本发明属于中药制药技术领域，具体涉及一种溶解性好、易粉碎、质量稳定性好、总木脂素含量高、杂质少、工艺简单、经济的滇鸡血藤乙醇提取物及其高提取率的制备方法。
背景技术：
滇鸡血藤（KADSURAE CAULIS）为木兰科植物内南五味子（Kadsura interior A.C.Smith）或异型南五味子的藤茎。滇鸡血藤是传统妇科良药复方鸡血藤膏的主药，始创于清道光年间。目前，用作鸡血藤的植物达26种，分属于6科12属。文献记载最早、使用历史最悠久的凤庆鸡血藤，其基原为木兰科植物异型南五味子。
现代医学研究复方鸡血藤膏表明其具有增加造血功能，抗炎、镇痛，增加子宫收缩作用。其中君药滇鸡血藤膏粉为滇鸡血藤的水提干浸膏粉，处方剂量约为其他四味药原药材总量的2倍，可见滇鸡血藤在方中所起到的重要作用。是故，《中国药典》2010版一部（第925页）已将《复方鸡血藤膏》更名为《复方滇鸡血藤膏》，再次强调滇鸡血藤的重要性及其地位。但由于鸡血藤各地习用品种和混杂品种甚多，药材质量难以控制。
据文献报道，对滇鸡血藤化学成分采用硅胶柱色谱、HPLC制备色谱以及红外、紫外、旋光谱、质谱、核磁共振(氢谱、碳谱、HMQC、HMBC和NOESY)等波谱技术，从滇鸡血藤乙酸乙酯部位分离鉴定了17个木脂素、2个三萜(甘五酸、马五味子酸)和β—谷甾醇。木脂素类化合物包括联苯环辛烯类木脂素10个、螺苯骈呋喃型联苯环辛烯类木脂素6个：南五味子酯丙、滇南五味子酯、异型南五味子丁素、内南五味子素、schiarisanrin C、异型南五味子庚素；2，3-二甲基-1，4二芳基丁烷。根据现代科学的研究，滇鸡血藤的主要活性成分是联苯环辛烯类木脂素，其中异型南五味子丁素( heteroclitin D) 含量高、活性强，具有抗氧化、抗病毒活性，且能明显抑制KCl、CaCl2和NA产生的血管收缩，以及ADP和PAF诱导的兔血小板聚集，可作为滇鸡血藤质量控制的指标成分。
目前，鸡血藤中发现的化合物中黄酮类化合物研究最多。因此，现有技术中对鸡血藤提取物的质量控制以黄酮类化合物为主，传统的水提不仅有效成分含量低和提取率低，而且由于提取温度较高，容易破坏热敏性有效物质。另外，传统水煎煮法制备滇鸡血藤膏，所得浸膏中有效成分含量不高，浸膏较硬，难粉碎，对加工制备其他的剂型和制剂有许多不利影响。也有采用乙酸乙酯、乙醇或其混合溶剂提取，提取物过正相硅胶柱，用石油醚、乙酸乙酯、氯仿等进行洗脱，最后用制备液相色谱，乙腈-水洗脱，该方法不仅过程繁杂，而且使用氯仿、乙腈等有毒溶剂，且应用制备液相等精密仪器，不适合工业化大生产；另外，现有技术中采用的渗漉法渗漉速度一般在每2～3小时得到1倍体积的渗漉液，不仅工艺时间长，而且最终提取物的总木脂素含量和提取率并没有显著的提高，效率较低。
技术实现要素：
本发明的第一目的在于提供一种总木脂素含量高、溶解性好、易粉碎、质量稳定性好的滇鸡血藤乙醇提取物；第二目的在于提供一种实现第一目的且总木脂素提取率高、杂质少、工艺简单、经济的滇鸡血藤乙醇提取物的高提取率制备方法。
本发明的第一目的是这样实现的：含量不少于2.75%的总木脂素
本发明的第二目的是这样实现的：包括前处理、提取、分离步骤，具体步骤如下：
A、前处理：将滇鸡血藤药材初清除杂后切片并粉碎过筛，留筛下物得到滇鸡血藤粉末；
B、提取：将上述滇鸡血藤粉末经70～85%乙醇浸渍20～36h，并以1～3体积倍数/h的速度渗漉，收集40～50倍体积的渗漉液；
C、分离：将上述渗漉液减压浓缩或旋转蒸发仪浓缩至无醇味以回收乙醇并得到滇鸡血藤乙醇提取物浸膏。
本发明与现有技术相比具有以下有益效果：
1、本发明的滇鸡血藤乙醇提取物浸膏中总木脂素含量是水提浸膏的10.5倍，本发明的制备方法中总木脂素提取率是水煎煮法的6.9倍，即本发明的制备方法能显著增加对滇鸡血藤中总木质素的提取率；
2、本发明的滇鸡血藤乙醇提取物浸膏相较传统水煎煮法得到的浸膏溶解性好、易粉碎、质量稳定性好，制备成其它剂型使用亦能提高生物利用度；
3、本发明的制备方法在总木脂素提取率基本相当的情况下，渗漉速度为1～3体积倍数/h，较现有技术中普遍采用的每2～3小时得到1倍体积渗漉液的渗漉速度快2～9倍，颠覆了传统认知中渗漉速度越慢提取率越高的认识，取得了意想不到的技术效果；
4、本发明的制备方法相较传统的乙醇回流提取虽然总木脂素提取率相近，但本发明所得的浸膏中总木脂素含量更高，提取物中的杂质相对较少；
5、本发明的制备方法全程采用低温干燥和提取、分离技术，提取物能够有效保留滇鸡血藤中的挥发性、热敏性的有效成分；
6、本发明的制备方法采用单一的乙醇溶液作为溶剂，不仅回收容易，而且无毒，易于规模化生产。
所以，本发明的滇鸡血藤乙醇提取物总木脂素含量高、溶解性好、易粉碎、质量稳定性好，本发明的滇鸡血藤乙醇提取物的高提取率制备方法总木脂素提取率高、杂质少、工艺简单、经济。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明，但不以任何方式对本发明加以限制，基于本发明教导所作的任何变更或改进，均属于本发明的保护范围。
本发明之滇鸡血藤乙醇提取物包括含量不少于2.75%的总木脂素。
所述总木脂素包括联苯环辛烯类木脂素、螺苯骈呋喃型联苯环辛烯类木脂素。
所述联苯环辛烯类木脂素包括南五味子酯甲、南五味子酯乙、滇南五味子酮、南五味子素、异型南五味子丙素。
所述螺苯骈呋喃型联苯环辛烯类木脂素包括南五味子酯丙、滇南五味子酯、异型南五味子丁素、内南五味子素。
本发明之滇鸡血藤乙醇提取物的制备过程包括前处理、提取、分离步骤，具体步骤如下：
A、前处理：将滇鸡血藤药材初清除杂后切片并粉碎过筛，留筛下物得到滇鸡血藤粉末；
B、提取：将上述滇鸡血藤粉末经70～85%乙醇浸渍20～36h，并以1～3体积倍数/h的速度渗漉，收集40～50倍体积的渗漉液；
C、分离：将上述渗漉液减压浓缩或旋转蒸发仪浓缩至无醇味以回收乙醇并得到滇鸡血藤乙醇提取物浸膏。
本发明之滇鸡血藤乙醇提取物的高提取率制备方法，包括前处理、提取、分离步骤，具体步骤如下：
A、前处理：将滇鸡血藤药材初清除杂后切片并粉碎过筛，留筛下物得到滇鸡血藤粉末；
B、提取：将上述滇鸡血藤粉末经70～85%乙醇浸渍20～36h，并以1～3体积倍数/h的速度渗漉，收集40～50倍体积的渗漉液；
C、分离：将上述渗漉液减压浓缩或旋转蒸发仪浓缩至无醇味以回收乙醇并得到滇鸡血藤乙醇提取物浸膏。
所述前处理步骤中的滇鸡血藤粉碎后过5～20目筛。
所述前处理步骤中的滇鸡血藤切片后干燥至含水率低于10%，然后粉碎过筛。
所述滇鸡血藤切片后在60℃以下热风干燥至含水率低于10%。
所述提取步骤中乙醇的温度为20～35℃。
所述滇鸡血藤乙醇提取物浸膏经喷雾干燥或低温真空干燥后粉碎过筛，得到滇鸡血藤乙醇提取物粉末。
所述滇鸡血藤中的总木脂素提取率不小于0.25%。
实施例1
1、滇鸡血藤药材初清除杂后切片并在60℃以下热风干燥至含水率低于10%，然后粉碎并过20目筛，留筛下物得到滇鸡血藤粉末；
2、称取上述滇鸡血藤粉末10g经20±2℃的85%乙醇浸渍20h，并以3体积倍数/h的速度渗漉，收集45倍体积的渗漉液；
3、将上述渗漉液减压浓缩至无醇味以回收乙醇，得到滇鸡血藤乙醇提取物浸膏；
4、将滇鸡血藤乙醇提取物浸膏经低温真空干燥后粉碎过筛，得到总木脂素提取率为0.329%及总木脂素含量（高效液相色谱法：色谱条件为Phenomenex Gemini-NX 5u C18 110A(4.6 mm×250 mm)色谱柱；甲醇-乙腈-水连续梯度洗脱，流速1mL／min；柱温35℃；检测波长230nm，进样量10μL）为3.272%的滇鸡血藤乙醇提取物粉末。
实施例2
1、滇鸡血藤药材初清除杂后切片并在60℃以下热风干燥至含水率低于10%，然后粉碎并过5目筛，留筛下物得到滇鸡血藤粉末；
2、称取上述滇鸡血藤粉末10g经30±2℃的80%乙醇浸渍24h，并以3体积倍数/h的速度渗漉，收集50倍体积的渗漉液；
3、将上述渗漉液旋转蒸发仪浓缩至无醇味以回收乙醇，得到滇鸡血藤乙醇提取物浸膏；
4、将滇鸡血藤乙醇提取物浸膏经低温真空干燥后粉碎过筛，得到总木脂素提取率为0.283%及总木脂素含量（高效液相色谱法：色谱条件为Phenomenex Gemini-NX 5u C18 110A(4.6 mm×250 mm)色谱柱；甲醇-乙腈-水连续梯度洗脱，流速1mL／min；柱温35℃；检测波长230nm，进样量10μL）为3.110%的滇鸡血藤乙醇提取物粉末。
实施例3
1、滇鸡血藤药材初清除杂后切片并在60℃以下热风干燥至含水率低于10%，然后粉碎并过15目筛，留筛下物得到滇鸡血藤粉末；
2、称取上述滇鸡血藤粉末10g经25±2℃的70%乙醇浸渍36h，并以1体积倍数/h的速度渗漉，收集40倍体积的渗漉液；
3、将上述渗漉液旋转蒸发仪浓缩至无醇味以回收乙醇，得到滇鸡血藤乙醇提取物浸膏；
4、将滇鸡血藤乙醇提取物浸膏经低温真空干燥后粉碎过筛，得到总木脂素提取率为0.306%及总木脂素含量（高效液相色谱法：色谱条件为Phenomenex Gemini-NX 5u C18 110A(4.6 mm×250 mm)色谱柱；甲醇-乙腈-水连续梯度洗脱，流速1mL／min；柱温35℃；检测波长230nm，进样量10μL）为3.204%的滇鸡血藤乙醇提取物粉末。
实施例4
1、滇鸡血藤药材初清除杂后切片并在60℃以下热风干燥至含水率低于10%，然后粉碎并过10目筛，留筛下物得到滇鸡血藤粉末；
2、称取上述滇鸡血藤粉末10g经35±2℃的75%乙醇浸渍30h，并以2体积倍数/h的速度渗漉，收集40倍体积的渗漉液；
3、将上述渗漉液旋转蒸发仪浓缩至无醇味以回收乙醇，得到滇鸡血藤乙醇提取物浸膏；
4、将滇鸡血藤乙醇提取物浸膏经低温真空干燥后粉碎过筛，得到总木脂素提取率为0. 275%及总木脂素含量（高效液相色谱法：色谱条件为Phenomenex Gemini-NX 5u C18 110A(4.6 mm×250 mm)色谱柱；甲醇-乙腈-水连续梯度洗脱，流速1mL／min；柱温35℃；检测波长230nm，进样量10μL）为3.018%的滇鸡血藤乙醇提取物粉末。
对照例1：
参照《药典》及文献报道的提取方法，经实验研究，确定最佳水提取工艺为：取与实施例2相同的滇鸡血藤粗粉10g，加6倍量的水，煎煮3次，时间分别为1.5h、1h、0.5h，合并三次煎煮夜，浓缩成干浸膏3份，粉碎，过五号筛备用。以高效液相色谱法测定水提浸膏总木脂素含量：色谱条件为Phenomenex Gemini-NX 5u C18 110A(4.6 mm×250 mm)色谱柱；甲醇-乙腈-水连续梯度洗脱，流速1mL／min；柱温35℃；检测波长230nm，进样量10μL。得到水提浸膏总木脂素含量为0.296%，总木脂素提取率为0.041%。
对比实施例2和对照例1，实施例2的总木脂素提取率是对照例1的6.9倍，实施例2得到的滇鸡血藤乙醇提取物中总木脂素含量是对照例1的10.5倍。