一种银杏药用提取物高效生产方法
【专利摘要】本发明涉及一种银杏药用提取物高效生产方法，包括酶解、提取、分离、干燥四个步骤，其中酶解步骤采用细胞壁溶解酶法，提取步骤采用柱层析循环提取法，分离步骤采用大孔树脂吸附法，干燥步骤采用喷雾干燥法。本发明的优点是：对银杏叶碾碎酶解，提高溶剂溶解率，提取率提高10%以上；提取过程中流出液循环再利用，节约溶剂用量；提取和分离步骤能通过多条层析柱组合成连续自动的生产线，不间断的获取提取物，形成循环流水线式生产，特别适合大规模工业生产；采用喷雾干燥法，不需要再对提取物进行粉碎，优化工艺步骤；所有步骤在常温下进行，无需加热，节约能源，节约生产成本40%以上。
【专利说明】一种银杏药用提取物高效生产方法
【技术领域】
[0001]本发明属于植物成分提取领域，具体涉及银杏药用成分银杏内酯、黄酮苷的生产方法。
【背景技术】
[0002]银杏内酯化合物是仅发现在银杏叶中一类具有特殊结构及显著药理活性的重要成分，银杏内酯对血小板活化因子(PAF)受体有强大的特异性抑制作用，PAF是血小板和多种炎症组织分泌产生的一种内源性磷脂，是迄今发现的最有效的血小板聚集诱导剂，与许多疾病的产生、发展密切相关，银杏内酯目前被认为是最有临床应用前景的天然PAF受体拮抗剂。
[0003]银杏黄酮主要的活性成分主要是槲皮素、异鼠李素和山奈酚，这三种化合物是治疗心脑血管系统疾病的有效成分,它能够增加脑血管流量,改善脑血管循环功能,保护脑细胞，扩张冠状动脉，防止心绞痛及心肌梗塞，阻止血栓形成，提高机体免疫能力，对冠心病、心绞痛、脑动脉硬化、老年性痴呆、高血压病人均十分有益。
[0004]随着中药质量标准的日益完善以及对银杏叶中药用成分研究日益增多，对银杏内酯和黄酮类化合物的需求越来越大，研究高效节能银杏内酯和黄酮苷提取、生产方法具有重要的意义。
[0005]目前对于银杏内酯、黄酮苷提取和生产方法的技术很多，但普遍存在如下不足:需要加热和离心处理，能耗高；提取溶剂只进行一次提取，没有综合利用，造成资源浪费；提取工艺过程复杂，提取效率低下，生产成本高，不适合大规模工业化生产。
[0006]其中赵守明等在CN102293791B专利公开了一种提取银杏叶有效成分的生产方法，提到了采用先酶解后乙醇回流提取的方法，能使黄酮含量大大提高，但需要加热提取耗能高，乙醇没有循环提取，溶剂消耗大。为了克服现有技术缺点，本发明提供了一种能有效获得高质量银杏叶提取物，且溶剂用量少、能耗低、提取率高、经济简单的生产工艺方法。
【发明内容】
[0007]本发明的目的在于提供一种银杏内酯、黄酮苷等银杏药用提取物高效节能生产方法。
[0008]本发明提供的技术方案是:一种银杏药用提取物高效生产方法，其步骤是:
(1)将干燥的银杏叶粉碎至50-80目；
(2)加入银杏叶重量0.1-0.15%的纤维素酶和银杏叶重量4-5倍的水在室温下浸泡2-3小时，使银杏叶细胞壁充分酶解；
(3)过滤除去酶解液，加入银杏叶重量4-8倍的65%乙醇，室温下浸泡6-12小时，使银杏叶充分吸胀；
(4)将充分吸胀的银杏叶转入层析柱或类似容器中，柱高约柱直径的6倍；室温下，用柱层析洗脱的方法将银杏内酯、黄酮苷从银杏叶中洗脱出来；(5)分别用银杏叶重量5-8倍的65%乙醇进行三次洗脱，洗脱流速为2-4BV/h;收集每次洗脱液，第一次得到洗脱液1，第二次得到洗脱液2，第三次得到洗脱液3 ;洗脱液2用于下一批次完成酶解步骤的银杏叶吸胀，洗脱液3用于下一批次提取步骤银杏叶的洗脱，反复上述循环；
(6)将上述步骤收集到的洗脱液I用大孔吸附树脂分离；
(7)用水、不同浓度的乙醇洗脱，收集各阶段洗脱液；
(8)将所收集的洗脱液进行真空浓缩，喷雾干燥，制得银杏内酯、黄酮苷的粉状固体；用液相色谱法跟踪检测银杏内酯、黄酮苷含量，得到提取物中银杏内酯含量>7%，黄酮苷含量^ 28%，满足2010版药典对银杏提取物药用成分的要求。
[0009]本发明与现有技术相比有如下优点:
(1)提取过程中流出液循环再利用，能节约溶剂用量近50%，提取率提高10%以上；
(2)提取和分离步骤能通过多条层析柱组合成连续自动的生产线，不间断的获取提取物，形成循环流水线式生产，特别适合大规模工业生产，生产效率大大增加；
(3)上述所有步骤在室温下进行，无需加热，节约能源，节约生产成本40%以上。
【专利附图】
【附图说明】
[0010]图1为本发明的工艺流程图。
【具体实施方式】
[0011]如本发明的工艺流程图所示，【具体实施方式】如下。
[0012]实施例1
(1)将干燥的银杏叶100kg粉碎至50目放入提取罐，加入400 kg的水和0.1kg的纤维素酶，在室温浸泡2小时，使银杏叶细胞壁充分酶解；
(2)过滤除去酶解液，加入400kg65%乙醇在室温下浸泡6小时，使银杏叶充分吸胀；
(3)将充分吸胀的银杏叶转入层析柱中，柱高是柱直径的6倍；室温下用柱层析洗脱的方法将银杏内酯、黄酮苷从银杏叶中洗脱出来；
(4)分别用500kg的65%乙醇进行三次洗脱(相当于银杏叶干重15倍的65%乙醇进行洗脱)，洗脱流速为2BV/h ;收集每次洗脱液，第一次得到银杏内酯、黄酮苷含量较高的洗脱液1，第二次得到银杏内酯、黄酮苷含量较低的洗脱液2，第三次得到银杏内酯、黄酮苷含量很低的洗脱液3 ;洗脱液2用于下一批次完成酶解步骤的银杏叶吸胀，洗脱液3用于下一批次提取步骤银杏叶的洗脱，通过多条层析柱组合成连续自动的生产线，不间断的获取提取物，形成循环流水线式生产；
(5)分别用水、10%、30%、50%、70%乙醇洗脱相洗脱，弃去水和10%洗脱液，收集后续三阶段洗脱液；
(6)将所收集的后续三阶段洗脱液进行真空浓缩，喷雾干燥，用液相色谱法跟踪检测，制得含7.33%银杏内酯、28.24%黄酮苷粉状固体提取物3.01 kg。
[0013]实施例2
如实施例1所述的银杏药用提取物高效生产方法，其步骤如下:
(I)将干燥的银杏叶100 kg粉碎至65目放入提取罐，加入500 kg的水和0.15kg的纤维素酶，在室温浸泡3小时，使银杏叶细胞壁充分酶解；
(2)过滤除去酶解液，加入600kg65%乙醇在室温下浸泡8小时，使银杏叶充分吸胀；
(3)将充分吸胀的银杏叶转入层析柱中，柱高是柱直径的6倍；室温下用柱层析洗脱的方法将银杏内酯、黄酮苷从银杏叶中洗脱出来；
(4)分别用600kg的65%乙醇进行三次洗脱(相当于银杏叶干重18倍的65%乙醇进行洗脱)，洗脱流速为4BV/h ;收集每次洗脱液，第一次得到银杏内酯、黄酮苷含量较高的洗脱液1，第二次得到银杏内酯、黄酮苷含量较低的洗脱液2，第三次得到银杏内酯、黄酮苷含量很低的洗脱液3 ;洗脱液2用于下一批次完成酶解步骤的银杏叶吸胀，洗脱液3用于下一批次提取步骤银杏叶的洗脱，通过多条层析柱组合成连续自动的生产线，不间断的获取提取物，形成循环流水线式生产；
(5)分别用水、10%、30%、50%、70%乙醇洗脱相洗脱，弃去水和10%洗脱液，收集后续三阶段洗脱液；
(6)将所收集的后续三阶段洗脱液进行真空浓缩，喷雾干燥，用液相色谱法跟踪检测，制得含7.43%银杏内酯、28.42%黄酮苷粉状固体提取物3.11 kg。
[0014]实施例3
如实施例1所述的银杏药用提取物高效生产方法，其步骤如下:
(1)将干燥的银杏叶100kg粉碎至65目放入提取罐，加入500 kg的水和0.15kg的纤维素酶，在室温浸泡2.5小时，使银杏叶细胞壁充分酶解；
(2)过滤除去酶解液，加入700kg65%乙醇在室温下浸泡10小时，使银杏叶充分吸胀；
(3)将充分吸胀的银杏叶转入层析柱中，柱高是柱直径的6倍；室温下用柱层析洗脱的方法将银杏内酯、黄酮苷从银杏叶中洗脱出来；
(4)分别用700kg的65%乙醇进行三次洗脱(相当于银杏叶干重21倍的65%乙醇进行洗脱)，洗脱流速为4BV/h ;收集每次洗脱液，第一次得到银杏内酯、黄酮苷含量较高的洗脱液1，第二次得到银杏内酯、黄酮苷含量较低的洗脱液2，第三次得到银杏内酯、黄酮苷含量很低的洗脱液3 ;洗脱液2用于下一批次完成酶解步骤的银杏叶吸胀，洗脱液3用于下一批次提取步骤银杏叶的洗脱，通过多条层析柱组合成连续自动的生产线，不间断的获取提取物，形成循环流水线式生产；
(5)分别用水、10%、30%、50%、70%乙醇洗脱相洗脱，弃去水和10%洗脱液，收集后续三阶段洗脱液；
(6)将所收集的后续三阶段洗脱液进行真空浓缩，喷雾干燥，用液相色谱法跟踪检测，制得含7.22%银杏内酯、28.15%黄酮苷粉状固体提取物2.98 kg。
[0015]实施例4
如实施例1所述的银杏药用提取物高效生产方法，其步骤如下:
(1)将干燥的银杏叶100kg粉碎至80目放入提取罐，加入400 kg的水和0.15kg的纤维素酶，在室温浸泡3小时，使银杏叶细胞壁充分酶解；
(2)过滤除去酶解液，加入600kg65%乙醇在室温下浸泡8小时，使银杏叶充分吸胀；
(3)将充分吸胀的银杏叶转入层析柱中，柱高是柱直径的6倍；室温下用柱层析洗脱的方法将银杏内酯、黄酮苷从银杏叶中洗脱出来；
(4)分别用800kg的65%乙醇进行三次洗脱(相当于银杏叶干重24倍的65%乙醇进行洗脱)，洗脱流速为4BV/h ;收集每次洗脱液，第一次得到银杏内酯、黄酮苷含量较高的洗脱液1，第二次得到银杏内酯、黄酮苷含量较低的洗脱液2，第三次得到银杏内酯、黄酮苷含量很低的洗脱液3 ;洗脱液2用于下一批次完成酶解步骤的银杏叶吸胀，洗脱液3用于下一批次提取步骤银杏叶的洗脱，通过多条层析柱组合成连续自动的生产线，不间断的获取提取物，形成循环流水线式生产；
(5)分别用水、10%、30%、50%、70%乙醇洗脱相洗脱，弃去水和10%洗脱液，收集后续三阶段洗脱液； (6)将所收集的后续三阶段洗脱液进行真空浓缩，喷雾干燥，用液相色谱法跟踪检测，制得含7.35%银杏内酯、28.13%黄酮苷粉状固体提取物2.95 kg。
【权利要求】
1.一种银杏药用提取物高效生产方法，其步骤是: (1)将干燥的银杏叶粉碎至50-80目； (2)加入银杏叶重量0.1-0.15%的纤维素酶和银杏叶重量4-5倍的水在室温下浸泡2-3小时，使银杏叶细胞壁充分酶解； (3)过滤除去酶解液，加入银杏叶重量4-8倍的65%乙醇，室温下浸泡6-12小时，使银杏叶充分吸胀； (4)将充分吸胀的银杏叶转入层析柱或类似容器中，柱高约柱直径的6倍；室温下，用柱层析洗脱的方法将银杏内酯、黄酮苷从银杏叶中洗脱出来； (5)分别用银杏叶重量5-8倍的65%乙醇进行三次洗脱，洗脱流速为2-4BV/h;收集每次洗脱液，第一次得到洗脱液1，第二次得到洗脱液2，第三次得到洗脱液3 ;洗脱液2用于下一批次完成酶解步骤的银杏叶吸胀，洗脱液3用于下一批次提取步骤银杏叶的洗脱，反复上述循环； (6)将上述步骤收集到的洗脱液I用大孔吸附树脂分离； (7)用水、不同浓度的乙醇洗脱，收集各阶段洗脱液； (8)将所收集的洗脱液进行真空浓缩，喷雾干燥，制得银杏内酯、黄酮苷的粉状固体；用液相色谱法跟踪检测银杏内酯、黄酮苷含量，得到提取物中银杏内酯含量>7%，黄酮苷含量^ 28%ο
【文档编号】A61K127/00GK103638071SQ201310715927
【公开日】2014年3月19日 申请日期:2013年12月23日 优先权日:2013年12月23日
【发明者】刘小文, 何福林, 李治章, 王宗成, 刘婷, 姜红宇, 吕宏再, 张敏, 张存根, 王峥, 陈小明, 陈修文 申请人:湖南科技学院, 湖南恒伟药业股份有限公司