含抗Ang-2 抗体的稳定化制剂的制作方法
【专利摘要】本发明提供包含特异结合血管生成素2(Ang-2)的抗体的药物制剂。除了抗Ang-2抗体以外，所述制剂还可含有至少一种氨基酸、至少一种糖或至少一种非离子型表面活性剂。本发明的药物制剂在储存数个月之后以及在历经热应力以及其它物理性应力之后表现相当高程度的抗体稳定性。
【专利说明】含抗Ang-2抗体的稳定化制剂
【技术领域】
[0001]本发明是有关于治疗性抗体制剂的领域。更具体而言，本发明是有关于包含特异结合至血管生成素-2 (Ang-2)的抗体的药物制剂。
[0002]序列表
[0003]依据37C.F.R§ 1.821 (e)随本说明书同时一起申请的是序列表的ST.25兼容性计算机可读取文字文件。文字文件的内容在此并入做为参考文件。序列表的纸本复印本系依据37C.F.R § 1.821 (f)与ST.25兼容性计算机可读取文字文件的内容完全相同，其包括作为本说明的一部分且在此并入做为参考文件。
【背景技术】
[0004]血管新生是新血管形成的一个生物过程。异常的血管新生与数种疾病病况有关，该等疾病病况包括，例如增生性视网膜病变、类风湿性关节炎以及牛皮癣。此外，已证实血管新生对于肿瘤生长与维持至关重要。血管生成素-2 (Ang-2)是Tie-2受体(Tie_2)的配体且已显示在血管新生中发挥作用。Ang-2在本领域中亦称为Tie-2配体(US 5，643，755 ；Yancopoulos 等人，2000, Nature407:242-248)。
[0005]结合至Ang-2的抗体与其它肽抑制剂在一定程度上描述于例如US 6，166，185 ；7，521，053 -J, 205，275 ；2006/0018909及2006/0246071中。在本领域中需要能够用来治疗由血管新生所致或因为血管新生而恶化的疾病与病况的新颖Ang-2调节剂(包括Ang-2抗体)。
[0006] 治疗性抗体必须以不仅使抗体适于投与给患者的方式，还要以在储存以及后续使用期间维持其稳定性的方式来调配。举例而言，例如除非适当地调配溶液，否则液体溶液中的治疗性抗体倾向于分解、团聚或非所欲的化学修饰。抗体在液体制剂中的稳定性不仅取决于制剂中所使用的赋形剂种类，还有赋形剂相对于彼此的数量和比例。此外，除了稳定性以外，在制备液体抗体制剂时必须纳入其它考虑。此等其它考虑的实例包括液体的黏度与特定制剂所能包含的抗体浓度，以及制剂的视觉质量或诉求。因此，在调配治疗性抗体时，必须非常小心以使得制剂维持稳定、含有适当浓度的抗体，以及具有适当黏度与使制剂方便投与给患者的其它特性。
[0007]针对血管生成素-2蛋白质(Ang-2)的抗体是需要适当调配的治疗相关大分子的一个实例。尽管已知一些抗Ang-2抗体，但在本领域中对于含有足够稳定且适于投与给患者的抗Ang-2抗体的新颖药物制剂仍存在有需要。
[0008]发明概述
[0009]本发明藉由提供含有特异结合至人血管生成素-2 (Ang-2)的人抗体的药物制剂来满足上述需求。
[0010]在一个方面中，提供一种液体药物制剂，其包含:(i)特异结合至血管生成素-2 (Ang-2)的抗体；(ii)缓冲剂；(iii)有机共溶剂；以及(iv)稳定剂。
[0011]在一个实施方案中，以约5±0.75mg/mL至约150±22.5mg/mL的浓度提供抗体。在另一个实施方案中，以约5mg/ml±0.75mg/mL的浓度提供抗体。在另一个实施方案中，以约25mg/mL±3.75mg/mL的浓度提供抗体。在另一个实施方案中，以约50mg/mL±7.5mg/mL的浓度提供抗体。
[0012]在一些实施方案中，本发明的例示性抗Ang-2抗体以及Ang_2抗原结合片段包含HCDRl、HCDR2、HCDR3、LCDRl、LCDR2及LCDR3结构域，各自选自由下列组成的组:(i) SEQID N0:4、6、8、12、14 及 16(例如，HIH685) ; (ii)SEQ ID NO: 28、30、32、36、38 及 40 (例如，HIH690) ； (iii)SEQ ID N0:52、54、56、60、62及64(例如，HIH691) ； (iv) SEQ ID NO: 148,150,152、156、158 及 160(例如，HIH696) ； (v) SEQ ID NO: 196、198、200、204、206 及 208 (例如，H1H706) ; (vi) SEQ ID NO: 268、270、272、276、278 及 280 (例如，H1M724);以及(vii)SEQ IDNO: 436、438、440、444、446 及 448 (例如，H2M744)。
[0013]在相关实施方案中，本发明包含特异结合Ang-2的抗Ang_2抗体或抗体的抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段包含选自由下列SEQ ID NO所组成的组的重链与轻链可变域序列中所含的重链与轻链⑶R域(亦即⑶R1、⑶R2与⑶R3):SEQ ID N0:2/10、18/20、22/24、26/34、42/44、46/48、50/58、66/68、70/72、74/82、90/92、94/96、98/106、114/116、118/120、122/130、138/140、142/144、146/154、162/164、166/168、170/178、186/188、190/192、194/202、210/212、214/216、218/226、234/236、238/240、242/250、258/260、262/264、266/274、282/284、286/288、290/298、306/308、310/312、314/322、330/332、334/336、338/346、354/356、358/360、362/370、378/380、382/384、386/394、402/404、406/408、410 /418、426/428、430/432、434/442、450/452、454/456、458/466、474/476、478/480、482/490、498/500，及502/504。在一个实施方案中，该抗体或其片段包含选自由下列SEQ ID NO的组的氨基酸序列对的HCVR与LCVR中所含的CDR序列:SEQ IDNO:18/20、42/44、66/68、162/164、210/212、266/274，及 434/442。
[0014]在一个实施方案中，液体制剂的pH为约ρΗ6.0±0.5、ρΗ6.0±0.4、ρΗ6.0±0.3、ρΗ6.0±0.2、ρΗ6.0±0.1、ρΗ6.0±0.05、ρΗ6.0±0.01 或 ρΗ6.0。在一个特定实施方案中，液体制剂的pH为约ρΗ6.0±0.3。在一个实施方案中，液体药物缓冲剂具有一种或多种缓冲剂，其(等)具有约ΡΗ5.5至约ρΗ7.4的有效缓冲范围，或pKa为约6.0。
[0015]在一个实施方案中，缓冲剂为组氨酸。在一个实施方案中，组氨酸浓度为5mM±0.75mM至50mM±7.5mM。在一个实施方案中，组氨酸浓度为5mM±0.75mM或约5mM。在一个实施方案中，组氨酸浓度为10mM±l.5mM或约10mM。在一个实施方案中，组氨酸浓度为15mM±2.25mM或约15mM。在一个实施方案中，组氨酸浓度为20mM±3mM或约20mM。在一个实施方案中，组氨酸浓度为25mM±3.75mM或约25mM。在一个实施方案中，组氨酸浓度为30mM±4.5mM或约30mM。在一个实施方案中，组氨酸浓度为35mM± 5.25mM或约35mM。在一个实施方案中，组氨酸浓度为40mM±6mM或约40mM。在一个实施方案中，组氨酸浓度为45mM±6.75mM或约45mM。在一个实施方案中，组氨酸浓度为50mM±7.5mM或约50mM。
[0016]在一个实施方案中，有机共溶剂为含有聚氧乙烯部分的非离子型聚合物。在一些实施方案中，有机共溶剂为聚山梨醇酯20、帕洛沙姆188及聚乙二醇3350中的任一者或多者。在一个特定实施方案中，有机共溶剂为聚山梨醇酯20。
[0017]在一个实施方案中，有机共溶剂浓度为约0.005% ±0.00075%至约1% ±0.15%“重量对体积”或“w/v”,其中，例如0.lg/ml = 10%而0.01g/ml = 1%0在一个实施方案中，有机共溶剂为聚山梨醇酯20，其浓度为约0.2% ±0.03% w/v。在另一个实施方案中，有机共溶剂为聚山梨醇酯20，其浓度为0.01% ±0.0015% w/v或约0.01% w/v。
[0018]在一个实施方案中,稳定剂为糖。在一个实施方案中，糖是选自于由鹿糖、甘露糖醇以及海藻糖组成的组。在一个特定实施方案中，稳定剂为蔗糖。
[0019]在一个实施方案中，稳定剂浓度为I % ±0.15% w/v至20% ±3% w/v。在一个特定实施方案中，稳定剂为浓度5% ±0.75% w/v或约5% w/v的蔗糖。在另一个特定实施方案中，稳定剂为浓度7.5% ±1.125% w/v或约7.5% w/v的蔗糖。在另一个特定实施方案中，稳定剂为浓度10% ±1.5% w/v或约1.5% w/v的蔗糖。在另一个特定实施方案中，稳定剂为浓度12.5% ±1.875% w/v或约12.5% w/v的蔗糖。在另一个特定实施方案中，稳定剂为浓度15% ±2.25% w/v或约15% w/v的蔗糖。在另一个特定实施方案中，稳定剂为浓度20% ±3% w/v或约20% w/v的鹿糖 。
[0020]在一个实施方案中，制剂的黏度为约I厘泊(cPoise)至约10厘泊。在一个实施方案中，制剂的黏度为1.4厘泊±0.21厘泊，或约1.4厘泊。
[0021]在一个实施方案中，制剂的渗透性在生理范围内。在一个实施方案中，制剂具有约300毫渗透性摩耳/kg(mOsm)至约400m0sm的渗透性。在一个实施方案中，制剂的渗透性为363m0sm±54m0sm 或约 363m0sm。
[0022]在一个实施方案中，至少96%于_80°C储存6个月后由该液体药物制剂回收的抗Ang-2抗体是非团聚且未分解的，如藉由大小排阻层析所测定。在一个实施方案中，至少55%于-80°C储存6个月后由该液体药物制剂回收的抗Ang-2抗体是非碱性及非酸性形式(亦即，主峰或主要电荷形式或“区2峰”)，如藉由离子交换层析所测定。
[0023]在一个实施方案中，至少96%于_30°C储存6个月后由该液体药物制剂回收的抗Ang-2抗体是非团聚且未分解的，如藉由大小排阻层析所测定。在一个实施方案中，至少55%于-30°C储存6个月后由该液体药物制剂回收的抗Ang-2抗体是主要电荷形式，如藉由离子交换层析所测定。
[0024]在一个实施方案中，至少96%于_20°C储存6个月后由该液体药物制剂回收的抗Ang-2抗体是非团聚且未分解的，如藉由大小排阻层析所测定。在一个实施方案中，至少55%于-20°C储存6个月后由该液体药物制剂回收的抗Ang-2抗体是主要电荷形式，如藉由离子交换层析所测定。
[0025]在一个实施方案中，至少96%于5°C储存9个月后由该液体药物制剂回收的抗Ang-2抗体是非团聚且未分解的形式，如藉由大小排阻层析所测定。在一个实施方案中，至少56%于5°C储存9个月后由该液体药物制剂回收的抗Ang-2抗体是主要电荷形式，如藉由离子交换层析所测定。
[0026]在一个实施方案中，至少98%于25°C储存3个月后由该液体药物制剂回收的抗Ang-2抗体是非团聚且未分解的形式，如藉由大小排阻层析所测定。在一个实施方案中，至少54%于25 °C储存3个月后由该液体药物制剂回收的抗Ang-2抗体是主要电荷形式，如藉由离子交换层析所测定。
[0027]在一个实施方案中，至少97%于37°C储存I个月后由该液体药物制剂回收的抗Ang-2抗体是非团聚且未分解的形式，如藉由大小排阻层析所测定。在一个实施方案中，至少47%于37°C储存I个月后由该液体药物制剂回收的抗Ang-2抗体是主要电荷形式，如藉由离子交换层析所测定。
[0028]在一个实施方案中，至少95%于45 °C储存28天后由该液体药物制剂回收的抗Ang-2抗体是非团聚且未分解的形式，如藉由大小排阻层析所测定。在一个实施方案中，至少32%于45°C储存28天后由该液体药物制剂回收的抗Ang-2抗体是主要电荷形式，如藉由离子交换层析所测定。
[0029]在一个方面中，提供一种液体药物制剂，其包含:(i)5±0.75mg/ml至150±22.5mg/ml 特异结合至人 Ang-2 的人抗体；(ii)5mM±0.75mM 至 50mM±7.5mM 组氨酸；005 % ±.000075 % 至 I % ±0.15% (w/v)聚山梨醇酯 20 ；以及(iv) I %±0.15%至20% ±3% (w/v)鹿糖，pH为约5.5至约6.5。此方面的抗Ang2抗体含有重链可变区(HCVR)以及轻链可变区(LCVR)，以使得HCVR/LCVR组合含有重链与轻链互补决定区(HCDR1-HCDR2-HCDR3/LCDR1-LCDR2-LCDR3)，其分别具有 SEQ ID N0:4-6_8/SEQ IDNO: 12-14-16的氨基酸序列。在一个特定实施方案中，抗Ang-2抗体含有重链可变区(HCVR)以及轻链可变区(LCVR)，其分别具有SEQ ID N0:18与SEQ ID NO: 20的氨基酸序列(美国公开专利案申请号:20110027286的抗体HIH685P，其特别以其整体并入本文做为参考文件)。
[0030]在另一个实施方案中，液体制剂包含⑴50±7.5mg/mL的HIH685P ；
(ii)10±l.5mM 组氨酸；(iii)0.2% ±0.03% (w/v)聚山梨醇酯 20 ;及(iv)10% ±1.5%(w/v)鹿糖，pH 为 6.0±0.5。
[0031]在本方面的一个实施方案中，液体制剂含有⑴25±3.75mg/mL的Η1Ν685Ρ ;
(ii)10±l .5mM 组氨酸；(iii)0.2% ±0.03% (w/v)聚山梨醇酯 20;及(iv)10% ±1.5%(w/v)蔗糖，pH为6.0±0.5。在此特定制剂的一个实施方案中，制剂于45°C储存28天后，≥95%的抗体为天然的且> 32%的抗体为主要电荷形式。在此特定制剂的一个实施方案中，制剂于37°C储存I个月后，≥ 97%的抗体为天然的且≥47%的抗体为主要电荷形式。在此特定制剂的一个实施方案中，制剂于25°C储存3个月后，≥ 98%的抗体为天然的且≥ 54%的抗体为主要电荷形式。在此特定制剂的一个实施方案中，制剂于5°C储存9个月后，≥ 96%的抗体为天然的且≥56%的抗体为主要电荷形式。在此特定制剂的一个实施方案中，制剂于_20°C储存3个月后，≥9%的抗体为天然的且≥55%的抗体为主要电荷形式。在此特定制剂的一个实施方案中，制剂于_30°C储存6个月后，> 96%的抗体为天然的且≥ 55%的抗体为主要电荷形式。在此特定制剂的一个实施方案中，制剂于_80°C储存6个月后，≥96%的抗体为天然的且≥55%的抗体为主要电荷形式。
[0032]在一个方面中，在容器中提供任一前述方面的液体药物制剂。在一个实施方案中，容器为聚碳酸酯小瓶。在另一个实施方案中，容器为玻璃小瓶。在一个实施方案中，玻璃小瓶为第I型硼硅酸玻璃小瓶，具有涂覆氟碳化物的丁基橡胶瓶塞。在另一个实施方案中，容器为微输注器。在另一个实施方案中，容器为注射器。在一个特定实施方案中，注射器含有一个涂覆氟碳化物的塞盖。在一个特定实施方案中，注射器为ImL长玻璃注射器,含有少于约500ppb钨的27-G针头、涂覆氟碳化物的丁基橡胶瓶塞，以及无乳胶、非细胞毒性橡胶顶盖。在一个更特定的实施方案中，注射器为NUOVA OMPI ImL长玻璃注射器，配有27-G薄壁针头、涂覆FLUROTEC的4023/50橡胶瓶塞，以及FM27橡胶顶盖。在另一个更特定的实施方案中，注射器为ImL或3mL塑料注射器，装有27-G针头。在一个更特定的实施方案中，塑料注射器是由BECTON DICKINSON所分发。在一个实施方案中，容器为聚氯乙烯IV袋。在另一个实施方案中，容器为聚烯烃IV袋。
[0033]在一个方面中，提供一种含有下列的药物制剂:(a) 50mg/mL±7.5mg/mL的抗Ang-2 抗体、(b) 10mM±l.5mM 组氨酸，ρΗ6.0±0.5、(c)0.2% w/v±0.03%聚山梨醇酯 20，及(d)10% w/v±l.5%蔗糖，其中(a)该抗体含有 SEQ ID NO: 18 的 HCVD 以及 SEQ ID NO:20的LCVD、(b)制剂中超过96%的抗体具有150.9kDa±lkDa的分子量、(c)制剂中至少53%的抗体具有约8.13±0.01的等电点、(d)制剂中约90%至约92%的抗体是岩藻糖基化的，及(e)约2.5%抗体的重链缺少C端赖氨酸。
[0034]在一个实施方案中，提供由下列组成的药物制剂:(a) 50mg/mL±7.5mg/mL的抗Ang-2 抗体、(b) 10mM±l.5mM组氨酸，ρΗ6.0±0.5、(c)0.2% w/v±0.03%聚山梨醇酯 20，及(d)10% w/v±l.5%蔗糖，其中(a)该抗体含有 SEQ ID NO: 18 的 HCVD 以及 SEQ ID NO:20的LCVD、(b)制剂中超过96%的抗体具有150.9kDa±lkDa的分子量、(c)制剂中至少53%的抗体具有约8.13±0.01的等电点、(d)制剂中约90%至约92%的抗体是岩藻糖基化的，及(e)约2.5%抗体的重链缺少C端赖氨酸。
[0035]在一个方面中，提供一种含有下列的药物制剂:(a) 25±3.75mg/mL的抗Ang-2抗体、(b) 10±1.5mM组氨酸，ρΗ6.0±0.5、(c)0.2% w/v±0.03%聚山梨醇酯 20，及(d) 10% w/v±l.5% )蔗糖，其中(a)该抗体含有 SEQ ID NO: 18 的 HCVD 以及 SEQ ID NO:20 的 LCVD、
(b)制剂中超过96%的抗体具有150.9kDa±lkDa的分子量、(c)制剂中至少53%的抗体具有约8.13±0.01的等电点、(d)制剂中约90%至约92%的抗体是岩藻糖基化的，及(e)约
2.5%抗体的重链缺少C端赖氨酸。
[0036]在一个实施方案中，提供由下列组成的药物制剂:(a) 25mg/mL±3.75mg/mL的抗Ang-2 抗体、(b) 10mM± 1.5mM 组氨酸，pH6±0.5、(c)0.2% w/v±0.03%聚山梨醇酯 20,及
(d)10% w/v±l.5%蔗糖，其中(a)该抗体含有 SEQ ID NO: 18 的 HCVD 以及 SEQ ID NO:20的LCVD、(b)制剂中超过96%的抗体具有150.9kDa±lkDa的分子量、(c)制剂中至少53%的抗体具有约8.13±0.01的等电点、(d)制剂中约90%至约92%的抗体是岩藻糖基化的，及(e)约2.5%抗体的重链缺少C端赖氨酸。
[0037]在一个方面中，提供了试剂盒，其含有前述方面中任一者的药物组合物、容器以及使用说明书。在一个实施方案中，容器为预充填注射器。在一个特定实施方案中，容器为硼硅酸小瓶，配有涂覆FLUROTEC的4023/50的橡胶瓶塞。
[0038]本发明的其它实施方案将透过参阅此后的详细说明而清楚明了。
[0039]详细说明
[0040]在说明本发明前，应了解，本发明不受限于所述的特定方法及实验条件，因为该等方法以及条件是可能改变的。亦应了解，本文所用术语仅是供说明特定实施方案之用，而不意欲为限制性的，因为本发明的范围将仅受到随附的权利要求所囿限。
[0041]除非另有定义，否则本文所用全部技术与科学术语和本发明所属领域中普通技术人员一般所理解的意思相同。如本文所用，术语“约”，当提及特定引用的数值或数值范围时，表示该数值可相对于引用的数值改变不超过2%。例如，如本文所用，表述“约100”包括98 与 102，以及其间的所有数值(例如 98.0,98.01,98.02,98.03,98.04…101.96,101.97、101.98,101.99,102.00)。
[0042]尽管任何与本文所述方法和材料类似或等效者可用于实施或测试本发明，现将说明较佳方法与材料。本文提及的全部公开文献以其全文并入本文做为参考文件来说明。
[0043]药物制剂
[0044]如本文所用，表述“药物制剂”意指至少一种活性成分(例如，小分子、大分子、化合物等，其能够在人类或非人类动物体内展现生物效用)以及至少一种非活性成分(其与活性成分或一种或多种其它非活性成分组合时，适于治疗性投药给人类或非人类动物)的组合。除非另有指明，否则如本文所用的术语“制剂”表示“药物制剂”。本发明提供包含至少一种治疗性多肽的药物制剂。依据本发明的某些实施方案，该治疗性多肽为抗体或其抗原结合片段，其特异结合至人血管生成素-2 (Ang-2)蛋白质。更具体而言，本发明包括含有下列的药物制剂:(i)特异结合至人Ang-2的人抗体；(ii)组氨酸缓冲剂；(iii)为非离子型表面活性剂的有机共溶剂；以及(iv)为碳水化合物的热稳定剂。本发明所包括的特定例示性组分与制剂详述于下文。
[0045]特异结合至Ang-2的抗体
[0046]本发明的药物制剂可包含人抗体或其抗原结合片段，其特异结合至人Ang-2。如本文所用，术语“Ang-2”表示人血管生成素-2，其通常已知为Tie2活化的自体分泌拮抗剂。Ang-2在本领域中通常已知会“引发”血管内皮层接受细胞因子的作用。Ang-2在肿瘤血管中强烈表达，且通常被认为与其它细胞因子(亦即血管内皮生长因子)协同作用以促使血管新生和肿瘤进展。一个例示性人Ang-2氨基酸序列描述于SEQ ID NO: 518中。针对人Ang-2的抗体描述于专利申请公开案US 2010/0166768、US 2011/0065902、WO2010/077854及US 2011/0027286中，其并入本文做为参考文件。
[0047]术语“抗体 ”，如本文所用，通常欲意指免疫球蛋白分子，其含有4个多肽链:藉由二硫键交互连结的2个重⑶链以及2个轻(L)链，及其多聚体(例如IgM);然而，仅由重链所构成的免疫球蛋白分子(亦即缺乏轻链)亦含括在术语“抗体”的定义内。各个重链含有重链可变区(此处缩写为HCVR或Vh)以及重链恒定区。重链恒定区含有3个结构域，为CH1、CH2以及CH3。各个轻链含有轻链可变区(此处缩写为LCVR或Vj以及轻链恒定区。轻链恒定区含有I个结构域(CLl)。Vh与' 区可进一步分为具有超变性的区域(命名为互补决定区(complementarity determining reg1ns, Q)R)),散布有较为保守的区域(命名为构架区(FR))。各个Vh与 '由3个CDR以及4个FR所构成，以下列顺序从氨基端往羧基端排列:FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。
[0048]除非另有特别指明，否则术语“抗体”，如本文所用，应理解为含括完整抗体分子以及其抗原结合片段。术语抗体的“抗原结合部分”或“抗原结合片段”(或仅称为“抗体部分”或“抗体片段”)，如本文所用，意指抗体的一或多个片段，其保有特异结合至人Ang-2或其表位的能力。
[0049]术语“经分离抗体”，如本文所用，欲意指基本上不含具有不同抗原特异性的其它抗体的抗体(例如，特异结合人Ang-2的经分离抗体基本上不含特异结合人Ang-2以外的抗原的抗体)。
[0050]术语“特异结合”或类似术语，意指抗体或其抗原结合片段与抗原形成在生理条件下相对稳定的复合物。特异结合的特征在于解离常数为至少约IxlO-6M或更高。用于测定两个分子是否特异结合的方法为本领域中已知的，且包括例如平衡透析、表面等离子体共振及类似方法。但是，特异结合人Ang-2的经分离抗体与其它抗原(诸如其它物种的Ang-2分子(直向同源物))具有交叉反应性。在本发明的上下文中，结合至人Ang-2以及一种或多种其它抗原的多特异性(例如双特异性)抗体被视为“特异结合”人Ang-2。此外，经分离抗体可以基本上不含其它细胞物质或化学品。
[0051]可含括在本发明药物制剂中的例示性抗人Ang-2抗体述于专利申请公开案US2010/0166768、US 2011/0065902、US 2011/0027286 及 WO 2010/077854 中，其揭示内容以其整体并入本文做为参考文件。
[0052]依据本发明的某些实施方案，抗人Ang_2HIH685P抗体为人IgGl，其含有重链可变区(为IGHV3-13.01亚型)以及轻链可变区(为IGKV3-20.01亚型)(参见Barbie和Lefranc, The Human Immunoglobulin Kappa Variable (IGKV) Genes and Joining (IGKJ)Segments,Exp.Clin.1mmunogenet.1998 ； 15:171-183 ；以及 Scaviner, D.等人，ProteinDisplays of the Human Immunoglobulin Heavy, Kappa and Lambda Variable andJoining Reg1ns, Exp.Clin.1mmunogenet., 1999 ； 16:234-240)。本文中出现的生殖系IGHV3-13与IGKV3-20序列，以及氨基酸位置分派数与国际免疫遗传学(MGT)信息系统一致，如 Lefranc, M.-P.,等人，IMGT?, the internat1nal ImMunoGeneTicsinformat1n system?, Nuc1.Acids Res, 37, D1006-D1012 (2009)中所述。
[0053]在一些实施方案中，抗人Ang_2HIH685P相对于正统重链可变区含有至少一个氨基酸置换，造成CDR中的肽链的旋转角度改变，合理预期相对于生殖系IGHV3-13序列改变抗体的暴露表面。在一些实施方案中，氨基酸置换包含在IGHV3-13的⑶R2中的位置39处脯氨酸置换异亮氨酸。
[0054]在一些实施方案中，抗人Ang_2HIH685P抗体含有至少一个氨基酸置换，其在生殖系IGKV3-20的第三CDR 中产生电荷改变。在一些实施方案中，氨基酸置换(等)是选自由下列所组成的组:(a)在IGHV3-20的CDR3中(例如在位置106处)碱性氨基酸置换无带电极性氨基酸，及(b)在IGKV3-20的⑶R3中(例如在位置108处)酸性氨基酸置换无带电极性氨基酸。CDR表面的电荷表现变化预期影响抗体与溶剂的交界处，且因而对于维持或增进抗体在溶液中的稳定性来说产生不可预测的情况。
[0055]依据本发明的某些实施方案，抗人Ang-2抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO:4的重链互补决定区(HCDR)1、SEQ ID N0:6的HCDR2及SEQ ID N0:8的HCDR3。在某些实施方案中，抗人Ang-2抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO: 18的HCVD。
[0056]依据本发明的某些实施方案，抗人Ang-2抗体或其抗原结合片段包含SEQ IDNO: 12 的轻(K )链互补决定区(LCDR)1、SEQ ID NO: 14 的 LCDR2 及 SEQ ID N0:16 的 LCDR3。在某些实施方案中，抗人Ang-2抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO: 20的LCVD。
[0057]本文实施例中所用非限制性例示性抗体意指“HIH685P”，如在US 2011/0027286中所述。该抗体包含HCVR/LCVR氨基酸序列对，其具有SEQ ID NO: 18/20，及由SEQ IDNO:4-6 - 8/SEQ ID NO: 12-14-16 所表示的 HCDR1-HCDR2-HCDR3/LCDR1-LCDR2-LCDR3 结构域。
[0058]本发明药物制剂中所包含的抗体或其抗原结合片段的数量可随着制剂所要的特定特性以及特定环境与要使用制剂的目的而改变。在某些实施方案中，药物制剂为液体制剂，其可含有 5±0.75mg/mL 至 150±22.5mg/mL 抗体;7.5±1.125mg/mL 至 140±21mg/mL 抗体；10 土 1.5mg/mL 至 130 土 19.5mg/mL 抗体；12.5 土 1.875mg/mL 至 120 土 18mg/mL 抗体；15±2.25mg/mL 至 110 土 16.5mg/mL 抗体；17.5 ±2.625mg/mL 至 100 土 15mg/mL 抗体；20±3mg/mL 至 90± 13.5mg/mL 抗体；22.5 ±3.375mg/mL 至 80± 12mg/mL 抗体；25±3.75mg/mL 至 70±10.5mg/mL 抗体；27.5±4.125mg/mL 至 60±9mg/mL 抗体；30±4.5mg/mL 至50±7.5mg/mL抗体；25±3.75mg/mL抗体；或50±7.5mg/ml。例如，本发明制剂可含有约20mg/mL ；约 25mg/mL ；约 30mg/mL ；约 35mg/mL ；约 40mg/mL ；约 45mg/mL ；约 50mg/mL ；约55mg/mL,或约60mg/mL抗体或其抗原结合片段,其特异结合至人Ang-2。
[0059]赋形剂和pH
[0060]本发明药物制剂包含一种或多种赋形剂。术语“赋形剂”，如本文所用，意指任一种被添加至制剂以提供所要稠度、黏度或稳定效用的非治疗性药剂。
[0061]在某些实施方案中，本发明药物制剂包含至少一种在剧烈操作或振荡(诸如涡卷)的条件下呈稳定人Ang-2抗体的类型与数量的有机共溶剂。在一些实施方案中，“稳定”表示在剧烈操作过程中预防抗体总数(以摩尔为基准)超过4%团聚抗体形成。在一些实施方案中，剧烈操作为涡卷含有抗体及有机共溶剂的溶液历时约60分钟或约120分钟。
[0062]在某些实施方案中，有机共溶剂为非离子型表面活性剂，诸如烷基聚(环氧乙烯)。可包括在本发明制剂中的特定非离子型表面活性剂包括，例如聚山梨醇酯，诸如聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯28、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯81及聚山梨醇酯85 ;帕洛沙姆，诸如帕洛沙姆181、帕洛沙姆188、帕洛沙姆407 ;或聚乙二醇(PEG)。聚山梨醇酯20亦已知为TWEEN20、山梨醇单月桂酸酯和聚氧乙烯去水山梨醇单月桂酯。帕洛沙姆188亦已知为普朗尼克(PLUR0NIC)F68。
[0063]本发明药物制剂中所含的非离子型表面活性剂数量可随制剂所需的特定特性，以及特定环境与要使用制剂的目的而改变。在某些实施方案中，制剂可含有0.01%±0.0015%至1% ±0.15%表面活性剂。例如，本发明制剂可含有约0.0085%;约0.01%;约 0.02% ;约 0.03% ;约 0.04% ;约 0.05% ;约 0.06% ;约 0.07% ;约 0.08% ;约 0.09% ；约 0.1% ;约 0.11% ;约 0.12% ;约 0.13% ;约 0.14% ;约 0.15% ;约 0.16% ;约 0.17% ；约 0.18% ;约 0.19% ;约 0.20% ;约 0.21% ;约 0.22% ;约 0.23% ;约 0.24% ;约 0.25% ；约 0.3% ;约 0.4% ;约 0.5% ;约 0.6% ;约 0.7% ;约 0.8% ;约 0.9%、约 1% ;约 1.1% ;约
1.15%:或约1.2%聚山梨醇酯20或帕洛沙姆188。
[0064]本发明的药物制剂亦可包含一种或多种呈在热应力条件下稳定人Ang-2抗体的类型及数量的稳定剂。在一些实施方案中，“稳定”表示当含有抗体及热稳定剂的溶液在约45°C持续至高约28天时，超过约93%的抗体维持其天然构象。在一些实施方案中，“稳定”表示当含有抗体及热稳定剂的溶液在约45°C持续至高约28天时,其中少于约4%的抗体团聚。在一些实施方案中，“稳定”表示当含有抗体及热稳定剂的溶液在约37°C持续至高约28天时，超过约96%的抗体维持其天然构象。在一些实施方案中，“稳定”表示当含有抗体及热稳定剂的溶液在约37°C持续至高约28天时，其中少于约2%的抗体团聚。如本文所用，“天然”表示依据大小排阻的主要抗体形式，其通常为抗体的完整单体。
[0065]在某些实施方案中，热稳定剂为糖或糖醇，选自于蔗糖、山梨糖醇、甘油、海藻糖及甘露糖醇或其任何组合，制剂中所含数量可随着特定环境及要使用制剂的目的而改变。在某些实施方案中，制剂可含有约3%至约20%糖或糖醇；约4%至约19%糖或糖醇；约5%至约18%糖或糖醇；约6%至约17%糖或糖醇；约7%至约16%糖或糖醇；约8%至约15%糖或糖醇；约9%至约16%糖或糖醇；约7%至约13%糖或糖醇；约8%至约12%糖或糖醇；约9%至约11%糖或糖醇；或约10%糖或糖醇。例如，本发明药物制剂可含有4% ±0.6%;5% ±0.75% ；6% ±0.9%;7% ±1.05%;8% ±1.2%;9% ±1.35%;10% ±1.5%;11%±1.65% ；12% ±1.8% ；13% ±1.95% ;或约14% ±2.1%糖或糖醇(例如，蔗糖、海藻糖或甘露糖醇)。
[0066]本发明的药物制剂亦可含有缓冲剂或缓冲系统，其作为维持稳定pH并有助于稳定人Ang-2抗体。在一些实施方案中，“稳定”表示当含有抗体及缓冲剂的溶液在45°C维持多达约28天时,少于5% ±0.5%或不超过4.3%抗体团聚。在一些实施方案中稳定”表示当含有抗体及缓冲剂的溶液在45°C维持多达约28天时，至少92% ±0.5%抗体呈其天然构象，如同藉由大小排阻层析所测定。“天然”或“天然构象”表示未团聚或分解的抗体部分。这通常是藉由测量抗体实体的相对大小的分析(诸如大小排阻层析分析)来决定。非团聚及非分解抗体在与天然抗体相同的级分中洗脱出来，且通常是主要洗脱级分。团聚抗体在表示尺寸大于天然抗体的级分中洗脱出来。分解抗体在表示尺寸小于天然抗体的级分洗脱出来。
[0067]在一些实施方案中，“稳定”表示当含有抗体及缓冲剂的溶液在45°C维持多达约28天时，至少52% ±0.5%抗体呈其主要电荷形式，如同藉由阳离子交换层析所测定。“主要电荷”或“主要电荷形式”表示抗体在主峰中从离子交换树脂洗脱出来的级分，其通常一侧为更“碱性”峰而另一侧为更“酸性”峰。
[0068]本发明药物制剂可具有约5.5至约6.5的pH。例如，本发明制剂具有约5.5 ;约
5.6 ;约 5.7 ;约 5.8 ;约 5.9 ;约 6.0 ;约 6.1 ;约 6.2 ;约 6.3 ;约 6.4 ;或约 6.5 的 pH。在一些实施方案中，pH 为 6.0±0.4 ；6.0±0.3 ；6.0±0.2 ；6.0±0.I ;约 6.0 ;或 6.0。
[0069]在一些实施方案中，缓冲剂或缓冲系统包含至少一种具有完全含括pH5.5-7.4或pH5.5-7.4的一部分的缓冲范围。在一个实施方案中，缓冲剂具有约6.0±0.5的pKa。在某些实施方案中，缓冲剂具有组氨酸缓冲剂。在某些实施方案中，组氨酸以5mM±0.75mM至15mM±2.25mM ;6mM±0.9mM至 14mM±2.1mM ;7mM±l.05mM至 13mM±l.95mM ;8mM±l.2mM至12mM±l.8mM ;9mM±l.35mM 至 llmM±l.65mM ;10mM±l.5mM ;或约 1mM 的浓度存在。在某些实施方案中，缓冲系统包含10mM±l.5mM, pH为6.0±0.3或6.4±0.3的组氨酸。
[0070]例示性制剂
[0071]依据本发明的一个方面，药物制剂为低黏度(例如具有低于10厘泊或约
1.4±0.21厘泊),大体上生理等张(亦即介于300至400m0sm或约363±54m0sm)的液体制剂，其含有:(i)特异结合至人Ang-2 (例如HIH685P)的人抗体，浓度为25mg/mL±3.75mg/mL,或50mg/mL±7.5mg/mL ； (ii)缓冲系统,在约pH6.0±0.3下提供充分缓冲；(iii)糖,尤其做为热稳定剂；以及(iv)有机共溶剂，若为抗体的话，所述有机共溶剂保护抗体的结构完整性。
[0072]依据一个实施方案，药物制剂包含:(i)人IgGl抗体，特异结合至人Ang-2，且其含有经取代IGHV3-13.01型重链可变区及经取代IGKV3-20.01型轻链可变区(例如，HIH685P)，浓度为20 土 3mg/mL至约60 土9mg/mL ; (ii)含有组氨酸的缓冲系统，其在约pH6.0±0.3有效地缓冲；(iii)蔗糖；及(iv)非离子型去污剂，诸如聚山梨醇酯。
[0073]依据一个实施方案，药物制剂包含:⑴人IgGl抗体，其特异结合至人Ang-2，且其具有 SEQ ID NO:4 的 HCDRl、SEQ ID NO:6 的 HCDR2、SEQ ID NO:8 的 HCDR3、SEQ ID NO: 14的 LCDR1、SEQ ID NO: 14 的 LCDR2 及 SEQ ID NO: 16 的 LCDR3，浓度为约 25mg/ml±3.75mg/mL ； (ii) 1mM土 1.5mM 的组氨酸，其在 pH6.0±0.3 下进行缓冲；(iii) 10% w/v± 1.5% w/v的蔗糖；及(iv)0.2% w/v±0.03% w/v聚山梨醇酯20。
[0074]依据一个实施方案，药物制剂包含:(i)人IgGl抗体，其特异结合至人Ang-2，且其具有 SEQ ID NO:4 的 HCDRl、SEQ ID NO:6 的 HCDR2、SEQ ID NO:8 的 HCDR3、SEQ ID NO: 14的 LCDR1、SEQ ID NO: 14 的 LCDR2 及 SEQ ID NO: 16 的 LCDR3，浓度为约 50mg/ml±7.5mg/mL ； (ii) 1mM土 1.5mM 的组氨酸，其在 pH6.0±0.3 下进行缓冲；(iii) 10% w/v± 1.5% w/v的蔗糖；及(iv)0.2%w/v±0.03% w/v聚山梨醇酯20。
[0075]依据一个实施方案，药物制剂包含:(i)人IgGl抗体，其特异结合至人Ang-2，且其具有SEQ ID NO: 18的重链可变域，以及SEQ ID NO:20的轻链可变域，浓度为25mg/ml±3.75mg/mL ;(ii)10mM±l.5mM 的组氨酸，其在 pH6.0±0.3 下进行缓冲；(iii)10% w/v±1.5% w/v 的蔗糖;及(iv)0.2% w/v±0.03% w/v 聚山梨醇酯 20。
[0076]依据一个实施方案，药物制剂包含:(i)人IgGl抗体，其特异结合至人Ang-2，且其具有SEQ ID NO: 18的重链可变域，以及SEQ ID NO:20的轻链可变域，浓度为约50mg/ml±7.5mg/mL ;(ii)10mM±l.5mM 的组氨酸，其在 ρΗ6.0±0.3 下进行缓冲；(iii)10% w/ν±1.5% w/v 的蔗糖；及(iv)0.2% w/v±0.03% w/v 聚山梨醇酯 20。
[0077]本发明所含括的药物制剂的其它非限制性实例在本文他处说明，包括如下所示的工作例。
[0078]药物制剂的稳定性与黏度
[0079]本发明药物制剂通常表现出高度稳定性。术语“稳定”，如本文所用，在提及药物制剂时，表示药物制剂中的抗体在储存于特定条件下之后保有可接受程度的化学结构或生物功能。制剂可以是稳定的，尽管其中所含抗体在储存特定时间数之后并未100%维持其化学结构或生物功能。在某些情况下，在储存特定时间数之后维持约90%、约95%、约96%、约97%、约98%或约99%的抗体结构或功能被认为是“稳定”。
[0080]稳定性尤其可于特定温度下储存特定时间量之后藉由测定制剂中维持的天然抗体百分比来决定。天然抗体的百分比尤其可以藉由大小排阻层析(例如大小排阻高效液相层析[SE-HPLC])来测定诸如天然平均非团聚者及非分解者。当“可接受程度的稳定性”这个词组用于本文中时，表示至少90%的天然形式抗体可于特定温度下储存特定时间量之后在制剂中检测到。在某些实施方案中，至少约90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97^^98^^99%或100%的天然形式抗体可于特定温度下储存特定时间量之后在制剂中检测到。在其后测量稳定性的特定时间量可为至少14天、至少28天、至少I个月、至少2个月、至少3个月、至少4个月、至少5个月、至少6个月、至少7个月、至少8个月、至少9个月、至少10个月、至少11个月、至少12个月、至少18个月、至少24个月或更久。当评估稳定性时，药物制剂储存的特定温度可为下列的任一温度:约_80°C至约45°C，例如储存于约-80°C、约-30°C、约-20°C、约(TC、约 4°C _8°C、约 5°C、约 25°C、约 35°C、约 37°C或约45°C。例如，若在储存于5°C 9个月之后，藉由SE-HPLC检测到超过约96%、96.5%,97%,
97.5%,98%,98.5%、99%或99.5%天然抗体，则药物制剂可被视为是稳定的。若在储存于 25°C 6 个月之后，藉由 SE-HPLC 检测到超过约 96%、96.5%,97%,97.5%,98%,98.5%,99%或99.5%天然抗体，则药物制剂亦可被视为是稳定的。若在储存于37°C 28天之后，藉由 SE-HPLC 检测到超过约 96%,96.5%,97%,97.5%,98%,98.5%、99%或 99.5%天然抗体，则药物制剂亦可被视为是稳定的。若在储存于45°C 28天之后，藉由SE-HPLC检测到超过约93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%天然抗体，则药物制剂亦可被视为是稳定的。若在储存于_20°C 6个月之后，藉由SE-HPLC检测到超过约96%、96.5%、97%、
97.5%、98%、98.5%、99%或99.5%天然抗体，则药物制剂亦可被视为是稳定的。若在储存于_30°C 6个月之后，藉由SE-HPLC检测到超过约96%、96.5%、97%、97.5%、98%、
98.5%、99%或99.5%天然抗体，则药物制剂亦可被视为是稳定的。在储存于_80°C 6个月之后，藉由SE-HPLC检测到超过约97%,97.5%,98%,98.5%、99%或99.5%天然抗体，则药物制剂亦可被视为是稳定的。
[0081]稳定性尤其可藉由测定在特定温度下储存特定时间量之后，制剂中抗体形成团聚体的百分比来测量，其中稳定性与形成团聚体的百分比呈反比。团聚抗体百分比尤其可藉由大小排阻层析(例如，大小排阻高效液相层析[SE-HPLC])来测定。当“可接受程度的稳定性”这个词组用于本文中时，表示至多6%的抗体于特定温度下储存特定时间量之后在制剂中检测到为团聚体形式。在某些实施方案中，可接受程度的稳定性表示至多约6%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5%或0.1%抗体于特定温度下储存特定时间量之后在制剂中检测到为团聚体形式。在其后测得稳定性的特定时间量可为至少2周、至少28天、至少I个月、至少2个月、至少3个月、至少4个月、至少5个月、至少6个月、至少7个月、至少8个月、至少9个月、至少10个月、至少11个月、至少12个月、至少18个月、至少24个月或更久。当评估稳定性时，药物制剂储存的特定温度可为约_80°C至约45°C的任一温度，例如储存于约-80°C、约-30°C、约-20°C、约(TC、约 4°C _8°C、约 5°C、约 25°C、约 35°C、约 37°C或约45°C。例如，若在储存于5°C 9个月之后，检测到少于约2%、1.75%U.5%U.25%U%>0.75%、0.5%、0.25%或0.1 %抗体呈团聚形式，则药物制剂可被视为是稳定的。若在储存于 25V 6 个月之后，检测到少于约 2%U.75%U.5%U.25%U%>0.75%,0.5%,0.25%或0.1%抗体呈团聚形式，则药物制剂亦可被视为是稳定的。若在储存于45°C 28天之后，检测到少于约4%、3.5%、3%、2.5%、2%、1.5%、1%、0.5%或0.1%抗体呈团聚形式，则药物制剂亦可被视为是稳定的。若在储存于-20°C、-30°C或_80°C 3个月之后，检测到少于约2%U.9%U.8%U.7%U.6%U.5%U%>0.5%或0.1 %抗体呈团聚形式，则药物制剂亦可被视为是稳定的。
[0082]稳定性尤其可藉由测定抗体在离子交换(“酸性形式”)期间移至比抗体主要级分(“主要电荷部分”)更为酸性的级分的百分比来测量，其中稳定性与呈酸性形式的抗体级分呈反比。尽管不希望受到理论所囿限，抗体的去酰胺化可使得抗体变为更加带负电并因而相对于非去酰胺化抗体更为酸性(参见，例如Robinson, N.，ProteinDeamidat1n, PNAS, 2002年4月16日，99(8):5283-5288)。“酸化”抗体百分比尤其可藉由离子交换层析(例如，阳离子交换高效液相层析[CEX-HPLC])测定。当“可接受程度的稳定性”这个词组用于本文中时，表示于特定温度下储存特定时间量之后在制剂中至多52%抗体呈更为酸性的形式。在某些实施方案中，可接受程度的稳定性表示于特定温度下储存特定时间量之后在制剂中至多约 52%,50%,45%,40%,35%,30%,29%,28%,27%,26%,25%,20% ,15% ,10%,5%,4%,3%,2% U %>0.5%或0.1 %抗体呈酸性形式。其后测量稳定性的特定时间量可为至少2周、至少28天、至少I个月、至少2个月、至少3个月、至少4个月、至少5个月、至少6个月、至少7个月、至少8个月、至少9个月、至少10个月、至少11个月、至少12个月、至少18个月、至少24个月或更久。当评估稳定性时，储存药物制剂的温度可为约-80 V至约45 V的任一温度，例如储存于约-80 V、约-30 V、约-20 °C、约(TC、约4°C -8°C、约5°C、约25°C或约45°C。例如，若在储存于-80°C、_30°C或-20°C 3个月之后，少于约 29%、28%、27%、26%、25%、24%、23%、22%、21%、20%、19%、18%、17%、16%、15%、14%、13%、12%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5%或 0.1%抗体呈更为酸性的形式，则药物制剂可被视为是稳定的。若在储存于5°C 9个月之后，少于约 28%、27%、26%、25%、24%、23%、22%、21%、20%、19%、18%、17%、16%、15%、14%、13%,12%,10%,9%,8%,7%,6%,5%,4%,3%,2%,1%>0.5%或 0.1 % 抗体呈更为酸性的形式，则药物制剂亦可被视为是稳定的。若在储存于25°C 28天后，少于约30%、29%、28%,27%,26%,25%,24%,23%,22%,21 %,20%,19%,18%,17%,16%,15%,14%,13%、12%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5%或 0.1 %抗体呈更为酸性的形式，则药物制剂亦可被视为是稳定的。若在储存于37°C 28天之后，检测到少于约37%,36%,35%,34%,33%,32%,31 %,30%,29%,28%,27%,26%,25%,24%,23%,22%,21%,20%,19%,18%,17%,16%,15%,14%,13%,12%,10%,9%,8%,7%,6%,5%、4%、3%、2%、1%、0.5%或0.1%抗体呈更为酸性的形式，则药物制剂亦可被视为是稳定的。若在储存于45°C 28天之后，检测到少于约52%、51%、50%、49%、48%、47%、46%、45%,44%,43%,42%,41 %,40%,39%,38%,37%,36%,35%,34%,33%,32%,3130%,29%,28%,27%,26%,25%,24%,23%,22%,21 %,20%,19%,18%,17%,16%,15%,14%,13%,12%,10%,9%,8%,7%,6%,5%,4%,3%,2%,1%>0.5%或 0.1%抗体呈更为酸性的形式，则药物制剂亦可被视为是稳定的。
[0083]测量抗体对其目标的结合亲和力亦可用于评估稳定性。例如，若在储存于例如-80°C、-30°C、-20°C、5°C、25°C、37°C、45°C等温度下特定时间量(例如14天至6个月)之后，制剂中所含抗Ang-2抗体以储存前该抗体结合亲和力的至少84 %、90 %、95 %或更高结合至Ang-2，本发明制剂可被视为是稳定的。结合亲和力可藉由，例如ELISA或等离子体共振来测定。生物活性可藉由Ang-2活性分析(诸如，例如使表达Ang-2的细胞与包含抗Ang-2抗体的制剂接触)来测定。抗体结合至此种细胞可直接藉由诸如，例如经由FACS分析来测定。备选地，可在抗体存在时测量Ang-2系统的下游活性，并且与抗体不存在时Ang-2系统的活性相比较。在一些实施方案中，Ang-2对细胞来说是内源性的。在其它实施方案中，Ang-2在细胞中异位地表达(即，异源表达)。
[0084]用于评估制剂中的抗体稳定性的其它方法在下面所示实例中证实。
[0085]容器和投药方法
[0086]本发明药物制剂可包含在任一种适于储存或投与药品及其它治疗性组合物的容器中。例如，药物制剂可包含在密封与灭菌的具有预定体积的塑料或玻璃容器中，例如小瓶、安瓿、注射器、药匣、瓶或IV袋中。不同类型的小瓶可用于容纳本发明制剂，包括，例如透明与不透明(例如琥珀色)玻璃或塑料小瓶。同样地，任何类型的注射器可用于容纳或投与本发明的药物制剂。
[0087]本发明的药物制剂可包含在“标准钨”注射器或“低钨”注射器中。如本领域技术人员所知，制造玻璃注射器的工艺通常涉及使用高钨杆(其作用为刺穿玻璃)，从而由其产生一个液体可被抽出并排出注射器的孔洞。此工艺使微量钨沉积在注射器的内表面。之后的洗涤与其它加工步骤可用于降低钨在注射器中的量。如本文所用，术语“标准钨”表示注射器含有超过或等于500ppb的钨。术语“低钨”表示注射器含有少于500ppb的钨。例如，依据本发明，低钨注射器可含有少于约490、480、470、460、450、440、430、420、410、390、350、300、250、200、150、100、90、80、70、60、50、40、30、20、10 或更低 ppb 的钨。
[0088]注射器中所使用的橡胶塞盖，以及用于密封小瓶开口的橡胶瓶盖可经涂层以防止注射器或小瓶的药物内容物污染，或维持其稳定性。因此，依据某些实施方案，本发明药物制剂可包含在具有经涂覆塞盖的注射器内，或在以经涂覆橡胶瓶盖密封的小瓶内。例如，塞盖或瓶盖可涂覆有氟碳化物膜。适用于与含有本发明药物制剂的小瓶及注射器一起使用的经涂覆塞盖或瓶盖的实例述于，例如美国专利第4，997, 423号；第5，908，686号；第6，286,699号；第6，645，635号及第7，226，554号，其内容以其整体并入本文做为参考文件。可用于本发明上下文内的特定例示性经涂覆橡胶瓶盖与塞盖可在商业上以商标名“FluroTec?”由 West Pharmaceutical Services, Inc.(L1nville, PA)取得。
FluroTec?是一种用于使药品尽可能不附着于橡胶表面或防止药品附着于橡胶表面的氟碳化物涂层。
[0089]依据本发明的某些实施方案，药物制剂可包含于具有经氟碳化物涂覆的塞盖的低钨注射器内。
[0090]药物制剂可以藉由非经肠途径投药给患者，诸如注射(例如皮下、静脉内、肌内、腹膜内等) ，或经皮、黏膜、鼻、肺或经口投药。许多可重复使用笔型或自动注射递送装置可用于皮下递送本发明的药物制剂。实例包括，但不限于AUTOPEN?(Owen Mumford, Inc., Woodstock, UK)、DISETR0NIC? pen (DisetronicMedical Systems, Bergdorf, Switzerland) > HUMAL0G MIX75/25? pen、HUMAL0G? pen、HUMALIN70/30? pen (Eli Lilly and C0., Indianapolis, IN),N0V0PEN? 1、II 与 III(NovoNordisk, Copenhagen, Denmark)、N0V0PEN JUN1R?(Novo Nordisk, Copenhagen, Denmark)、BD? pen(Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ)、0ΡΤΙΡΕΝ?、0ΡΤΙΡΕΝ PRO?、0ΡΤΙΡΕΝSTARLET?、以及 0PTICLIK?(sanof1-aventis, Frankfurt, Germany)。应用在皮下递送本发明药物制剂的抛弃式笔型或自动注射递送装置的实例包括，但不限于S0L0STAR?pen (sanof1-aventis)、FLEXPEN?(Novo Nordisk)以及 KWIKPEN?(Eli Lilly)、SURECLICK?Autoinjector(Amgen, Thousand Oaks, CA)、PENLET? (HaseImeier, Stuttgart, Germany)、EPIPEN (Dey, L.P.)、以及 HUMIRA? Pen (Abbott Labs, Abbott Park, IL)。
[0091]在本文中亦预期使用微输注器递送本发明的药物制剂。如本文所用，术语“微输注器”表示被设计成在一段长时间内(例如约10、15、20、25、30或更多分钟)缓慢地投与大量(例如多达约2.5mL或更多)治疗制剂的皮下递送装置。参见，例如U.S.6，629，949 ；US
6,659, 982 以及 Meehan 等人，J.Controlled Release46:107-116 (1996)。微输注器尤其可用于递送大剂量的治疗性蛋白(具有高浓度)(例如，约100、125、150、175、200或更多11^/mL)或黏性溶液。
[0092]在一个实施方案中，药物制剂是经IV滴注投与，使得制剂稀释于含有生理学上可接受溶液中的IV袋中。在一个实施方案中，药物制剂是静脉内输注袋的复合无菌制剂，使得单剂量药品稀释至100mL、250mL(或适于静脉内滴注投递的其它可行量)的生理缓冲液(例如0.9%食盐水)中。在一些实施方案中，输注袋是由聚氯乙烯(例如VIAFLEX，Baxter,Deerfield, Illinois)制成。在一些实施方案中，输注袋是由聚烯烃(EXCEL IV Bags.BraunMedical Inc., Bethlechem, Pennsylvania)制成。
[0093]药物制剂的治疗用途
[0094]本发明的药物制剂尤其可用于治疗、预防或改善与Ang-2活性有关的任何疾病或病症，包括由Ang-2所介导的疾病或病症。可经由投与本发明药物制剂而治疗或预防的例示性、非限制性疾病与病症包括各种涉及血管新生的疾病，而血管新生为新血管形成的生物过程。异常血管新生与数种疾病病况有关，包括(例如)增生性视网膜病变、类风湿性关节炎和牛皮癣。另外，已证实血管新生对于肿瘤生长与维持至关重要。
实施例
[0095]提出下列实施例以将如何制造与使用本发明方法和组合物的完整揭示内容以及发明说明提供给本领域普通技术人员，且不欲限制发明人就其发明所视为的范畴。已尽力确保所用数字的正确性(例如数量、温度等)，但可能产生某些实验误差与偏差。除非另有指明，否则份为以摩尔计的份，分子量为平均分子量，温度为摄氏度，而压力为大气压或近乎大气压。
[0096]初始制剂研发行动涉及以实验为基础的实验和筛选抗Ang-2抗体的液体和冻干制剂中的有机共溶剂、热稳定剂和缓冲剂，以鉴定与蛋白质兼容且增强其稳定性，同时维持相近的生理渗透性与低黏度供静脉内和皮下注射用的赋形剂。亦测试了缓冲条件以确定最高蛋白质稳定性的最佳pH。
[0097]实施例1:研发抗Ang-2制剂
[0098]制剂研发行动包括筛选抗Ang-2抗体的液体制剂中的缓冲剂、有机共溶剂和热稳定剂，以鉴定会增强蛋白质稳定性的赋形剂。亦测试了缓冲条件以确定最高蛋白质稳定性的最佳pH。由这些研究所产生的结果用于研发稳定的临床用液体制剂。抗Ang-2(例如HIH685P)被调配成25±3.75mg/ml与50±7.5mg/ml。在一个实施方案中，抗Ang-2抗体被调配于 10±1.5mM 组氨酸(pH6.0±0.3),0.2% ±0.03%聚山梨醇酯 20、10% ±1.5%蔗糖中。
[0099]实施例2:缓冲剂和pH
[0100]考虑pH与缓冲剂类型对于抗Ang-2稳定性的影响。在45°C将25mg/mL HIH685P培育于乙酸盐(ρΗ5.0-5.5)、柠檬酸盐(ρΗ5.5-6.0)、琥珀酸盐(ρΗ6.0)、组氨酸(ρΗ5.5-6.5)、磷酸盐(ΡΗ6.0-8.0)或Tris(pH8.0)缓冲剂中，以评估缓冲剂与pH对于蛋白质的热稳定性的影响(表1)。就HIH685P的制剂而言，依据大小排阻层析(SE-HPLC)的蛋白质稳定性分析揭示，乙酸盐(pH5.5)、磷酸盐(pH6.0)、组氨酸(pH5.5-6.5)、与琥珀酸盐表现得比其它缓冲系统更好。当HIH685P以pH6.0调配于组氨酸缓冲剂中时，观察最高蛋白质稳定性，如同藉由阳离子交换层析(CEX HPLC)所测定。这些分析亦揭示，抗体分解主要形成团聚体、分解产物及电荷变体。HIH685P稳定性的最佳pH在组氨酸缓冲剂中经观察为6.0，尽管在
5.5至6.5的pH范围内观察到良好稳定性。根据这些结果，选定在pH6.0时的1mM组氨酸缓冲剂来调配抗体药品(DP)。
[0101]表1:在45°C培育28天，缓冲剂与pH对于HIH685P稳定性的影响
[0102]
【权利要求】
1.药物制剂，其包含:(i)特异结合至人血管生成素2(Ang-2)的抗体；(ii)缓冲剂，pH在6.0±0.3;(iii)非离子型去污剂；以及(iv)稳定剂。
2.权利要求1的药物制剂，其中该抗体包含SEQID NO:4的HCDRl、SEQ ID NO:6的HCDR2、SEQ ID NO:8 的 HCDR3、SEQ ID NO: 12 的 LCDR1、SEQ ID NO: 14 的 LCDR2 及 SEQ IDNO: 16 的 LCDR3。
3.权利要求1或2的药物制剂，其中该抗体包含SEQID N0:18的HCVD，以及SEQ IDNO:20 的 LCVD。
4.权利要求1至3中任一项所述的药物制剂，其中 (a)超过96%的抗体具有151kDa±lkDa的分子量； (b)至少53%的抗体具 有约8.13±0.01的等电点；以及 (c)约90%至约92%的抗体是岩藻糖基化的。
5.权利要求1至4中任一项所述的药物制剂,其中抗体浓度为约25mg/mL±0.375mg/mL，或约 50mg/mL + 7.5mg/mL。
6.权利要求1至4中任一项所述的药物制剂，其中该缓冲剂为组氨酸。
7.权利要求6的药物制剂，其中组氨酸浓度为10mM±l.5mM。
8.权利要求1至7中任一项所述的药物制剂，其中非离子型去污剂为聚山梨醇酯20。
9.权利要求8的药物制剂，其中聚山梨醇酯20浓度为约0.2% w/v±0.03%。
10.权利要求1至9中任一项所述的药物制剂，其中该稳定剂为蔗糖。
11.权利要求10的药物制剂，其中蔗糖浓度为约10%±1.5% (w/v)。
12.权利要求1至11中任一项所述的药物制剂，其中抗体浓度为25mg/mL±3.75mg/mL，缓冲剂为10mM±l.5mM组氨酸，pH6±0.3、非离子型去污剂为0.2% w/v±0.03%，和稳定剂为10% w/v±l.5%鹿糖。
13.权利要求1至11中任一项所述的药物制剂，其中抗体浓度为50mg/mL±7.5mg/mL,缓冲剂为10mM±l.5mM组氨酸，pH6±0.3、非离子型去污剂为0.2% w/v±0.03%，和稳定剂为 10% w/v±l.5%鹿糖。
14.权利要求1至13中任一项所述的药物制剂，其中至少93%的抗体在45°C28天后具有天然构象。
15.权利要求1至14中任一项所述的药物制剂，其中至少32%的抗体在45°C28天后为抗体的主要电荷变体。
16.权利要求1至15中任一项所述的药物制剂，其中至少97%的抗体在25°C28天后具有天然构象。
17.权利要求1至16中任一项所述的药物制剂，其中至少53%的抗体在25°C28天后为抗体的主要电荷变体。
18.权利要求1至17中任一项所述的药物制剂，其中至少96%的抗体在37°C28天后具有天然构象。
19.权利要求1至18中任一项所述的药物制剂，其中至少45%的抗体在37°C28天后为抗体的主要电荷变体。
20.权利要求1至19中任一项所述的药物制剂，其中至少97%的抗体在5°C6个月后具有天然构象。
21.权利要求1至20中任一项所述的药物制剂，其中至少55%的抗体在5°C6个月后为抗体的主要电荷变体。
22.权利要求1至21中任一项所述的药物制剂，其中在5°C6个月后抗体的相对效力百分比为储存前抗体效力的至少100%。
23.权利要求1至22中任一项所述的药物制剂，其中至少97%的抗体在-80°C6个月后具有天然构象。
24.权利要求1至23中任一项所述的药物制剂，其中至少55%的抗体在-80°C6个月后为抗体的主要电荷变体。
25.权利要求1至24中任一项所述的药物制剂，其中在_80°C6个月后抗体的相对效力百分比为储存前抗体效力的至少85%。
26.权利要求1至25中任一项所述的药物制剂，其中至少96%的抗体在-30°C6个月后具有天然构象。
27.权利要求1至26中任一项所述的药物制剂，其中至少55%的抗体在-30°C6个月后为抗体的主要电荷变体。
28.权利要求1至27中任一项所述的药物制剂，其中在_30°C6个月后抗体的相对效力百分比为储存前抗体效力的至少84%。
29.权利要求1至28中任一项所述的药物制剂，其中至少96%的抗体在-20°C6个月后具有天然构象。
30.权利要求1至29中任一项所述的药物制剂，其中至少55%的抗体在-20°C6个月后为抗体的主要电荷变体。
31.权利要求1至30中任一项所述的药物制剂，其中在_20°C6个月后抗体的相对效力百分比为储存前抗体效力的至少90%。
32.药物制剂，其包含(a)25mg/mL±3.75mg/mL 的抗 Ang-2 抗体、(b) 10mM±l.5mM 组氨酸，pH6±0.3、(c)0.2% w/v±0.03%聚山梨醇酯 20，和(d) 10% w/v±L 5%蔗糖，其中
(a)该抗体包含SEQ ID NO: 18 的 HCVD 以及 SEQ ID NO:20 的 LCVD ； (b)超过96%的抗体具有151kDa±lkDa的分子量； (c)至少53%的抗体具有约8.13±0.01的等电点；和 (d)约90%至约92%的抗体是岩藻糖基化的。
33.权利要求32的药物制剂,其在水中由下列所组成:(a)25mg/mL±3.75mg/mL的抗体、(b)10mM±3mM 组氨酸，ρΗ6±0.3、(c)0.2% w/v±0.03%聚山梨醇酯 20，和(d)10% w/v± 1.5%鹿糖。
34.药物制剂，其包含(a)50mg/mL±7.5mg/mL 的抗 Ang-2 抗体、(b) 10mM± 1.5mM 组氨酸，pH6±0.3、(c)0.2% w/v±0.03%聚山梨醇酯 20，和(d) 10% w/v±L 5%蔗糖，其中
(a)该抗体包含SEQ ID NO: 18 的 HCVD 以及 SEQ ID NO:20 的 LCVD ； (b)超过96%的抗体具有151kDa±lkDa的分子量； (c)至少53%的抗体具有约8.13±0.01的等电点；及 (d)约90%至约92%的抗体是岩藻糖基化的。
35.权利要求34的药物制剂,其在水中由下列所组成:(a)50mg/mL±7.5mg/mL的抗体、(b)10mM±l.5mM 组氨酸，ρΗ6±0.3、(c)0.2% w/v±0.03 %聚山梨醇酯 20，和(d) 10% w/v± 1.5%鹿糖。
36.权利要求1至35中任一项所述的药物组合物，其中该组合物包含在容器中。
37.权利要求36的药物组合物，其中该容器为小瓶。
38.权利要求37的药物组合物，其中该小瓶为玻璃。
39.权利要求36的药物组合物，其中该容器为IV滴注袋。
40.权利要求39的药物组合物，其中该袋是由聚氯乙烯制成。
41.权利要求39的药物组合物，其中该袋是由聚烯烃制成。
42.试剂盒，其包含权利要求1至35中任一项所述的药物组合物、容器以及使用说明。
43.权利要求42的试剂盒，其中该容器为玻璃小瓶，配有涂覆FLUROTEC的4023/50的橡胶 瓶塞。
【文档编号】A61K47/06GK104169299SQ201380006367
【公开日】2014年11月26日 申请日期:2013年1月22日 优先权日:2012年1月23日
【发明者】S·沃尔什, D·迪克斯 申请人:瑞泽恩制药公司