本发明属于药物制剂领域，特别涉及一种祛斑组合物及其制剂和制法。
背景技术：
在大部分国人的审美观中，肤色白皙是美的标准，然而在日常生活中，我们的皮肤却由于受到各种因素的影响，产生色素沉积从而在皮肤表层显现出来，形成色斑。由于形成原因及自身皮肤性质的不同，色斑分为很多种，常见的有黄褐斑、黑斑、妊娠斑、咖啡斑、晒斑或血素斑等。目前美白祛斑的产品很多，但是大部分产品是采用激素类药物和化学合成药物制成，有些产品甚至含有对人体有害的重金属成分，长期使用会使皮肤受到不同程度的刺激和损伤，导致皮肤老化和皱纹的产生。有些产品则在使用效果上只起到遮盖作用，无消除色斑效果，长期使用会另皮肤干枯粗糙，毛孔粗大。有些快速物理祛斑方法，例如祛斑水、激光祛斑等，风险较大，甚至有毁容的可能性，而且极易反弹。
中医理论认为，色斑的发生，肝郁、脾湿、肾亏是因，气血瘀阻、肌肤失养是果。色斑与内分泌失调、气血不足、中交凝结、肾虚脾虚有着密切的关系。主要表现为：一是人体内部机能衰退、内分泌失调，招致体内“气血淤阻”，导致黑色素堆积，形成色斑；二是气血不足，长时间熬夜、过多的消耗了身体的气血、而易于长斑；三是脾虚，脾主肌肉、脾虚则会出现皮肤松弛、暗黄、长斑，四是 肾虚，肾虚易导致卵巢的早衰，从而直接导致斑点和妇科疾病的产生。成功祛斑必需内调外养，且要注重个人安全，不能对人体造成任何伤害。中医药物祛斑就是在中医理论的指导下，运用中药调理脏腑、平衡阴阳，以达到祛斑目的的治疗方法。
目前，越来越多的人采用中药治疗色斑，采用的中药种类和制备方法都不相同。例如公开号为CN1943551的中国专利申请公开了一种治疗和预防黄褐斑的外用药物及祛斑增白美容组合物。该组合物以血竭、三七、川芎、杏仁、桃仁、薏苡仁、当归、川芎、牵牛子、白芷、白附子、丝瓜络、白僵蚕、白蔹、黄芩、珍珠粉制备而成，适用于气血瘀滞、肌肤失养所致的黄褐斑。公开号为CN101342318的发明专利申请涉及一种养血调经祛斑的药物组合物及其制备方法，该药物组合物由如下重量的原料药制成：黄芪、菟丝子、墨旱莲、女贞子、当归、白芍、何首乌、地黄、熟地黄、桃仁、柴胡、阿胶、手参、红花和淀粉。上述发明中使用的药材种类繁多，制备步骤复杂。公开号为CN102648955的中国专利申请公开了一种美白祛斑养颜方，由白芍、柏树、阿胶、白茯苓、核桃仁、蜂蜜等原料制备而成，使用不气血虚汗导致的皮肤粗糙、萎黄及黄褐斑等症状；发明专利CN101485786公开了一种美白祛斑组合物，由代代花、白芷、茯苓、枸杞和桃仁按照一定比例制备而成，主要用于治疗黄褐斑。
技术实现要素：
本发明的特征在于提供一种祛斑组合物,以及其制剂和制备该组合物的方法。按照科学的配伍，利用多种中草药的活性成分相互协同作用，使本发明所提供的组合物对黄褐斑、黑斑、晒斑、血素斑和咖啡斑等各种斑均有较好疗效，且对人体无任何毒副作用。
为实现上述目的，本发明具体技术方案如下：
一种祛斑组合物，主要由下列重量份的原料经加工制备而成：
本发明有益效果：发明采用多种纯天然药材进行精心研制而成，药食同源，安全绿色，对身体无毒副作用；各组分相互协同，活血化瘀、疏肝理气、健脾补肾，从根源上解决色斑问题，不复发；同时调节身体新陈代谢，起到排毒养颜的功效，对黄褐斑、黑斑、晒斑、血素斑和咖啡斑等各种斑均有意想不到的较好疗效。经试验证实本发明所述的祛斑组合物对酪氨酸酶具有显著的抑制作用的同时又能阻断自由基对皮肤组织造成的损伤，应用于外用药上，可发挥消除色斑，减轻和抑制皮肤色素沉积等作用。
优选，制备所述组合物所用原料的重量份数为：
为了增强生物利用度及提高使用方便性，本发明将所述祛斑组合物与药学上可接受的辅料按照1:1-3的重量份数比制成膏剂，所述辅料主要为蜂蜜。
所述膏剂利用蜂蜜自身抗氧化性及粘性，制成浸膏，不添加其他辅料，对人体无毒无害。
进一步本发明提供了所述祛斑膏剂的制备方法，该方法包括如下步骤：
1)称取处方量的山楂、葛根、陈皮、枳椇子和代代花，洗净晾干，研磨成粗粉后加入原料总重量4-6倍的乙醇浸泡3-5h,然后回流2-3h,过滤收集提取液；向残渣中加入原料总重量4-6倍的去离子水，大火煎熬2-4h，过滤收集煎液，将第一次的提取液和第二次的煎液合并，减压浓缩至相对密度为1.05-1.08，得到浓缩液备用；
2)称取处方量的黑桑葚洗净凉干，用破碎机将果实破碎收集渣汁备用；
3)称取处方量的桃仁和茯苓，研磨成细粉备用；
4)称取处方量蜂蜜置于锅中，小火慢熬，熬制锅内泡沫颜色介于黄色与红色之间的颜色时，加入阿胶、步骤1)所得的浓缩液、黑桑葚渣汁和步骤3)制得的细粉，小火熬制的同时搅拌均匀，晾凉后制成膏剂。
进一步优选，所述膏剂的辅料还包括如下重量份数的成分：液体石蜡65-75、抗氧剂0.03-0.1、乳化剂12-20和吸收促进剂0.08-0.2。
优选，所述抗氧剂是质量比为3:1的丁基羟基茴香醚和麦芽糖的混合物；所述乳化剂是质量比为4:1的单硬脂酸甘油酯和失水山梨醇单油酸酯的混合物；所述吸收促进剂是质量比为1:1的山奈酚-3-葡萄糖苷和吐温65的混合物。
将所述祛斑组合物与上述辅料制成的膏剂，延长使用时间，携带及使用更加便利；同时，所述吸收促进剂能够促进皮肤对有效成分的吸收，大大提高组合物的生物利用度；与内服膏剂协同作用，增强疗效。
另外，本发明还提供所述组合物及其制剂的用途，其用于制备治 疗黄褐斑、黑斑、晒斑、血素斑、咖啡斑的药物中的应用。
本发明所述的祛斑组合物采用多种纯天然药材进行精心研制而成，药食同源，安全绿色，对身体无毒副作用；各组分相互协同，活血化瘀、疏肝理气、健脾补肾，从根源上解决色斑问题，不复发；同时调节身体新陈代谢，起到排毒养颜的功效，对黄褐斑、黑斑、晒斑、血素斑和咖啡斑等各种斑均有意想不到的较好疗效。经试验证实本发明所述的祛斑组合物对酪氨酸酶具有显著的抑制作用的同时又能阻断自由基对皮肤组织造成的损伤。利用蜂蜜自身抗氧化性及粘性，将所述祛斑组合物制成内服浸膏，不添加其他辅料，对人体无毒无害；将所述祛斑组合物与其他辅料制成外敷膏剂，与内服膏剂协同作用，增强疗效，延长使用时间，携带更加方便；同时，所述吸收促进剂能够促进皮肤对有效成分的吸收，大大提高组合物的生物利用度。
本发明药物组方参考了多种医学药典，同时辅以多年临床应用的优化，克服了禁忌组合的问题，具体选用草药的药理学基础为：
黑桑椹：性微寒，入心、肝、肾经，具有补肝益肾、滋阴养血之功效，且富含花青素，具有很强的抗氧化能力，能提高人体免疫能力、抗疲劳、抗衰老。
蜂蜜：味甘，性平；归肺、脾、大肠经；补中、润燥、止痛、解毒。
代代花：性微寒，味苦、酸，归脾、胃经；行气宽中，消食，化痰、疏肝、和胃、理气。
茯苓：味甘，性淡、平；归心、肺、胃、肾经；具有败毒抗癌、利水渗湿、健脾和胃、保肝护肝作用、改善血液循环等功效。
桃仁：味苦、甘，性平；入心、肝、大肠经；具有破血行瘀，润燥滑肠的功效，主要用于治疗经闭、癥瘕、热病蓄血、风痹、疟疾、跌打损伤、淤血肿痛、血燥便秘等症。
阿胶：一种传统的补血用药，具有补血、止血、滋阴、润燥、养血、安胎、改善睡眠、健脑益智、延缓衰老的功效。
枳椇子：鼠李科植物枳椇的带有肉质果柄的果实或种子，性甘，味酸、平，入手太阴经；具有疏肝理气、补中益气、止渴除烦、润五脏、利大小便等功效。
山楂：味酸，性温，气血并走；化瘀而不伤新血，行滞气而不伤正气，应用于肉食积滞证，泻痢腹痛、疝气痛、瘀滞腹痛胸痛、恶露不尽、痛经、吐血、便血等。现代单用本品制剂治疗心血管疾病、细菌性痢疾等均有较好疗效。
陈皮：性温，味辛、苦，入脾经、胃经、肺经；具有理气健脾、调中、燥湿、化痰的功效。味辛善散，故能开气；胃苦开泄，故能行痰；其气温平，善于通达，故能止呕、止咳，健脾和胃者。
葛根：性凉，味甘、辛；具清热、降火、排毒诸功效；葛根中的异黄酮类化合物葛根素对高血压、高血脂、高血糖和心脑血管疾病有一定疗效。
具体实施方式
实施例1
一种祛斑组合物，该组合物由下列重量份数的原料经加工制备而成：
实施例2
一种祛斑组合物，该组合物由下列重量份数的原料经加工制备而成：
实施例3
一种祛斑组合物，该组合物由下列重量份数的原料经加工制备而成：
制备方法：
1)称取处方量的山楂、葛根、陈皮、枳椇子和代代花，洗净晾干，研磨成粗粉后加入原料总重量4倍的乙醇浸泡5h,然后回流3h,过滤收集提取液；向残渣中加入原料总重量6倍的去离子水，大火煎熬2h，过滤收集煎液，将第一次的提取液和第二次的煎液合并，减压浓缩至相对密度为1.05-1.08，得到浓缩液后喷雾干燥，得到细粉备用；
2)称取处方量的黑桑葚洗净凉干，用破碎机将果实破碎收集渣汁备用；
3)称取处方量的桃仁、阿胶和茯苓，研磨成细粉备用；
4)将步骤1)的到的细粉、步骤2)得到的渣汁和步骤3)得到的细粉混合均匀，得到所述祛斑组合物。
实施例4膏剂
一种祛斑膏剂，由下列重量份的原料经加工制备而成：
制备方法：
1)称取处方量的山楂、葛根、陈皮、枳椇子和代代花，洗净晾干，研磨成粗粉后加入原料总重量6倍的乙醇浸泡3h,然后回流2h,过滤收集提取液；向残渣中加入原料总重量4倍的去离子水，大火煎熬4h，过滤收集煎液，将第一次的提取液和第二次的煎液合并，减压浓缩至相对密度为1.05-1.08，得到浓缩液备用；
2)称取处方量的黑桑葚洗净凉干，用破碎机将果实破碎收集渣汁备用；
3)称取处方量的桃仁和茯苓，研磨成细粉备用；
4)称取处方量蜂蜜置于锅中，小火慢熬，熬制锅内泡沫颜色介于黄色与红色之间的颜色时，加入阿胶、步骤1)所得的浓缩液、黑桑葚渣汁和步骤3)制得的细粉，小火熬制的同时搅拌均匀，晾凉后制成膏剂。
实施例5膏剂
一种祛斑膏剂，由下列重量份的原料经加工制备而成：
制备方法：
1)称取处方量的山楂、葛根、陈皮、枳椇子和代代花，洗净晾干，研磨成粗粉后加入原料总重量5倍的乙醇浸泡4h,然后回流2.5h,过滤收集提取液；向残渣中加入原料总重量5倍的去离子水，大火煎熬3h，过滤收集煎液，将第一次的提取液和第二次的煎液合并，减压浓缩至相对密度为1.05-1.08，得到浓缩液备用；
2)称取处方量的黑桑葚洗净凉干，用破碎机将果实破碎收集渣汁备用；
3)称取处方量的桃仁和茯苓，研磨成细粉备用；
4)称取处方量蜂蜜置于锅中，小火慢熬，熬制锅内泡沫颜色介于黄色与红色之间的颜色时，加入阿胶、步骤1)所得的浓缩液、黑桑葚渣汁和步骤3)制得的细粉，小火熬制的同时搅拌均匀，晾凉后制成膏剂。
实施例6膏剂
制备方法：
1)将丁基羟基茴香醚、麦芽糖、山奈酚-3-葡萄糖苷和丙二醇充分混合，溶解于70℃的蒸馏水中；
2)将液体石蜡、单硬脂酸甘油酯和失水山梨醇单油酸酯混合，加热至70℃后，加入到步骤1)所制备的混合物中，搅拌至混合均匀，放凉制成基质备用；
2)取处方量实施例8所制备的组合物与三分之一步骤2)制成的基质研匀成糊状，然后再与剩余基质混合均匀得到膏剂。
实施例7膏剂
制备方法：按实施例6所述方法制备。
实施例8膏剂
制备方法：按实施例6所述方法制备。
实施例9膏剂
制备方法：按实施例6所述方法制备。
试验1对酪氨酸酶活性抑制作用的实验
1试验材料
1.1仪器与试剂：
AE-240电子分析天平(梅特勒-托利仪器有限公司)
UV-2401型分光光度计(日本岛津)
酪氨酸酶(Sigma产品)和L-酪氨酸购自北京中生瑞泰科技有限公司；磷酸二氢钠(分析纯)购自北京恒通化工有限公司。
1.2试验样品：本发明实施例3所制得的祛斑组合物。
1.3阳性对照药物：公开号为CN102648955的中国专利申请中公开的美白祛斑养颜组合物。
1.4 L-酪氨酸溶液(7.5mmol/L)的配制：
取0.272gL-酪氨酸，加入两滴浓盐酸，加去离子水50mL，微加热完全溶解后，用氢氧化钠水溶液调节pH值至7左右，加入去离子水定容至200mL。
1.5待测液的配制：
精确称取试验(或对照组)样品0.1g，加入20mL去离子水，分别加热至完全溶解，晾凉得到5mg/mL的待测液.
2酪氨酸酶活性抑制测定
总体反应体系为5mL，具体设计见表1。
实验时，向试管中依次加入磷酸盐缓冲溶液，待测液(包括阳性对照组液)，酶液，25℃孵育10min。然后加入底物L-酪氨酸，立即开始计时。预测反应20min时475nm波长下的吸光值。测定时，用下列公式计算待测液(包括阳性对照液)对酪氨酸酶的抑制率：
抑制率＝[(A-B)/A]×100％
其中“A”为标准对照的吸光值，“B”为待测液(或阳性对照组液)的吸光值。
表1 5mL试验体系设计
表2酪氨酸酶活性抑制测定结果
结论：由上述试验可知，本发明所提供的祛斑组合物对酪氨酸酶具有明显的抑制作用，能有效减少黑色素的产生与沉积，其对酪氨酸酶的抑制率是对照组合物的2倍，高达88.69％。
试验2 DPPH自由基(二苯代苦味脐基自由基)清除试验
1试验材料
1.1仪器与试剂：
AE-240电子分析天平(梅特勒-托利仪器有限公司)
UV-2401型分光光度计(日本岛津)
自由基(DPPH·)购自北京中生瑞泰科技有限公司；乙醇(分析纯)购自北京恒通化工有限公司。
1.2试验样品：本发明实施例3所制得的祛斑组合物。
1.3阳性对照药物：公开号为CN102648955的中国专利申请中公开的美白祛斑养颜组合物。
1.4待测液的配制：
精确称取试验(或对照组)样品，配置成浓度为10mg/mL的乙醇溶液，备用；
2 DPPH·清除率的测定
取0.1mL样品的乙醇溶液，用0.1mol/L的DPPH·乙醇溶液定容至4mL。立即混匀后室温避光放置30min，在一定时间间隔内测定在517nm处的吸光度A，直到读数稳定，并以下式计算清除率：
自由基清除率＝(1-A1/A0)×100％
其中，A1为抗氧化性物质与DPPH·反应后的吸光度；A0为加入乙醇为对照的DPPH·避光放置30min后的吸光度。
以清除DPPH自由基50％的活性物浓度(EC50)来表征自由基清除剂的功效；清除DPPH自由基活性检测结果见表3。
表3清除DPPH自由基活性检测结果
3.结论
本试验检测结果表明本发明所述的祛斑组合物具有较强的DPPH自由基清除能力，其活性优于对照试验所提供的组合物。
试验3体外透皮吸收试验
1试验材料
1.1试验动物：昆明小鼠，雄性，18-20g,北京维通利华实验动物技术有限公司提供。
1.2试验组药物：1％(质量份)质量比为1:1的山奈酚-3-葡萄糖苷和丙二醇的混合物的水溶液。
1.3阳性对组照药物：对照组1：1％(质量份)质量比为1:1的氮酮和薄荷醇的混合物的水溶液；对照组2：1％(质量份)月桂醇硫酸钠水溶液；对照组3：1％(质量份)甲基吡咯烷酮水溶液；对照组4：1％(质量份)丙二醇水溶液；对照组5：1％(质量份)水杨酸水溶液。
2试验方法
将小鼠乙醚麻醉，固定，用脱毛剂脱去腹部皮肤的毛。然后用生理盐水擦拭干净，处死后迅速剥取腹部皮肤(2cm×1cm)，去除皮下组织及脂肪，用生理盐水反复冲洗干净后检查皮肤是否有破损，无破损则置生理盐水中，4℃保存备用(1d内用完)。
首先，将摘出的皮肤(无毛小鼠)安装于保温在37℃的立式扩散池中，向接受相内填充7mL磷酸缓冲生理盐水(PBS，pH7.5)。放置1小时后，角质侧添加试样溶液1000μL。从试验开始至8小时为止是每小时采集接受相的PBS，从那之后至24小时为止是每2小时采集接受相的PBS，采集后，补充等量的PBS到接受相中。用HPLC法测定所采集 的接受相PBS中的药物浓度，将其对透过时间绘图，算出贴附面积每1cm2的24小时累积药物透过量(μg/cm2)另外，由透过速度为恒定状态时的透过曲线的斜率算出皮肤透过速度(μg/hr/cm2)。
药物的透过促进效果进行评价，药物使用本发明所述的祛斑组合物，以“桃仁”中“苦杏仁苷”作为检测成分；最大皮肤透过速度以及24小时累积药物透过量见表4。
表4体外透皮试验结果
3.结论
由试验组和对照组的对比可知，通过本发明的将山奈酚-3-葡萄糖苷和丙二醇的混合物，对本发明所述祛斑组合物的皮肤渗透性均高于常用吸收促进剂，能有效提高组合物的生物利用度，增强疗效。
临床试验
1.试验病例
试用者为女性共145例，均在年龄18-60岁之间，皮肤肉眼观察可见色斑，无任何痛痒等症状。均经确诊黄褐斑35例，血素斑25例，黑斑28例，晒斑30例，咖啡斑27例。
2.观察方法
1、色斑面积大小的变化：用标尺测量同一色褐斑受试前后的长度和宽度，计算色斑面积；
2、色斑颜色深浅的变化：按照中国科学院地理研究所设计研制，测绘出版社1992年出版的《实用标准色卡》(第一版)中的棕色(Y+M+BK即黄+品红+黑的叠色)色卡为色斑颜色深浅的判断标准：I度(15、20、5)，II度(30、40、10)，III度(40、60、15)。
3.疗效评定标准
痊愈：治疗后色斑全部消失，不产生新色斑；
显效：色斑颜色明显变浅，面积减少＞1/3，不产生新色斑；
有效：色斑颜色变浅，面积减少≤1/3，不产生新色斑；
无效：色斑颜色及面积无明显变化。
4.分组及给药
将35例黄褐斑患者随机分成治疗组18例，对照组17例；将25例血素斑患者随机分成治疗组13例，对照组12例；将28例黑斑患者随机分成治疗组15例，对照组13例；将30例晒斑患者随机分成治疗组15例，对照组15例；将27例咖啡斑患者随机分成治疗组14例，对照组13例；以上治疗组均给予本发明所述祛斑组合物制成的膏剂，对照组给予CN1491699中公开的药物配方，每天口服3次，每次3-5g(生药)，连续服用60天。
5.结果
治疗组和对照组的患者均给药60天，两组对黄褐斑、血素斑、黑斑、晒斑和咖啡斑的治疗效果比较分别见表5-9。
表5治疗组和对照组对黄褐斑治疗效果比较
表6治疗组和对照组对血素斑治疗效果比较
表7治疗组和对照组对黑斑治疗效果比较
表8治疗组和对照组对晒斑治疗效果比较
表9治疗组和对照组对咖啡斑治疗效果比较
治疗组与对照组相比较均具有显著性差异(Pa<0.01)；
6.结论
由上述临床试可知，对照组提供的组合物仅对黄褐斑治疗效果较佳。本发明所述的祛斑组合物对黄褐斑、血素斑、黑斑、晒斑和咖啡斑均有较好的疗效，有效率均在92％以上，痊愈率高达80％，且从根源去除色斑，不复发，是一种非常高效的祛斑组合物。
典型病例
张女士，20岁，脸上有咖啡斑，用过很多祛斑产品不见效果，服用本发明所述的祛斑组合物7天，面斑变淡，又用20天面斑消失，皮肤水润有光泽。
周女士，35岁，由于工作原因，长期户外日晒，导致面部很多晒斑，用过很多祛斑类的美白产品，效果甚微，内外兼用本发明所述的祛斑组合物10天后面斑变淡，继续使用30天，晒斑消失，同时皮肤变白皙、细腻光滑。
吴女士，42岁，由于生育后保养不周全，面部出现片状黄褐斑10年，内外兼用本发明所述的祛斑组合物8天后色斑变淡，继续使用30天，黄褐斑消失。
李女士，37岁，经常熬夜，面部出现黑斑，同时患有卵巢疾病，服用本发明所述的祛斑组合物14天后，面部黑斑变淡变小，继续服用60天，黑斑消失，并且卵巢疾病也得到了有效的改善。
秦女士，29岁，青春期面部痤疮较多，发炎后留下色素沉淀，导致血素斑，使用多种祛斑产品均无效，严重困扰其生活。外用兼内服本发明所述的祛斑膏10天后，色斑变淡，继续使用40天，血素斑消失，面部皮肤光滑白皙。