专利名称：一种美洲大蠊提取物的制备方法及其新用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及药物领域，具体涉及一种美洲大蠊提取物的制备方法。
背景技术：
美洲大蠊(Periplaneta americana)为昆虫纲有翅亚纲蜚蠊目蜚蠊科大蠊属昆虫，俗称“蟑螂”，其入药始载于《神农本草经》，其中把它列为中品，谓“味:咸、寒；治:血瘀证坚寒热、破积聚、喉咽闭、内寒无子”。近些年来随着我国对传统中医药资源研究开发的重视，有些学者其进一步研究并取得了可喜的成就，以美洲大蠊醇提物纯化制成的产品“康复新液”，在烧伤、烫伤等外伤创面的治疗上取得的良好疗效。从美洲大蠊醇提物纯化精制而成的“心脉隆注射液”，具强心升压，改善微循环，兴奋呼吸，利尿，增加心、脑、肺、肾的血流量，其主治:右心衰，也可治急慢性心衰，失血性休克，低血压,室性早搏,病窦性综合症,心脑缺血性疾病。目前，美洲大蠊的提取通常采用浸提法，如专利号:ZL200610021993.6，发明名称:“美洲大蠊提取物、含该提取物的药物组合物及其制备方法”的专利中公开了一种美洲大蠊提取的制备方法，包括如下步骤:a、取美洲大蠊粉碎，加石油醚，在温度5 20°C下浸泡，过滤，滤渣挥干；b、取步骤a所得滤渣，采用水提醇沉或醇提水沉法提取，静置；静置后的药液，弃上层油脂，过滤，得下层药液；其中，水提醇沉法中醇沉时，加入的乙醇浓度为:75^95%w/w ;或，醇提水沉法时，加入的乙醇浓度为:6(T80%W/W ;c、所得b步骤所得药液，浓缩至相对密度为1.2(Tl.25，得清膏；d、按每IOOOg美洲大蠊使用4(T60ml甘油的用量取甘油，与c步骤所述的清膏混合，即得美洲大蠊提取物。然而，该提取方法难以有效保留氨基酸和大分子蛋白质等有效成分，同时，收率也较低，仅为23%。
发明内容
本发明提供了一种美洲大蠊提取物的新制备方法。本发明美洲大蠊提取物的制备方法，它包括如下步骤:(I)取美洲大蠊粗粉，加水，美洲大蠊粗粉与水的质量体积比为25:6 14，在电压80^120伏特条件下闪式提取2 3次，每次f 3min，得提取液；(2)离心步骤(I)所得提取液，得上清，浓缩，即得美洲大蠊提取物。优选地，步骤(I)中，所述美洲大蠊粗粉与水的质量体积比为25:1(Γ12。进一步优选地，所述美洲大蠊粗粉与水的质量体积比为25:12。优选地，步骤(I)中，所述闪式提取的电压为80伏特。优选地，步骤(I)中，所述闪式提取的次数为2次。优选地，步骤(I)中，所述闪式提取的时间为2 3min。进一步优选地，所述提取时间为3min。
优选地,步骤(2)中，所述离心的转速为4000r/min,离心时间为30min。优选地，步骤(2)中，所述浓缩采用冷冻干燥的方法。所述冷冻干燥的方法是:预冻24小时后,冷冻干燥48小时。本发明还提供了前述方法制备的美洲大蠊提取物。用本发明闪式提取方法制备美洲大蠊提取物，有效的保留了氨基酸、蛋白质等有效成分，收率高达47.59%，是专利号:ZL200610021993.6的专利公开的方法的2倍，并且操作简便，成本低廉，具有良好的应用价值。显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。以下通过实施例形式的具体实施方式
，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
具体实施例方式试验仪器和材料仪器:UV1100紫外可见分光光度计(上海天美科学仪器有限公司)；酶标仪(美国Thermo公司)；Mili_Q超纯水处理仪(美国密理博公司)；恒温干燥箱(上海森杏实验有限公司，DGG-9240) ；BP211D电子天平(德国Sartorius公司)；电子恒温水浴锅(北京中兴伟业仪器有限公司，DZKW-4) ；DL-360超声波清洗器；高速台式离心机(TGL-16G) ;ALPHR1_4LSC冷冻干燥仪(Christ);电磁炉；96孔酶标板(NUNC MaxiSorp);蒸发皿；闪式提取器(型号JHBE-50 型)。材料:美洲大蠊药材；谷氨酸对照品(成都瑞芬思生物科技有限公司，批号:G-025-110305);茚三酮(天津市瑞金`特化学品有限公司，批号:110518) ;100T/96样考马斯亮蓝试剂盒(南京建成生物工程研究所，批号:20110719);磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化亚锡均为分析纯。吸水率测定方法:称取美洲大蠊药材3份，每份100g，分别加入8倍量水，浸泡至透心，滤出全部未被吸收的水液，根据以下公式计算吸水率:吸水率=吸水量/药材重量X 100%=(加水量一滤出水的量)+药材重量X 100%计算得到美洲大蠊药材的吸水率为140%，故在之后试验中补足吸水率140%进行试验。实施例1提取方法的初步筛选根据参考文献以及常用中药提取方法，确定从渗漉法、冷浸法、超声法、回流法、闪式提取法五种方法中初筛适宜美洲大蠊药材有效成分提取的方法。根据参考文献，目前美洲大蠊药材的提取溶媒主要有水和不同浓度的乙醇，首先进行预试验，以美洲大蠊药材提取液中的氨基酸含量、蛋白质含量、干膏收率为指标，使用综合加权评分法，对五种提取方法的提取效果进行综合加权评分。最终优选出闪式提取法为最佳提取方法，进一步对闪式提取法进行工艺参数的筛选试验。预试验得知乙醇浓度越高时，氨基酸和蛋白质的提取率越低，所以在考察提取方法时，除渗漉法以乙醇为溶媒外，其余方法均以水为提取溶媒。具体提取方法如下:渗漉法:称取美洲大蠊药材粗粉25g，加20倍量60%的乙醇，静置16小时，以3ml/min的速度渗滤，提取液备用。冷浸法:称取美洲大蠊药材粗粉25g，加10倍量的水，静置提取两次，每次24小时，离心，合并滤液。超声法:称取美洲大蠊药材粗粉25g，加入10倍量的水，超声提取两次，每次30分钟，离心，合并滤液，备用。回流法:称取美洲大蠊药材粗粉25g，加10倍量的水，回流提取两次，每次30分钟，离心，合并滤液，备用。9061闪式提取法:称取美洲大蠊药材粗粉25g，加10倍量的水，80伏特电压下闪式提取两次，每次2分钟，离心，合并滤液，备用。试验以美洲大蠊药材提取液中的氨基酸含量、蛋白质含量、干膏收率为指标，使用综合加权评分法，对五种提取方法的提取效果进行综合加权评分。其中氨基酸、蛋白质等大类成分是药效成分，最为重要，故给予各0.35的权重系数，满分各为35分，干膏收率能侧面反映出固体成分的提取率，给予0.3的权重系数，满分为30分，总和为100分。考察结果如表I所示:表I不同提取方法考察结果
权利要求
1.一种美洲大蠊提取物的制备方法，其特征在于:它包括如下步骤: (O取美洲大蠊粗粉，加水，美洲大蠊粗粉与水的质量体积比为25:6 14，在电压80^120伏特条件下闪式提取2 3次，每次f 3min，得提取液； (2)离心步骤(I)所得提取液，得上清，浓缩，即得美洲大蠊提取物。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于:步骤(I)中，所述美洲大蠊粗粉与水的质量体积比为25:10 12。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于:所述美洲大蠊粗粉与水的质量体积比为25:12o
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于:步骤(I)中，所述闪式提取的电压为80伏特。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于:步骤(I)中，所述闪式提取的次数为2次。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于:步骤(I)中，所述闪式提取的时间为2 3min。
7.根据权利要求6所述的制备方 法，其特征在于:所述提取时间为3min。
8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于:步骤(2)中，所述离心的转速为4000r/min,离心时间为 30min。
9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于:步骤(2)中，所述浓缩采用冷冻干燥的方法。
10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于:所述冷冻干燥的方法是:预冻24小时后，冷冻干燥48小时。
11.权利要求广10任意一项所述方法制备的美洲大蠊提取物。
全文摘要
本发明公开了一种美洲大蠊提取物的制备方法，它包括如下步骤(1)取美洲大蠊粗粉，加水，美洲大蠊粗粉与水的质量体积比为256~14，在电压80~120伏特条件下闪式提取2~3次，每次1~3min，得提取液；(2)离心步骤(1)所得提取液，得上清，浓缩，即得美洲大蠊提取物。本发明还公开了该方法制备的美洲大蠊提取物。本发明方法既可以有效保留美洲大蠊的营养成分，又可以显著提高收率，操作简便，具有较强的实际应用价值。
文档编号A61P9/10GK103083363SQ20131003023
公开日2013年5月8日 申请日期2013年1月25日 优先权日2013年1月25日
发明者傅超美, 张臻, 廖婉, 耿福能, 傅舒 申请人:四川好医生攀西药业有限责任公司