金属硫蛋白作为制备穴位介入治疗二型糖尿病及其并发症药物的应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种金属硫蛋白作为制备穴位介入治疗二型糖尿病及其并发症药物的应用。所述金属硫蛋白为纯度大于95％的冻干粉兔肝金属硫蛋白。金属硫蛋白(MT)作为强抗氧化剂和金属离子缓冲剂应用于治疗治疗二型糖尿病及其并发症方面；是通过清除体内及病灶垃圾(清除自由基，消除靶细胞对胰岛素的抵抗或免疫作用的物质，实现体内胰岛素对靶细胞的指令信号畅通，修复损伤的DNA，提升体液PH值，恢复细胞对葡萄糖的正常胞饮功能)。对整体器官组织的代谢改善非常显著，既治愈了疾病，又能明显消除或减轻并发症。对提高中医在治二型糖尿病及其并发症的地位，将起到巨大的社会效应和经济效益。
【专利说明】金属硫蛋白作为制备穴位介入治疗二型糖尿病及其并发症 药物的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于金属硫蛋白医药用途领域，具体地说是一种金属硫蛋白作为制备穴位 介入治疗二型糖尿病及其并发症药物的应用。
【背景技术】
[0002] 目前在治疗二型糖尿病及其并发症方面，西医采用口服降糖药物以非胰岛素类药 物为主，分为非胰岛素类促胰岛素分泌剂类、双胍类、α -糖苷酶抑制剂类、胰岛素增敏剂 类。不良反应；降糖药共同的严重副作用为低血糖。α-糖苷酶抑制剂、双胍类及胰岛素增 收剂单独使用一般不会引起低血糖，但与其他药物连用时仍可能发生。患者用药期间出现 强烈空腹感、出冷汗、全身无力、心悸、手脚发抖、眼睛发花、头疼和发呆等现象，应立即服用 葡萄糖或含葡萄糖饮料。
[0003] 现代药理研究证明，很多单味中药具有降糖作用。但中医药治疗二型糖尿病，与治 疗其他疾病一样，其特点是重视患者的个体差异性和复方的使用。中医药治疗二型糖尿病 不仅在于降低血糖，更重要的是注重防治糖尿病并发症，起到提高生活质量和延长寿命的 作用。其缺点是抓取，煎煮，服法不便。
[0004] 目前传统疗法治疗糖尿病不论中药或西药，都是终生服药来控制血糖。
【发明内容】
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[0005] 所要解决的技术问题：本发明目的是提供一种金属硫蛋白的新用途，即在作为制 备穴位介入治疗二型糖尿病及其并发症药物的应用。
[0006] 技术方案：
[0007] -种金属硫蛋白作为制备穴位介入治疗二型糖尿病及其并发症药物的应用。所述 金属硫蛋白为纯度大于95 %的冻干粉兔肝金属硫蛋白。
[0008] 本发明有益效果如下；
[0009] 本发明采用金属硫蛋白（MT)介入人体穴位内能直接吸收并发挥其生理作，在治 疗二型糖尿病及其并发症中，是通过清除体内及病灶垃圾（清除自由基，消除靶细胞对胰 岛素的抵抗或免疫作用的物质，实现体内胰岛素对靶细胞的指令信号畅通，修复损伤的 DNA，提升体液PH值，恢复细胞对葡萄糖的正常胞饮功能，），为细胞提供良好的洁净的最适 生理环境，分化年轻细胞，使体内腺体组织得于修复活化，分泌生理所需量的生理物质；如； 酶类及激素类等，金属硫蛋白（MT)参与体内微量金属元素的运输、储存和代谢，使人体内 金属元素的重新分配，对体内重金属元素铅，汞，镉，铜等有强力清除力，对治疗二型糖尿病 及其并发症起着重要的作用，使人体代谢处于动态平衡来实现的。
[0010] 细胞是组成人体最基本的单位，一切生命活动都在细胞之间完成，能量的供给最 终是为细胞服务；只有健康的细胞；人体才能发挥正常的生理功能。人体在生命活动过程 中；不断地进行新陈代谢，在代谢过程中不断产生代谢产物（垃圾）。代谢产物存在于细胞 间质之间，如得不到及时的清除则成为内毒素不断攻击健康细胞。致使细胞脂质过氧化而 成病态，直接影响细胞对葡萄糖的正常胞饮功能。值得指出的是；体内积蓄过多代谢产物及 过量重金属元素是导致体液PH值降低的因素（据研究表明；体液PH值每降低或升高0. 1 时，靶细胞对胰岛素的利用率降低或升高28%)，也是影响胰岛素对靶细胞敏感度的原因。
[0011] 金属硫蛋白（MT)从上世纪50年代发现至今，越来越多的科学家被奇特的MT吸 弓丨，对MT的结构，性质，生理功能及其在生物，医学，环境等方面的应用进行了广泛的研究， 目前金属硫蛋白（MT)在世界上召开过五次国际研讨会议。
[0012] 发明人从事临床医学三十余年，对金属硫蛋白（MT)的临床应用已有十余年，自 2003年起把金属硫蛋白（MT)作为强抗氧化剂（自由基清除剂）和金属离子缓冲剂应用于 治疗二型糖尿病及其并发症至今，收到非常理想的治疗效果。清除体内自由基（消除靶细 胞对胰岛素产生抵抗或免疫的介质，恢复细胞对葡萄糖的胞饮功能，从而改善糖代谢，体内 血糖降至正常值），疗效已超过传统治疗标淮，金属硫蛋（MT)无毒，无不良反应，金属硫蛋 (MT)穴位介入比任何中西药制剂的穴位介入都安全。因此，为尽快解除广大患者的疾苦，得 于临床普及应用。
[0013] 金属硫蛋白（Metallothionein，简称（MT)是一类低分子量、富含半胱氨酸的金属 结合蛋白。1957年Margoshes. M和Vallee. B.L[1]首次从马肾中分离出该物质，当时并未 引起重视，直到80年代之后，逐步发现其具有多种重要的生物学功能，才引起科学家们的 重视。现已发现（MT)同时存在于所有的生物体中，包括哺乳动物、各种低等动物、植物和微 生物中，从广义上讲，金属硫蛋白和其类似物可分为三大类：第一类即人，哺乳动物的具有 全部金属硫蛋白结构和特性的。第二类存在于较低等动、植物和微生物中的类似金属硫蛋 白。第三种广泛地存在于低等植物中的根部，实为谷胱甘肽类聚合物。第一类也就是真正 的金属硫蛋白的生物功能的效果最强，尤其是人，其次是各种哺乳动物。目前市场上销售的 多为兔肝金属硫蛋白，它主要有两种异构体，分别称之为MT- I与MT- II，它们共有非常相 似的结构与功能，只有十分微小的差异，可作为化妆品、营养保健品添加剂，可以不必将它 们彼此分开。当然从猪、牛、羊等哺乳动物肝脏中也可制得兔肝类似（MT)，但由于其中对兔 肝（MT)研究得最深，且易获得，所以还是使用兔肝（MT)比较安全可靠。
[0014] 兔肝MT与其它哺乳动物（MT) -样，是由68个氨基酸构成的一个单肽链蛋白质分 子，分子量约为6500,分子中富含7个二价金属，主要为锌，其次为铜，钴等，在有毒环境下 也会含有毒重金属如汞、镉、铅等。它也能与一价金属如一价铜、金、银结合。在正常体内主 要为锌，少量的铜，钴等，其分子最大特点是富含半胱氨酸，即占全部氨基酸中约30 % (即 20个左右），最有意思的是它们在分子中都是以金属一巯基簇形式存在，使整个分子结构 十分紧密和牢固，稳定。在金属存在下，它可以有效地拮抗高温和蛋白酶对其的分解。但在 酸性条件下极不稳定，在PH4.0以下，就易脱掉金属，暴露自由巯基而使整个分子松驰（变 性态），此时易受蛋白酶的攻击而被降解，导致生物活性的丧失。所以（MT)不能口服，否则 易被胃液所破坏导致失效，因此，制成肠溶衣胶囊不失为一种有效的方法，但它一进入肠道 就不易再被蛋白酶所破坏，人体对（MT)吸收最有效的途径是舌下或皮下粘膜。
[0015] 金属硫蛋白是一种诱导蛋白，在体内主要由肝脏合成，通常情况下含量甚微，但当 受环境刺激下，诸如锌和重金属，烷基化试剂，某些细胞因子（如干扰素，白介素…）和细 菌，病毒的侵入，也可因在对机体严重不利的情况下（诸如极度寒冷，高温，紧张，危急，饥 饿等）会加速其体内的生物合成，所以这也可被看作是机体的一种自卫手段
[0016] 金属硫蛋白（MT)具有多种生物学作用：
[0017] (1)参与体内微量金属兀素（Zn, Cu, Co等）的运输、储存和代谢等。研究表明体内 很多参与新陈代谢的酶类，包括参与体内蛋白质、核酸生物合成的多种酶，参与体内能量合 成的某些酶，参与体内解毒作用的酶，以及参与体内蛋白质分子折叠（保持蛋白质的天然 构象与生物功能的蛋白质分子），以及参与体内金属代谢的蛋白质、酶类，都需要有某种一 定量的金属参与，否则就不会有生物活性和功能。类似老年人与儿童缺锌、缺铁等等都会引 起某些疾病的发生和影响健康。但如单纯补锌补微量元素，体内多数未被吸收而被排出，如 在肝脏内富有（MT)，它就可从食物中吸收和固定金属元素，贮藏下来，一旦机体需要，它就 可以将其运输和缓慢释放，起到"银行""仓库"的作用。尤其是老年人、幼儿的补锌。
[0018] (2)参与体内重金属解毒作用。目前由于环境的污染，尤其是土壤与水域中大量重 金属（如镉，汞，铅，铬等）的存在，通过食物链（粮食，蔬菜，水果，空气，饮用水…）进入体 内，严重危害人体健康，尤其是铅对儿童神经系统的破坏最为严重。由于（MT)结构的特殊 性，它能有效地将细胞内游离的有毒重金属结合（高度专一性和亲和性）而排出体外，起到 解毒作用。另外也可利用它来吸附空气、土壤和污水中重金属，改善人类生存环境（通过转 基因技术）是大有希望的。
[0019] (3)抗氧化，抗衰老作用及护肝作用。通过我们多年分子、细胞和整体动物水平研 究发现，它是自然界抗氧化、抗衰老的最有效的生物活性物质之一。在细胞内发现它具有大 幅度地提高抗氧化活性物质谷胱甘肽、谷胱甘肽过氧化物酶，SOD等的含量，反之，却能降低 氧化作用产物如肝脏脂质过氧化物，心肌脂褐素的含量。通过抗小鼠 D-半乳糖拟老化（衰 老）效应模型试验结果发现（MT)可明显改善小鼠的学习记忆能力，降低MDA(丙二醛，一种 致癌促衰老化学物质）的含量及提高SOD活性，说明（MT)对D-半乳糖的致衰老效应有很 好的对抗作用。同时还发现（MT)对D-半乳糖诱导果蝇寿命缩短具有保护作用（延缓寿命 1/10)，其它诸如抗静态缺氧效应，对小鼠尾静脉栓子LD50的影响，对大鼠脑多发性栓塞致 死效应的影响以及对小鼠脑栓塞记忆功能衰退的影响等都显示出良好的抗衰老作用。
[0020] (4)参与抗辐射，保护机体，尤其是细胞核，DNA的辐射受损进行修复。实验证明， 它不单可修复受损细胞DNA，而且还可预防，效果显著，它能提高因辐射而引起的淋巴细胞、 白细胞的下降，且呈量效关系，高剂量的（MT)可以抵御高剂量的辐射，同样动物因辐射的 死亡率也大大下降，提高了存活率和存活时间。因而（MT)明显地具有提高机体抵抗放射性 辐射的能力，由此可见可被用于预防辐射损伤的诸行业人员的劳保和预防，也可用于肿瘤 病人放疗中的保护。
[0021] (5)清除自由基，尤其是羟基自由基。经研究发现，（MT)具有很强的清除自由基能 力，值得注意的是它尤其对危害人类健康最甚的羟基自由基，远远强于S0D，是目前最强的 天然产物。这与上述（MT)具有强抗氧化作用是一致的，可用于抗肿瘤、糖尿病、心血管疾病 及神经退行性病变（如老年性痴呆症等）的改善和缓解。有关（MT)对这些老年性疾病的 关系，尚在进行研究，将有可能成为这方面的医药产品（目前尚无医药产品）。
[0022] (6)促进细胞生长，机体发育和能量代谢等。这很显然与（MT)本身的结构与功能 有关。由于它是体内多种参与代谢的蛋白质、酶的活性必须成份一微量金属元素的供应者 和运输者，由它才能调节体内物质的新陈代谢，包括能量代谢与细胞的生长、分化。另外又 据近来利用蛋白质组学技术的研究，发现它还能抑制细胞凋亡和促进蛋白质正确折叠（使 具有正常的生物学功能）和抗氧化作用，即抗衰老作用。因而可以判断（MT)将可发展成为 营养保健，抗衰老和治疗药物。
[0023] 目前在国内外，有关（MT)的研究主要已涉及医学和环保，尤其是老年性疾病。但 是，金属硫蛋白（MT)在用于治疗二型糖尿病及其并发症尚无这方面的应用报道。
[0024] 技术来源和先进性：本技术来自北京大学生命科学学院以茹炳根教授领导的蛋白 质课题组，其MT研究处于国际领先地位，先后获得七五、八五、九五国家科委的国家攻关项 目，七五、八五、九五的[863]项目，和国家自然科学基金多项。1995年5月获国家教委科技 进步一等奖，1999年5月通过了国家教育部组织的产业化技术鉴定，2001年和2004年又分 别获中国高校科学技术二等奖（2个）。其中兔肝金属硫蛋白产品已为国家九五攻关产品。 受国际组织委托，由北京大学茹炳根教授主持在2005年10月在北京胜利召开了第五届金 属硫蛋白国际会议。
[0025] 金属硫蛋白（MT)在治疗疾病过程中，虽局部穴位介入，但对整体器官组织的代谢 改善非常显著。金属硫蛋白（MT)使用一个细胞周（90天使用MT150mg至300mg)后，体内 环境空前洁净，既治愈了疾病，患者又显得明显的年轻化。金属硫蛋白（MT)是自然界抗氧 化、抗衰老的最有效的生物活性物质，是目前最理想的细胞保护剂之一。
[0026] 金属硫蛋白（MT)是目前最理想的极强的抗氧化剂，对人体全身各组织器官的代 谢性疾病有显著疗效。也是对二型糖尿病及其并发症治疗的首选的理想制剂。
【具体实施方式】
[0027] 二型糖尿病及其并发症穴位介入治疗：
[0028] 金属硫蛋白（MT)为通过特殊的诱导技术处理后的兔肝为原料，经分离、纯化，制 得纯度大于95%的冻干粉的兔肝金属硫蛋白，可以在市场上选购。
[0029] 兔肝金属硫蛋白（MT)溶剂：灭菌注射用水。
[0030] 兔肝金属硫蛋白（MT)冻干粉与溶剂稀释配比：5-10mg/ml。（每毫升溶液中含5-10 晕克金属硫蛋白）。
[0031] 取穴方法；按三消症取穴；
[0032] 主穴；胰俞，辅穴，上消肺俞，合谷，照海，
[0033] 主穴；胰俞，辅穴，中消脾俞，足三里，中脘。
[0034] 主穴；胰俞，辅穴，下消肾俞，关元，三阴交。
[0035] 用法：
[0036] A、用2_5ml -次性注射器吸取金属硫蛋白（MT)稀释液。
[0037] B、斜刺深至0. 5寸行针至气至，退至皮下介入0. 25-10mg，（即金属硫蛋白冻干粉 稀释后的溶液〇. 5-2ml)至覆盖穴位。
[0038] 用量：
[0039] 一个疗程90天。分15次穴位介入：前5次，1次/3天；后10次，1次/7天，10-20mg/ 次。一般一至三个大疗程即可治愈。
[0040] 发明人把金属硫蛋白（MT)应用于二型糖尿病及其并发症对照治疗66例，随访到 58例，治疗效果如下。
[0041] 临床资料：
[0042] 1、一般资料：本组58例患者，为2003年01月?2010年10月治疗，病例入选标 准：选择临床符合（WHO)二型糖尿病诊断标准。男32例，女26例；年龄30?81岁，平均 52岁；病程最短1年，最长19年，平均3年。均排除有严重的心、脑、肾疾病，无感染、手术、 妊娠等应激情况。
[0043] 2、研究方法：用随机数字表将患者随机分为治疗组和对照组，每组各29例患者， 两组均给予相同的基础治疗（心理，饮食，运动等）口服优降糖，治疗组在此基础上用金属 硫蛋白（MT)穴位介入，对照组口服优降糖，两组年龄、性别、病程等一般资料比较，差异无 统计学意义（P > 〇. 05)，可以进行组间比较。
[0044] 其中；治疗组29例，男性17例，女性12例；年龄19?70岁，平均51. 75岁；病 程1?7年，平均3. 15年；合并冠心病者5例，合并白内障者4例，合并糖尿病肾病者6 例，合并自主神经病变者5例，合并对称性周围神经病变者9例。
[0045] 对照组29例，男性15例，女性14例。年龄25?68岁，平均52. 25岁；病程 2?10年，平均4. 12年；合并冠心病4例，合并白内障6例，合并对称性周围神经病变 10例，合并自主神经病变9例。
[0046] 诊断与病例选择标准：
[0047] (1)诊断与分型标准；糖尿病根据世界卫生组织（WHO)二糖尿病专家委员会1999 年颁布的糖尿病新诊断和分型标准进行诊断和分型。中医辨证分型标准参照中医药学会内 科学会消渴病专业委员会1992年提出的消渴病辨证诊断参考标准进行辨证与分型。
[0048] (2)病例入选标准；选择临床符合（WHO)二型糖尿病诊断标准，并经中医辨证属 肺，脾，肾虚亏损，痰湿瘀血阻滞之患者为观察对象。
[0049] 本资料58例患者，全部符合上述诊断与辨证分型标准。
[0050] 临床表现及实验室检查：
[0051] (1)治疗组；收治时空腹血糖（FPG) 7. 15?11. llmmol/L者10例，11. 12? 13. 19mmol/L 者 15 例，14. lOmmol/L 以上者 4 例。
[0052] (2)对照组；收治时空腹血糖（FPG) 7. 13?11. llmmol/L 11例，11. 12? 13. 19mmol/L 13 例，大于 14. 10mmol/L 5 例。
[0053] 血压：
[0054] (1)治疗组；收治时；130 ?139/80 ?89mmHg 6 例，140 ?149/90 ?95mmHg，13 例，小于 130/80mmHg 10 例。
[0055] (2)对照组；收治时；130 ?139/80 ?89mmHg 11 例，140 ?149/90 ?95mmHg，10 例，小于 130/80mmHg 8 例。
[0056] 3、治疗方法：两组均首先进行饮食控制、运动锻炼等基础治疗上加用优降糖（格 列本脲片），一大疗程均为3个月。
[0057] 治疗组在上述基础上加用金属硫蛋白（MT)穴位介入（取穴标准；按中医消渴病辨 证诊断；上，中，下三消取穴，用量：一个疗程90天。分15次穴位介入：前5次，1次/3d ;后 10次，！次/7d，10-20mg/次。优降糖于餐前30min 口服，具体为：病情较轻者I. 25mg/次， 中度病情者2. 5mg/次，病情较重者3. 75mg/次，均为口服，2次/d。笫一个月为笫一疗程， 优降糖按上述用2次/d，笫二个月为笫二疗程，优降糖按上述用1次/d，笫三个月为笫三疗 程，停服所有降糖药，单用金属硫蛋白（MT)穴位介入，一大疗程为3个月。
[0058] 对照组用优降糖，于餐前30min 口服，具体为：病情较轻者I. 25mg/次，中度病情者 2. 5mg/次，病情较重者3. 75mg/次，均为口服，2次/d。一大疗程为3个月。
[0059] 4、统计学分析：建立FOXPRO数据库，用SAS6. 12软件进行数据分析，统计学方法用 t检验和X 2检验。P〈0. 05为差异有统计学意义。
[0060] 5 ;治疗结果：
[0061] 疗效比较：采用以下疗效评价标准：显效：治疗后空腹血糖下降>2. 8mmol/L，餐后 2h血糖下降>4. 5mmol/L，有效：治疗后空腹血糖下降I. 1?2. 8mmol/L，餐后2h血糖下降 2. 2?4. 5mmol/L ;无效：治疗后空腹血糖下降〈1. lmmol/L，餐后2h血糖下降〈1. 7mmol/L， 或加重。治疗总有效率=(显效例数+有效例数）/总例数X100%。两组治疗2个月疗效 比较；
[0062] 表1 ;治疗2个月治疗组与对照组患者空腹及餐后2h血糖下降疗效比较（例）
[0063]
【权利要求】
1. 一种金属硫蛋白作为制备穴位介入治疗二型糖尿病及其并发症药物的应用。
2. 根据权利要求1所述的一种金属硫蛋白作为制备穴位介入治疗二型糖尿病及其并 发症药物的应用，其特征在于：所述金属硫蛋白为纯度大于95%的冻干粉兔肝金属硫蛋 白。
【文档编号】A61P3/10GK104288755SQ201410577320
【公开日】2015年1月21日 申请日期:2014年10月24日 优先权日:2014年10月24日
【发明者】刘添如, 刘星成 申请人:刘添如, 刘星成