本发明属于生物医药领域，涉及萘丁美酮的新用途，具体涉及一种萘丁美酮的药物组合物及其医药用途。
背景技术：
萘丁美酮在体外有抑制多形白细胞和单核细胞向炎症组织迁移的能力，并抑制炎症渗出物种某些水解酶活性。对胃黏膜的影响小，在治疗剂量下不引起明显的胃肠道损伤，对血小板和出血时间影响甚微，故出血和溃疡发生率较低。临床用于各种急、慢性关节炎以及运动性关节炎以及运动性软组织损伤、扭伤和挫伤、术后疼痛、牙痛、痛经等。
迄今为止，尚未见萘丁美酮及其药物组合物与抗炎镇痛的相关性报道。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种萘丁美酮的药物组合物，该药物组合物中含有萘丁美酮和一种结构新颖的天然产物，萘丁美酮和该天然产物可以协同抗炎镇痛。
本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
一种萘丁美酮的药物组合物，包括萘丁美酮、化合物(Ⅰ)和药学上可以接受的载体，制备成需要的剂型；所述化合物(Ⅰ)的结构如下：
进一步地，药学上可以接受的载体包括稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体或润滑剂。
进一步地，所述剂型包括片剂、胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。
进一步地，上述化合物(Ⅰ)的制备方法，包含以下操作步骤：(a)将五味子粉碎，用70～90％乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步骤(a)中正丁醇取物用大孔树脂除杂，先用20％乙醇洗脱12个柱体积，再用80％乙醇洗脱15个柱体积，收集80％洗脱液，减压浓缩得80％乙醇洗脱浓缩物；(c)步骤(b)中80％乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为80:1、40:1、20:1和10:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；(d)步骤(c)中组分3用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为25:1、20:1和15:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；(e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为65％的甲醇水溶液等度洗脱，收集13～17个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到化合物(Ⅰ)。
进一步地，化合物(Ⅰ)的制备方法中，所述大孔树脂为D101型大孔吸附树脂。
上述萘丁美酮的药物组合物在制备抗炎镇痛的药物中的应用。
本发明的优点：
本发明提供的萘丁美酮的药物组合物含有萘丁美酮和一种结构新颖的天然产物，萘丁美酮和该天然产物单独作用时，具有抗炎镇痛作用；二者联合作用时，抗炎镇痛作用进一步提高，可开发成抗炎镇痛的药物。本发明与现有技术相比具有突出的实质性特点和显著的进步。
具体实施方式
下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
实施例1：化合物(Ⅰ)分离制备及结构确证
分离方法：(a)将五味子(2kg)粉碎，用80％乙醇热回流提取(15L×3次)，合并提取液，浓缩至无醇味(3L)，依次用石油醚(3L×3次)、乙酸乙酯(3L×3次)和水饱和的正丁醇(3L×3次)萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步骤(a)中乙酸乙酯萃取物用D101型大孔树脂除杂，先用20％乙醇洗脱12个柱体积，再用80％乙醇洗脱15个柱体积，收集80％洗脱液，减压浓缩得80％乙醇洗脱浓缩物；(c)步骤(b)中80％乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为80:1(10个柱体积)、40:1(8个柱体积)、20:1(8个柱体积)和10:1(9个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；(d)步骤(c)中组分3用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为25:1(7个柱体积)、20:1(8个柱体积)和15:1(7个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；(e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为65％的甲醇水溶液等度洗脱，收集13～17个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到化合物(Ⅰ)(HPLC归一化纯度大于98％)。。
结构确证：HR-ESI-MS显示[M+H]+为m/z 443.3081，结合核磁特征可得分子式为C28H42O4，不饱和度为8。核磁共振氢谱数据δH(ppm，CD3OD，500MHz)：H-1a(1.75，td，J＝13.6，3.8Hz)，H-1b(1.43，m)，H-2a(2.47，m)，H-2b(2.25，m)，H-4a(2.71，m)，H-4b(2.46，dd，J＝12.3，11.7Hz)，H-7(4.37，dd，J＝11.5，3.1Hz)，H-8(2.94，dd，J＝11.5，4.4Hz)，H-9(1.25，m)，H-11a(1.85，m)，H-11b(1.73，m)，H-12a(2.15，m)，H-12b(1.11，m)，H-15(5.36，s)，H-16a(2.11，ddd，J＝15.6，7.6，3.1Hz)，H-16b(1.92，m)，H-17(1.78，m)，H-18(1.02，s)，H-19(1.03，s)，H-20(2.27，m)，H-21(1.03，d，J＝6.7Hz)，H-22(5.25，dd，J＝15.3，7.8Hz)，H-23(5.23，dd，J＝15.3，7.3Hz)，H-24(1.88，m)，H-25(1.49，m)，H-26(0.86，d，J＝7.5Hz)，H-27(0.87，d，J＝7.5Hz)，H-28(0.95，d，J＝6.6Hz)；核磁共振碳谱数据δC(ppm，CD3OD，125MHz)：31.9(CH2，1-C)，36.5(CH2，2-C)，211.8(C，3-C)，46.6(CH2，4-C)，87.5(C，5-C)，198.4(C，6-C)，62.5(CH，7-C)，37.3(CH，8-C)，38.5(CH，9-C)，39.5(C，10-C)，23.5(CH2，11-C)，44.4(CH2，12-C)，47.1(C，13-C)，151.1(C，14-C)，125.8(CH，15-C)，36.3(CH2，16-C)，61.1(CH，17-C)，18.3(CH3，18-C)，19.7(CH3，19-C)，40.1(CH，20-C)，21.2(CH3，21-C)，136.7(CH，22-C)，132.9(CH，23-C)，43.8(CH，24-C)，34.1(CH，25-C)，19.8(CH3，26-C)，20.2(CH3，27-C)，18.2(CH3，28-C)。1H-NMR显示出两个单峰甲基信号[δH1.02(3H，s，Me-18)和1.03(3H，s，Me-19)]，四个双峰甲基信号[δH1.03(3H，d，J＝6.7Hz，Me-21)，0.86(3H，d，J＝7.5Hz，Me-26)，0.87(3H，d，J＝7.5Hz，Me-27)和0.95(3H，d，J＝6.6Hz，Me-28)]，三个烯属次甲基质子信号[δH5.36(1H，s，H-15)，5.25(1H，dd，J＝15.3，7.8Hz，H-22)和5.23(1H，dd，J＝15.3，7.3Hz，H-23)]以及一个含氧次甲基质子信号[δH4.37(1H，dd，J＝11.5，3.1Hz，H-7)]。该新化合物的碳谱显示出28个碳信号，包括六个甲基，六个亚甲基，十个次甲基(三个烯烃碳以及一个连氧碳)以及六个季碳(两个酮羰基碳，一个烯烃季碳以及一个含氧季碳)。综合核磁谱图数据以及高分质谱数据，该化合物可能为一个孕甾烷型的甾体类化合物。查阅文献可以推论出该化合物和已知化合物Fomentarol B具有相似的结构。比较两者核磁数据发现，两者的唯一区别在于，新化合物中失去了C-3和C-6位连氧碳信号的同时多出了两个酮羰基信号。据此，可以推测出新化合物可能为一个fomentarol B中C-3以及C-6位氧化的产物。在HMBC解析中，H-4/C-5，H-7/C-6，H-7/C-5以及H-4/C-6的相关性可以证明该化合物中的C-6位是一个酮羰基碳信号。同时，H-1/C-3，H-2/C-3，H-4/C-3之间的相关性说明C-3位是一个羰基。该化合物的相对构型是通过NOESY谱来解析的，H-7/Me-18之间的相关信号说明7-OH为α构型。随后，将该化合物在吡啶中做谱，结果发现Hax-4，Hax-7，Hax-8以及Me-19等均发生了显著的位移，这一现象更加证明了7-OH是α型的，同时也表明5-OH是α型的。该化合物侧链的绝对构型是核磁数据比较来解决的。通过比较化合物中的C-26，C-27以及C-28的核磁数据和具有(24R)-22E-或者(24S)-22E-侧链的化合物进行比较发现，新化合物C-24位的绝对构型依然是24R型的。综合氢谱、碳谱、HMBC谱和NOESY谱，以及文献关于相关类型核磁数据，可基本确定该化合物如下所示，立体构型进一步通过ECD试验确定，理论值与实验值基本一致。该化合物化学式及碳原子编号如下：
实施例2：药理作用
1、材料与方法
1.1动物
昆明种小白鼠，雌雄各半(个别实验用雄性)，体质量(20±2)g；Wistar大鼠，雄性，体质量(200±20)g，均由黑龙江中医药大学实验动物中心提供。
1.2试剂与样品
萘丁美酮购自中国药品生物制品检定所。化合物(Ⅰ)自制，制备方法见实施例1。阿司匹林肠溶片(河南新汇制药有限公司产品)；二甲苯、冰醋酸等化学试剂均为分析纯，鸡蛋清溶液为新鲜配制。
1.3仪器
自制足趾肿胀测定仪
1.4二甲苯所致小鼠耳肿胀实验
取小鼠50只，雄性，按体质量随机分为5组，每组10只，各组分别为空白对照组、阳性对照组(阿司匹林，500mg·kg-1)和萘丁美酮组(80mg·kg-1)、化合物(Ⅰ)组(80mg·kg-1)、萘丁美酮与化合物(Ⅰ)组合物组【40mg·kg-1萘丁美酮+40mg·kg-1化合物(Ⅰ)】。空白对照组灌服等量生理盐水，其余按照药物给药，灌胃给药连续3天。末次给药30min后，立即在小鼠左耳前后两面涂抹二甲苯0.05mL，1h后将小鼠脱颈椎处死，沿耳廓基线剪下左右两耳片，用6mm直径打孔器分别在同一部位打下圆耳片，称两耳重量，计算耳肿胀度。
1.5蛋清所致大鼠足肿胀实验
取大鼠50只，雄性，按体质量随机分成5组(分组同1.4)，每组10只。实验前在各鼠右后足踝关节处作标记，用容积测定法测定各鼠右后足容积两次，取平均值作为正常足容积。空白对照组灌服等量生理盐水，其余按照药物给药，连续3天，末次给药30min后每只大鼠右后足跖部皮下注射10％新鲜鸡蛋清生理盐水溶液0.1mL致炎，于致炎后2.0h测定大鼠足容积，连续2次，平均值为测定值，计算各鼠致炎前后右后足跖容积变化值、肿胀率及抑制率。
1.6醋酸所致小鼠扭体反应实验
取小鼠50只，雌雄各半，按体质量随机分为5组(分组及给药量同1.4)，每组10只，各组连续3天灌胃给药，末次给药30min后腹腔注射0.3％HAc溶液0.1mL/10g，观察注射后15min内小鼠出现扭体的次数。
1.7统计学方法
以均数±标准差表示，数据处理用SPSS13.0统计软件进行成组设计t检验。
2、实验结果
2.1对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响
肿胀程度＝每鼠左耳片质量－右耳片质量
与空白对照组比，阳性对照组小鼠耳肿胀程度显著降低(P＜0.01)；与空白对照组比，萘丁美酮组、化合物(Ⅰ)组小鼠耳肿胀程度降低(P＜0.05)；与空白对照组比，萘丁美酮组和化合物(Ⅰ)组合物组小鼠耳肿胀程度显著降低(P＜0.01)。结果见表1。
2.2对蛋清所致大鼠足肿胀的影响
肿胀率＝(致炎后足跖容积－致炎前足跖容积)/致炎前足跖容积×100％；
抑制率＝(空白对照组肿胀率－给药组肿胀率)/空白对照组肿胀率×100％。
与空白对照组比，阳性对照组大鼠足肿胀度显著降低(P＜0.01)；与空白对照组比，萘丁美酮组、化合物(Ⅰ)组大鼠足肿胀度降低(P＜0.05)；与空白对照组比，萘丁美酮组和化合物(Ⅰ)组合物组大鼠足肿胀度显著降低(P＜0.01)。结果见表1。
2.3对醋酸所致小鼠扭体反应的影响
与空白对照组比，阳性对照组小鼠扭体次数显著降低(P＜0.01)；与空白对照组比，萘丁美酮组、化合物(Ⅰ)组小鼠扭体次数降低(P＜0.05)；与空白对照组比，萘丁美酮组和化合物(Ⅰ)组合物组小鼠扭体次数显著降低(P＜0.01)。结果见表1。
表1对小鼠耳肿胀、大鼠足肿胀、小鼠扭体反应的影响
上述结果表明，萘丁美酮、化合物(Ⅰ)单独作用时，具有抗炎镇痛作用；萘丁美酮和化合物(Ⅰ)联合作用时，抗炎镇痛效果进一步提高，可以开发成抗炎镇痛药物。
实施例3：
按照重量份数计，萘丁美酮为50份和化合物(Ⅰ)为50份，药学上可以接受的载体按照配药常规手段进行配比。
上述实施例的作用在于说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明的保护范围。本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和保护范围。