固体脂质纳米粒、含其的药物组合物、及其用途的制作方法

专利名称：固体脂质纳米粒、含其的药物组合物、及其用途的制作方法
技术领域：
本公开内容涉及包括弹性蛋白样(elastin-like peptide, ELP)多肽的固体脂质纳米粒(solid lipid nanopaticle, SLN)及其用途。
背景技术：
固体脂质纳米粒(SLN)被开发作为乳液、脂质体和聚合物纳米颗粒的替代载体系统。SLN可提供包括如下的优点:所引入化合物的稳定化、受控的释放、吸留性(occlusivity)、和在皮肤上的成膜(包括在皮肤上的体内效应)。而且，当使用生物脂质时，SLN提供优异的生物相容性和生物降解性以及高的储存稳定性。SLN常规地通过熔融/固化方法制备，其中脂质首先熔融，分散在水中，然后冷却以固化脂质颗粒。或者，SLN常规地使用类似于聚合物微粒形成的乳液方法制造，其中脂质溶解在溶剂中，乳化，然后分散在包含乳化剂的水溶液中以使SLN硬化。乳化剂的作用是使SLN稳定化。但是，由于SLN是过度稳定的，因此药物的释放可花费长时间。因此，为了克服该缺陷，需要提供有 效的药物释放的方法。

发明内容
提供包括弹性蛋白样多肽(ELP)的固体脂质纳米粒(SLN)。提供包括包含ELP的SLN的药物组合物。提供通过使用SLN有效地将活性剂递送到靶部位的方法。另外的方面将在随后的描述中部分地阐明，且部分地将从所述描述明晰，或者可通过所提供的实施方式的实践获知。


从结合附图考虑的实施方式的下列描述，这些和/或其它方面将变得明晰和更容易理解，在附图中:图1说明在实施例1中制备的包括甲基红(MR)(其为微溶于水的物质)的固体脂质纳米粒(SLN)的微溶于水的物质的释放图(profile)；图2说明在实施例2中制备的根据表面活性剂的量的SLN的尺寸；图3 (A)-(B)说明不包括香豆素-6的SLN (图3(A))和包括香豆素_6的SLN (图3(B))的透射电子显微镜镜检(TEM)图像；
图4A-4B说明根据脂质的类型和表面活性剂的量的SLN尺寸；图5说明根据以与实施例7相同的方式在颗粒核心(芯)中插入或不插入胆甾醇油酸酯(其用作SLN的稳定剂)的颗粒的分散性的温度灵敏度；图6显示如实施例8中所述的其中引入紫杉醇(Paclitaxel)的包括弹性蛋白样多肽(ELP)的SLN的药物释放的温度灵敏度；和图7说明以与实施例9相同的方式用SLN在细胞内递送香豆素-6的结果。
具体实施例方式现在将详细介绍实施方式，其实例说明在附图中，其中相同的附图标记始终是指相同的元件。在这点上，本实施方式可具有不同的形式并且不应解释为限于本文中所阐明的描述。因此，下面仅通过参考附图描述实施方式，以解释本描述的方面。如本文中使用的术语“和/或”包括相关所列条目的一个或多个的任意和全部组合。根据本发明的一方面，固体脂质纳米粒(SLN)包括偶联(conjugate)至疏水部分(moiety)的弹性蛋白样多肽(ELP)和脂质。如本文中使用的术语“弹性蛋白样多肽”是指一类氨基酸聚合物，其经历取决于温度的构象变化。在本发明的实施方式中，ELP可为呈现出反向相变(inverse phasetransitioning)行为的聚合物。反向相变行为是指，ELP在低于反向相变温度(Tt)时可溶于水溶液中，但是随着温度升高至高于Tt，所述ELP为不可溶的。随着温度升高，ELP可从高度可溶的伸长链转变为具有大大降低的溶解性的紧密折叠的聚集体。随着当温度升高时ELP结构具有更多的￠-转角结构和扭曲的￠-结构，可诱导这样的反向相变。例如，在约IO0C -约70°C、或约39°C -约70°C的范围内的温度下可发生ELP的相变。

在SLN中，反向相变行为可破坏SLN，这归因于随着温度从低于ELP的Tt的温度升至更高温度，ELP收缩并自组装。破坏SLN可增加SLN中包括的活性剂的释放。因此，SLN中包括的活性剂可以较高的温度灵敏度从SLN释放到外部。但是，本发明的一个或多个实施方式不限于任何特定机理。归因于ELP的反向相变行为的SLN破坏可因构成SLN的脂质和ELP的相变温度而不同。脂质低于相变温度时以凝胶相存在且在高于相变温度时以液(晶)相存在。当脂质以凝胶相存在时，SLN的破坏可不发生或可被限制，尽管ELP的结构由于反向相变行为而变化为具有转角结构。另一方面，当脂质以液相存在时，随着ELP的结构由于反向相变行为而变化为具有￠-转角结构，可诱导SLN的破坏。即，当脂质以液相而不是以凝胶相存在时，反向相变更有效地诱导SLN的破坏。因此，SLN中包含的活性剂的释放温度可通过调节脂质的相变温度和ELP的反向相变温度而控制。例如，ELP、构成SLN的脂质和SLN的相变温度可各自在约10°C -约70°C、例如约35°C -约70°C、约39°C -约45°C、或约39°C -约60°C的范围内。偶联至疏水部分的ELP可偶联至氨基酸序列的N-末端或C-末端、N-末端氨基酸残基的侧链、C-末端氨基酸残基的侧链、或在N-和C-末端之间的氨基酸残基的侧链。例如，所述疏水部分偶联至N-末端或C-末端，且每一个ELP分子可偶联至少一个疏水部分。例如，所述疏水部分例如烃基、含羰基的基团如酰基、和烷氧基可通过与在ELP的N-末端的氮原子的胺键或酰胺键或者与在C末端的羰基的酯键偶联至ELP。这里，所述疏水部分可为具有4-30个碳原子、例如14-24个碳原子或16-24个碳原子的烃基、或含羰基的基团如酰
基、或烧氧基。ELP可通过其氨基酸序列限定。例如，ELP的一部分或整个ELP可包括一个或多个重复单元，所述重复单元可选自:VPGXG(SEQ ID NO:1)、PGXGV (SEQ ID NO: 2)、GXGVP (SEQID NO:3)、XGVPG(SEQ ID NO:4)、GVPGX(SEQ ID NO:5)及其组合，其中 V 为缬氨酸，P 为脯氨酸，G为甘氨酸，和X为除脯氨酸外的任何天然或非天然氨基酸序列。这里，在各重复单元中的X可为相同或不同的氨基酸。所述重复单元可通过ELP中不消除得到的ELP的相变性质的一个或多个氨基酸分开，或ELP的端部可包括一个或多个氨基酸，例如不同于所述重复单元的氨基酸。所述重复单元对其它氨基酸的摩尔比可为在所述重复单元和所述其它氨基酸两者中约0.1-约99.9%的所述重复单元。所选择的重复单元可重复两次或更多次，例如2-200次。在本发明实施方式中，ELP可为其中VPGXG、PGXGV、GXGVP、XGVPG、GVPGX或其组合串联重复的嵌段，或者ELP可包括其中VPGXG、PGXGV、GXGVP、XGVPG、GVPGX或其组合串联重复的嵌段。只要保持反向相变行为，ELP可包括VPGXG、PGXGV,GXGVP,XGVPG,GVPGX或其组合，且在分子中可包括另外的部分，例如，在重复单元之间、和/或在ELP的任一末端的一个或多个氨基酸如丙氨酸和甘氨酸。ELP的N-末端或C-末端可与疏水部分连接。而且，疏水部分可通过与ELP中的 氨基酸残基的侧链中的反应性基团连接而偶联至ELP。所述反应性基团可为氨基、羟基、硫醇基、或羧基。未与疏水部分连接的其它末端可被封闭(block)或不封闭。例如，当疏水部分和ELP经由ELP的N-末端连接时，ELP的C-末端的羧基可被封闭或不封闭。所述封闭可通过与可为生物相容的、非免疫原的、在特异性递送中有用的、或可逃避生物降解体系的材料连接或相互作用而实现。例如，所述封闭可通过由ELP的C-末端的羧基和氨基的结合形成的酰胺键而实现。所述氨基可得自氨分子、伯胺、仲胺、或叔胺。所述伯胺、仲胺或叔胺可各自具有1-18个碳原子、例如1-6个碳原子。X可为缬氨酸或丙氨酸。所述重复单元可各自独立地以一个或多个整数重复数包括在ELP中。所述重复数可各自独立地为2至200、2至100、2至80、2至60、2至40、2至10、2至12、2至8、2至6、4至100、8至80、10至60、12至40、20至40、4至10、4至8、或4至6的整数。所述疏水部分可为具有通过与脂质分子相互作用而将ELP固定至脂质的性质的分子。所述相互作用可为共价或非共价键合。所述相互作用可为疏水相互作用、范德华相互作用、离子键合、或氢键合。所述疏水部分可与所述脂质部分或完全相同，或可为另外的脂质。所述疏水部分可包括仅包含疏水区域的分子、或者包含疏水区域和亲水区域两者的两亲分子。在所述两亲分子中，所述疏水区域可向着脂质内部排列，和所述亲水区域可向着脂质外部排列，这使得能够与ELP连接。这里，“向外”表示远离SLN的中心的方向。所述部分可包装、嵌入或分散在SLN的脂质之间。所述疏水部分可为天然存在于生物膜中的脂质或未天然存在于生物膜中的脂质。天然存在于生物膜中的脂质可选自磷脂或其衍生物、留醇或其衍生物、鞘脂或其衍生物、及它们的组合。磷脂或其衍生物可选自卵磷脂(磷脂酰胆碱)、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、磷脂酰乙醇胺、及其组合。留醇或其衍生物可为胆留醇或其衍生物、或鲨烯或其衍生物。鞘脂或其衍生物可为鞘磷脂或其衍生物、或神经节苷脂或其衍生物。磷脂、留醇或鞘脂包括在体内合成过程中产生的中间体或前体。例如，所述疏水部分包括磷酸甘油酯、鞘氨醇、神经酰胺、或脑苷脂。所述衍生物可为脂肪酸的酯。所述脂肪酸可为具有4-30个碳原子的脂肪酸。 所述疏水部分可为饱和或不饱和的烃基、饱和或不饱和的酰基、饱和或不饱和的烃氧基(alkoxy group)、或具有式-C(O)N(Rl) (R2)的取代酰胺基，其中Rl和R2各自独立地为饱和或不饱和的烃基。疏水部分和ELP的偶联可通过在生理学或病理学条件下的不可裂解连接或通过可裂解连接进行。所述可裂解连接的实例可为通过PH可裂解接头、热可裂解接头、辐射可裂解接头、或在水溶液中裂解的接头介导的连接。所述疏水部分可通过与在N-末端的氨基(NH2-或-NH-)或在C-末端的羰基(-C(O)-)偶联而与ELP偶联。所述疏水部分可通过与在ELP的侧链上的选自氨基、羰基、羟基、硫醇基、及其组合的官能团的相互作用而偶联。所述疏水部分可通过与ELP的氮原子的胺键或酰胺键而与ELP偶联。所述疏水部分可通过与在ELP的C-末端的羰基的酰胺键或酯键而与ELP偶联。所述疏水部分的疏水区域或所述具有式-C (O)N(Rl) (R2)的取代酰胺基的Rl和R2可具有4-30个碳原子、例如14-24个碳原子或16-24个碳原子。所述疏水部分可为，例如，肉豆蘧酰基(C14)、棕榈酰基(C16)、硬脂酰基(C18)、花生四烯酰基(arachidonyl) (C20)、山嵛酰基(C22)、或木蜡酰基(C24)，或者肉豆蘧基(C14)、棕榈基(C16)、硬脂基(C18)、花生四烯基(C20)、山嵛基(C22)、或木蜡基(Iignoceryl) (C24)。所述具有式_C(0)N(Rl) (R2)的取代酰胺基的Rl和R2可为，例如，肉豆蘧基(C14)、棕榈基(C16)、硬脂基(C18)、花生四烯基(C20)、山嵛基(C22)、或木蜡基(C24)。所述疏水部分可通过疏水效应装填在脂质中，且因此，偶联至疏水部分的E·LP可固定在SLN上。偶联至疏水部分的ELP的实例可为硬脂酰基-或胆甾醇基-V n-NH2，其中n为1-200。这里，V’可表示选自 VPGXG、PGXGV、GXGVP、XGVPGJP GVPGX 的一种，和当 n 为 2 或更大时，硬脂酰基-或胆留醇基-r I1-NH2中包括的V’可彼此相同或不同。n可为2至200、2 至 80、2 至 60、2 至 40、2 至 10、2 至 12、2 至 8、2 至 6、4 至 100、8 至 80、10 至 60、12 至 40、20至40、4至10、4至8、或4至6的整数。这里，V可为缬氨酸，P可为脯氨酸，G可为甘氨酸，和X可为除脯氨酸外的任何天然或非天然氨基酸。这里，在各V’单元中的X可为相同或不同的氨基酸。偶联至疏水部分的ELP可为，例如，硬脂酰基-(VPGVG)n-NH2或胆甾醇基-(VPGVG) n-NH2。偶联至疏水部分的ELP的另外的实例可为硬脂酰基-或胆甾醇基-[ViniV2Ii2]Ii3-NH2，其中叫、n2和n3各自独立地为1-200。Ii1、n2和％可各自独立地为2至200,2至100、2 至 80、2 至 60、2 至 40、2 至 10、2 至 12、2 至 8、2 至 6、4 至 100、8 至 80、10 至 60、12 至40、20至40、4至10、4至8、或4至6的整数。这里，V1和V2可各自独立地表示选自VPGXG、PGXGV、GXGVP、XGVPGJP GVPGX的一种。这里，V可为缬氨酸，P可为脯氨酸，G可为甘氨酸，和X可为除脯氨酸外的任何天然或非天然氨基酸。这里，在各V1单元中的X可为相同或不同的氨基酸，和在各V2单元中的X可为相同或不同的氨基酸。偶联至疏水部分的ELP可为，例如，硬脂酰基-或胆甾醇基-[(VPGVG) H1 (VPGAG) n2] H3-NH2。
偶联至疏水部分的ELP的另外的实例可为硬脂酰基-或胆甾醇基-[B (SA或Chol)Ii1V1Ign3-NH2，其中Ii1、n2和n3各自独立地为1-200。Ii1、n2和n3可各自独立地为2至200、2 至 100、2 至 80、2 至 60、2 至 40、2 至 10、2 至 12、2 至 8、2 至 6、4 至 100、8 至 80、10 至 60、12至40、20至40、4至10、4至8、或4至6的整数。这里，B(SA或Chol)可各自独立地表示选自VPGXG、PGXGV、GXGVP、XGVPGJP GVPGX的一种。这里，V可为缬氨酸，P可为脯氨酸，G可为甘氨酸，和X可为具有与硬脂酰基或胆留醇基部分偶联的侧链氨基的赖氨酸、精氨酸或组氨酸。这里，在各B(SA或Chol)单元中的X可为相同或不同的氨基酸。V1可表示选自VPGXG, PGXGV, GXGVP, XGVPG、和GVPGX的一种，其中V可为缬氨酸，P可为脯氨酸，G可为甘氨酸，和X可为除脯氨酸外的任何天然或非天然氨基酸。各V1单元中的X可为相同或不同的氨基酸。这里，当Ii1或n2为2或更大时，各位置的B可彼此相同或不同，和各位置的V1可彼此相同或不同。偶联至疏水部分的ELP可为，例如，硬脂酰基-或胆留醇基-[(VPGK(SA或 Choi) G) rii (VPGXG) n2] n3_NH2。可以相对于SLN总重量的0.01-50重量％(wt%)的比例包括ELP。如本文中使用的术语“脂质”包括脂肪或脂肪衍生的物质，其相对地不溶于水中，但是可溶于有机溶剂中。所述脂质包括脂肪酸酯、脂肪醇、留醇或蜡。脂肪的实例为高级脂肪酸的甘油酯。所述脂质包括中性脂质、两亲脂质、或其组合。所述中性脂质是指没有电荷的脂质。所述中性脂质包括脂肪酸的甘油酯。所述中性脂质包括至少一种C4-C24羧酸的甘油一酯、甘油二酯或甘油三酯。所述羧酸可为饱和或不饱和的，且可为支化或未支化的。例如，所述脂质可为 C4、C5、C6、C7、C8、C9、C10、CU、C12C13、C14、C15、C16、C17、C18、C19、C20、C21、C22、C23或C24羧酸的甘油一酯。所述羧酸可为饱和或不饱和的且支化或未支化的。所述羧酸可共价连接至三个甘油羟基的任意一个。根据另一实施方式，所述脂质可为C4、C5、C6、C7、C8、C9、CIO、Cll、C12、C13、C14、C15、C16、C17、C18、C19、C20、C21、C22、C23 或C24羧酸的甘油二酯。所述羧酸可为饱和或不饱和的且支化或未支化的。两个羧酸可相同或不同，且所述羧酸可共价连接至三个甘油羟基的任意两个。根据另一实施方式，所述脂质可为 C4、C5、C6、C7、C·8、C9、C10、C11、C12、C13、C14、C15、C16、C17、C18、C19、C20、C21、C22、C23或C24羧酸的甘油三酯。所述羧酸可为饱和或不饱和的且支化或未支化的。三个羧酸可相同，所述羧酸的两个可相同，或全部三个可不同。所述羧酸可共价连接至三个甘油羟基的任意三个。根据实施方式，所述脂质可为具有C8-C18链长度的饱和的、偶数的、未支化的脂肪酸的甘油三酯的共混物。例如，所述脂质可为甘油三酯的共混物，各甘油三酯为包括CS、CIO、C12、C14、C16或C18羧酸的甘油三酯。例如，所述脂质可为三癸酸甘油酯和三月桂酸甘油酯的共混物。对于在共混物中的各甘油三酯，三个羧酸可相同，所述羧酸的两个可相同，或全部三个可不同。所述脂质可包括甘油一酯、甘油二酯和甘油三酯的共混物。各甘油一酯、甘油二酯和甘油三酯的羧酸可为饱和或不饱和的，可为支化或未支化的，且可为C4、C5、C6、C7、C8、C9、C10、C11、C12、C13、C14、C15、C16、C17、C18、C19、C20、C21、C22、C23、C24 羧酸。所述脂质可为具有C8-C18链长度的饱和的、偶数的、未支化的脂肪酸的甘油一酯、甘油二酯和甘油三酯的共混物。例如，所述脂质可为甘油一酯、甘油二酯和甘油三酯的共混物，各甘油一酯、甘油二酯和甘油三酯为包括C8、CIO、C12、C14、C16或C18羧酸的那些。所述两亲脂质可包括亲水区域和疏水区域。所述两亲脂质可为具有亲水头部和疏水尾部的分子。所述两亲脂质可包括选自磷脂、脂肪酸、及其组合的一种或多种。所述脂质可具有14-50个碳原子。所述脂质可为磷脂。所述磷脂可具有12-24个碳原子。所述磷脂可为选自卵磷脂、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、磷脂酰乙醇胺、及其组合的至少一种，其中所述至少一种磷脂具有一个酰基。而且，所述磷脂可具有约10°C -约70°C、例如约39°C -约60°C或约38°C-约45°C的相变温度。所述磷脂的酰基可为饱和或不饱和的。所述脂质可为两种或更多种磷脂的混合物。由于所述两种或更多种磷脂的混合物，可产生具有多种相变温度的SLN。磷脂可具有两个酰基，例如，选自C12饱和链磷脂(Tc=约10°C )、C14饱和链磷脂(Tc=约240C )、C16饱和链磷脂(Tc=约41°C )、C18饱和链磷脂(Tc=约55 °C )、C20饱和链磷脂(Tc=约65°C )、C22饱和链磷脂(Tc=约70V )、及其组合。类似地，可使用的其它通常的磷脂包括磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、磷脂酰乙醇胺、鞘磷脂和神经节苷脂，其具有取决于它们的酰基链长度以类似的方式变化的相变温度。卵磷脂可为蛋黄卵磷脂(PC)。C16饱和链磷脂的实例可为二棕榈酰卵磷脂(DPPC)。DPPC为具有约41.5°C的双层转变温度的饱和链(C16)磷脂。C18饱和链磷脂的实例可为1，2-二硬脂酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱(DSPC)。DSPC为具有约55.10°C的双层转变温度的饱和链(C18)磷脂。所述脂质可包括不同于磷脂的成膜材料。可形成固相膜的示例性的材料包括勃拉(bola)脂质或细菌脂质。另外，可使用包括水溶性聚合物(例如聚乙二醇)和水不溶性聚合物(例如聚环氧丙烧和聚乙基乙烯(polyethylethylene))的嵌段共聚物。而且,所述脂质包括聚合物脂质。例如，所述脂质可为酯化的聚(丙烯酸)或酯化的聚(乙烯醇)。可以相对于SLN 总重量的 0.01-90(0.5、1、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、或 85)重量 ％，例如，0.5-90 重量％、1.0_90 重量 ％、5.0-90 重量 ％、10.0-90重量 ％、15.0-90 重量 ％、30.0-90 重量 ％、50.0-90 重量 ％、75.0-90 重量 ％、80.0-90 重量 ％、或
10.0-80重量％的比例包括所述脂质或所述脂质混合物。术语“固体”是指SLN的至少一部分在室温和大气压下是固体的。但是，SLN可包括液体脂质和/或俘获(entrap)的溶剂。SLN可进一步包括其稳定剂。所述稳定剂可选自留醇或其衍生物、鞘脂或其衍生物、及它们的组合。所述稳定剂可选自胆留醇、￠-胆留醇、胆留醇的脂肪酸酯(例如具有10-24个碳原子的脂肪酸酯)、谷留醇、麦角留醇、豆留醇、4，22-豆留二烯-3-酮、豆留醇乙酸酯、羊毛留醇、环阿尔廷醇、及其组合。SLN稳定剂可选自留族化合物或其衍生物、鞘脂或其衍生物、及它们的组合。所述稳定剂可为具有能够引入到脂质中的性质的留族化合物。如本文中使用的术语“留族化合物”表示包括如下的一类有机混合物:留烷核心或由其衍生的骨架，其包含彼此结合的四个环烷烃环的特定排列，即从左到右的三个环己烷环(称作A、B和C)以及一个环戊烷环(D环)。这里，“由其衍生的骨架”包括插入在留烷骨架中的不饱和键。所述留族化合物可根据连接到四个环核心的官能团和环的氧化态而变化。例如，所述留族化合物可包括在环上的亲水官能团。例如，所述留族化合物可具有羟基。所述留族化合物可为留醇。术语“甾醇”为在C-3位置上具有羟基 和具有由胆留烷衍生的骨架的一类留族化合物。这里，术语“衍生的骨架”包括插入在胆留烷骨架中的不饱和键。所述留族化合物包括在植物、动物和真菌中发现的留族化合物。例如，所有留族化合物可在细胞中由羊毛留醇(如在动物和真菌中)或由环阿尔廷醇(如在植物中)制造。所述留醇包括胆留醇或其衍生物。这里，“衍生物”意味着保持在脂质双层中插入的性质的胆留醇衍生物。所述衍生物包括脂肪酸酯。所述稳定剂可选自胆留醇、谷留醇、麦角留醇、豆留醇、4，22-豆留二烯-3-酮、豆留醇乙酸酯、羊毛甾醇、环阿尔廷醇、及其组合。可以相对于SLN总重量的约0至约50重量％、例如约I至约50重量％、约5至约50重量％、约10至约50重量％、约20至约50重量％、约30至约50重量％、约I至约40重量％、约5至约20重量％、约10至约40重量％、约20至约30重量％、或约I至约10重量％的比例包括稳定剂。SLN可进一步包括用亲水聚合物衍生的磷脂衍生物。所述亲水聚合物可选自聚乙二醇(PEG)、聚乳酸、聚乙醇酸、聚乳酸和聚乙醇酸的共聚物、聚乙烯醇、聚乙烯基吡咯烷酮、寡糖及其组合。所述衍生物可为与PEG偶联的C4-C30例如C16-C24的磷脂。所述衍生物可为DPPC-PEG或DSPE-PEG。PEG可具有约180-约50000Da的分子量。可以相对于SLN总重量的约0至约10重量％、例如约I至约10重量％、约2至约10重量％、约3至约10重量％、约5至约10重量％、约I至约8重量％、约2至约5重量％、或约I至约5重量％的比例包括所述衍生物。构成SLN的脂质可具有在约39°C -约60°C的范围内的相变温度。ELP可具有在约350C -约70°C或约39°C -约70°C的范围内的相变温度。SLN的平均直径可为约IOnm至约1500nm、例如约IOnm至约lOOOnm、约IOnm至约500nm、约 IOnm 至约 300nm、约 IOOnm 至约 300nm、或约 IOOnm 至约 200nm。SLN可进一步包括活性剂。所述活性剂可包括选自如下的活性剂:生理活性齐IJ、药物活性剂、磁力活性剂、显像剂、及其组合。所述药物活性剂可选自麻醉剂、抗组胺剂、抗肿瘤药、抗溃疡药、抗 癫痫剂、肌肉松弛药、免疫抑制剂、抗感染剂、非留体抗炎齐U、显像剂、营养剂、及其组合。所述活性剂可选自氨甲蝶呤、阿霉素(doxorubicin)、表柔比星(epirubicin)、柔红霉素(daunorubicin)、长春新碱(vincristine)、长春碱(vinblastine)、依托泊苷(etoposide)、椭圆玫瑰树碱(elIipticine)、喜树碱(camptothecin)、紫杉醇、多西紫杉醇(docetaxel)、顺钼(cisplatin)、泼尼松(prednisone)、甲基-泼尼松、布洛芬(ibuprofen)及其组合。所述活性剂可分散、包埋(embed)或引入在SLN中。可以相对于SLN总重量的约0.01至约10重量％、例如约0.1至约10重量％、约I至约10重量％、约3至约10重量％、约5至约10重量％、约0.01至约8重量％、约0.01至约5重量％、或约0.1至约5重量％的比例包括所述活性剂。SLN可进一步包括表面活性剂。表面活性剂是溶解在液体中且用于显著降低表面张力的物质，且所述表面活性剂以分为亲水区域和疏水区域的分子存在。在这点上，表面活性剂可便利地附着到表面且在一定浓度(临界胶束浓度)或更高下形成分子聚集体(其为胶束)。表面活性剂可用于抑制脂质凝聚和增加在当前体系中的均匀分散。表面活性剂可为聚醚，例如脱水山梨糖醇单月桂酸酯的聚氧乙烯衍生物(Tween)。表面活性剂可为TWeen20或Tween80。可以相对于SLN总体积的约0至约10体积％、例如约I至约10体积％、约3至约10体积％、约5至约10体积％、约I至约8体积％、约I至约5体积％、或约3至约5体积％的比例包括所述表面活性剂。在SLN的制造期间，一种或多种表面活性剂可溶解或悬浮在有机相中或水相中。根据另一实施方式，在制造SLN后，可将一种或多种表面活性剂添加到SLN的悬浮液中。当表面活性剂存在于有机相或水相中时，所述表面活性剂可位于SLN的内部中(即，被包封)或在SLN的外部上(即，共价或非共价键合至存在于外部上的官能团)。当在形成SLN后混合一种或多种表面活性剂时，所述表面活性剂可位于SLN的外部上，即通过共价或非共价键合至存在于外部上的官能团而定位。根据SLN的实施方式，SLN可包括偶联至疏水部分的ELP、第一脂质、第二脂质、和稳定剂，其中所述第一脂质为磷脂，和所述第二脂质为中性脂质。所述部分、稳定剂、磷脂、和中性脂质如上所述。根据实施方式，所述磷脂可为选自卵磷脂、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、磷脂酰乙醇胺、及其组合的至少一种。所述磷脂可具有拥有16-24个碳原子的酰基。所述中性脂质可包括选自具有4-24个碳原子的羧酸的甘油一酯、甘油二酯、甘油三酯、及其组合的至少一种。所述稳定剂可选自留醇或其衍生物、鞘脂或其衍生物、及它们的组合。所述稳定剂可选自胆留醇、^ -胆留醇、胆留醇的脂肪酸酯(例如具有10-24个碳原子的脂肪酸酯)、谷留醇、麦角留醇、豆留醇、4，22-豆留二烯-3-酮、豆留醇乙酸酯、羊毛留醇、环阿尔廷醇、及其组合。根据实施方式，SLN可包括偶联至疏水部分的ELP、卵磷脂、及由甘油三癸酸酯和甘油三月桂酸酯组成的甘油三酯、和胆留醇油酸酯。卵磷脂、由甘油三癸酸酯和甘油三月桂酸酯组成的甘油三酯、和胆甾醇油酸酯的摩尔比可为约2-约5:约0.1-约3:0_约1，偶联至疏水部分的ELP为卵磷脂的约0.01-约50重量％，且甘油三癸酸酯和甘油三月桂酸酯的摩尔比可为约1:约0.25-约4。偶联至疏水部分的ELP的实例可为硬脂酰基-或胆甾醇基-V，n-NH2，其中 n 为 1-200。这里，V，可表示选自 VPGXG、PGXGV、GXGVP、XGVPG、和 GVPGX的一种，和当n为2或更大时，硬脂酰基-或胆留醇基-V’n-NH2的各位置中包括的V’可彼此相同或不同。n可为2至200、2至80、2至60、2至40、2至10、2至12、2至8、2至6、4至100、8至80、10至60、12至40、20至40、4至10、4至8、或4至6的整数。这里，V可为缬氨酸，P可为脯氨酸，G可为甘氨酸，和X可为除脯氨酸外的任何天然或非天然氨基酸。这里，在各位置中V’的X可为相同或不同的氨基酸。偶联至疏水部分的ELP可为，例如，硬脂酰基-(VPGVG) n-NH2 或胆甾醇基-(VPGVG) n_NH2。偶联至疏水部分的ELP的另外的实例可为硬脂酰基-或胆甾醇基-[ViniV2Ii2]n3-NH2。和n3可各自独立地为2至200,2至100,2至80、2至60、2至40、2至10、2至
12、2 至 8、2 至 6、4 至 100、8 至 80、10 至 60、12 至 40、20 至 40、4 至 10、4 至 8、或 4 至 6 的整数。当Ii1和n2各自独立地为2或更大时，在硬脂酰基-或胆甾醇基-[V1Ii1V2Ii2] n3-NH2中各位置的V1可彼此相同或不同，和在硬脂酰基-或胆留醇基-[ViniV2Ii2]n3-NH2中各位置的V2可彼此相同或不同。这里，V1和V2可各自独立地表示选自VPGXG、PGXGV, GXGVP, XGVPG,和GVPGX的一种。 这里，V可为缬氨酸，P可为脯氨酸，G可为甘氨酸，和X可为除脯氨酸外的任何天然或非天然氨基酸。这里，在各位置中V1的X可为相同或不同的氨基酸，和在各位置中V2的X可为相同或不同的氨基酸。偶联至疏水部分的ELP可为，例如，硬脂酰基-或胆甾醇基-[(VPGVG) H1 (VPGAG) n2] H3-NH2。偶联至疏水部分的ELP的另外的实例可为硬脂酰基-或胆甾醇基-[B (SA或Chol)Ii1V1Ign3-NH2，其中n1、n2和n3可各自独立地为2至200,2至100,2至80、2至60、2至40、2至 10、2至12、2至8、2至6、4至100、8至80、10至60、12至40、20至40、4至10、4至8、或4至6的整数。这里，B(SA或Chol)可各自独立地表示选自VPGXG、PGXGV、GXGVP、XGVPGjPGVPGX的一种。这里，V可为缬氨酸，P可为脯氨酸，G可为甘氨酸，和X可为具有与硬脂酰基或胆留醇基部分偶联的侧链氨基的赖氨酸、精氨酸或组氨酸。V1可表示选自VPGXG、PGXGV、GXGVP、XGVPG、和GVPGX的一种，其中V可为缬氨酸，P可为脯氨酸，G可为甘氨酸，和X可为除脯氨酸外的任何天然或非天然氨基酸。这里，当Ii1或112为2或更大时，各位置的B可彼此相同或不同，和各位置的V1可彼此相同或不同。偶联至疏水部分的ELP可为，例如，硬脂酰基-或胆甾醇基-[(VPGK (SA 或 Choi) G) H1 (VPGXG) n2] H3-NH2。制造SLN的方法是已知的。SLN可通过熔融/固化方法制造，其中脂质首先熔融，分散在水中，然后冷却以固化SLN。此外，SLN可使用类似于聚合物微粒形成的乳液方法制造，其中脂质溶解在溶剂中，乳化，然后分散在包含乳化剂的水溶液中以使SLN硬化。乳化剂的作用是使SLN稳定化。或者，SLN可通过成膜/水合方法制造，其中脂质和疏水药物同时熔化在有机溶剂中并从其中移除，然后通过声波处理和涡旋，可制造嵌入有药物的SLN。根据SLN的组成，可独立地使用以上方法。SLN可通过例如包括如下的方法制造:提供包括ELP、脂质和二元溶剂体系的有机相；通过移除有机相产生薄膜；提供包括水的水相；和将所述薄膜和水相合并且分散。可选择性地移除所述有机相或所述有机相的一部分，且因此SLN可制造为水悬浮液。术语“二元溶剂体系”是指包括两种或更多种可混溶或部分可混溶的溶剂的溶剂体系。该术语特别地包括三-溶剂、4-溶剂和5-溶剂体系。所述溶剂体系通常包括在室温和大气压下为液体的溶剂。但是，尽管整个体系在室温和大气压下是液体的，但是所述体系的一种或多种溶剂需要理解为在室温和大气压下是固体或气体的。所述二元溶剂体系可为氯仿(CHCl3)-乙醇、氯仿(CHCl3)-甲醇、 二氯甲烧(CH2Cl2)-乙醇、二氯甲烧(CH2Cl2)-甲醇、N-甲基卩比咯烧酮(NMP)-丙酮、四氢呋喃(THF)-丙酮、或二甲基甲酰胺(DMF)-丙酮。

SLN还可通过包括如下的方法制造:提供包括ELP、中性脂质和二元溶剂体系的有机相；通过移除有机相 产生薄膜；提供包括水的水相；和将所述薄膜和水相合并且分散。但是，已知的方法可用于制造SLN，且不限于特定的方法。根据实施方式，SLN可包括偶联至疏水部分的ELP、第一脂质、第二脂质、和稳定齐U，其中所述第一脂质为磷脂，和所述第二脂质为中性脂质，其中SLN可具有如下结构:所述第二脂质和稳定剂形成内芯，且所述第一脂质围绕所述内芯。所述第一脂质可以单层的形式围绕所述内芯。ELP可由于经由所述部分与所述第一脂质和任选地所述第二脂质的相互作用而固定在SLN上。所述ELP、第一脂质、第二脂质和稳定剂如上所述。而且，SLN可包括表面活性剂。根据本发明的另一方面，用于将活性剂递送到受试者中的靶部位的药物组合物包括可药用载体或稀释剂、以及包含所述活性剂的SLN，其中，所述SLN包括偶联至疏水部分的ELP和脂质。所述可药用载体或稀释剂可为本领域中公知的。所述载体或稀释剂可选自水(例如盐水或无菌水)、林格氏(Ringer’ s)溶液、缓冲盐水、葡萄糖溶液、麦芽糊精(maltodextose)溶液、甘油、乙醇、及其组合。
SLN已在以上描述。SLN可分散在水(aqueous)介质中。所述水介质可包括生理盐水或PBS。而且，SLN可俘获在脂质体中或以分散体或乳液的形式配制。活性剂可俘获在SLN的内部空间中。活性剂可俘获在SLN的脂质分子中。SLN可具有约39 °C -约45 °C的相变温度。所述活性剂可包括选自生理活性剂、药物活性剂、磁力活性剂、显像剂、及其组合的一种或多种。所述活性剂可为水不溶性成分、水溶性成分、及其组合的一种或多种。所述药物活性剂可选自麻醉剂、抗组胺剂、抗肿瘤药、抗溃疡药、抗癫痫剂、肌肉松弛药、免疫抑制剂、抗感染剂、非留体抗炎剂、显像剂、营养剂、及其组合。所述活性剂可选自氨甲蝶呤、阿霉素、表柔比星、柔红霉素、长春新碱、长春碱、依托泊苷、椭圆玫瑰树碱、喜树碱、紫杉醇、多西紫杉醇、顺钼、泼尼松、甲基-泼尼松、布洛芬及其组合。根据本发明的另一实施方式，将活性剂递送到受试者中的靶部位的方法包括:向受试者施用包含所述活性剂的SLN，其中SLN包括偶联至疏水部分的ELP和脂质；和加热受试者的所述靶部位以在所述靶部位使所述活性剂从SLN释放。所述方法包括向受试者施用包含所述活性剂的SLN。包含所述活性剂的SLN已在以上描述。SLN可具有约39 °C -约45 °C的相变温度。所述施用可为肠胃外施用。所述 肠胃外施用例如可为静脉内、皮内、肌内、腔内(腹腔、关节或眼)、或直接注射。所述直接注射可包括直接注射到患病部位例如肿瘤部位。SLN可静脉内施用且由此通过血流被带到靶部位如肿瘤部位。所述靶部位可具有渗漏(leaky)性质。术语“渗漏性质^示所述靶部位具有与正常的组织或细胞相比增加的渗透性的特性。所述靶部位可为肿瘤部位,其中在肿瘤中血管的物质渗透性由于肿瘤血管的泄露程度增加而增加。所述受试者可为人类或除人类外的哺乳动物。所述哺乳动物可选自狗、猫、马、牛、猪、羊、猴子、鼠、及其组合。所述方法包括加热所述受试者的靶部位以在所述靶部位使所述活性剂从SLN释放。所述加热可归因于引起过热的临床程序或可涉及身体的其他部分相比发炎体部分的固有地较高的温度。引起过热的临床程序可通过如下进行:直接传热，例如在盆中的热液体介质，例如在水中接触身体；辐照超声，例如集中在靶部位的高强度超声；施加磁场，例如放大的磁场；施加微波能量和/或高频能量。所述靶部位可为其中存在病理症状的区域例如肿瘤部位(例如实体瘤)、或其中存在炎症的区域。所述加热可包括加热至约39°C -约45 °C的温度。所述活性剂可包括选自生理活性剂、药物活性剂、磁力活性剂、显像剂、及其组合的一种或多种。所述药物活性剂可选自麻醉剂、抗组胺剂、抗肿瘤药、抗溃疡药、抗癫痫剂、肌肉松弛药、免疫抑制剂、抗感染剂、非留体抗炎剂、显像剂、营养剂、及其组合。所述活性剂可选自氨甲蝶呤、阿霉素、表柔比星、柔红霉素、长春新碱、长春碱、依托泊苷、椭圆玫瑰树碱、喜树碱、紫杉醇、多西紫杉醇、顺钼、泼尼松、甲基-泼尼松、布洛芬及其组合。根据实施方式的SLN，颗粒的分散性可通过偶联至疏水部分的ELP取决于温度的收缩和自组装而调节。因此，SLN可用作用于有效地将活性剂递送到受试者的靶部位的媒介物(vehicle)。根据包括活性剂的SLN，颗粒的分散性和活性剂的释放性可通过偶联至疏水部分的ELP的相变温度以及SLN自身的相变温度而调节。因此，当SLN在体温下、例如甚至在包含有效量的分子如胆留醇(其使脂质稳定化以在体温下更稳定地保持SLN)的情况下具有更稳定的组成时，颗粒的分散性和活性剂的释放性可通过偶联至疏水部分的ELP的相变温度有效地调节。根据用于将根据包含于根据另一实施方式的SLN中的活性剂递送到受试者中的靶部位的药物组合物，所述组合物可用于有效地将所述活性剂递送到受试者中的靶部位。按照根据另一实施方式的将活性剂施用到受试者身体中的靶部位的方法，所述活性剂可有效地递送到受试者身体中的靶部位。现在将参考示例性实施方式更充分地描述本发明。但是，本发明可以许多不同的形式体现且不应解释为限于本文中阐述的实施方式。实施例1:包括微溶于水的甲基红的SLN的制备使用脂质制备SLN。在室温和大气压下将作为磷脂的蛋黄卵磷脂(PC)、及作为甘油三酯的甘油三癸酸酯和甘油三月桂酸酯(甘油三癸酸酯:甘油三月桂酸酯的摩尔比为6:4)的混合物、与作为稳定剂的胆留醇油酸酯溶解在氯仿和乙醇(体积比2:1)的混合溶剂中(蛋黄PC:甘油三酯:胆留醇油酸酯的摩尔比=5:2:1)。将l_2ml所得溶液添加到包括Iml PBS的容器中并通过涡旋和声波处理(sonication)而分散，且通过使用旋转蒸发器蒸发有机溶剂，并由此，在Iml PBS中形成SLN(下文中，称作“对照组SLN”)，因为有机溶剂被蒸发。而且，以与上述相同的方式处理对应于蛋黄PC的10重量％的甲基红，除了将甲基红与蛋黄PC、胆甾醇油酸酯、及作为甘油三酯的甘油三癸酸酯和甘油三月桂酸酯(摩尔比6:4)的混合物一起溶解以外，且由此制备含MR的SLN(下文中，称作“实验组SLN”)。图1显示在实施例1中制备的SLN的MR发射图。将400 U L包括微溶于水的材料的SLN (Img蛋黄PC (主要脂质)/ml PBS,蛋黄PC的10重量％的MR)(实验组SLN)和不包括微溶于水的材料的SLN( 对照组SLN)添加到50mL PBS中，然后根据在室温和大气压下储存的时间在410nm(其为MR的最大吸光度波长)下测量吸光度值，即MR的释放量。如图1中所示，在室温下随时间推移的MR发射是微小的(insignificant)(引入量的1%或更低)。SP，不具有ELP的SLN具有非常低的引入材料的发射。另外，通过使用Zetasizer Nano ZS(Malvern instrument, UK)(其为动态光散射(DLS)装置)测量得到的SLN的平均直径。具体地，将10 ii L SLNdmg蛋黄PC (主要脂质)/lml PBS,蛋黄PC的10重量％的MR)添加到包含90 u LPBS的样品池(cuvette)( 一次性的耐溶剂的微型样品池(ZEN0040)，Malvern, UK)，且在Zetasizer中通过光散射测量平均直径。结果，包括MR的SLN的平均直径为168nm±0.5nm。实施例2:包括表面活性剂的SLN的制备在当前实施方式中，在室温和大气压下将作为磷脂的蛋黄PC、作为稳定剂的胆甾醇油酸酯、及作为甘油三酯的甘油三癸酸酯和甘油三月桂酸酯(摩尔比6:4)的混合物以5:1:2的蛋黄PC:甘油三酯:胆甾醇油酸酯的摩尔比溶解在氯仿和乙醇(体积比2:1)的混合溶剂中。将l_2ml所得溶液添加到各自包括含有不同比例的表面活性剂TWeen20(0、2.5、5或10体积％，基于PBS体积)的lml PBS的容器中并通过涡旋和声波处理而分散，且通过使用旋转蒸发器蒸发有机溶剂，并由此，在lml PBS中形成SLN，因为有机溶剂被蒸发。通过使用Zetasizer Nano ZS(Malvern instrument,UK)(其为动态光散射(DLS)装置)测量得到的SLN的平均直径。具体地，将IOiiL SLN(lmg蛋黄PC/lml PBS)添加到包含90 ii L PBS的样品池(一次性的耐溶剂的微型样品池(ZEN0040)，Malvern, UK)，且在Zetasizer中通过光散射测量平均直径。结果，所产生的SLN的平均直径为约50nm_约650nmo图2显示在实施例2中制备的根据表面活性剂的量的SLN的平均直径。如图2中所示，随着Tween20的量增加，SLN的平均直径减小。实施例3:包括微溶于水的物质的SLN的制备和使用透射电子显微镜的证实在当前实施方式中，在室温和大气压下将作为磷脂的蛋黄PC、作为甘油三酯的甘油三癸酸酯和甘油三月桂酸酯(摩尔比6:4)的混合物、及胆甾醇油酸酯以5:2:1的摩尔比与香豆素-6 (蛋黄PC的10重量％)(其为微溶于水的物质)一起溶解在氯仿和乙醇(体积比2:1)的混合溶剂中。将1-2ml所得溶液添加到包括lml PBS (包含2体积%的Tween20,基于PBS体积)的容器中并通过涡旋和声波处理而分散，且通过使用旋转蒸发器蒸发有机溶剂，并由此，在lml PBS中形成SLN，因为有机溶剂被蒸发。通过使用Zetasizer Nano ZS(Malvern instrument,UK)(其为动态光散射(DLS)装置)测量得到的SLN的平均直径。具体地，将10 ii L SLNdmg蛋黄PC/lml PBS,蛋黄PC的10重量％的香豆素-6)添加到包含90 ii L PBS的样品池(一次性的耐溶剂的微型样品池(ZEN0040) ,Malvern，UK)，且在Zetasizer中通过光散射测量平均直径。结果，所产生的SLN的平均直径为约200nm-约220nm。而且，通过透射电子显微镜(TEM)观察证实在固体脂质中引入的香豆素-6颗粒。图3显示(A)不包含香豆素-6的SLN和⑶包含香豆素_6的SLN的TEM图像。如图3(B)中所示，在SLN中存 在对应于香豆素-6颗粒的黑点。而且，测量所产生的SLN的稳定性。在将以实施例1的相同方式制备的SLN(其为具有对应于Img蛋黄PC/ml PBS的浓度的SLN的溶液(不包括MR))在室温和大气压下储存一周的同时，在制造当日、24小时后和72小时后，以上述相同的方式通过使用Zetasizer测量粒径。平均粒径为约168nm±0.5nm，这表明即使在储存约72小时后粒径也未变化。实施例4:根据脂质的类型和表面活性剂的量的SLN的制备在当前实施方式中，以与实施例3中使用的相同方式制造SLN，不同的是，磷脂的类型变为蛋黄PC或二棕榈酰卵磷脂(DPPC)且作为甘油三酯的甘油三癸酸酯和甘油三月桂酸酯的比例变为8:2，由此制造脂质纳米粒(不包含香豆素-6)。而且，使用的TWeen20的量为PBS体积的0、1或2体积％。制造的脂质纳米粒的浓度为Img磷脂/ml包含TWeen20的 PBS。通过使用Zetasizer Nano ZS(Malvern instrument,UK)(其为动态光散射(DLS)装置)测量得到的SLN的平均直径。具体地，将IOiiL SLN(lmg蛋黄PC/lml PBS)添加到包含90 ii L PBS的样品池(一次性的耐溶剂的微型样品池(ZEN0040)，Malvern, UK)，且在Zetasizer中通过光散射测量平均直径。图4显示根据脂质的类型和表面活性剂的量的SLN的平均直径。制备10 y L以实施例4的相同方式制备的SLN溶液和90 ii L PBS的混合物，并且在将该混合物的温度保持在25°C或45°C五分钟的同时，以与上述相同的方式通过使用Zetasizer测量平均直径。如图4A中所示，当磷脂为蛋黄PC时，所产生的SLN的平均直径在25°C的温度下为约200nm_约950nm且在45°C的温度下为约50nm_约400nm。如图4B中所示，当磷脂为DPPC时，所产生的SLN的平均直径在25°C的温度下为约500nm-约2580nm且在45°C的温度下为约250nm_约700nm。实施例5:包括ELP的SLN的制备和粒径的测量使用其中n为1-200的硬脂酰基-(VPGVG) n_NH2 (下文中称作“SA_Vn”)作为ELP制备SLN。这里，硬脂酰基通过酰胺键连接到N-末端的氮。在当前实施方式中，在室温和大气压下将n为5和6的SA-V5和SA-V6 (得自Peptron Inc.,Korea)(蛋黄PC的10重量％)、作为磷脂的蛋黄PC、作为甘油三酯的甘油三癸酸酯和甘油三月桂酸酯(摩尔比6:4)的混合物、及胆留醇油酸酯以5:2:1(蛋黄PC:甘油三酯:胆留醇油酸酯)的摩尔比溶解在氯仿和乙醇(体积比2:1)的混合溶剂中。通过使用旋转蒸发器蒸发有机溶剂，且由此，所述脂质溶液形成为膜。然后，通过添加和声波处理，得到颗粒分散在其中的SLN溶液。通过使用Zetasizer Nano ZS(Malvern instrument,UK)(其为动态光散射(DLS)装置)测量得到的SLN的平均直径。具体地，将10 ii L SLNdmg蛋黄PC/lml PBS,蛋黄PC的10重量％的ELP)添加到包含90 u LPBS的样品池(一次性的耐溶剂的微型样品池(ZEN0040)，Malvern, UK)，且在Zetasizer中通过光散射测量平均直径。结果，根据使用的ELP的长度，所产生的SLN的平均直径为220nm(SA-V5)或120nm(SA_V6)。实施例6:包括ELP的SLN的制备和取决于温度的粒径变化使用其中nl和n2各自独立地为1-200的胆甾醇基-(VPGVG) n1- (VPGAG)n2-NH2 (下文中称作 “Chol-VnlAn2”)(Peptron, Korea)作为 ELP 制备 SLN。在当前实施方式中，在室温和大气压下将nl为3和n2为I的Chol-VnlAn2 (Peptron,Korea)(蛋黄PC的O、1、2.5和5重量%)、作为磷脂的蛋黄PC、作为甘油三酯的甘油三癸酸酯和甘油三月桂酸酯(摩尔比8:2)的混合物、及胆留醇油酸酯以5:2:1(蛋黄PC:甘油三酯:胆甾醇油酸酯)的摩尔比溶解在氯仿和乙醇(体积比2:1)的混合溶剂中。通过使用旋转蒸发器蒸发有机溶剂，且由此，所述脂质溶液形成为膜。然后，通过添加PBS、涡旋和声波处理，得到颗粒分散在其中的SLN溶液。通过使用Zetasizer Nano ZS(Malvern instrument,UK)(其为动态光散射(DLS)装置)测量得到的SLN的平均直径。具体地，将10 u LSLNdmg蛋黄PC/lml PBS,蛋黄PC的
0、1、2.5和5重量％的ELP)添加到包含90 u LPBS的样品池(一次性的耐溶剂的微型样品池(ZEN0040)，Malvern, UK)，且在Zetasizer中通过光散射测量平均直径。表I和2说明如上所述测量的SLN的平均直径。表I
权利要求
1.固体脂质纳米粒(SLN)，包括: 偶联至一个或多个疏水部分的弹性蛋白样多肽(ELP);和 脂质分子， 其中所述疏水部分为饱和或不饱和的烃基、饱和或不饱和的酰基、饱和或不饱和的烃氧基、或者其中Rl和R2独立地为饱和或不饱和的烃基的具有式-C(O)N(Rl) (R2)的取代酰胺基，所述脂质分子为中性脂质分子、两亲脂质分子、或其组合，和所述ELP包括选自如下的至少一个重复单元:VPGXG、PGXGV、GXGVP、XGVPG、GVPGX、及其组合，其中V为缬氨酸，P为脯氨酸，G为甘氨酸，和X为除脯氨酸外的任何氨基酸。
2.权利要求1的SLN，其中所述ELP偶联至两个或更多个疏水部分。
3.权利要求1的SLN，其中一个或多个疏水部分偶联至ELP的侧链。
4.权利要求1的SLN，其中所述SLN进一步包括稳定剂。
5.权利要求1的SLN，其中构成所述SLN的脂质具有在约39°C-约60°C的范围内的相变温度。
6.权利要求1的SLN，其中所述SLN的平均直径为约IOnm-约1500nm。
7.权利要求1的SLN，其中所述SLN进一步包括选自如下的至少一种:生理活性剂、药物活性剂、磁力活性剂、显像剂、及其组合。
8.权利要求1的SLN，其中所述SLN包括: 偶联至一个或多个疏水部分的ELP ； 第一脂质分子； 第二脂质分子；和 稳定剂， 其中所述第一脂质分子为磷脂，所述第二脂质分子为中性脂质分子，和所述稳定剂选自甾醇或其衍生物、鞘脂或其衍生物、及它们的组合，其中所述磷脂具有拥有16-24个碳原子的酰基，和所述中性脂质包括具有4-24个碳原子的羧酸的甘油一酯、甘油二酯和甘油三酯的一种或多种。
9.权利要求8的SLN，包括偶联至一个或多个疏水部分的ELP、卵磷脂、由三癸酸甘油酯和三月桂酸甘油酯组成的甘油三酯、及胆留醇油酸酯，其中所述偶联至一个或多个疏水部分的ELP为: 硬脂酰基-或胆甾醇基-V n-NH2，其中n为1-200，其中V’表示选自VPGXG、PGXGV,GXGVP、XGVPG、和GVPGX的一种，其中当n为2或更大时，各位置的V’彼此相同或不同，其中V为缬氨酸，P为脯氨酸，G为甘氨酸，和X为除脯氨酸外的任何天然或非天然氨基酸，其中各位置的V’的X彼此相同或不同； 硬脂酰基-或胆甾醇基-[V1Ii1V2Ii2] H3-NH2，其中Ii1、n2和n3各自独立地为1-200，其中V1和V2各自独立地表示选自VPGXG、PGXGV、GXGVP、XGVPGJP GVPGX的一种，其中当叫和n2各自独立地为2或更大时，各位置的V1彼此相同或不同，各位置的V2彼此相同或不同，其中V为缬氨酸，P为脯氨酸，G为甘氨酸，和X为除脯氨酸外的任何天然或非天然氨基酸，和各位置的V1的X彼此相同或不同，各位置的V2的X彼此相同或不同；或者 硬脂酰基-或胆留醇基-[B (SA或Choi) Ii1V1Ign3-NH2,其中叫、n2和n3各自独立地为1-200，其中 B (SA 或 Chol)表示选自 VPGXG、PGXGV, GXGVP, XGVPG、和 GVPGX 的一种，其中 V为缬氨酸，P为脯氨酸，G为甘氨酸，和X为具有与硬脂酰基或胆留醇基部分偶联的侧链氨基的赖氨酸、精氨酸或组氨酸，其中V1表示选自VPGXG、PGXGV、GXGVP、XGVPGJP GVPGX的一种，其中V为缬氨酸，P为脯氨酸，G为甘氨酸，和X为除脯氨酸外的任何天然或非天然氨基酸，和当Ii1为2或更大时，各位置的B彼此相同或不同，和当n2为2或更大时，各位置的V1彼此相同或不同。
10.权利要求9的SLN，其中卵磷脂、由三癸酸甘油酯和三月桂酸甘油酯组成的甘油三酯、与胆甾醇油酸酯的摩尔比为约2-约5:约0.1-约3:约0-约1，偶联至疏水部分的ELP为卵磷脂的约0.01-约50重量％，且甘油三癸酸酯和甘油三月桂酸酯的摩尔比为约1:约0.25-约 4。
11.用于将活性剂递送到受试者中的靶部位的药物组合物，所述组合物包括: 可药用载体或稀释剂；和 包含所述活性剂的权利要求1-10中任一项的SLN， 其中所述活性剂为生理活性剂、药物活性剂、磁力活性剂、显像剂、或其组合。
12.将活性剂递送到受试者中的靶部位的方法，所述方法包括: 向受试者施用包含所述活性剂的权利要求1-10中任一项的SLN ;和 加热所述受试者的靶部位以在所述靶部位使所述活性剂从所述SLN释放， 其中所述活性剂为生理活性剂、药物活性剂、磁力活性剂、显像剂、或其组合。
13.权利要求12的方法，其中加热所述靶部位为加热至在约39°C-约45°C的范围内的温度。
14.权利要求1-10中任一项的SLN在制备用于将活性剂递送到受试者中的靶部位的制剂中的用途。
15.权利要求14的用途，其中通过加热受试者的靶部位，SLN在靶 部位释放活性剂。
全文摘要
本发明提供固体脂质纳米粒(SLN)、含其的药物组合物、及其用途。所述固体脂质纳米粒(SLN)包括偶联至一个或多个疏水部分的弹性蛋白样多肽(ELP)；和脂质分子，其中所述疏水部分为饱和或不饱和的烃基、饱和或不饱和的酰基、饱和或不饱和的烃氧基、或者其中R1和R2独立地为饱和或不饱和的烃基的具有式-C(O)N(R1)(R2)的取代酰胺基，所述脂质分子为中性脂质分子、两亲脂质分子、或其组合，和所述ELP包括选自如下的至少一个重复单元VPGXG、PGXGV、GXGVP、XGVPG、GVPGX、及其组合，其中V为缬氨酸，P为脯氨酸，G为甘氨酸，和X为除脯氨酸外的任何氨基酸。
文档编号A61K9/51GK103239423SQ20131004134
公开日2013年8月14日 申请日期2013年2月1日 优先权日2012年2月1日
发明者朴宣玟, 金泫伶, 朴在钻, 蔡洙荣 申请人:三星电子株式会社