本发明涉及一种异甘草素或异甘草苷的新用途，特别涉及异甘草素或异甘草苷在抑制人体皮肤成纤维细胞凋亡，促进人体皮肤成纤维细胞中胶原蛋白合成中的用途，属于化妆品技术领域。
背景技术：
甘草(glycyrrhizauralensisfisch)素有“美白皇后”之称，在化妆品中的应用广泛，市场需求巨大，其不仅可以抑制酪氨酸酶、清除自由基，抑制组胺释放，从而达到美白、抗衰老、抗炎的功效，同时可以改善皮肤粗糙、缺水等问题。甘草美白在国外很多美白类化妆品专利中报道较多，多直接应用甘草提取物添加。众多宣称美白功效的化妆品中含有甘草提取物。由于甘草提取物一般颜色较深，在化妆品中用量受到限制。所以，其粗提物应用于化妆品存在很大的局限。甘草主要成分为：多糖类、三萜类、黄酮类化合物、少量生物碱、木质素、香豆素。其中报道黄酮类化合物106个，苷元73个。目前为止从甘草中分离出的化合物有甘草甜素、甘草次酸、甘草甙、光甘草定、异甘草甙、新甘草甙、新异甘草甙、甘草素、异甘草素以及甘草西定、甘草醇、异甘草醇、7-甲基香豆精、伞形花内酯等数十种化合物，光甘草定(glabridin)为国际公认甘草美白活性成分，但本发明在研究过程中发现光甘草定对黑素细胞及成纤维细胞具有毒性，且能够刺激mmps的表达，提示光甘草定作为美白成分对人体存在一定的安全隐患，因此寻找甘草中具有高安全性的，且同时具有美白及抗衰老活性的其他成分成为一种迫切的需要。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种甘草中具有高安全性的，且同时具有美白及抗衰老活性的单体成分。
为了达到上述目的，本发明采用了以下技术手段：
本发明通过对主要甘草单体(包括甘草素、异甘草素、异甘草苷、光甘草定、甘草酸以及甘草查尔酮a)在促进胶原蛋白合成、抑制mmp1mrna表达以及对细 胞的毒性等方面进行研究，结果发现虽然光甘草定(glabridin)为国际公认甘草美白活性成分，但其对成纤维细胞具有毒性，并且能够刺激mmps的表达，因此作为美白成分添加到化妆品中会对人体存在一定的安全隐患。另外两种物质，即异甘草素(isoliquiritigenin)以及异甘草苷(isoliquiritoside)，经研究证实，其对前ⅰ型胶原α1链(col1a1)以及沉默信息调节因子1(sirt1)具有显著促进作用，且可以抑制mmp1的表达，是有助于皮肤真皮层改善的物质，而且二者的细胞毒性低，安全性高，因此，异甘草素(isoliquiritigenin)以及异甘草苷(isoliquiritoside)在制备抗衰老化妆品中具有重要的应用价值。
异甘草素(isoliquiritigenin)以及异甘草苷(isoliquiritoside)的分子结构式分别如下所示：
本发明在上述研究的基础上，提出了异甘草素或异甘草苷在制备高安全性的，且具有抗衰老效果的化妆品中的用途。以及
异甘草素或异甘草苷在抑制人体皮肤成纤维细胞凋亡，促进人体皮肤成纤维细胞中胶原蛋白合成中的用途。
所述的异甘草素或异甘草苷通过提高人体皮肤成纤维细胞中前ⅰ型胶原α1链(col1a1)的表达水平、降低基质金属蛋白酶1(mmp1)的表达水平，以及促进沉默信息调节因子1(sirt1)的表达水平来抑制人体皮肤成纤维细胞凋亡，促进人体皮肤成纤维细胞中胶原蛋白合成，进而达到抗衰老的目的。
附图说明
图1为甘草单体对sirt1活性的影响。
具体实施方式
下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。
实施例1甘草单体的细胞毒性
为了确定甘草发酵液中各甘草单体的细胞毒性，本发明通过wst-1法测试了6种甘草单体对人体皮肤成纤维细胞(dermalfibroblast，nhdfs)的细胞毒性，测试结果如表1所示。
表1不同浓度的甘草活性单体对成纤维细胞毒性
实施例2甘草单体对colla1、mmp1mrna的表达的影响
1、仪器与试剂
2、试验方法
利用实时荧光定量pcr(qrt-pcr)分析法测定1型胶原蛋白和分解1型胶原的胶原蛋白酶代表基因的mrna数量的变化从而确定1型胶原蛋白和胶原蛋白酶的变化。在60mm培养板中把人体皮肤成纤维细胞(nhdf)细胞分株为3x105个/孔后，进行24小时的培养。然后，添加一定浓度样品溶液再进行24小时的培养。收获培养好的细胞后，添加1mltrizol试剂(lifetechnology)对细胞进行溶解并提取其总mrna。利用
2、试验结果
评价甘草单体对nhdf细胞col1a1和mmp1的影响是通过测定col1a1和mmp1的mrna的表达量来实现的。结果如表2。
表212h后甘草各单体对col1a1和mmp1的mrna的影响
根据上述试验进行了对异甘草素和异甘草苷不同浓度下对col1a1和mmp1的mrna的表达影响的研究，其数据结果如表3所示：
表324h后甘草各单体对col1a1和mmp1的mrna的影响
综合实验结果来看，可以判断从甘草中提取的异甘草素、异甘草苷、甘草查尔酮具有增加col1a1的功效；异甘草素、异甘草苷可降低mmp1的含量。所以，异甘草素和异甘草苷可以使col1a1增加，减少mmp1的表达，是有助于皮肤真皮层改善的物质。光甘草定在降低col1a1含量的同时增加mmp-1的表达。又因细胞毒性大，存在安全隐患。光甘草素、光甘草苷在较低浓度下，对col1a1具有显著促进作用，且可以抑制mmp1的表达，且其细胞毒性低、安全性高，在促进胶原蛋白合成、抗衰老化妆品中具有重要的应用价值。
实施例3甘草单体对sirt1活性的影响
1、仪器与试剂
2、试验方法
为了测定甘草活性单体在抗衰老领域的应用前景，对各单体在促进不老基因(sirt1)活性方面进行了分析。
沉默信息调节因子1(silentinformationregulatortype1,sirt1)是nad+依赖性的脱乙酰基酶，俗称为不老基因，是第一个被发现的哺乳动物中sirtuin蛋白家族成员。sirt1是哺乳动物延缓衰老、延长寿命的关键分子，可以与染色质、许多重要的转录因子及转录共调控因子相互作用,通过去乙酰化作用调节基因转录、染色体稳定性和靶蛋白活性，在细胞周期、代谢、分化等方面发挥广泛调节作用。研究表明sirt1的高表达可以抑制细胞凋亡，促进细胞外基质基因、胶原蛋白的表达。
按照使用说明书的方法，运用sit1试剂盒测定sirt1脱乙酰酶的活性。这个 方法是通过两步酶促反应来实现的。第一步，sirt1在sirt1底物的乙酰化赖氨酸侧链处反应，在脱乙酰作用过程中发生作用。第二步，根据显象剂，通过切割脱去乙酰基底物得到荧光基团，得到的荧光利用荧光光度计测定sirt1的活性。
具体实验方法为：在细胞培养基中分别加入白藜芦醇(sir1激动剂，作为阳性对照)、烟酰胺(sirt1抑制剂，作为阴性对照)、不同浓度的甘草素、异甘草素、异甘草苷、光甘草定、甘草酸、甘草查尔酮a，取细胞基质，在37℃的条件下反应30分钟。此时，通过充分的反应使净化的sirt1酶尽量接近1.5ug。加入显象剂充分混合后，以37℃反应10分钟后，使用酶标仪检测在366nm、435nm下的吸光度。
3、统计分析方法
本实验的统计处理利用excel进行了分析。为了对实验结果进行分析，在反复实验结果中使用了平均值、标准偏差、百分比等；为了分析清除细胞毒性和活性氧的机器测定结果是否为有意义的变化，使用student’st-test分析(条件：两侧分析、等方差性)。
4、试验结果
sirt1在细胞内的表达和活性受到精细的调节，现采用体外测定sirt1活性的方法，对异甘草素和异甘草苷以及其他四种甘草主要单体对sirt1活性调节变化的影响进行研究，结果如图1所示。
以上研究表明，异甘草素和异甘草苷可以实现sirt1的高表达，因此具有抑制细胞凋亡，促进细胞外基质基因以及胶原蛋白的表达的作用。