(一)技术领域
本发明涉及一种生物医用敷料及其制备方法。
(二)
背景技术：
现实生活中，人们常会因意外而受伤，比如擦伤、磕碰伤、刀割伤、刺伤以及烧伤烫伤等，这类皮肤外伤容易引起出血、渗血，并带来持续疼痛感。除此以外，在医院中还有褥疮、手术伤口等外伤，这些创伤如果处理不恰当，轻者延缓愈合时间，留下疤痕等；严重者会导致感染致病微生物，局部出现红肿、化脓，相继会引发各种并发症，如破伤风、败血症等。因此，创伤是一类不可忽视的疾病，对皮肤表面的创伤进行有效的治疗和护理，并积极开展创伤的治疗和修复研究是十分必要的。
目前，国内外研究者在伤口敷料上做了大量研究，但是在临床治疗中还是多采用无菌纱布进行包扎处理，这种传统纱布敷料主要起保护伤口的作用，而对伤口的愈合几乎没有促进作用，并且此类敷料易与伤口发生粘连，因此在更换敷料时极易造成二次损伤；而针对小面积伤口，胶布创口贴仍是人们经常处理伤口的选择产品，胶布创口贴通常由一条长形状的胶布和一小块吸水垫构成，但是传统创口贴一般仅起到暂时止血、保护创面的作用，使用时间不宜过长。若长久使用，创可贴外层的胶布不透空气，会使伤口和伤口周围的皮肤发白、变软，导致继发感染。
据不完全统计，目前市面上已存在超过2400种伤口敷料，但是没有一种特定敷料可用于整个伤口的愈合过程，敷料的选择也应当视伤口的情况而做选择。总而言之，作为理想敷料，应具备这些优点：不透水而能控制水分蒸发，具有类似正常皮肤的水分蒸发率；能保持伤口的生理环境，使创面处于湿润但又没有积液的环境；有良好的顺应性，易揭除而不损伤肉芽组织，不产生疼痛；保护伤口免除微生物入侵，起屏障保护作用，最好还具有一定能促进伤口愈合和抑制疤痕增生的功能；安全、无毒、无过敏或其他不良反应。
壳聚糖是一种天然高分子生物材料，具有良好的生物官能性和相容性、血液相容性、安全性、微生物降解性等，同时还具有广谱抗菌，止血和促进创伤愈合、抑制疤痕形成等多种医学性能，可作为优良的医用敷料及组织工程材料。本发明采用的n-糖基化壳聚糖属于水溶性壳聚糖，克服了现有技术中壳聚糖水溶性较差的缺点，同时脱乙酰度在60％-70％之间，相关研究表明，在此脱乙酰度之内的壳聚糖相对比其他脱乙酰度，更能促进红细胞凝集，从而起到更佳的止血作用(tianf,yangj,chens,kany,jif·jbiomedeng,2005,22:999-1003)。
针对现有壳聚糖类产品的弊端，优选原辅料，控制各成分含量，制备出一种对皮肤温和无刺激，成膜性良好、抗菌能力较强、安全高效的新制剂，对如今临床治疗皮肤烧伤、创伤感染等具有非常重要的意义，并能进一步对难治性慢性皮肤溃疡(如晚期糖尿病皮肤溃疡、下肢静脉曲张引起的老烂脚等)和妇科常见病、多发病(如宫颈糜烂等)，创造更好的医学和社会效益。
(三)
技术实现要素：
本发明目的是提供一种涂抹型的流体创伤敷料(液体壳聚糖创伤敷料)，所成膜柔软贴服性好，具有良好的透气性和透明度，抑菌效果好，同时促进伤口愈合，抑制伤口组织异常增生导致的凸起性疤痕。本发明的另一目的在于提供了该种液体创伤敷料的制备方法。
本发明采用的技术方案是：
本发明提供一种液体壳聚糖创伤敷料，所述液体壳聚糖创伤敷料由如下原料制成：n-糖基化壳聚糖、芦荟提取物、质量浓度10％聚乙烯醇水溶液、聚乙二醇、甘油、橄榄油、聚维酮碘、质量浓度30％双氧水、乳酸、薄荷脑、体积浓度95％乙醇水溶液、5mg/ml生理盐水；所述n-糖基化壳聚糖与聚乙二醇和薄荷脑质量比为1:0.01-1：0.01-1.5；所述芦荟提取物、质量浓度10％聚乙烯醇水溶液、甘油、橄榄油、聚维酮碘、质量浓度30％双氧水、乳酸、体积浓度95％乙醇水溶液、5mg/ml生理盐水体积用量以n-糖基化壳聚糖质量计分别为0.5-20ml/g、1-50ml/g、0.05-5ml/g、0.05-5ml/g、0.1-10ml/g、0.1-10ml/g、0.01-2ml/g、1.5-50ml/g、1-50ml/g；所述芦荟提取物是将芦荟叶片(不需要去皮)捣碎后的匀浆液超声浸提后的上清液与去离子水混合浓缩至总体积四分之一获得的，或匀浆液与体积浓度75％乙醇水溶液混合后超声浸提并浓缩至总体积的十分之一获得的；所述去离子水与上清液体积比为1.5:1；所述乙醇水溶液与所述的匀浆液体积比为5:1。
进一步，优选所述n-糖基化壳聚糖与聚乙二醇和薄荷脑质量比为1:0.01-0.3：0.03-0.5，更优选所述n-糖基化壳聚糖与聚乙二醇和薄荷脑质量比为1:0.02-0.2：0.04-0.3。
进一步，优选所述芦荟提取物、质量浓度10％聚乙烯醇水溶液、甘油、橄榄油、聚维酮碘、质量浓度30％双氧水、乳酸、体积浓度95％乙醇水溶液、5mg/ml生理盐水体积用量以n-糖基化壳聚糖质量计分别为0.75-7.5ml/g、2.5-20ml/g、0.08-2ml/g、0.08-2ml/g、0.2-4ml/g、0.2-4ml/g、0.06-0.75ml/g、2.25-20ml/g、2-20ml/g，更优选所述芦荟提取物、质量浓度10％聚乙烯醇水溶液、甘油、橄榄油、聚维酮碘、质量浓度30％双氧水、乳酸、体积浓度95％乙醇水溶液、5mg/ml生理盐水体积用量以n-糖基化壳聚糖质量计分别为1-7ml/g、4-17ml/g、0.1-1ml/g、0.1-1ml/g、0.2-3ml/g、0.2-3ml/g、0.07-0.5ml/g、3-17ml/g、3-17ml/g。
进一步，所述芦荟提取物按如下方法之一制备：(1)选取新鲜芦荟叶片，去离子水漂洗干净，捣碎制得匀浆液；取匀浆液，在95℃下高温杀菌5～8min，静置冷却后，450w下超声20～30min，离心，取上清液和去离子水按体积比2:3混合，于65～70℃旋蒸至总体积的四分之一，即得到芦荟水提物；(2)选取新鲜芦荟叶片，去离子水漂洗干净，捣碎制得匀浆液；取匀浆液加入体积浓度75％乙醇水溶液，在功率450w下超声提取30～40min，共超声提取2次，离心取上清，45～50℃下旋蒸至总体积的十分之一，取浓缩液即为芦荟醇提物；所述乙醇水溶液与匀浆液体积比为5:1。
本发明还提供一种所述液体壳聚糖创伤敷料的制备方法，所述方法为：
(1)按配方量，将n-糖基化壳聚糖用生理盐水搅拌溶解，再加入乳酸，制得n-糖基化壳聚糖溶液；
(2)膜液制备：按配方量，将聚乙烯醇加入去离子水中，在90～100℃下加热搅拌2～3h至完全溶解，制成质量浓度10％聚乙烯醇水溶液，即得膜液；
(3)按配方量，将步骤(1)制得的n-糖基化壳聚糖溶液和芦荟提取物混合，再加入步骤(2)制得的膜液，依次继续加入聚乙二醇、甘油、橄榄油、聚维酮碘、双氧水、薄荷脑，室温下500～700r/min搅拌混合均匀；
(4)按配方量，向步骤(3)制备的溶液中加入体积浓度95％乙醇水溶液，室温下500～700r/min搅拌混合均匀，即制得所述的液体壳聚糖创伤敷料。
本发明还提供一种所述液体壳聚糖创伤敷料在制备创伤面愈合药物中的应用。
本发明制备方法简单，各组分的主要功效为：
(1)采用n-糖基化壳聚糖取代普通壳聚糖，n-糖基化壳聚糖克服了现有技术中壳聚糖水溶性较差的缺点，且选取脱乙酰度在60％～70％之间的n-糖基化壳聚糖，更能促进红细胞凝集，从而起到更佳的止血作用；
(2)采用生理盐水取代乙酸溶液，一方面因为生理盐水通常用于消毒伤口，另一方面考虑到生理盐水的ph值接近7，改性后的壳聚糖更易溶于中性溶液中，加速了壳聚糖的溶解速率；
(3)加入乳酸，可以调节壳聚糖生物成膜胶的ph值，并且酸性条件有利于乳酸菌的繁殖生长，而对大肠杆菌等有害微生物产生抑制作用；
(4)聚乙烯醇，是较为常见的水溶性的高分子成膜材料，成膜之后有一定的强度和柔韧性，对皮肤不会产生刺激，还具有很好的吸湿性，同时也具有一定的防水作用。
(5)芦荟提取物，具有杀菌消炎、解毒以及促进伤口愈合的作用，同时温和平复疤痕。
(6)添加甘油，可滋润皮肤，防止皮肤龟裂。于空气中易吸收水分，对伤口保湿较好。现代医学认为，在避免创口处感染的情况下，维持湿态比干态环境将更有利于创口的愈合。同时甘油可作为增稠剂，增加膜的柔韧性和可拉伸性；
(7)橄榄油，可作为分散剂，增加膜的柔韧性和可拉伸性，对伤口具有保湿作用，可防止皮肤皱裂及因皮肤分泌过少引起的瘙痒，可减轻伤口疼痛，促进愈合，愈后不留下疤痕。美国、德国等西方国家早已把橄榄油载入药典；
(8)5％聚维酮碘，本身就可作为消毒防腐剂，对多种细菌、芽胞、病毒、真菌等有杀灭作用。其作用机制是本品接触创面或患处后，能解聚释放出游离碘发挥杀菌作用。特点是对组织刺激性小，适用于皮肤、黏膜感染。可用于小面积皮肤、黏膜创口的消毒；
(9)30％双氧水，常用于医用消毒杀菌，其强氧化性可以破坏细菌的蛋白质，使之死亡，另一方面又可以作为致孔剂，双氧水歧化释放氧气而使抗菌膜致孔透气，加上歧化反应会放热，能加速抗菌膜固化速度。通常医用上使用3％双氧水，本实验采用的双氧水微量，且有添加其他试剂稀释，最终得到的双氧水浓度不会对皮肤造成刺激伤害；
(10)薄荷脑，常作为赋香剂使用，具有清凉感，同时可消炎镇痛止痒，减轻浮肿，添加在敷料中易于被患者接受；
(11)使用乙醇溶剂，利用乙醇迅速挥发特性，使本发明产品能够在创面上快速成膜，有效保护创面。
本发明通过特定成分的特定组合，制得的涂抹型的流体创伤敷料，作为外用医用敷料上具有如下技术效果：
(1)涂抹后会快速形成与创面贴合良好、弹性柔软、透气性良好、具抑菌效果的一层胶膜，结合了创可贴和新型创口专业敷料的优点；
(2)维持一个湿性愈合环境，湿态比干态环境将更有利于创口的愈合；
(3)有良好的杀菌效果，能够杀灭和抑制创面的病原菌，保证创面的无菌，同时能抑制炎症反应；
(4)有良好的止血效果、促进伤口愈合作用和抑制伤口组织异常增生导致的凸起性疤痕的作用，同时气味芳香，涂抹上刺激感小，很舒适。
本发明的涂抹型的流体创伤敷料适用于皮肤擦伤割伤、皮肤皲裂、轻微烧烫伤、外科手术后缝合部位的保护等。
(四)具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：
本发明实施例所用双氧水质量浓度为30％，聚乙烯醇(聚合度1750±50)、聚乙二醇(聚合度6000)、聚维酮碘(分子量365)。本发明所述室温为25-30℃。
实施例1
(1)n-糖基化壳聚糖的制备：称取壳聚糖4.0g，加入体积浓度1％乙酸水溶液200ml，室温(25-30℃)下搅拌0.5h，待其充分溶解，再加入4.0壳聚糖氨基当量的果糖，30～35℃下磁力搅拌反应7h后，加入硼氢化钠1.7g于室温下还原24h，最后用体积浓度95％乙醇水溶液终止反应，将析出产物用无水乙醇洗涤3～4次，离心得沉淀，40℃真空烘干，最后得到n-糖基化壳聚糖，于干燥器内保存备用。
(2)芦荟水提物制备方法如下：选取新鲜芦荟叶片，去离子水漂洗干净，捣碎制得匀浆液。取匀浆液100g，在95℃下高温杀菌5～8min，静置冷却后，450w下超声20～30min，离心取上清，取40ml上清液和60ml去离子水混合，加热到65～70℃旋蒸提纯40min，即得到芦荟水提物25ml，装入棕色瓶中，4℃保存备用。
(3)芦荟醇提物制备方法如下：选取新鲜芦荟叶片，去离子水漂洗干净，捣碎制得匀浆液。取100g匀浆液，加入体积浓度75％乙醇水溶液200ml，超声提取30～40min(功率450w)，共超声提取2次，离心取上清，45～50℃下旋蒸提纯30min去除乙醇溶剂，最后将浓缩液(即为芦荟醇提物，浓缩至总体积的十分之一倍体积)35ml装入棕色试剂瓶中，于4℃保存备用。
实施例2
1)液体壳聚糖创伤敷料配方：n-糖基化壳聚糖2.17g、实施例1制备的芦荟水提物10ml、质量浓度10％聚乙烯醇(聚合度1750±50)30ml、聚乙二醇(聚合度6000)0.43g、甘油1.52ml、橄榄油1.52ml、聚维酮碘(分子量365)3.91ml、质量浓度30％双氧水3.91ml、乳酸0.65ml、薄荷脑0.43g、体积浓度95％乙醇水溶液32.6ml、5mg/ml生理盐水21.74ml。
2)液体壳聚糖创伤敷料的制备步骤如下：
(1)按配方量，称取n-糖基化壳聚糖2.17g，加入5mg/ml生理盐水21.74ml，室温下搅拌溶解，再加入0.65ml乳酸，制得n-糖基化壳聚糖溶液；
(2)膜液制备：按配方量，称取聚乙烯醇0.30g，加入去离子水中，在90-100℃下加热搅拌2～3h至完全溶解，制成质量浓度10％聚乙烯醇水溶液30ml，即得膜液；
(3)将步骤(1)制得的n-糖基化壳聚糖溶液和10ml芦荟水提物混合，再加入(2)制得的膜液，依次继续加入配方量聚乙二醇0.43g、甘油1.52ml、橄榄油1.52ml、聚维酮碘3.91ml、双氧水3.91ml、薄荷脑0.43g，搅拌速度为500～700r/min，室温下混合均匀；
(4)向上述步骤(3)制备的溶液中加入32.6ml95％乙醇水溶液，搅拌速度为500～700r/min，室温下混合均匀，即制得本发明的液体壳聚糖创伤敷料。
实施例3
1)液体壳聚糖创伤敷料配方：n-糖基化壳聚糖2.27g、实施例1制备的芦荟醇提物10.45ml、质量浓度10％聚乙烯醇31.8ml、聚乙二醇0.45g、甘油1.59ml、橄榄油1.59ml、聚维酮碘4.09ml、质量浓度30％双氧水3.18ml、乳酸0.68ml、薄荷脑0.45g、体积浓度95％乙醇水溶液30.9ml、5mg/ml生理盐水22.7ml。
2)液体壳聚糖创伤敷料的制备步骤如下：
(1)按配方量，称取n-糖基化壳聚糖2.27g，加入5mg/ml生理盐水22.7ml，室温下搅拌溶解，再加入0.68ml乳酸，制得n-糖基化壳聚糖溶液；
(2)膜液制备：按配方量，称取聚乙烯醇3.18g，加入去离子水中，在90-100℃下加热搅拌2～3h至完全溶解，制成质量浓度10％聚乙烯醇水溶液31.8ml，即得膜液；
(3)将(1)制得的溶液和10.45ml芦荟醇提物混合，再加入(2)制得的膜液，依次继续加入配方量聚乙二醇0.45g、甘油1.59ml、橄榄油1.59ml、聚维酮碘4.09ml、双氧水3.18ml、薄荷脑0.45g，搅拌速度为500～700r/min，室温下混合均匀；
(4)向上述步骤(3)制备的溶液中加入30.9ml95％乙醇水溶液，搅拌速度为500～700r/min，室温下混合均匀，即制得本发明的液体壳聚糖创伤敷料。
实施例4
1)液体壳聚糖创伤敷料配方：n-糖基化壳聚糖6.67g、实施例1制备的芦荟水提物8.33ml、质量浓度10％聚乙烯醇33.3ml、聚乙二醇0.17g、甘油0.83ml、橄榄油0.83ml、聚维酮碘1.67ml、质量浓度30％双氧水1.67ml、乳酸0.5ml、薄荷脑0.33g、体积浓度95％乙醇水溶液23.3ml、5mg/ml生理盐水33.3ml。
2)液体壳聚糖创伤敷料的制备步骤如下：
(1)按配方量，称取n-糖基化壳聚糖6.67g，加入5mg/ml生理盐水33.3ml，室温下搅拌溶解，再加入0.5ml乳酸，制得n-糖基化壳聚糖溶液；
(2)膜液制备：按配方量，称取聚乙烯醇3.33g，加入去离子水中，在90-100℃下加热搅拌2～3h至完全溶解，制成质量浓度10％聚乙烯醇水溶液33.3ml，即得膜液；
(3)将(1)制得的溶液和8.33ml芦荟水提物混合，再加入(2)制得的膜液33.3ml，依次继续加入配方量聚乙二醇0.17g、甘油0.83ml、橄榄油0.83ml、聚维酮碘1.67ml、双氧水1.67ml、薄荷脑0.33g，搅拌速度为500～700r/min，室温下混合均匀；
(4)向上述步骤(3)制备的溶液中加入23.3ml95％乙醇水溶液，搅拌速度为500～700r/min，室温下混合均匀，即制得本发明的液体壳聚糖创伤敷料。
实施例5
1)液体壳聚糖创伤敷料配方：n-糖基化壳聚糖6.9g、实施例1制备的芦荟醇提物8.62ml、质量浓度10％聚乙烯醇34.5ml、聚乙二醇0.17g、甘油0.86ml、橄榄油0.86ml、聚维酮碘1.72ml、质量浓度30％双氧水1.72ml、乳酸0.52ml、薄荷脑0.34g、体积浓度95％乙醇水溶液20.69ml、5mg/ml生理盐水34.48ml。
2)液体壳聚糖创伤敷料的制备步骤如下：
(1)按配方量，称取n-糖基化壳聚糖6.9g，加入5mg/ml生理盐水34.48ml，室温下搅拌溶解，再加入0.52ml乳酸，制得n-糖基化壳聚糖溶液；
(2)膜液制备：按配方量，称取聚乙烯醇3.45g，加入去离子水中，在90-100℃下加热搅拌2～3h至完全溶解，制成质量浓度10％聚乙烯醇水溶液34.5ml，即得所述膜液；
(3)将(1)制得的n-糖基化壳聚糖溶液和8.62ml芦荟醇提物混合，再加入(2)制得的膜液34.5ml，依次继续加入配方量聚乙二醇0.17g、甘油0.86ml、橄榄油0.86ml、聚维酮碘1.72ml、双氧水1.72ml、薄荷脑0.34g，搅拌速度为500～700r/min，室温下混合均匀；
(4)向上述步骤(3)制备的溶液中加入20.69ml95％乙醇，搅拌速度为500～700r/min，室温下混合均匀，即制得本发明的液体壳聚糖创伤敷料。
实施例6
对实施例2-实施例5得到的液体壳聚糖创伤敷料分别进行了性能和药理测试，实验结果如下：
测试1：产品性能参数检测
对本发明制备的液体壳聚糖创伤敷料性能参数进行检测，实施例2-5的产品均符合以下要求：
1.性状：为微黄色，透明液体，质地均匀。
2.ph：取实施例2-5的样品各少许，用ph计测得ph都在4.0～6.0之间。
测试2：液体壳聚糖创伤敷料样品抑菌效果
按《药品微生物学检验手册》(科学出版社，2001年版)第18章第1节管碟法进行试验，测定结果参见表1：
表1各个试验组的抑菌圈直径(mm)
从表1的结果显示，本发明的产品均有明显抑菌圈，说明对大肠杆菌、金色葡萄球菌、白色念珠菌、铜绿假单胞菌的生长均有明显的抑制作用。
测试3：液体壳聚糖创伤敷料样品皮肤刺激指数(pii)测定
取家兔6只(购于浙江中医药大学动物实验中心)，于背部脊柱两侧将脱毛剂均匀涂上，设置5个试验区域(1号-5号)，每个区域面积约为1cm×1cm，洗净脱毛剂，归笼观察24h。24小时之后，在脱毛区1号-4号分别涂抹本发明实施例2-5生产的液体壳聚糖创伤敷料，涂抹0.1ml，5号脱毛区不作处理，作为自身对照。持续24h后除去药物，肉眼观察用药皮肤局部有无红斑及水肿、色素沉着、出血点、皮肤粗糙或皮肤菲薄等，结束后用温水清洗给药部位。皮肤刺激试验反应评分和刺激强度评价见表2、表3。
表2皮肤刺激反应评分标准
表3皮肤刺激强度评价标准
皮肤刺激试验反应平均值＝(红斑形成总分+水肿形成总分)/合计试验数
表4皮肤刺激性试验
从表4结果表明，本发明制备的液体壳聚糖创伤敷料均无皮肤致敏反应。
测试4：创伤愈合的对比试验
供试品：实施例2-实施例5制备的液体壳聚糖创伤敷料
对照品：云南白药止血粉
实验动物采用普通家兔(购于浙江中医药大学动物实验中心)，10％水合氯醛麻醉后用4％硫化钠脱毛，取俯卧位。常规消毒皮肤后，于每只兔子距脊柱两侧1.0cm处切割长1.5cm，宽1.0cm的伤口4个，深度从皮肤到肌层，伤口的厚度为0.3cm。将4个伤口分别标记为a、b、c、d号，用生理盐水冲洗伤口，备用。a号伤口以0.9％生理盐水上药，每次0.1ml，为阴性对照；b号伤口以云南白药止血粉为阳性对照，每次取药0.1g，均匀涂抹至完全覆盖创口，每12h更换一次；c和d号伤口(一只兔子设置2个平行试验，即c和d涂抹的是相同的敷料)分别使用本发明的实施例2-5液体壳聚糖创伤敷料，每次0.1ml，均匀涂抹至完全覆盖创口，每12h更换一次，连续用药15天(“天”以“d”表示)。每组实验动物8只，雌雄各半，体量约为2.0～2.5kg。观察伤口愈合情况，记录伤口愈合时间，记录时间点分别为3d、6d、9d、12d、15d，同时计算创面愈合率。
计算创面愈合率的方法如下：先将创面标记在透明膜上，再以此为模板将质地均匀的硬纸片剪成同样大小，然后用天平称重，以硬纸片重量间接地表示创面大小。按下试计算创面愈合率：
创面愈合率(％)＝(原始创面面积-未愈合创面面积)/原始创面面积。
表5各组别伤口愈合率比较
由表5所知，本发明的液体创伤敷料使用后，各创面平均愈合率均高于阴性对照组和阳性对照组，且15天时创伤平均愈合率为99％以上，高于阴性对照组30％以上，高于阳性对照组14％以上，说明本发明的涂抹型流体创伤敷料促进伤口愈合作用非常好。同时，实施例4和实施例5均在第14天时就已达到伤口的痊愈，痂皮全部自然脱落，形成的疤痕凸出皮肤面不明显，触摸发现无硬结块，也无黑紫色色素的沉着，并且伤口处呈粉嫩状，接近家兔原肤色，说明本发明的涂抹型的流体创伤敷料可以抑制伤口组织疤痕的异常增生。
上述实施例为本发明较佳的实现方案，除此之外，本发明还可以其它方式实现，在不脱离本发明构思的前提下任何显而易见的替换，均在本发明的保护范围之内。