本发明涉及一种刺五加总黄酮组合物及其制备方法，属于中药领域。
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：中药刺五加为五加科(Araliaceae)五加属(Acanthopanax)灌木植物刺五加(Acanthopanaxsenticosus(Rupr.etMaxim.)Harms.)的根、根茎和茎，广泛分布于亚洲的俄罗斯远东针叶林带，中国东北、河北及山西，日本和朝鲜的北方地区均有分布。在明朝李时珍《本草纲目》称刺五加，以五叶交加这良，故名五加，又名五花。五加治风湿，壮筋骨，其功良深，宁得一把五加，不用金玉满车，又“文章作酒，能成其味，以金买草，不言其贵”之说，对五加做了很高的赞誉。该药性温，味辛、微苦，无毒，入脾肾经，具补中，益精，坚精骨，强意志等功效。主要应用于脾肺气虚证、肾虚腰膝酸痛、心脾不足，失眠、健忘等症状。刺五加含有多种糖苷，为主要有效成分，还含有多糖、异秦皮定、绿原酸、芝麻素、硬脂酸、β-谷甾醇、白桦脂酸、苦杏仁苷等。因其明显的药理作用，继而被广泛应用于临床。自1950年代以来，从草本考证、资源分布、引种繁殖、生药鉴定、化学成分、生化药理、制剂生产及临床等各方面进行了有计划的研究工作，对刺五加的活性物质及其药理作用做了深入研究。近年来，更是对其做了多方位的研究，并进一步推进了刺五加在医药及其他方面的多方位多层次应用。刺五加主要化学成分有苯丙素类(木脂素类、香豆素类、苯丙酸类)、三萜类、黄酮类、含氮化合物、多糖、氨基酸等。目前研究表明刺五加总黄酮是刺五加中重要的天然活性成分，其在心脑血管疾病、消化系统类疾病以及神经系统类疾病方面具有较佳的治疗效果。目前刺五加总黄酮一般采用乙醇提取后大孔树脂分离的方法进行制备，虽然在本领域中大量非专利文献一直不断试图通过正交试验方法对刺五加总黄酮提取工艺进行优化，但是这过于专注于总黄酮的提取率，而忽略了总黄酮中具体成分变化可能对总黄酮活性可能带来的影响。例如，非专利文献刘忠英等.微波辅助提取刺五加中黄酮类化合物过程中的化学变化研究[J].高等学校化学学报,2007,28(3):431-435.公开了一种通过微波辅助提取刺五加总黄酮的方法，但从其技术方案可以看出，其仍然仅关注于总黄酮的提取率。技术实现要素：本发明的第一方面是提供一种刺五加总黄酮组合物，所述组合物中，金丝桃苷重量百分比不低于8％，槲皮素重量百分比不低于5％，并且槲皮苷重量百分比不低于5％。在本发明的一个实施方案中，所述组合物中，金丝桃苷重量百分比为8-15％，槲皮素重量百分比为5-10％，并且槲皮苷重量百分比为5-10％。在本发明进一步地实施方案中，所述组合物中，金丝桃苷重量百分比为9-12％，槲皮素重量百分比为6-8％，并且槲皮苷重量百分比为6-8％。本发明的第二方面是提供一种所述刺五加总黄酮组合物的制备方法，具体步骤如下：(1)将刺五加药材粉碎，采用70％乙醇回流提取，提取三次，过滤收集滤液，加无水乙醇至滤液乙醇浓度至95％，静置过夜，过滤收集滤液；(2)将滤液采用微滤陶瓷膜进行过滤，收集滤液；(3)将步骤2获得的滤液进行超滤膜过滤，过滤温度50℃，压力1MPa，收集滤液，减压蒸发去除溶剂，真空干燥即得刺五加总黄酮提取物。在一个实施方案中，在步骤1中，所述70％乙醇提取是指采用10倍量的70％乙醇提取15min。在另一个实施方案中，在步骤2中，所述微滤陶瓷膜孔径为0.1μm。在又一个实施方案中，在步骤3中，所述超滤膜截留分子量5000。本发明的第三方面是所述刺五加总黄酮组合物在制备治疗心脑血管疾病中的应用。本发明在研究刺五加总黄酮提取工艺的过程中，意外发现了一种刺五加总黄酮组合物，较现有技术中采用大孔树脂、微波辅助提取等手段所获得的刺五加总黄酮活性更佳。尤其是在心脑血管疾病领域，其表现出最佳的活性效果。具体实施方式还可进一步通过实施例来理解本发明，其中所述实施例说明了一些制备或使用方法。然而，要理解的是，这些实施例不限制本发明。现在已知的或进一步开发的本发明的变化被认为落入本文中描述的和以下要求保护的本发明范围之内。实施例1刺五加总黄酮组合物制备(1)将10kg刺五加药材粉碎，采用10倍量的70％乙醇回流提取15min，提取三次，过滤收集滤液，加无水乙醇至滤液乙醇浓度至95％，静置过夜，过滤收集滤液；(2)将滤液采用0.1μm陶瓷膜进行过滤，收集滤液；(3)将步骤2获得的滤液进行超滤，过滤温度50℃，压力1MPa，超滤膜截留分子量5000，收集滤液，减压蒸发去除溶剂，真空干燥即得刺五加总黄酮提取物134.3g。HPLC检测表明，所述刺五加总黄酮组合物中金丝桃苷重量百分比为10.8％，槲皮素重量百分比为7.3％，并且槲皮苷重量百分比为6.5％。实施例2刺五加总黄酮组合物对大鼠MCAO再灌注模型的脑保护作用模型制备SD大鼠，禁食过夜，自由饮水。实验当天用异氟烷气体麻醉并维持。仰卧位固定，沿颈正中线切开皮肤，暴露右侧颈总动脉，小心分离颈总动脉分叉至颅底部的血管周围的神经及筋膜，分离颈外动脉分支枕动脉、甲状腺上动脉、舌动脉和上颚上颌动脉，结扎，剪断。从颈外动脉游离端插入3#丝线(直径0.260mm)，从颈外动脉远心端将尼龙线导入到颈内动脉，插至Willis环大脑中动脉处，以有效阻断大脑中动脉，插入的尼龙线长度距颈总动脉分叉处18～20mm。然后将颈外动脉游离端连同腔内尼龙线一并结扎，以防出血。逐层缝合皮下筋膜和皮肤，肌肉注射青霉素防止感染。假手术组动物仅分离出颈内动脉。MCAO后2h小心抽出颈内动脉血管腔内的尼龙线使颈内动脉再灌注，10min后进行神经缺陷评分，有明显神经功能缺陷者(>8分)为造型成功。分组及给药具体分为假手术组、模型组及给药组。采用尾静脉输注给药的方式给药，给药体积以最大给药体积计算，即均定容成2.25ml/100g(大鼠体重)，输注时间120min，每天一次，连续3天，各给药组剂量相当于10mg/kg。假手术组和模型组给予生理盐水。神经功能缺陷评分分别于治疗前、治疗后，根据附表评分标准，采用盲法对动物进行神经功能缺陷评分，用于评价神经功能损害程度，总分为16分，分数越高，表明动物神经功能损害程度越严重。MCAO/R大鼠神经功能损害程度评分标准具体结果如下：1、神经行为学评分分组评分假手术组0模型组13.2±2.6实施例15.7±1.7**对比例19.1±2.1*对比例210.2±2.3对比例38.5±1.9*对比例1的刺五加总黄酮组合物制备方法为：用8倍量80％乙醇浸提1.5h，温度70℃，提取二次，过滤合并滤液，浓缩干燥即得。经HPLC测定，所述刺五加总黄酮组合物中金丝桃苷重量百分比为5.9％，槲皮素重量百分比为6.4％，并且槲皮苷重量百分比为3.6％。对比例2的刺五加总黄酮组合物制备方法为：以50％乙醇为溶剂，提取时间10min，料液比为120，提取压力700kPa条件下，微波提取制备。所述刺五加总黄酮组合物中金丝桃苷重量百分比为8.3％，槲皮素重量百分比为4.8％，并且槲皮苷重量百分比为5.4％。对比例3的刺五加总黄酮组合物制备方法为：10倍量80％乙醇回流提取3次，每次2h，合并提取液，减压蒸发得浸膏。将浸膏上AB-8大孔树脂，以80％乙醇洗脱，乙醇洗脱用量6BV，收集洗脱液，浓缩干燥即得。经HPLC测定，所述刺五加总黄酮组合物中金丝桃苷重量百分比为15.8％，槲皮素重量百分比为8.9％，并且槲皮苷重量百分比为6.1％。2、脑梗死范围测定实验结束后取脑，沿冠状面切成2mm厚的切片，间隔取上述一半脑片放入2％TTC染液中，避光37℃温孵10min进行染色，采用COOLPIX955数码相机成像系统将数字影象存储于计算机中，并用图象分析系统v4.0软件测量梗死区和全脑面积，计算脑梗死范围(梗死区面积占全脑面积百分比),具体结果如下：分组脑梗死面积(％)假手术组0模型组33.1±4.9实施例16.4±2.7**对比例127.8±3.6*对比例229.2±4.1对比例319.4±4.5**3.抗氧化指标测定取各组大鼠脑梗死区边缘脑组织适量，匀浆提取蛋白，然后采用ELISA试剂盒检测GSH-px和MDA含量，具体结果如下：实施例3刺五加总黄酮组合物对心肌缺血模型的保护作用动物心肌缺血模型的复制及给药方法雄性SD大鼠，体重220±50g，每组12只。具体分为假手术组、模型组及给药组。采用尾静脉输注给药的方式给药，给药体积以最大给药体积计算，即均定容成2.25ml/100g(大鼠体重)，输注时间120min，每天一次，连续3天，各给药组剂量相当于10mg/kg。假手术组和模型组给予生理盐水。在末次给药后30分钟，1％戊巴比妥钠(50mg/kg)腹腔注射麻醉，持续监测心电图变化。将心电图电极针埋在左下肢及右上肢皮下，在左心耳与肺动脉圆锥之间找到与左冠状动脉伴行的心大静脉，在左心耳下方2mm处用眼科针6-0丝线穿线，进针深度约1-1.5mm，宽约2-3mm，连同心大静脉一起结扎冠状动脉左前降支(假手术组只穿线不结扎)。心电图显示ST段显著抬高或异常Q波时；即表明急性心肌缺血造模成功。心肌缺血梗死面积百分比的测定：术后24h，将麻醉后的大鼠打开胸腔，迅速取下心脏在结扎线以下将左心室切成厚度为2mm的4-5片，放入1％TTC溶液中，在37℃水浴、避光条件下染色15min，梗死区不着色(白色)，非梗死区染成红色，按照公式1用Image-J(NIH)软件计算梗死区面积百分比。心肌梗死面积百分比(S)％＝梗死区面积/左心室总面积×100％。血清心肌酶水平的测定：术后24h，将麻醉后的大鼠打开腹腔，从腹主动脉取血5～8ml，放置1～2h，离心10min(3000rpm)，测定血清LDH和CK-MB的水平。具体结果如下：1、心肌梗死面积测定分组梗死面积(％)假手术组0模型组36.8±5.6实施例19.3±4.1**对比例123.7±5.1**对比例228.4±5.5*对比例317.3±4.9**2、心肌酶测定本
发明内容仅仅举例说明了要求保护的一些具体实施方案，其中一个或更多个技术方案中所记载的技术特征可以与任意的一个或多个技术方案相组合，这些经组合而得到的技术方案也在本申请保护范围内，就像这些经组合而得到的技术方案已经在本发明公开内容中具体记载一样。当前第1页1 2 3