用于治疗肝衰竭的干细胞制剂及其制备方法和应用与流程

文档序号:13767283阅读:来源:国知局
技术特征:

1.一种用于治疗肝衰竭的干细胞制剂,其特征在于,包括间充质干细胞和血管内皮细胞。

2.根据权利要求1所述的用于治疗肝衰竭的干细胞制剂,其特征在于,所述干细胞制剂中,所述间充质干细胞的浓度为(4~6)×106个/ml,所述血管内皮细胞的浓度为(1~2)×106个/ml。

3.根据权利要求2所述的用于治疗肝衰竭的干细胞制剂,其特征在于,还包括干细胞因子、黄芪、岩藻多糖和Y-27632。

4.根据权利要求3所述的用于治疗肝衰竭的干细胞制剂,其特征在于,所述干细胞制剂中,

干细胞因子的浓度为10~200μg/ml、

黄芪的浓度为100mg/L~200mg/L、

岩藻多糖的浓度为1~100μg/mL、

和Y-27632的浓度为10~50μM。

5.根据权利要求4所述的用于治疗肝衰竭的干细胞制剂,其特征在于,所述干细胞制剂中,还包括质量分数为2.5~5.0%的枸橼酸钠。

6.根据权利要求5所述的用于治疗肝衰竭的干细胞制剂,其特征在于,所述干细胞制剂中,

间充质干细胞的浓度为5×106个/ml、

血管内皮细胞的浓度为1.5×106个/ml、

干细胞因子的浓度为100μg/ml、

黄芪的浓度为150mg/L、

枸橼酸钠的质量分数为3.8%、

岩藻多糖的浓度为50μg/mL、

和Y-27632的浓度为30μM。

7.一种如权利要求1~6任意一项所述的用于治疗肝衰竭的干细胞制剂的制备方法,其特征在于,

获取间充质干细胞的过程包括以下步骤:

无菌环境下,取脐带,用含有双抗的PBS溶液清洗,剪切成组织块,并用培养基湿润所述组织块;然后,添加间充质干细胞生长培养基进行培养,每2~4天更换间充质干细胞生长培养基;当细胞贴壁生长达70%以上汇合后,弃组织块,胰酶消化,待细胞间隙增大,胞质回缩,用血清终止消化,制成单细胞悬液,离心后重悬细胞,按1:2~1:3的比例进行传代培养至收获第3~5代中任一代间充质干细胞。

获取血管内皮细胞的过程包括以下步骤:

取所述第3~5代中任一代间充质干细胞,以(3~6)×105个/皿的密度接种,加入诱导培养基诱导培养至间充质干细胞转化为原代血管内皮细胞,再对所述原代血管内皮细胞进行传代扩增培养至收获第3~5代中任一代血管内皮细胞。

8.根据权利要求7所述的用于治疗肝衰竭的干细胞制剂的制备方法,其特征在于,所述诱导培养基中添加有40~60μg/L的血管内皮生长因子和5~15μg/L的人碱性成纤维生长因子。

9.根据权利要求1~6任一项所述的干细胞制剂在制备治疗肝衰竭的药物中的应用。

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