为主。由图7可以看出，SP肽预防给药低剂量组小鼠肺间质中度或重度水肿并有较多的炎细胞浸润(如图7箭头所示)，炎细胞以嗜酸性粒细胞和单个核细胞为主。由图8可以看出，SP肽预防给药中剂量组小鼠肺间质中度或轻度水肿并有少量炎细胞浸润(如图8箭头所示)，炎细胞以嗜酸性粒细胞和单个核细胞为主。由图9可以看出，SP肽预防给药高剂量组小鼠肺间质轻度水肿并且支气管周围有较少量炎细胞浸润(如图9箭头所示)。由图10可以看出，SP肽治疗给药低剂量组小鼠肺内小血管和支气管周围肺间质中度水肿并有较多量炎细胞浸润(如图10箭头所示)，炎细胞以嗜酸性粒细胞和单个核细胞为主。由图11可以看出，SP肽治疗给药中剂量组小鼠肺内小血管和支气管周围肺间质轻度水肿并有较多量炎细胞浸润(如图11箭头所示)，炎细胞以嗜酸性粒细胞和单个核细胞为主，周围肺泡壁充血，肺泡呈气肿状。由图12可以看出，SP肽治疗给药高剂量组小鼠肺间质轻度水肿并有少量炎细胞浸润(如图12箭头所示)，炎细胞以嗜酸性粒细胞和单个核细胞为主。(×200)3.2将各组小鼠的肺组织病变轻重程度按照上述评分规则，使用秩和检验方法获得各病理学检查指标的综合评分结果，如图3所示，由图3可以看出，病理组织学检查表明SP肽预防给药或治疗给药后均能显著性减轻小鼠支气管、血管周围间质水肿、水肿处炎细胞的浸润以及肺泡壁充血或气肿，并且SP肽治疗给药低剂量组及SP肽预防给药中、低剂量组小鼠，相比于模型组均有统计学显著性差异(*P＜0.05)，其中SP肽治疗给药高、中剂量组，SP肽预防给药高剂量组与模型组相比有高度显著性差异(**P＜0.01)。