本发明属于活性物质及其制品研究开发领域，涉及一种活性油物质，特别涉及一种具有抗血栓和抗心肌缺血作用的活性油物质及其制备方法与应用。
血栓形成和血栓栓塞两种病理过程所引起的疾病，临床上称为血栓性疾病，血栓性疾病严重威胁人类生命健康，其发病率高且有渐增之势，是当代医药研究的重点。目前上市的大多数药物对血栓性疾病有一定的副作用，可导致出血、血小板减少等；心肌梗死是心血管疾患的常见病、多发病之一，急性发作时死亡率较高，在医学界引起了广泛的重视。心肌缺血(myocardial ischemia)是心脏的血液灌注减少，导致心脏的供氧减少，心肌能量代谢异常，不能支持心脏正常工作的一种病理状态，目前呈现多发趋势，市场药物繁杂并有一定副作用。
油茶果榨取的茶油为具有高食品价值的食用油；其油茶果榨取茶油后的余渣为油茶枯饼，在医药领域与健康功能维护方面的研究开发尚为空白。本研究发现油茶枯饼及同属植物油茶果中含有酚类、萜类、生物碱类等多种生物活性的化学成分，可用于血栓及心脑血管疾病的防治。本发明采用大孔吸附树脂进行富集纯化得到油茶枯饼中活性物质系列制备物组合物，并与茶油按优化比例配方组合，得到具有良好抗血栓和抗心肌缺血作用的活性油物质，可用于健康功能性制品或药物的开发。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种具有抗血栓和抗心肌缺血活性的活性油物质，本发明的另一个目的在于提供其制备方法，本发明的第三个目的在于提供其质量检测及控制方法，本发明的第四个目的在于提供油茶和茶油的一种新用途。
本发明的目的是通过如下技术方案实现的：
本发明活性/药物物质组合主要由酚类、生物碱类、萜类、氨基酸类等组成，可由化学合成、制备，植物、中药、天然药物提取制备组合制成；本发明活性/药物物质组合可由如下1组药用植物及其代用品种，包括其药用部位及非药用部位，药材及其饮片组合制成。
组1油茶(茶籽树、油茶树、白花茶)同属植物原植物、加工品(包括油茶各部位及各部位处理后的油茶饼粕)及提取制备物：油茶(原变种、植物油茶)、单籽油茶(变种)、高州油茶、狭叶油茶、茶梅、越南油茶、小叶油茶、浙江红花油茶、广宁红花油茶及华南油茶，等等。
组2茶油为油茶(茶籽树、油茶树、白花茶)同属植物原植物、加工品(包括油茶各部位及各部位处理后的油茶饼粕)及提取制备物：油茶(原变种、植物油茶)、单籽油茶(变种)、高州油茶、狭叶油茶、茶梅、越南油茶、小叶油茶、浙江红花油茶、广宁红花油茶及华南油茶等植物中压榨获得。
本发明活性/药物物质优选为以下原料制成：
油茶枯饼 10-500重量份 茶油 10-500重量份
本发明活性/药物物质制备方法包括如下步骤：
步骤1：选取上述原料油茶枯饼；
步骤2：提取；
步骤3：大孔吸附树脂纯化。
上述步骤2中，将选取原料用水或5％-90％乙醇回流提取2-5次，每次提取0.5-3小时。
上述步骤3中，将步骤2所得提取物加水分散溶解，使水溶液浓度为0.001-0.50g/mL，水溶液通过弱极性或非极性大孔吸附树脂，吸附流速为0.5-10BV/h，树脂柱径高比为1∶(2-15)，上样液浓度为0.001-0.50g/mL，收集上样流出液，然后水洗脱1-8BV，洗脱流速为0.5-10BV/h，收集洗脱液，合并上样流出液与水洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得制备物I；5-50％乙醇洗脱1-10BV，洗脱流速为0.5-10BV/h，收集洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得制备物II；50％-90％乙醇洗脱1-10BV，洗脱流速为0.5-10BV/h，收集洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得制备物III。
将以上所得活性/药物物质系列制备物按优化比例组合后，再与茶油配方组合，活性油中含主要活性物质为：酚类、萜类、生物碱类、脂肪酸类，等等。加入常规辅料，食料，香料，调料等，或作为添加物制备任意常规食品形式，或药剂学可接受的任意常规剂型，包括胶囊剂、颗粒剂、凝胶剂、缓释剂、口服液、调料油包等，可应用于食品、健康功能食品、保健食品及其调料与药物药品等健康制品的开发中。
以下对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。
实验例1本发明抗血栓作用
(一)实验材料
1.实验动物
SD大鼠，雄雌各半，体重190-220g。由北京维通利华实验动物技术有限公司提供。
2.药品与试剂
受试药：角叉菜胶(批号：C1013-25g)，sigma公司；活性油物质(由灵犀山茶油/及其枯饼制备物组成，原料由湖南润农生态茶油有限公司提供)；华法林钠片(批号：4070161KR)，齐鲁制药有限公司；试剂：生理盐水(批号：C13040602)，山东华鲁制药有限公司；水合氯醛(批号：20120720)，国药集团化学试剂有限公司。
(二)实验方法与结果
1.分组及给药方式
大鼠适应性喂养养一周后，随即分成4组，每组8只，雌雄各半，分别为空白组、模型组、阳性药组、活性油组，按成人(60kg)每天1.8g的用量，折算成大鼠为0.18g/kg/天(1∶6)给药，金纳多制成浓度0.833mg/mL，每只大鼠每天按照16.66mg灌胃给药，角叉菜胶用生理盐水制成浓度10mg/mL，每只大鼠按照一次20mg腹腔注射给药。每天给药1次，连续给药7天，第6天给药后1h后开始造模，将角叉菜胶以生理盐水制成浓度10mg/mL，每只大鼠每天按照20mg腹腔注射给药，第七天给药一小时后测定大鼠黑尾长度。
2.血栓模型试验
空白组和模型组灌胃蒸馏水，给药组灌胃药物，共7天，在第6天给药后，模型组和给药组分别腹腔注射角叉菜胶造血栓模型，第7天给药1h后，大鼠测完黑尾之后以10％水合氯醛腹腔注射麻醉，测定大鼠黑尾长度，之后腹主动脉取血，置于柠檬酸钠抗凝管，4℃，3500r/min，离心15min，分离血浆，用放免法测定血浆中TXB2和6-keto-PGF1a含量。
3.统剂方法
使用SPSS17.0统剂软件进行分析，实验结果以均数±标准误表示。采用两样本t检验和非参数检验(Mann-Whitney Test)进行两两比较，采用单因素方差分析(ANOVA)进行多组间比较，组间差异采用LSD(方差齐)或者Games-Howell法(方差不齐)。
4.实验结果
表1血栓模型药效结果
(注：数据为均值±标准偏差；**表示与模型组比较，P＜0.01，有极显著性差异；*表示与模型组比较，P＜0.05，有显著性差异，▲表示与空白组比较P＞0.05，没有显著性差异，#表示和模型组比较，P＞0.05没有显著差异)。
(三)结论
由表1可知：模型对照组大鼠TXB2值、TXB2/6-Keto-PGF1α值及黑尾长度与空白对照组有极显著性差异(P＜0.01)，说明用角叉菜胶腹腔注射给药造血栓模型成功。阳性药组指标TXB2和模型组比较，P＜0.01，有极显著性差异，阳性药组指标TXB2/6-Keto-PGF1α及黑尾长度和模型组比较，P＜0.01，有极显著性差异，并且阳性药组两指标和空白组比较，P＞0.05，没有显著差异，说明阳性药对血栓有良好的治疗作用。活性油组TXB2和模型组比较，P＜0.01，有显著性差异，指标TXB2/6-Keto-PGF1α及黑尾长度和模型组比较，P＜0.01，有极显著性差异，两指标和空白组比较，P＞0.05，没有显著差异，说明活性油对抗血栓药效作用显著。
综合实验数据分析可知：活性油可起到良好抗血栓作用。
实验例2本发明心肌缺血作用
(一)实验材料
1.实验动物
SD大鼠，雄雌各半，体重190-220g。由北京维通利华实验动物技术有限公司提供。
3.药品与试剂
受试药：复方丹参滴丸(批号：140207天士力制药集团股份有限公司)；活性油物质(由灵犀山茶油/及其枯饼制备物组成，原料由湖南润农生态茶油有限公司提供)；垂体后叶注射液(国药准字H31022259，上海第一生化药业有限公司，3U/ml)；试剂：生理盐水(批号：C13040602)，山东华鲁制药有限公司；水合氯醛(批号：20120720)，国药集团化学试剂有限公司。
(二)实验方法与结果
1.分组及给药方式
大鼠适应性喂养养一周后，随即分成4组，每组8只，雌雄各半，分别为空白组、模型组、阳性药组、活性油组，按成人(60kg)每天1.8g的用量，折算成大鼠每天为0.18g/kg(1∶6)给药，，复方丹参滴丸溶液：按临床人给药剂量(30丸/位)换算成大鼠每天给药剂量(3丸/kg)，每只舌下静脉给脑垂体后叶素按每千克体重4U舌下静脉注射垂体后叶素(3U/ml)造成急性心肌缺血模型。
2.心肌缺血模型试验
空白组和模型组灌胃蒸馏水，给药组分别灌胃各组药物，共7天，第7天给药1h后，腹腔注射10％水合氯醛麻醉，仰卧固定于手术台，按每千克体重4U舌下静脉注射垂体后叶素(3U/ml)造成急性心肌缺血模型，造模20min后，腹主动脉取血，置于促凝的真空采血管中，4℃-3500r/min离心10min，分离血清离心得血清。采用生化法检测血清中肌酸激酶(CK)与乳酸脱氢酶(LDH)的含量。
3.统剂方法
使用SPSS17.0统剂软件进行分析，实验结果以均数±标准误表示。采用两样本t检验和非参数检验(Mann-Whitney Test)进行两两比较，采用单因素方差分析(ANOVA)进行多组间比较，组间差异采用LSD(方差齐)或者Games-Howell法(方差不齐)。
4.实验结果
表2抗心肌缺血药效结果
(注：数据为均值±标准差；**表示与模型组比较P＜0.01，有极显著性差异；
*表示与模型组比较P＜0.05，有显著性差异，▲表示与模型组比较P＞0.05，没有显著性差异，#表示和空白组比较，P＞0.05没有显著差异)。
(三)结论
由表2可知：模型对照组大鼠CK值、LDH值及黑尾长度与空白对照组有极显著性差异(P＜0.01)，说明造模成功。阳性药组指标CK和LDH和模型组比较，P＜0.01，有显著性差异，并且阳性药组两指标和空白组比较，P＞0.05，没有显著差异，说明阳性药对心肌缺血有良好的治疗作用。活性油组CK和模型组比较，P＜0.05，有显著性差异，指标LDH和模型组比较，P＜0.01，有极显著性差异，两指标和空白组比较，P＞0.05，没有显著差异，说明活性油对心肌缺血药效作用显著。
综合实验数据分析可知：活性油可起到良好抗心肌缺血作用。
下述实施例均能实现上述实验例的效果。
实施例1：胶囊剂
油茶饼粕 100g 茶油 100g
取上述原料药油茶枯饼1kg，12倍量50％乙醇回流提取1次，每次提取0.5小时，减压回收溶剂，得提取物，以适量水溶解，使水溶液浓度为0.067g/mL，水溶液通过弱极性或非极性大孔吸附树脂，吸附流速为3.5BV/h，树脂柱径高比为1∶6，上样液浓度为0.067/mL，收集上样流出液，然后水洗脱5BV，洗脱流速为4.5BV/h，收集洗脱液，合并上样流出液与水洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得制备物I；15％乙醇洗脱9BV，洗脱流速为4.5BV/h，收集洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得制备物II；70％乙醇洗脱5BV，洗脱流速为4.5BV/h，收集洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得制备物III，将以上所得活性/药物物质系列制备物按优化比例组合后，再与茶油配方组合，使加入常规辅料，按照常规工艺制成胶囊剂；
总酚的含量测定方法：
对照品溶液的制备
取没食子酸对照品适量，精密称定，用去离子水溶解并定容于10ml容量瓶中，摇匀即得。
标准曲线的制备
精密量取对照品溶液没食子酸溶液0.05、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35ml于10ml容量瓶中，加入1ml福林酚显色剂，摇匀后加入2ml 15％碳酸钠溶液，摇匀后用去离子水定容，室温下避光反应2h，以相应试剂为空白，在波长762nm下进行光度测定，以吸光度为纵坐标，对照品量为横坐标，绘制标准曲线。
测定法
取样品适量，精密称定，加去离子水溶解，转移至10ml棕色量瓶中，加去离子水至刻度，摇匀既得供试品溶液，精密量取供试品溶液适量，置10ml量瓶中，照标准曲线制备项下方法，自“加入1ml福林酚显色剂”起依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中没食子酸重量，计算，即得。
总生物碱含量测定方法：
对照品溶液的制备
精密取可可碱对照品适量，精密称定，加用去离子水溶解，定容于25ml容量瓶中，摇匀即得。
标准曲线的制备
精密移取对照品溶液0.2、0.3、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6ml于25ml容量瓶中，加入1ml0.01ml/L盐酸溶液，摇匀，在272nm下进行光度测量，以对照品含量(mg)为横坐标，吸光度为纵坐标建立标准曲线绘制标准曲线。
测定法
取样品适量，精密称定于25ml容量瓶中，加入4ml0.01ml/L盐酸溶液，和1ml碱式乙酸铅溶液，用水稀释至刻度，混匀，静置沉淀，过滤，取6.25ml滤液于10ml容量瓶中，加入0.1ml4.5ml/L硫酸溶液，用水定容，混匀，静置沉淀，过滤，在波长272nm处以相应试剂空白溶液作参比，测定吸光度(A)，从标准曲线上读出供试品溶液中可可碱重量，计算，即得。
总萜含量测定方法：
对照品溶液的制备
取茶皂素标准品适量，精密称定，用70％乙醇溶解并定容于10ml容量瓶中，摇匀即得。
标准曲线的制备
精密量取茶皂素标准品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8ml于具塞试管中，补足至0.8ml，均加入0.5ml香草醛溶液，于冰水中加入5ml 77％硫酸5ml，摇匀，在60摄氏度水浴中反应20min，然后在冰水中冷却10min，待溶液恢复到室温后，以相应试剂为空白，在474nm下测定吸光度，以吸光度为纵坐标，对照品量为横坐标，绘制标准曲线。
测定法
取样品适量，加70％乙醇溶解，转移至10ml量瓶中，加70％乙醇刻度，摇匀，精密量取适量，置于具塞试管中，照标准曲线制备项下方法，自“均加入0.5ml香草醛溶液”起依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中茶皂素重量，计算，即得。
实施例2：丸剂
油茶饼粕 100g 茶油 100g
取上述原料药油茶枯饼1kg，12倍量50％乙醇回流提取4次，每次提取1.2小时，减压回收溶剂，得提取物，以适量水溶解，使水溶液浓度为0.067g/mL，水溶液通过弱极性或非极性大孔吸附树脂，吸附流速为3.5BV/h，树脂柱径高比为1∶6，上样液浓度为0.067/mL，收集上样流出液，然后水洗脱5BV，洗脱流速为4.5BV/h，收集洗脱液，合并上样流出液与水洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得制备物I；15％乙醇洗脱9BV，洗脱流速为4.5BV/h，收集洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得制备物II；70％乙醇洗脱5BV，洗脱流速为4.5BV/h，收集洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得制备物III，将以上所得活性/药物物质系列制备物按优化比例组合后，再与茶油配方组合，使加入常规辅料，按照常规工艺制成丸剂；
总酚的含量测定方法：
对照品溶液的制备
取没食子酸对照品适量，精密称定，用去离子水溶解并定容于10ml容量瓶中，摇匀即得。
标准曲线的制备
精密量取对照品溶液没食子酸溶液0.05、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35ml于10ml容量瓶中，加入1ml福林酚显色剂，摇匀后加入2ml 15％碳酸钠溶液，摇匀后用去离子水定容，室温下避光反应2h，以相应试剂为空白，在波长762nm下进行光度测定，以吸光度为纵坐标，对照品量为横坐标，绘制标准曲线。
测定法
取样品适量，精密称定，加去离子水溶解，转移至10ml棕色量瓶中，加去离子水至刻度，摇匀既得供试品溶液，精密量取供试品溶液适量，置10ml量瓶中，照标准曲线制备项下方法，自“加入1ml福林酚显色剂”起依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中没食子酸重量，计算，即得。
总生物碱含量测定方法：
对照品溶液的制备
精密取可可碱对照品适量，精密称定，加用去离子水溶解，定容于25ml容量瓶中，摇匀即得。
标准曲线的制备
精密移取对照品溶液0.2、0.3、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6ml于25ml容量瓶中，加入1ml0.01ml/L盐酸溶液，摇匀，在272nm下进行光度测量，以对照品含量(mg)为横坐标，吸光度为纵坐标建立标准曲线绘制标准曲线。
测定法
取样品适量，精密称定于25ml容量瓶中，加入4ml0.01ml/L盐酸溶液，和1ml碱式乙酸铅溶液，用水稀释至刻度，混匀，静置沉淀，过滤，取6.25ml滤液于10ml容量瓶中，加入0.1ml4.5ml/L硫酸溶液，用水定容，混匀，静置沉淀，过滤，在波长272nm处以相应试剂空白溶液作参比，测定吸光度(A)，从标准曲线上读出供试品溶液中可可碱重量，计算，即得。
总萜含量测定方法：
对照品溶液的制备
取茶皂素标准品适量，精密称定，用70％乙醇溶解并定容于10ml容量瓶中，摇匀即得。
标准曲线的制备
精密量取茶皂素标准品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8ml于具塞试管中，补足至0.8ml，均加入0.5ml香草醛溶液，于冰水中加入5ml 77％硫酸5ml，摇匀，在60摄氏度水浴中反应20min，然后在冰水中冷却10min，待溶液恢复到室温后，以相应试剂为空白，在474nm下测定吸光度，以吸光度为纵坐标，对照品量为横坐标，绘制标准曲线。
测定法
取样品适量，加70％乙醇溶解，转移至10ml量瓶中，加70％乙醇刻度，摇匀，精密量取适量，置于具塞试管中，照标准曲线制备项下方法，自“均加入0.5ml香草醛溶液”起依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中茶皂素重量，计算，即得。
实施例3：软胶囊剂
油茶饼粕 100g 茶油 100g
取上述原料药油茶枯饼1kg，12倍量50％乙醇回流提取2次，每次提取1.4小时，减压回收溶剂，得提取物，以适量水溶解，使水溶液浓度为0.067g/mL，水溶液通过弱极性或非极性大孔吸附树脂，吸附流速为3.5BV/h，树脂柱径高比为1∶6，上样液浓度为0.067/mL，收集上样流出液，然后水洗脱5BV，洗脱流速为4.5BV/h，收集洗脱液，合并上样流出液与水洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得制备物I；15％乙醇洗脱9BV，洗脱流速为4.5BV/h，收集洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得制备物II；70％乙醇洗脱5BV，洗脱流速为4.5BV/h，收集洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得制备物III，将以上所得活性/药物物质系列制备物按优化比例组合后，再与茶油配方组合，使加入常规辅料，按照常规工艺制成软胶囊剂；
总酚的含量测定方法：
对照品溶液的制备
取没食子酸对照品适量，精密称定，用去离子水溶解并定容于10ml容量瓶中，摇匀即得。
标准曲线的制备
精密量取对照品溶液没食子酸溶液0.05、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35ml于10ml容量瓶中，加入1ml福林酚显色剂，摇匀后加入2ml 15％碳酸钠溶液，摇匀后用去离子水定容，室温下避光反应2h，以相应试剂为空白，在波长762nm下进行光度测定，以吸光度为纵坐标，对照品量为横坐标，绘制标准曲线。
测定法
取样品适量，精密称定，加去离子水溶解，转移至10ml棕色量瓶中，加去离子水至刻度，摇匀既得供试品溶液，精密量取供试品溶液适量，置10ml量瓶中，照标准曲线制备项下方法，自“加入1ml福林酚显色剂”起依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中没食子酸重量，计算，即得。
总生物碱含量测定方法：
对照品溶液的制备
精密取可可碱对照品适量，精密称定，加用去离子水溶解，定容于25ml容量瓶中，摇匀即得。
标准曲线的制备
精密移取对照品溶液0.2、0.3、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6ml于25ml容量瓶中，加入1ml0.01ml/L盐酸溶液，摇匀，在272nm下进行光度测量，以对照品含量(mg)为横坐标，吸光度为纵坐标建立标准曲线绘制标准曲线。
测定法
取样品适量，精密称定于25ml容量瓶中，加入4ml0.01ml/L盐酸溶液，和1ml碱式乙酸铅溶液，用水稀释至刻度，混匀，静置沉淀，过滤，取6.25ml滤液于10ml容量瓶中，加入0.1ml4.5ml/L硫酸溶液，用水定容，混匀，静置沉淀，过滤，在波长272nm处以相应试剂空白溶液作参比，测定吸光度(A)，从标准曲线上读出供试品溶液中可可碱重量，计算，即得。
总萜含量测定方法：
对照品溶液的制备
取茶皂素标准品适量，精密称定，用70％乙醇溶解并定容于10ml容量瓶中，摇匀即得。
标准曲线的制备
精密量取茶皂素标准品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8ml于具塞试管中，补足至0.8ml，均加入0.5ml香草醛溶液，于冰水中加入5ml 77％硫酸5ml，摇匀，在60摄氏度水浴中反应20min，然后在冰水中冷却10min，待溶液恢复到室温后，以相应试剂为空白，在474nm下测定吸光度，以吸光度为纵坐标，对照品量为横坐标，绘制标准曲线。
测定法
取样品适量，加70％乙醇溶解，转移至10ml量瓶中，加70％乙醇刻度，摇匀，精密量取适量，置于具塞试管中，照标准曲线制备项下方法，自“均加入0.5ml香草醛溶液”起依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中茶皂素重量，计算，即得。
实施例4：调味油包
油茶饼粕 100g 茶油 100g
取上述原料药油茶枯饼1kg，12倍量50％乙醇回流提取4次，每次提取1.4小时，减压回收溶剂，得提取物，以适量水溶解，使水溶液浓度为0.067g/mL，水溶液通过弱极性或非极性大孔吸附树脂，吸附流速为3.5BV/h，树脂柱径高比为1∶6，上样液浓度为0.067/mL，收集上样流出液，然后水洗脱5BV，洗脱流速为4.5BV/h，收集洗脱液，合并上样流出液与水洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得制备物I；15％乙醇洗脱9BV，洗脱流速为4.5BV/h，收集洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得制备物II；70％乙醇洗脱5BV，洗脱流速为4.5BV/h，收集洗脱液，回收溶剂，减压干燥，即得制备物III，将以上所得活性/药物物质系列制备物按优化比例组合后，再与茶油配方组合，使加入常规辅料，按照常规工艺制成调味油包；
总酚的含量测定方法：
对照品溶液的制备
取没食子酸对照品适量，精密称定，用去离子水溶解并定容于10ml容量瓶中，摇匀即得。
标准曲线的制备
精密量取对照品溶液没食子酸溶液0.05、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35ml于10ml容量瓶中，加入1ml福林酚显色剂，摇匀后加入2ml 15％碳酸钠溶液，摇匀后用去离子水定容，室温下避光反应2h，以相应试剂为空白，在波长762nm下进行光度测定，以吸光度为纵坐标，对照品量为横坐标，绘制标准曲线。
测定法
取样品适量，精密称定，加去离子水溶解，转移至10ml棕色量瓶中，加去离子水至刻度，摇匀既得供试品溶液，精密量取供试品溶液适量，置10ml量瓶中，照标准曲线制备项下方法，自“加入1ml福林酚显色剂”起依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中没食子酸重量，计算，即得。
总生物碱含量测定方法：
对照品溶液的制备
精密取可可碱对照品适量，精密称定，加用去离子水溶解，定容于25ml容量瓶中，摇匀即得。
标准曲线的制备
精密移取对照品溶液0.2、0.3、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6ml于25ml容量瓶中，加入1ml0.01ml/L盐酸溶液，摇匀，在272nm下进行光度测量，以对照品含量(mg)为横坐标，吸光度为纵坐标建立标准曲线绘制标准曲线。
测定法
取样品适量，精密称定于25ml容量瓶中，加入4ml0.01ml/L盐酸溶液，和1ml碱式乙酸铅溶液，用水稀释至刻度，混匀，静置沉淀，过滤，取6.25ml滤液于10ml容量瓶中，加入0.1ml4.5ml/L硫酸溶液，用水定容，混匀，静置沉淀，过滤，在波长272nm处以相应试剂空白溶液作参比，测定吸光度(A)，从标准曲线上读出供试品溶液中可可碱重量，计算，即得。
总萜含量测定方法：
对照品溶液的制备
取茶皂素标准品适量，精密称定，用70％乙醇溶解并定容于10ml容量瓶中，摇匀即得。
标准曲线的制备
精密量取茶皂素标准品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8ml于具塞试管中，补足至0.8ml，均加入0.5ml香草醛溶液，于冰水中加入5ml 77％硫酸5ml，摇匀，在60摄氏度水浴中反应20min，然后在冰水中冷却10min，待溶液恢复到室温后，以相应试剂为空白，在474nm下测定吸光度，以吸光度为纵坐标，对照品量为横坐标，绘制标准曲线。
测定法
取样品适量，加70％乙醇溶解，转移至10ml量瓶中，加70％乙醇刻度，摇匀，精密量取适量，置于具塞试管中，照标准曲线制备项下方法，自“均加入0.5ml香草醛溶液”起依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中茶皂素重量，计算，即得。