轮状病毒亚单位疫苗及其制备和使用的方法
【专利摘要】本发明提供了在动物或人中引发抗轮状病毒的免疫反应的轮状病毒抗原性多肽或抗原、包含所述轮状病毒多肽的组合物、接种以抗轮状病毒的方法，以及用于这样的方法和组合物的试剂盒。本发明还提供了用于产生疫苗抗原性多肽的新型表达载体。
【专利说明】轮状病毒亚单位疫苗及其制备和使用的方法 发明领域
[0001] 本申请要求2012年2月14日提交的美国临时专利申请系列No. USSN 61/598,624 的优先权，将所述美国临时专利申请通过引用整体并入本文。
[0002] 发明领域
[0003] 本发明总地来说涉及亚单位疫苗，具体地包含已被工程化以在遗传和抗原性上与 由感染目标动物群体的病毒表达的肽几乎相同的轮状病毒肽的那些疫苗。通过毒素/解毒 剂选择系统在细菌细胞群体中维持表达抗原性肽或亚单位蛋白的质粒。细菌细胞产生毒性 蛋白，该毒性蛋白被由质粒编码的具有肽的解毒蛋白中和，从而使得非转化细胞不能存活。
[0004] 背景
[0005] 轮状病毒是婴儿和幼儿中严重腹泻的最常见原因 （Dennehy PH，2000)，并且是引 起通常称为肠胃感冒（stomach flu)(尽管与流感无关）的的感染的几种病毒之一。其属于 呼肠孤病毒科（Reoviridae)的双链RNA病毒属。该病毒有五个种，称为A、B、C、D和E(ICTV 病毒分类学：2009发布）。表1提供了已知轮状病毒蛋白的概述。轮状病毒A(最常见的） 引起超过90%的人的感染。该病毒通过粪口途径传播，感染和破坏沿着小肠排列的细胞， 引起胃肠炎。除了其对人死亡的影响外，轮状病毒还感染动物，为家畜的病原体（Dubovi EJ，2010)。
[0006] 例如，根据最近的研究，轮状病毒主要（65% )发现于来自具有腹泻的猪的粪便或 肠内容物中。大部分动物被单个组（A，B，C)感染，超过一个轮状病毒组的合并感染确实也 有发生（Yoon, KJ, Epidemiology of rotaviruses, ISUVDL submissions, 2010-2011, Iowa State)。将近1/3的动物被至少组C轮状病毒感染。直至现在，猪的轮状病毒的预防牵涉 相当神秘的实践，例如给健康猪喂饲感染的仔猪组织。该实践是必需的，因为组C轮状病毒 不能体外生长，从而妨碍了常规灭活/减毒的全病毒疫苗的产生。因此，存在对更安全、更 有效的预防性措施的明确、紧迫的需要。
[0007] 表1.轮状病毒蛋白概述
[0008]
【权利要求】
1. 一种免疫组合物，其包含： a) 选自轮状病毒多肽或其片段的一种或多种多肽；和 b) 药学上或兽医学上可接受的媒介物、稀释剂或赋形剂。
2. 权利要求1的组合物，其还包含佐剂。
3. 权利要求2的组合物，其中所述佐剂是水包油型的。
4. 权利要求2或3的组合物，其中所述佐剂为TRIGEN或ULTRAGEN或PRIMAVANT、TS6 或 LR4。
5. 权利要求1至3中任一项的组合物，其中所述多肽与SEQ ID N0:17、19、21、23、25、 27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69 或 71 中所示 的序列具有至少80 %的序列同一性。
6. 权利要求1-3或5中任一项的组合物，其还包含与除轮状病毒外的病原体相关的至 少一种另外的抗原。
7. 权利要求6的组合物，其中所述至少一种另外的抗原能够在猪中引发抗肺炎支原 体、PCV2、PRRSV、SIV或其它病原体的免疫反应，所述其它病原体能够感染猪并引起疾病或 对疾病的易感性。
8. -种用于产生权利要求1_3、5或7中任一项的自体组合物的方法，包括步骤： (a) 从已知感染有或怀疑感染有一种或多种类型的轮状病毒的动物获得生物样品； (b) 如果感染状态未知，则确定所述动物是否被轮状病毒感染； (c) 从被所述一种或多种类型的轮状病毒感染的动物收获RNA ; (d) 使用与至少一个组C轮状病毒基因互补的引物进行逆转录酶PCR ; (e) 将来自步骤（d)的PCR产物插入适当的表达载体； (f) 将步骤（e)中产生的载体置于适当的宿主表达系统中； (g) 收获轮状病毒多肽；和 (h) 添加任何另外的疫苗组分，从而产生疫苗组合物。
9. 权利要求8的方法，其中所述另外的组分选自佐剂、载体、稀释剂和与除轮状病毒外 的病原体相关的抗原。
10. 权利要求9的方法，其中所述另外的组分为TRIGEN或ULTRAGEN。
11. 权利要求9的方法，其中所述另外的组分为能够在猪中引发抗肺炎支原体、PCV2、 PRRSV、SIV或其它病原体的免疫反应的抗原，所述其它病原体能够感染猪并引起疾病或对 疾病的易感性。
12. -种接种动物的方法，包括权利要求1至7中任一项的组合物或载体的至少一次施 用。
13. 权利要求12的方法，其中所述动物是猪。
14. 权利要求13的方法，其中所述猪是分娩前约3周至约6周的母猪。
15. 权利要求12的方法，其中所得的猪崽相较于来自未接种的母猪的猪崽具有降低的 发病率和/或死亡率。
【文档编号】A61K39/15GK104203274SQ201380015512
【公开日】2014年12月10日 申请日期:2013年2月14日 优先权日:2012年2月14日
【发明者】R·F·柏, R·R·西蒙逊, K·R·斯里吉雷迪, B·M·豪瑟 申请人:梅里亚有限公司