本发明属于中医药领域，具体涉及一种基于伴生原理制备的药物组合物及其在戒毒中应用。
背景技术：
毒品不仅危害吸食者本人的身体健康、心理健康，而且危及到家庭的幸福安宁。毒品问题已经成为威胁社会治安和社会稳定的一个重要因素。目前，普遍采用的戒毒方法主要有两种：一是人为的生理强制性硬脱毒法，例如泰国推行的水桶排水法、印度的强行军治疗法、中国的关押强制劳动法等，二是药物戒毒法，一般采用阿片受体激动剂或拮抗剂。生理强制性硬脱毒法让患者承受较大身体痛苦的条件下，依靠时间来消耗积聚在自身体内的生物碱毒素，并不能完全清楚患者体内的毒素，复吸率高达90％，药物戒毒法如美沙酮、阿片、丁丙诺非、盐酸二氢埃托啡等容易造成患者对这些药物产生依赖，加之这些药物价格较高，普通患者是难于承受的。中药戒毒具有多靶点、无成瘾性等的特点，被认为是药物戒毒的良方，逐渐为人们所重视。申请号201410388420.1的中国发明专利中公开了一种戒毒纯中药制剂，戒毒镇痛效果良好，但是其并未指明该中药制剂的主效成分及含有的具体化学成分。
本发明基于植物提取物伴生原理：中药提取物可分为基本活性物质(有效成分、有效部位)与伴生物质(辅助成分、无效成分、组织成分)，基本活性物质与其制剂的治疗特性完全或大体相关联。伴生物质可分为附加物质(辅助成分、部分无效成分)和无活性副产物(部分无效成分、组织成分)。附加物质可增强或减弱基本活性物质的作用；无活性副产物无药理作用，其存在往往是不期望的。伴生物质可改变基本活性物质的理化性质，从而影响其生物药剂学参数，特别是影响活性物质从药物处方或植物提取物中溶出和进一步吸收。以植物药为主体的中药含复方，其提取物不仅具有上述体系的基本属性，还因处方“君、臣、佐、使”的配伍原理赋予“伴生物质”更丰富的内涵和更具弹性的广阔空间。一方面，提取物中“臣、佐、使”药贡献的部分可作为基本活性物质与“君”药的有关成分共同发挥多靶点治疗作用，从药物动力学角度而言，“君、臣、佐、使”药中的效应成分则可能影响君药中有效成分的吸收、分布、消除；另一方面，与基本活性物质共存的多种伴生物质，又因具有某些独特的性质而充当前者的天然辅料，对基本活性物质起着促进溶解与吸收的作用。
技术实现要素：
本发明基于植物提取物伴生原理，提供一种药物组合物，该组合物包括a、b、c、d组分，其中组分a为高乌头和川芎的提取物；组分b为延胡索和西洋参的提取物；组分c为草珊瑚和甘草的提取物；组分d为牛黄和维生素b6。
上述药物组合物作为整体，按重量份计，组分a提取物使用高乌头1-10份，川芎0.1-5份；组分b提取物使用延胡索1-15份，西洋参1-20份；组分c提取物使用草珊瑚1-10份，甘草1-10份；组分d中含牛黄0.01-0.5份，维生素b60.01-0.5份。
上述药物组合物作为整体，按重量份计，优选组分a提取物使用高乌头1-5份，川芎0.5-3份；组分b提取物使用延胡索2-7份，西洋参3-9份；组分c提取物使用草珊瑚1-5份，甘草2-6份；组分d中含牛黄0.05-0.2份，维生素b60.05-0.2份。
本发明利用植物提取物伴生原理制备的上述药物组合物中，组分a中基本活性物质来自高乌头，伴生物质来自川芎，即高乌头为主效植物药，川芎为伴生植物药；组分b中基本活性物质来自延胡索，伴生物质来自西洋参，即延胡索为主效植物药，西洋参为伴生植物药；组分c中基本活性物质来自草珊瑚，伴生物质来自甘草，即草珊瑚为主效植物药，甘草为伴生植物药；组分d为联合用药成分。
本发明提供上述药物组合物中组分a提取物的制备方法，其特征在于包括如下步骤：(1)取主效植物药高乌头(aconitumsinomontanumnakai)1-10份和伴生植物药川芎(ligusticumchuanxionghort)0.1-5份，粉碎混匀，得物料，上述份为重量份；
(2)向步骤(1)得到的物料中喷入适量氨水，密闭浸润，加入无水乙醇提取，过滤，滤液减压浓缩回收乙醇得粗提物；
(3)向步骤(2)得到的粗提物中加入盐酸调ph至2-5，再加入氨水调ph至9-11，然后用有机溶剂萃取1-5次，合并有机相，减压浓缩得浓缩物，真空干燥得组分a提取物，(经hplc分析组分a提取物中的主要成分为高乌甲素和川芎嗪)。
步骤(1)中所述的粉碎，优选粉碎粒度为10-200目；步骤(2)中所述氨水的用量以充分浸润物料为宜，所述密闭浸润时间优选10-30分钟，所述无水乙醇的用量为物料质量的3-8倍，所述提取方式选自超声提取或浸泡提取，提取温度为室温至60℃，超声提取时间为5-30分钟，超声频率为30-60khz，浸泡提取时间为2-6小时；步骤(3)所述的盐酸优选质量分数为1-3％的盐酸，所述有机溶剂优选氯仿、二氯甲烷、乙醚或乙酸乙酯中的一种；所述真空干燥温度选自室温至50℃，真空干燥时间优选12-24小时。
本发明提供上述药物组合物中组分a提取物的制备方法的另一优选实施方案，其特征在于步骤(1)中使用高乌头1-5份，川芎0.5-3份，其他步骤及参数同上。
本发明的另一实施方案提供上述组分a提取物在制备中药戒毒药物中的应用。
本发明的另一实施方案提供一种中药戒毒药物，其特征在于以组分a提取物作为有效成分。
本发明提供上述药物组合物中组分b提取物的制备方法，其特征在于包括如下步骤：(1)取主效植物药延胡索(corydalisyanhusuow.t.wangexz.y.suetc.y.)1-15份和伴生植物药西洋参(panaxquinquefoliusl)1-20份，粉碎混匀，得物料，上述份为重量份；
(2)向步骤(1)得到的物料中加入醋酸溶液和水，室温下浸泡提取1-4小时后，再加热回流提取1-3小时，自然降至室温，过滤，滤液减压浓缩得浓缩物，真空干燥得组分b提取物。(经hplc分析组分b提取物中的主要成分为延胡索乙素和人参皂苷rg1、rb1)。
步骤(1)中所述的粉碎，优选粉碎粒度为10-200目；步骤(2)中所述醋酸溶液的质量分数为0.1％-12.0％，醋酸溶液的用量与水相同，均为步骤(1)得到物料质量的2-5倍，所述真空干燥温度选自室温至50℃，真空干燥时间优选12-24小时。
本发明提供上述药物组合物中组分b提取物的制备方法的另一优选实施方案，其特征在于步骤(1)中使用延胡索2-7份，西洋参3-9份，其他步骤及参数同上。
本发明的另一实施方案提供上述组分b提取物在制备中药戒毒药物中的应用。
本发明的另一实施方案提供一种中药戒毒药物，其特征在于以组分b提取物作为有效成分。
本发明提供上述药物组合物中组分c提取物的制备方法，其特征在于包括如下步骤：(1)取主效植物药草珊瑚(sarcandraglabra(thunb.)naka)1-10份和伴生植物药甘草(glycyrrhizauralensisfisch)1-10份，粉碎混匀，得物料，上述份为重量份；
(2)向步骤(1)得到的物料中加入乙醇溶液提取，过滤，滤液减压浓缩得浓缩物，真空干燥得组分c提取物。(经hplc分析组分c提取物中的主要成分为延胡索酸、琥珀酸、东莨菪碱、甘草酸)。
步骤(1)中所述的粉碎，优选粉碎粒度为10-200目；步骤(2)中所述的乙醇溶液选自体积分数为60％-90％的乙醇溶液，乙醇溶液的用量为物料质量的3-8倍，所述提取方式选自超声提取或浸泡提取，提取温度为室温至60℃，超声提取时间为5-30分钟，超声频率为30-60khz，浸泡提取时间为1-6小时；所述真空干燥温度选自室温至50℃，真空干燥时间优选12-24小时。
本发明提供上述药物组合物中组分c提取物的制备方法的另一优选实施方案，其特征在于步骤(1)中使用草珊瑚1-5份，甘草2-6份，其他步骤及参数同上。
本发明的另一实施方案提供上述组分c提取物在制备中药戒毒药物中的应用。
本发明的另一实施方案提供一种中药戒毒药物，其特征在于以组分c提取物作为有效成分。
本发明的另一实施方案提供本发明的药物组合物在制备戒毒药物中的应用。
本发明所述的药物组合物除a、b、c、d组分外，还可包括药用辅料，例如注射用水、药用载体、表面活性剂、稀释剂、赋形剂、抗氧剂、稳定剂、增溶剂等。
本发明的另一实施方案提供一种药物组合物的制备方法，其特征在于按照主效植物药、伴生植物药及联合用药成分在药物组合物中的重量份，将组分a提取物、组分b提取物、组分c提取物和联合用药成分(即牛黄和维生素b6)按照制药领域技术规范和要求分别制备成符合临床治疗和戒毒毒瘾需求的制剂及其适宜的各种规格与剂型(包括固体制剂和液体制剂)如缓释、控释和肠溶性胶囊、片剂、混悬剂、微乳剂、亚微乳剂或含有与之相同单一及多成分组合性各种注射剂。
本发明药物组合物涉及到的剂型的制备方法，属于药剂学领域常规的制备方法，是本领域技术人员根据现有技术(例如药典、教科书及制药领域的其他技术规范)就可以实现制备，本发明对上述剂型的常规制备方法不再赘述。
本发明所述牛黄包括牛黄和人工牛黄。
附图说明
图1a:10种混合对照品hplc谱图；b：组合物1的hplc谱图；c：组合物9的hplc谱图；峰1-延胡索酸、峰2-琥珀酸、峰3-川芎嗪、峰4-东莨菪碱、峰5-延胡索乙素、峰6-延胡索甲素、峰7-高乌甲素、峰8-人参皂苷rg1、峰9-甘草酸、峰10-人参皂苷rb1。
具体实施方式
为了便于对本发明的进一步理解，下面提供的实施例对其做了更详细的说明。但是这些实施例仅供更好地理解发明而并非用来限定本发明的范围或实施原则，本发明的实施方式不限于以下内容。
实施例1组分a提取物的制备
例1
(1)取高乌头1.0kg和川芎10g，粉碎至10-200目，混匀，得物料；
(2)向步骤(1)得到的物料中喷入适量氨水(约15-20ml)，密闭浸润10-20分钟，加入无水乙醇(约3.0kg)，室温下超声提取，提取时间为30分钟，超声频率为30khz，过滤，滤液减压浓缩回收乙醇得粗提物(约200g)；
(3)向步骤(2)得到的粗提物中加入质量分数为1％盐酸调ph至2-5，再加入氨水调ph至9-11，然后用氯仿萃取3次，合并有机相，减压浓缩得浓缩物，50℃下真空干燥12小时得组分a提取物(约120g，简称产品a1，经hplc分析产品a1的主要成分为高乌甲素和川芎嗪)。
例2
(1)取高乌头1.0kg和川芎5.0kg，粉碎至10-200目，混匀，得物料；
(2)向步骤(1)得到的物料中喷入适量氨水(约100ml)，密闭浸润20-30分钟，加入无水乙醇(约48kg)，60℃下浸泡提取，浸泡时间为6小时，过滤，滤液减压浓缩回收乙醇得粗提物(约240g)；
(3)向步骤(2)得到的粗提物中加入质量分数为3％盐酸调ph至2-5，再加入氨水调ph至9-11，然后用乙酸乙酯萃取5次，合并有机相，减压浓缩得浓缩物，室温下真空干燥24小时得组分a提取物(约135g，简称产品a2，经hplc分析产品a2的hplc图谱与例1中产品a1的基本一致，主要成分为高乌甲素和川芎嗪)。
例3
(1)取高乌头10kg和川芎5.0kg，粉碎至10-200目，混匀，得物料；
(2)向步骤(1)得到的物料中喷入适量氨水(约200ml)，密闭浸润30分钟，加入无水乙醇(约50kg)，60℃下超声提取，提取时间为5分钟，超声频率为60khz，过滤，滤液减压浓缩回收乙醇得粗提物(约2100g)；
(3)向步骤(2)得到的粗提物中加入质量分数为3％盐酸调ph至2-5，再加入氨水调ph至9-11，然后用二氯甲烷萃取2次，合并有机相，减压浓缩得浓缩物，50℃下真空干燥18小时得组分a提取物(约1.25kg，简称产品a3，经hplc分析产品a3的hplc图谱与例1中产品a1的基本一致，主要成分为高乌甲素和川芎嗪)。
例4
(1)取高乌头500g和川芎300g，粉碎至10-200目，混匀，得物料；
(2)向步骤(1)得到的物料中喷入适量氨水(约12ml)，密闭浸润15分钟，加入无水乙醇(约4kg)，室温下超声提取，提取时间为15分钟，超声频率为60khz，，过滤，滤液减压浓缩回收乙醇得粗提物(约98g)；
(3)向步骤(2)得到的粗提物中加入质量分数为3％盐酸调ph至2-5，再加入氨水调ph至9-11，然后用乙醚萃取4次，合并有机相，减压浓缩得浓缩物，50℃下真空干燥18小时得组分a提取物(约61g，简称产品a4，经hplc分析产品a4的hplc图谱与例1中产品a1的基本一致，主要成分为高乌甲素和川芎嗪)。
例5
(1)取高乌头1.0kg和川芎8g，粉碎至10-200目，混匀，得物料；
(2)向步骤(1)得到的物料中喷入适量氨水(约15-20ml)，密闭浸润10-20分钟，加入无水乙醇(约3.0kg)，室温下超声提取，提取时间为30分钟，超声频率为30khz，过滤，滤液减压浓缩回收乙醇得粗提物(约115g)；
(3)向步骤(2)得到的粗提物中加入质量分数为1％盐酸调ph至2-5，再加入氨水调ph至9-11，然后用氯仿萃取3次，合并有机相，减压浓缩得浓缩物，50℃下真空干燥12小时得组分a提取物(约72g，简称产品a5，经hplc分析虽然产品a5中仍含有高乌甲素和川芎嗪，但产品a5的hplc图谱与例1中产品a1的一致性较差；分析可能是伴生植物药川芎用量减少，导致某些增加主效植物药中基本活性物质溶解度的伴生物质减少，进而导致产品a5的hplc图谱的差异)。
实施例2组分b提取物的制备
例1
(1)取延胡索1.0kg和西洋参1.0kg，粉碎至10-200目，混匀，得物料；
(2)向步骤(1)得到的物料中加入质量分数为0.1％醋酸溶液(4.0kg)和水(4.0kg)，室温下浸泡提取1小时后，再加热回流提取3小时，自然降至室温，过滤，滤液减压浓缩得浓缩物，50℃下真空干燥12小时得组分b提取物(约145g，简称产品b1，经hplc分析，产品b1的主要成分为延胡索乙素和人参皂苷rg1、rb1)。
例2
(1)取延胡索1.5kg和西洋参100g，粉碎至10-200目，混匀，得物料；
(2)向步骤(1)得到的物料中加入质量分数为12％醋酸溶液(8.0kg)和水(8.0kg)，室温下浸泡提取4小时后，再加热回流提取1小时，自然降至室温，过滤，滤液减压浓缩得浓缩物，室温下真空干燥24小时得组分b提取物(约200g，简称产品b2，经hplc分析产品b2的hplc图谱与例1中产品b1的基本一致，主要成分为延胡索乙素和人参皂苷rg1、rb1)。
例3
(1)取延胡索2.0kg和西洋参9.0kg，粉碎至10-200目，混匀，得物料；
(2)向步骤(1)得到的物料中加入质量分数为5％醋酸溶液(40.0kg)和水(40.0kg)，室温下浸泡提取2小时后，再加热回流提取2小时，自然降至室温，过滤，滤液减压浓缩得浓缩物，室温下真空干燥18小时得组分b提取物(约350g，简称产品b3，经hplc分析产品b3的hplc图谱与例1中产品b1的基本一致，主要成分为延胡索乙素和人参皂苷rg1、rb1)。
例4
(1)取延胡索5.0kg和西洋参3.0kg，粉碎至10-200目，混匀，得物料；
(2)向步骤(1)得到的物料中加入质量分数为1％醋酸溶液(25kg)和水(25kg)，室温下浸泡提取4小时后，再加热回流提取3小时，自然降至室温，过滤，滤液减压浓缩得浓缩物，40℃下真空干燥16小时得组分b提取物(约720g，简称产品b4，经hplc分析产品b4的hplc图谱与例1中产品b1的基本一致，主要成分为延胡索乙素和人参皂苷rg1、rb1)。
例5
(1)取延胡索1.5kg和西洋参90g，粉碎至10-200目，混匀，得物料；
(2)向步骤(1)得到的物料中加入质量分数为12％醋酸溶液(8.0kg)和水(8.0kg)，室温下浸泡提取4小时后，再加热回流提取1小时，自然降至室温，过滤，滤液减压浓缩得浓缩物，室温下真空干燥24小时得组分b提取物(约148g，简称产品b5，经hplc分析虽然产品b5中仍含有延胡索乙素和人参皂苷rg1、rb1，但产品b5的hplc图谱与例2中产品b2的一致性较差；分析可能是伴生植物药西洋参用量减少，导致某些增加主效植物药中基本活性物质溶解度的伴生物质减少，进而导致产品b5的hplc图谱的差异)。
实施例3组分c提取物的制备
例1
(1)取草珊瑚1.0kg和甘草1.0kg，粉碎至10-200目，混匀，得物料；
(2)向步骤(1)得到的物料中加入体积分数为60％的乙醇溶液(6.0kg)，室温下超声提取，提取时间为30分钟，超声频率为30khz，过滤，滤液减压浓缩得浓缩物，50℃下真空干燥12小时得组分c提取物(约160g，简称产品c1，经hplc分析组产品c1的主要成分为延胡索酸、琥珀酸、东莨菪碱、甘草酸)。
例2
(1)取草珊瑚10kg和甘草1.0kg，粉碎至10-200目，混匀，得物料；
(2)向步骤(1)得到的物料中加入体积分数为90％的乙醇溶液(88kg)，60℃下浸泡提取，浸泡时间为6小时，过滤，滤液减压浓缩得浓缩物，室温下真空干燥24小时得组分c提取物(约1.52kg，简称产品c2，经hplc分析产品c2的hplc图谱与例1中产品c1的基本一致，主要成分为延胡索酸、琥珀酸、东莨菪碱、甘草酸)。
例3
(1)取草珊瑚1.0kg和甘草6.0kg，粉碎至10-200目，混匀，得物料；
(2)向步骤(1)得到的物料中加入体积分数为85％的乙醇溶液(66kg)，60℃下超声提取，提取时间为5分钟，超声频率为60khz，过滤，滤液减压浓缩得浓缩物，40℃下真空干燥24小时得组分c提取物(约182g，简称产品c3，经hplc分析产品c3的hplc图谱与例1中产品c1的基本一致，主要成分为延胡索酸、琥珀酸、东莨菪碱、甘草酸)。
例4
(1)取草珊瑚500g和甘草200g，粉碎至10-200目，混匀，得物料；
(2)向步骤(1)得到的物料中加入体积分数为70％的乙醇溶液(3.5kg)，60℃下超声提取，提取时间为10分钟，超声频率为60khz，过滤，滤液减压浓缩得浓缩物，50℃下真空干燥16小时得组分c提取物(约86g，简称产品c4，经hplc分析产品c4的hplc图谱与例1中产品c1的基本一致，主要成分为延胡索酸、琥珀酸、东莨菪碱、甘草酸)。
例5
(1)取草珊瑚10kg和甘草800g，粉碎至10-200目，混匀，得物料；
(2)向步骤(1)得到的物料中加入体积分数为90％的乙醇溶液(88kg)，60℃下浸泡提取，浸泡时间为6小时，过滤，滤液减压浓缩得浓缩物，室温下真空干燥24小时得组分c提取物(约960g，简称产品c5，经hplc分析虽然产品c5中仍含有延胡索酸、琥珀酸、东莨菪碱、甘草酸，但产品c5的hplc图谱与例2中产品c2的一致性较差；分析可能是伴生植物药甘草用量减少，导致某些增加主效植物药中基本活性物质溶解度的伴生物质减少，进而导致产品c5的hplc图谱的差异)。
实施例4常规提取物的制备
为比较采用伴生原理制备的提取物中化学成分发生集聚效应的优势，特将产品a1、b1、c1及产品a3、b3、c3相同配方按照目前常规中药提取方法制备常规提取物a和常规提取物b。
例1
取高乌头(1.0kg)、延胡索(1.0kg)、草珊瑚(1.0kg)、川芎(10g)、西洋参(1.0kg)、甘草(1.0kg)六味饮片混匀，粉碎至10-200目，混匀，得物料；加入体积分数70％乙醇溶液，60℃下超声提取，提取时间为30分钟，超声频率为60khz，过滤，滤液减压浓缩得浓缩物，室温下真空干燥24小时得常规提取物a(480g，hplc分析，未检测到川芎嗪、东莨菪碱和高乌甲素)。
例2
取高乌头(10kg)、延胡索(2.0kg)、草珊瑚(1.0kg)、川芎(5.0kg)、西洋参(9.0kg)、甘草(6.0kg)六味饮片混匀，粉碎至10-200目，混匀，得物料；加入体积分数90％乙醇溶液，60℃下超声提取，提取时间为30分钟，超声频率为60khz，过滤，滤液减压浓缩得浓缩物，室温下真空干燥24小时得常规提取物b(1.62kg，hplc分析，基本与常规提取物a的图谱一致，仍未检测到川芎嗪、东莨菪碱和高乌甲素)。
本发明实施例1-4中使用的高乌头、延胡索、草珊瑚、川芎、西洋参、甘草均为中药饮片。
实施例5药物组合物的制备
采用药物制剂领域常规的方法，可将实施例1-4制备的提取物、牛黄、维生素b6、任选药用辅料(例如药用载体、表面活性剂、稀释剂、赋形剂、抗氧剂、稳定剂、增溶剂等)按照组合物中的重量份，制备成固体制剂(例如片剂、胶囊剂等)、液体制剂(如口服液、注射剂等)。
本发明以下制备例中片剂采用的通用制备方法为：提取物(a、b、c)、牛黄、维生素b6与适量药用辅料(无水乙醇、羧甲基纤维素钠、硬脂酸镁)混匀、压片制成片剂；注射剂(包括混悬型注射剂)的通用制备方法为：提取物(a、b、c)、牛黄、维生素b6与适量药用辅料(注射用水、吐温-80、聚乙二醇400)混合搅拌均匀，滤过，除菌，灌封至西林瓶中，得注射剂。
组合物1：将产品a1、产品b1、产品c1、人工牛黄(10g)、维生素b6(10g)制备成片剂，即组合物1。
组合物2：将产品a2、产品b1、产品c1、人工牛黄(50g)、维生素b6(20g)制备成注射剂，即组合物2。
组合物3：将产品a3、产品b3、产品c3、人工牛黄(200g)、维生素b6(50g)制备成片剂，即组合物3。
组合物4：将产品a4、产品b2、产品c4、人工牛黄(50g)、维生素b6(10g)制备成片剂，即组合物4。
组合物5：将产品a2、产品b1、产品c2、人工牛黄(100g)、维生素b6(20g)制备成片剂，即组合物5。
组合物6：将产品a5、产品b1、产品c1、人工牛黄(10g)、维生素b6(10g)制备成片剂，即组合物6。
组合物7：将产品a4、产品b5、产品c4、人工牛黄(50g)、维生素b6(10g)制备成片剂，即组合物7。
组合物8：将产品a2、产品b1、产品c5、人工牛黄(100g)、维生素b6(20g)制备成片剂，即组合物8。
组合物9：将常规提取物a与人工牛黄(10g)、维生素b6(10g)制备成片剂，即组合物9。
组合物10：将常规提取物b与人工牛黄(200g)、维生素b6(50g)制备成片剂，即组合物10。
实施例6组合物1-10(实施例5制备的)对吗啡依赖小鼠的戒断作用
动物：昆明小鼠1000只，雄性，6周龄，体重20-24g；由第四军医大学实验动物中心提供，生产合格证号：scxk(军)字第2012-0007号。
试剂和仪器：组合物1-10由申请者按实施例5中配方及常规方法制备，批号为20161103，盐酸美沙酮口服溶液(天津市中央药业有限公司)，批号：20161201，规格：10ml∶10mg，临用时以生理盐水稀释成0.25mg/ml，灌胃(ig)；盐酸吗啡注射液(沈阳第一制药厂)，规格：10mg/ml，批号：20161102；盐酸纳络酮注射液(北京四环医药科技股份有限公司)，规格：0.4mg/ml，批号：20161202；0.6％醋酸溶液(临用前取冰醋酸1.2ml加蒸馏水至200ml)。
组合物1-10对小鼠吗啡成瘾戒断作用：按文献[1-2]将小鼠随机分12组，每组12只，分别为模型组、美沙酮阳性组、组合物1、组合物2、组合物3、组合物4、组合物5、组合物6、组合物7、组合物8、组合物9、组合物10。各组小鼠每12小时皮下注射(sc)吗啡100mg/kg，共14次(7天)，造成吗啡成瘾模型。美沙酮组给药剂量为5mg/kg，组合物1-10给药剂量为75mg/kg，模型组灌胃(ig)等体积生理盐水。各组分别于催瘾前3天上午9时给药，1次/日，催瘾前再给药1次。末次给药6小时后sc纳络酮5mg/kg催瘾，立即称体重后把小鼠放入40×30cm圆桶内，观察记录纳络酮注射后30min内的跳跃动物数和每个小鼠的跳跃次数，1天后再称体重1次，计算2次体重差及动物跳跃次数；结果见表1-2。
表1组合物1-10抑制小鼠吗啡成瘾戒断后的跳跃率
与模型组和美沙酮组比较：*p<0.05，**p<0.01。
表2组合物1-10对小鼠吗啡成瘾戒断后的跳跃和体重的影响
与模型组比较：*p<0.05，**p<0.01。
上述活性测试结果表明，组合物1-5能明显抑制小鼠吗啡成瘾戒断后的跳跃发生率。组合物1-5给药3天对小鼠吗啡成瘾戒断后的跳跃发生率、跳跃次数及戒断后的体重恢复均有显著作用；其作用显著优于组合物6-10和美沙酮组，其中组合物6-8的活性优于组合物9-10及美沙酮组。
组合物1-5与组合物6-8之间的活性差异，说明本发明组合物中提取物a、b、c中主效植物药与伴生植物药比例的选择对组合物的疗效，起到至关重要的作用；组合物1-5与组合物9-10(常规提取物)之间的活性差异，说明本发明基于植物提取物伴生原理得到的药物组合物中确实含有某些伴生物质可增强基本活性物质的作用。
实施例7
为进一步探索实施例6中组合物1-5与组合物6-10的活性差异，对组合物1-10进行hplc分析。
实验材料与仪器
(1)对照品与试剂
延胡索酸(含量>98％)、琥珀酸(含量>98％)、川芎嗪(含量>98％)、东莨菪碱(含量>98％)、高乌甲素(含量>98％)、延胡索乙素(含量：>98％)、延胡索甲素(含量：>98％)、人参皂苷rb1(含量：>98％)、甘草酸(含量：>98％)、人参皂苷rb1(含量：>98％)购自中国药品生物制品检定所；乙睛(色谱纯)购自美国fisher科学世界公司；磷酸、三乙胺(色谱纯)购自天津市科密欧化学试剂有限公司；浓硫酸、naoh、95％乙醇(分析纯)购自天津红岩化学试剂厂；乙酸乙酯、氯仿购自天津红岩化学试剂厂；去离子水由millipore水纯净系统自制。
(2)主要仪器
lc-2010ht型高效液相色谱系统，日本岛津公司；tgl-16gb型低速离心机，上海安亭科学仪器厂；me2355型电子天平，德国sartorius公司。
实验方法
(1)hplc检测条件：美国菲罗门反相键合硅胶-c18色谱柱(250mm×4.6mmi.d.，5μm)和c18预柱(10mm×4.6mm，5μm)；流动相为乙睛(ⅰ)-0.1％磷酸(用三乙胺调至ph5.7；ⅱ)；梯度洗脱：0～18min，20％ⅰ；10～30min，15～25％ⅰ；20～50min，20～80％ⅰ；40～60min，80％ⅰ；流速lml/min；检测波长280nm；柱温30℃；进样量10μl。
(2)检测样品制备
①对照品溶液制备：分别精密称取延胡索酸5.0mg、琥珀酸5.0mg、川芎嗪5.0mg、东莨菪碱5.0mg、延胡索乙素5.0mg、延胡索甲素5.0mg、高乌甲素5.0mg、人参皂苷rg15.0mg、甘草酸5.0mg、人参皂苷rb15.0mg对照品于10ml容量瓶中，加入甲醇溶解并稀释至刻度，作为母液；分别精密量取上述母液适量，置于2ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，并摇匀，制成梯度稀释混合对照品溶液，置于4℃冰箱保存。
②组合物溶液制备：分别精密称取组合物1-10样品5.0mg，加乙腈定容至5ml量瓶，微孔滤膜滤过，取续滤液即得组合物溶液；按照hplc检测条件测定。
检测结果
(1)标准曲线
取“对照品溶液制备”项下系列混合标准品溶液，按“hplc检测条件”进行测定。以延胡索酸、琥珀酸、川芎嗪、东莨菪碱、延胡索乙素、延胡索甲素、高乌甲素、人参皂苷rg1、甘草酸、人参皂苷rb1的浓度为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归(n＝3)；结果表明，各对照品在一定范围内线性关系良好(表3和图1中a)。
表3对照品溶液标准曲线(n＝3)
(2)组合物1-10中10种成分的含量
分别对配制的组合物1-10溶液，按“hplc检测条件”进行测定。结果表明组合物1-5中的hplc图基本一致(以组合物1的hplc图为例，见图1b)，尤其是延胡索酸、琥珀酸、川芎嗪、东莨菪碱、延胡索乙素、延胡索甲素、高乌甲素、人参皂苷rg1等成分的比例基本相同；组合物6、7、8的hplc图谱各不相同(尤其是在延胡索酸、琥珀酸、川芎嗪、东莨菪碱、延胡索乙素、延胡索甲素、高乌甲素、人参皂苷rg1等成分的比例含量)与组合物1-5的hplc图谱中上述10种成分的比例含量差异明显；组合物9-10的hplc图谱基本一致，其中缺少川芎嗪(峰3)、东莨菪碱(峰4)和高乌甲素(峰7)，而且成分延胡索酸(峰1)、延胡索乙素(峰5)和人参皂苷(峰8、10)和甘草酸(峰9)的相对含量均低于组合物1-5中的相对含量(以组合物9的hplc图为例，图1c)。
由于组合物1-5的hplc图基本一致，且延胡索酸、琥珀酸、川芎嗪、东莨菪碱、延胡索乙素、延胡索甲素、高乌甲素、人参皂苷rg1等成分的比例基本相同。因此，以组合物1为例，组合物1三批重复实验样品的检测及其计算的10种主要成分含量数据见表4。
表4组合物1中10种主要成分含量(n＝3，
实施例8
按照实施例7测定的组合物1中10种主要成分的平均值的比例，取对照品延胡索酸(46.7mg)、琥珀酸(25.2mg)、川芎嗪(36.2mg)、东莨菪碱(29.7mg)、延胡索乙素(55.5mg)、延胡索甲素(104.6mg)、高乌甲素(93.2mg)、人参皂苷rg1(20.4mg)、甘草酸(105.6mg)、人参皂苷rb1(28.2mg)、人工牛黄(50mg)、维生素b6(20mg)与适量药用辅料(无水乙醇、羧甲基纤维素钠、硬脂酸镁)混匀、压片制成片剂，即组合物11。
按照实施例6记载的组合物1-10对吗啡依赖小鼠的戒断作用的实验方法，测试组合物11的活性，结果表明组合物11对小鼠吗啡成瘾戒断后的跳跃发生率、跳跃次数显示出一定的抑制作用，但是其作用明显低于组合物1-5，略优于组合物6-8。
上述实验结果，进一步证实，本发明基于植物提取物伴生原理得到的组分a提取物(基本活性物质来自高乌头，伴生物质来自川芎)、组分b提取物(基本活性物质来自延胡索，伴生物质来自西洋参)、组分c提取物(基本活性物质来自草珊瑚，伴生物质来自甘草)组成的本发明药物组合物中含有某些伴生物质可增强基本活性物质的作用，本发明药物组合物的药理作用是单一化学成分组成的组合物无法代替的。
实施例9组合物1、6、9、11对小鼠镇痛作用
扭体法：按照文献[3]方法，72只小鼠随机分成吗啡组(剂量为50mg/kg)、组合物1、组合物6、组合物9、组合物11(剂量均为75mg/kg)和对照组。小鼠灌胃(ig)，对照组给以等体积生理盐水；连续给药3天，末次ig后30分钟各组小鼠腹腔注射(ip)0.6％醋酸溶液10ml/kg，观察ip后出现扭体的时间(潜伏期)和15分钟内出现扭体(伸展后肢，腹部收缩内凹，臀部抬高)次数。结果见表5。结果证实组合物1连续ig3天，能显著减少ip醋酸所致的小鼠扭体次数，说明组合物1有显著镇痛作用，其作用显著优于组合物6、9和11。
表5组合物对小鼠的镇痛作用(醋酸扭体法)
与对照组比较：*p<0.05，**p<0.01；与常规提取物组(组合物9)比较：δp<0.05，δδp<0.01。
实施例10：组合物1对吗啡依赖大鼠戒断的thl/th2平衡作用机制
通过检测大鼠在吗啡依赖、自然戒断和给予组合物治疗后thl/th2相关细胞因子，探讨其对thl/th2平衡的影响，评价本组合物1对阿片类物质依赖和止痛的初步作用机制。具体实验方法参照文献：“戒毒中药玄夏对吗啡依赖大鼠戒断过程中th1/th2平衡的影响”，孙莉，等，中国药物依赖性杂志，2008年第17卷第5期，第337-340页。
材料与方法
1、动物：成年sd大鼠32只，雄性，6周龄，体重220-240g；由第四军医大学实验动物中心提供，生产合格证号：scxk(军)字第2012-0007号。
2、试剂和仪器：组合物1，批号20161103；由申请者制备。盐酸吗啡，青海制药厂生产，批号：20161101；刀豆蛋白a(concanavalina，cona)，sigma公司生产：rpmi-1640培养基(含10％胎牛血清、谷氨酰胺2mmol/l，hepes10mmol/l，青霉素100iu/ml，链霉素100μg/ml)；大鼠ifn-γ、il-2、il-4和il-6的elisa试剂盒均为美国biosource公司产品；co2细胞孵育箱(napco5400，usa)和sm型酶标分析仪。
实验方法
1、动物分组与处理方法：大鼠随机分为对照组、吗啡依赖组、自然戒断组和组合物1治疗组4组，每组8只。除正常对照组每日两次(8、16时)sc等容积的生理盐水外，其余组按文献[4]方法建立吗啡依赖模型，每天2次sc吗啡(8时和l6时)，第1-2天剂量为20mg/kg；第3-5天剂量为30mg/kg；第6-7天剂量为40mg/kg。第8天早8时用20mg/kg剂量一次sc。组合物1治疗组于给吗啡的第4天起每日灌胃(ig)0.15g/kg，直至取脾脏前。于第8天最后一次sc吗啡后，对照组和吗啡依赖组大鼠经注射戊巴比妥钠麻醉，在无菌条件下取出脾脏。自然戒断组和组合物1治疗组于停给吗啡72h后以同法取脾脏。
2、脾细胞悬液的制备：无菌取出的脾脏用冷hank’s液冲洗后，用玻璃组织匀浆器捻碎，过滤后将细胞悬液移到离心管内，离心(1200g，10min)，弃上清。加入l0倍体积的tri-nh4cl混合，置室温10min后，离心(150g，10min)。再用冷hank’s液洗涤细胞2次，最后用含10％胎牛血清的rpmi-1640培养液悬浮细胞，用台盼蓝染色测细胞存活率并计数细胞，调节细胞浓度至5×106ml。
3、细胞因子的测定：将浓度为5×106ml的脾细胞悬液滴人96孔细胞培养板，每孔1ml，每只大鼠的脾细胞悬液滴2孔。每孔内加人cona(终浓度为5μg/ml)，将细胞培养板置37℃-5％co2细胞培养箱中培养，48h后分别收集每孔中细胞培养上清液，离心、分装，置-70℃冰箱保存。用elisa测定细胞培养上清液中ifn-γ、il-2、il-4和il-6四种细胞因子的含量。
4、统计方法：测得各细胞因子的水平以
实验结果
各组大鼠脾细胞培养液经cona诱导，从四种细胞因子的测定结果看到，ifn-γ、il-2和il-6三种细胞因子的组间差异有统计学意义(p<0.05)，il-4组间差异无统计学意义，见表6。
表6大鼠脾细胞上清液中细胞因子水平的比较(n＝8；
与对照组比较：*p<0.05，**p<0.05；与自然戒断组比较：δp<0.05；与吗啡依赖组比较：δp<0.05。
实验结果表明，采用组合物1治疗后，thl型细胞因子ifn-γ和il-2能恢复到正常水平，提示组合物1具有抑制大鼠吗啡依赖时增强了thl型免疫应答，对thl/th2平衡具有显著调节作用，说明本发明组合物的戒断毒瘾作用可能与其调节thl/th2平衡有关。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考文献，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述内容之后，本领域的技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
参考文献
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