包含他克莫司的局部组合物的制作方法

特应性皮炎是一种常见的慢性复发性炎症性皮肤病。该疾病的确切原因是一个有争议的问题，但其特征在于湿疹性病变、皮肤干燥和强烈的瘙痒(搔痒)。还有强有力的证据表明近年来特应性皮炎的患病率一直在增加。病症可以从轻微到严重，并且随后有对生活品质的损害。目前的治疗方案包括使用润肤霜，然后对其以渐变的规模补充其他疗法。局部应用温和皮质类甾醇如醋酸氢化可的松通常是下一步，只有在必要时才使用越来越强效的皮质类甾醇。然而，存在许多与局部皮质类甾醇相关的潜在缺点。这些缺点(尤其适用于更强效的皮质类固醇的这些缺点)可包括皮肤变薄、快速耐受和反弹现象。由于这些和其他潜在的副作用，不建议将皮质类甾醇用在面部区域上。尽管事实上在面部上发展的特应性皮炎可能对患者的生活品质最不利。最近，局部应用的大环内酰胺免疫抑制剂已用于治疗中度至重度特应性皮炎。与皮质类甾醇不同，这些化合物通常具有良好的耐受性，因此可用于面部区域。他克莫司属于子囊霉素类的大环内酰胺类免疫抑制剂。在机制上，他克莫司不直接抑制细胞过程，而是与特异性细胞质蛋白顺反脯氨酰基异构酶fkbp12(也称为fk506结合蛋白，是免疫亲和素蛋白家族的成员)形成复合物。正是该所得复合物随后抑制炎症反应。在他克莫司的情况下，衍生的复合物抑制钙调神经磷酸酶，阻止激活的t细胞的核因子(nf-at)的去磷酸化，从而降低编码这些细胞内的il-2和相关细胞因子的基因的活性。虽然他克莫司在其耐受性方面比皮质类甾醇具有明显优势，但将他克莫司配制用于局部应用已证明具有挑战性。出现的第一个困难是获得化学和物理稳定的产品。出现的第二个困难是设法通过外皮屏障递送足够量的活性剂以使其有效。他克莫司的渗透受其分子大小(804da)的阻碍，该分子大小远远大于公认的500da的易渗透尺寸。虽然疾病状态在一定程度上损害皮肤屏障，但仍需要改善他克莫司向皮肤中渗透的策略。商业上，已经发布了0.03％和0.1％的他克莫司无水软膏(由astellas提供的protopictm)。两种商品均含有分散在液体石蜡、白色软石蜡、硬石蜡和蜂蜡介质中的极性溶剂(碳酸亚丙酯)。碳酸亚丙酯充当药物的载体和渗透增强剂。虽然溶剂用于将他克莫司递送至更深的皮肤层，但它会进一步破坏已经受损的皮肤屏障，从而对皮肤造成刺激。缺水限制了由于水解或ph不相容性引起的化学降解的可能性，并且大体积赋形剂的封闭性质产生了高度的封闭，有助于活性剂的渗透。然而，与大多数软膏一样，缺水和石蜡和蜡组分的存在使得制剂具有非常差的审美特征(s.e.wolverton,comprehensivedermatologicdrugtherapy，第3版，(2012),p13)。这可能严重限制患者的依从性。几种非软膏他克莫司制剂是已知的。例如，us2005/0249757公开了一种药物霜剂组合物，其包含大环内酯免疫抑制剂、一种或多种霜剂形成剂和有效量的一种或多种皮肤渗透增强剂。us2012/0184511公开了大环内酯免疫抑制剂的液体微乳液。该组合物包含高水平的表面活性剂和极性水混溶性液体作为渗透增强剂。ep2596788公开了一种包含他克莫司的水包油型霜剂组合物，其中癸二酸二异丙酯可用于油相中。没有公开组合物在高温(例如40℃)下的长期稳定性。虽然已知的非软膏制剂可能具有比protopictm制剂更好的审美特征，但它们往往也缺乏活性剂的化学稳定性。此外，为了实现活性剂的充分渗透，通常需要包含大量表面活性剂和/或极性水混溶性液体。这由us2005/0249757、us2012/0184511和ep2596788例举。由于这些组分含量高，这些非软膏制剂往往会刺激皮肤。因此，本发明的一个目的是提供一种能够将他克莫司递送到皮肤中的制剂，其具有比现有技术制剂更好的审美特性，同时尽可能地对皮肤屏障温和。换句话说，本发明的一个目的是提供一种比现有技术制剂具有更好的患者依从性的他克莫司制剂。替代性和/或另外的目的是提供一种他克莫司制剂，该制剂具有比现有技术制剂更好的皮肤渗透性或至少提供其商业上有用的替代物。替代性和/或另外的目的是提供一种制剂，与现有制剂相比，该制剂显示出改善的他克莫司的化学稳定性。根据第一方面，本发明提供一种用于局部应用的组合物，其包含：包含第一油和他克莫司的第一不连续相；包含第二油的第二不连续相；和连续水相；其中所述第一油与所述第二油不同。本发明人发现，与现有技术的非软膏制剂不同，本文公开的组合物不需要实现良好的皮肤渗透的高水平的极性水混溶性液体或高水平的表面活性剂。这显示出许多优点。首先，该组合物对皮肤的刺激性较小，提供了改善的患者依从性。在患者已经患有炎性皮肤的情况下，这是特别有利的。其次，如在猪炎症模型中测试的，该组合物在体内具有优异的功效。此外，令人惊讶的是他克莫司具有比许多现有制剂，尤其是非软膏制剂更高的化学稳定性。这将在下面更详细地解释。现在将进一步描述本发明。在以下段落中，更详细地定义了本发明的不同方面/实施方式。除非明确地相反指示，否则如此定义的每个方面/实施方式可以与任何其他方面/实施方式组合。特别地，被指示为优选或有利的任何特征可以与被指示为优选或有利的任何其他特征组合。本发明提供用于局部应用的组合物。用于局部应用的组合物在本文中定义为适合直接施用于人体或动物体的一部分的组合物。优选地，该组合物适合直接施用于皮肤，例如面部、头皮、足、四肢或躯干。本发明的组合物包含第一不连续相、第二不连续相和连续水相。换句话说，该组合物包含第一不连续相和第二不连续相在连续水相中的分散体。如本文所用的术语“不连续相”是指形成该特定油相的油滴的多个离散区域。它不用于指单个油滴。这些相在物理和化学上是不同的。应该理解的是，第一不连续相并不分散在第二不连续相中，反之亦然。换句话说，该组合物不含复杂的内相，例如wo2005/082515中所公开的。图1中提供了显示根据本发明的组合物的结构的简单示意图。在本发明组合物中包含连续水相使其能够以洗剂或霜剂的形式提供，而不是软膏。因此，相对于现有技术的软膏，本发明的组合物具有改善的审美特征，从而改善患者的依从性。优选地，该组合物是洗剂或霜剂的形式。第一不连续相和第二不连续相分别包括第一油和第二油。第一油与第二油不同，即在化学上与第二油不同。优选地，第一油和/或第二油是药学上可接受的油。可在本发明中使用的油的实例包括：椰子油、角鲨烷、肉豆蔻酸异丙酯、异硬脂酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、改性甘油三酯、辛酸癸酸甘油酯、分馏甘油三酯、甘油三癸酸酯、甘油三己酸酯、甘油三辛酸酯、甘油三辛酸/癸酸酯、甘油三辛酸/癸酸酯、甘油三辛酸/癸酸/月桂酸酯、甘油三辛酸/癸酸/亚油酸酯、甘油三辛酸/癸酸/硬脂酸酯、甘油三月桂酸酯、甘油三亚油酸酯、甘油三亚麻酸酯、甘油三油酸酯、甘油三(十一烷酸)酯、亚油酸甘油酯、饱和的聚乙二醇化甘油酯、主要含有c8-c12脂肪酸链的合成中链甘油三酯、中链甘油三酯、长链甘油三酸酯、改性甘油三酯、分馏甘油三酯、异硬脂酸异硬脂基酯、己二酸二异丙酯、矿物油、聚二甲基硅氧烷、环二甲基硅氧烷、氢化聚异丁烯、七甲基壬烷，和它们的混合物。优选地，该组合物不包含在25℃下为固体的蜡组分。应该理解的是，第一油和第二油形成两种不同的不连续相。在某些示例性实施方式中，第一油和第二油基本上不混溶。然而，同样可以由两种可混溶的或至少部分可混溶的油形成两种不同的不连续相。这可以通过将第一油和第二油分别分散在连续相中而不预先混合油来实现。优选地，第一不连续相不包含第二油，并且第二不连续相不包含第一油。第一不连续相包含他克莫司。应该理解的是，术语“他克莫司”包括无水他克莫司和他克莫司水合物。他克莫司是一种大环内酯类，属于聚酮化合物类的天然产物。它是一种免疫抑制剂，并且已知可治疗皮肤病症。用于本发明的他克莫司的来源优选是无水他克莫司，尽管会意识到可以使用其他来源的他克莫司，例如他克莫司水合物。引入基于本文的组合物中的他克莫司的量以他克莫司的无水形式计。根据用于在最终组合物中提供所需量的来源，调节组合物制备中使用的量将在本领域技术人员的能力范围内。优选地，第一油包含己二酸二异丙酯。如实施例中所示，己二酸二异丙酯、癸二酸二乙酯和己二酸二丁酯对于他克莫司都具有相似的溶解度曲线。然而，包含己二酸二异丙酯作为第一油的一部分令人惊讶地导致比包含癸二酸二乙酯或己二酸二丁酯时显著更高的他克莫司化学稳定性。不希望受理论限制，认为所有三种油中存在的两种酯键在己二酸二异丙酯中由于靠近键的甲基接近/构象所引起的空间位阻而得到更多保护。据认为，该键的降解可能随后影响活性剂的稳定性，因此解释了当包含己二酸二异丙酯时增加的稳定性。第一不连续相有利地包含对于他克莫司具有高溶解能力的油，因为这允许对于给定的总体他克莫司浓度限制第一油的量。因为本文公开的组合物含有两种不连续相，所以在第一不连续相中使用对于他克莫司具有差的溶解能力的油将导致制剂的总油含量高，从而产生差的、油腻的审美。第一油的量对其中第一油和第二油以优选比例使用的制剂的总油水平具有显著影响。优选地，该组合物包含小于1重量％的癸二酸二乙酯和/或小于1重量％的己二酸二丁酯。优选地，该组合物不包含癸二酸二乙酯和/或不包含己二酸二丁酯。另一种对于他克莫司具有良好溶解性的油是乙二醇水杨酸酯。这种油经常用于现有技术系统中。然而，本发明人发现，当使用己二酸二异丙酯时，本发明组合物的物理稳定性显着高于乙二醇水杨酸酯。不希望受理论限制，认为己二酸二异丙酯具有比乙二醇水杨酸酯高的logp并因此更少“极性”，具有较低的分配到水相中的倾向。优选地，该组合物包含占组合物重量小于1重量％的乙二醇水杨酸酯。更优选地，该组合物不包含乙二醇水杨酸酯。优选地，除了己二酸二异丙酯之外，第一油包含与肉豆蔻酸异丙酯和/或棕榈酸异丙酯组合的辛酸癸酸甘油三酯。作为选择，除己二酸二异丙酯外，第一油可包含蓖麻油和/或角鲨烷。这些油增加了己二酸二异丙酯的粘度，从而改善了其加工性。它们还可以改善组合物的物理稳定性，当使用低含量的表面活性剂时尤其如此。优选地，第一油包含己二酸二异丙酯和/或肉豆蔻酸异丙酯和/或辛酸癸酸甘油三酯，和/或由己二酸二异丙酯和/或肉豆蔻酸异丙酯和/或辛酸癸酸甘油三酯组成。本发明人还发现，辛酸癸酸甘油三酯和/或肉豆蔻酸异丙酯对于他克莫司具有合理的溶解度特征并且提供润肤功能。因此，特别优选第一油包含己二酸二异丙酯与辛酸癸酸甘油三酯和/或肉豆蔻酸异丙酯的组合，和/或由其组成。优选地，基于第一油的重量，第一油包含10重量％至40重量％的己二酸二异丙酯和/或10重量％至40重量％的肉豆蔻酸异丙酯和/或2重量％0至80重量％的辛酸癸酸甘油三酯。更优选地，基于第一油的重量，第一油包含20重量％至30重量％的己二酸二异丙酯和/或20重量％至30重量％的肉豆蔻酸异丙酯和/或40重量％至60重量％的辛酸癸酸甘油三酯。优选地，第一油由己二酸二异丙酯和/或肉豆蔻酸异丙酯和/或辛酸癸酸甘油三酯组成，优选为上述量。优选地，第二油包含润肤油或由其组成，更优选包含选自下述的油或由其组成：矿物油、聚二甲基硅氧烷、环二甲基硅氧烷、氢化聚异丁烷，七甲基壬烷及其两种以上的混合物。最优选地，第二油包含矿物油或由其组成。第二油有助于制剂的润肤性质以及提供封闭层以促进他克莫司的扩散。因此，增强了组合物的扩散性质。优选地，他克莫司基本上不溶于第二油。换句话说，第二油优选用作非溶剂油相。优选地，第一不连续相包含的第一油的量为第一不连续相的至少90重量％，更优选至少95重量％，还更优选至少97.5重量％，最优选至少99重量％。优选地，第一不连续相包含的第一油为第一不连续相的至多99.75重量％。优选地，第一不连续相包含他克莫司的量为不连续相的0.025重量％至10重量％，更优选0.05重量％至5重量％，还更优选0.25重量％至2.5重量％，并且最优选约0.5重量％。优选地，第一不连续相由第一油和他克莫司组成，更优选以上述量组成。优选地，第二不连续相包含的第二油的量为第二连续相的至少90重量％，更优选至少95重量％，还更优选至少99重量％，并且最优选第二不连续相由第二油组成。优选地，他克莫司主要在第一不连续相。主要在第一不连续相中，意指至少90重量％的他克莫司在所述不连续相，优选至少95重量％，更优选至少99重量％。组合物的这种性质是由于以下导致的：在第一不连续相中使用对于他克莫司具有良好的溶解性特征的一种或多种油，而在第二不连续相中使用非溶剂油。优选地，他克莫司基本上可溶于第一油和/或基本上不溶于第二油。基本上可溶的是指在25℃下的溶解度为至少0.1重量％，优选至少0.2重量％。基本上不溶是指在25℃下的溶解度小于0.1重量％，优选小于0.05重量％。作为对油相进行选择的结果，本发明的连续水相不需要包含高含量的极性水混溶性液体，例如醇和二醇，以实现他克莫司的有效皮肤渗透或溶剂化。通常需要这些液体作为常规他克莫司制剂中的渗透增强剂。优选地，本发明的组合物包含小于所述组合物的10重量％的c1-c4醇、聚乙二醇、乙二醇、丙二醇、丁二醇、戊二醇、甘油、二乙二醇单乙醚、碳酸亚丙酯或其混合物。换句话说，这些组分不需要存在于组合物中，但是当存在其中一种或多种组分时，这些组分的总量小于组合物的10重量％。更优选地，该组合物包含小于组合物的5重量％的c1-c4醇、聚乙二醇、乙二醇、丙二醇，丁二醇、甘油、二乙二醇单乙醚、碳酸亚丙酯或其混合物，还更优选小于组合物的2重量％，更优选小于1重量％，更优选小于0.5重量％，更优选小于0.2重量％，最优选小于0.1重量％。优选地，这些化合物不存在于组合物中。通过使用本文所述的第一和第二不连续相，促进仅使用低水平的极性水混溶性液体(或根本不使用)，并使组合物引起的皮肤刺激最小化。在患者已经具有发炎皮肤的情况下，这是特别有利的。可以使用这种低水平的极性水混溶性液体的事实是令人惊讶的，因为他克莫司制剂，特别是非软膏制剂，通常需要高含量的这些溶剂作为渗透增强剂。优选地，本发明的组合物包含表面活性剂。可以将表面活性剂掺入一个或多个不连续相和/或连续水相中。合适的表面活性剂包括烷基聚乙二醇醚、烷基聚乙二醇酯、乙氧基化醇、聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯、聚氧乙烯脂肪酸酯、离子或非离子表面活性剂、含有25至60个乙氧基的氢化蓖麻油/聚氧乙二醇加合物、含有25至45个乙氧基的蓖麻油/聚氧乙二醇加合物，脱水山梨糖醇脂肪酸酯(例如span20或span80)、环氧乙烷和环氧丙烷的嵌段共聚物(例如pluronicl121或pluronicf68)，或其混合物。作为选择，可以使用基于丙烯酸的改性交联共聚物的聚合物表面活性剂，例如pemulentr-1和pemulentr-2(lubrizolcorporation)。应该理解的是，可以使用其他合适的表面活性剂。优选地，该组合物包含两种以上表面活性剂，例如掺入第一和/或第二不连续相中的第一表面活性剂，和掺入连续水相中的不同的第二表面活性剂。第一和第二表面活性剂优选选自上面的列表。第一表面活性剂易溶于或分散在第一和/或第二油中，并且优选选自laureth-4(聚氧乙烯(4)单十二烷基醚)、聚山梨醇酯80、span80，及其两种以上的混合物。第二表面活性剂易溶于或分散在连续水相中，优选选自聚山梨醇酯20、pluronicl121、pluronicf68、peg-40氢化蓖麻油、span20及其两种以上的混合物。最优选地，第一表面活性剂是laureth-4(聚氧乙烯(4)单十二烷基醚)，第二表面活性剂是聚山梨醇酯20。作为选择，组合物可以仅包含一种表面活性剂。在该实施方式中，表面活性剂优选是基于丙烯酸的改性交联共聚物的聚合物表面活性剂。合适的表面活性剂是pemulentr-1和pemulentr-2(lubrizolcorporation)。虽然在制备组合物期间这些表面活性剂溶解在第一和/或第二不连续相中，但表面活性剂在所得组合物中的不连续相和连续水相之间分配。优选地，本文公开的组合物的总表面活性剂含量小于组合物的5重量％，更优选小于2.5重量％，还更优选小于2重量％，还更优选小于1重量％，并且最优选小于0.5重量％。优选地，总表面活性剂含量为至少0.1重量％。如本文所用，术语“总表面活性剂含量”是指组合物中存在的所有表面活性剂的重量百分比之和。如上所述，可以将表面活性剂掺入一个或多个不连续相和/或连续水相中。通过使用本文所述的第一和第二不连续相促进低水平表面活性剂的使用，并使组合物引起的皮肤刺激最小化。在患者已经具有发炎皮肤的情况下，这是特别有利的。可以使用这种低水平的表面活性剂的事实是令人惊讶的，因为通常他克莫司霜剂(非软膏)制剂需要非常高水平的表面活性剂以充当渗透增强剂或允许形成物理稳定的产品。使用优选的低水平极性水混溶性液体和/或表面活性剂的另一个优点是，他克莫司令人惊讶地具有比已知制剂中更高的化学稳定性。不希望受理论限制，本发明人认为极性水可混溶的液体和表面活性剂影响了他克莫司在油相和水相之间的分配。他克莫司是油溶性的。然而，极性水混溶性液体和表面活性剂的存在增加了他克莫司与水相的相容性。本发明人已经发现，这可能导致他克莫司显著更大的水暴露，导致其分解。相反，在本发明的组合物中，优选的低水平极性水混溶性液体和/或表面活性剂意味着他克莫司的水性暴露较少，因此具有较高的化学稳定性。优选地，如在60％rh±5％下测量的，他克莫司在5℃±3℃下化学稳定至少12个月。该稳定性是在密封的琥珀色玻璃罐中储存后测量的。将罐密封在空气中。“化学稳定”是指相对于t＝0时的测量值，hplc测定为100％±5％。优选地，如在60％rh±5％下测量的，他克莫司在25℃±2℃下化学稳定至少12个月。该稳定性是在密封的琥珀色玻璃罐中储存后测量的。将罐密封在空气中。再次，“化学稳定”是指相对于t＝0时的测量值，hplc测定为100％±5％。优选地，他克莫司在40℃±3℃下化学稳定至少6个月。该稳定性是在密封的琥珀色玻璃罐中储存后测量的。将罐密封在空气中。“化学稳定”采用与上述相同的含义。优选地，组合物包含所述组合物重量的0.005重量％至2重量％的他克莫司，更优选0.01重量％至1重量％，还更优选0.03重量％至0.5重量％，最优选约0.1重量％。有利地，本发明在实现改善的审美和患者依从性的同时，允许与已知软膏制剂相当的他克莫司载量。优选地，组合物包含所述组合物重量的重量％5至40重量％的第一不连续相，优选10重量％至30重量％，更优选10重量％至25重量％，还更优选15重量％至25重量％，并且最优选约20重量％。优选地，组合物包含所述组合物重量的5重量％至40重量％的第二不连续相，优选10重量％至30重量％，更优选10重量％至25重量％，还更优选15重量％至25重量％，并且最优选约20重量％。令人惊讶的是，当第二不连续相的量相对较低时，制剂的渗透最大化。这在实施例中的体外模型中得到证明。优选地，第一油的存在量为所述组合物的5重量％至40重量％，更优选10重量％至30重量％，还更优选10重量％至25重量％，还更优选15重量％至25重量％，并且最优选约20重量％。优选地，第二油的存在量为所述组合物的5重量％至40重量％，更优选10重量％至30重量％，还更优选10重量％至25重量％，还更优选15重量％至25重量％，并且最优选约20重量％。优选地，该组合物的第二油与第一油的重量比为1：3至3：1，更优选1：2至2：1，还更优选2：3至3：2，并且最优选约1：1。如实施例中所证明的，本发明人发现，如果要使制剂的渗透最大化，第二油与第一油的比例不应过高。这在实施例中的体外模型中得到证明。优选地，组合物包含组合物重量的至少10重量％的水，优选至少20重量％，更优选至少30重量％，还更优选至少40重量％，最优选至少50重量％。优选地，组合物包含所述组合物重量的至多70重量％的水。他克莫司在第一不连续相中的优异溶解度意味着可以使用相对高的水含量，而不会引起活性剂的过量水性暴露。相对高水平的水使皮肤感觉不那么油腻，进一步改善了患者的依从性。优选地，组合物包含至多两种不连续相。优选地，该组合物不包含除本文所述的第一油和第二油之外的油。优选地，组合物还包含至少一种药学上可接受的赋形剂。优选地，本发明的组合物具有1至30μm、优选1至20μm的平均液滴直径(即，不连续相液滴直径)。这种液滴直径与微乳液形成对比，微乳液通常具有1至100nm的平均液滴直径。在本发明的上下文中，通过使用malvernmastersizer2000激光衍射粒径分析仪测量液滴直径。本发明的组合物可以是巨乳液(macroemulsion)的形式。巨乳液是本领域已知的并且与微乳液不同的之处在于它们具有更大的平均液滴直径。此外，与微乳液不同，巨乳液是热力学不稳定的。由于这种相对热力学不稳定性，通常以与微乳液不同的方式制备巨乳液。例如，巨乳液形成通常需要搅拌/剪切，而通常微乳液有效地自发形成。作为选择，本发明的组合物可以是多微泡分散体的形式。多微泡分散体是本领域已知的，并在sebba的以下参考文献中公开："biliquidfoams",j.colloidandinterfacescience,40(1972)468-474and"thebehaviourofminuteoildropletsencapsulatedinawaterfilm",colloidpolymersciences,252(1979)392-396,hicks"investigatingthegeneration,characterisation,andstructureofbiliquidfoams",phdthesis,universityofbristol,2005,crutchley"theencapsulationofoilsandoilsolublesubstanceswithinpolymerfilms",phdthesis,theuniversityofleeds,2006andlyeandstuckey,colloidandsurfaces,131(1998)119-136。微泡也公开于us-a-4,486,333和wo97/32559中。制造多微泡分散体的合适方法描述于wo03/064024中。优选地，该组合物是洗剂或霜剂的形式。在本发明上下文中的洗剂和霜剂与例如剃须泡沫不同，所述剃须泡沫具有高得多的表面活性剂含量以便在使用中产生所需的泡沫。本发明人已经发现，使用如本文所述的两种不连续相能够提供物理和化学稳定的他克莫司洗剂或霜剂组合物，其具有良好的患者耐受性和感知的审美、良好的功效和低刺激性。优选地，本发明的组合物可分散在水中。优选地，本发明的组合物可在水中稀释。这增加了本发明的使用灵活性，例如通过使头发湿润来改善组合物穿过头发至头皮的应用，或者在期望或需要时从任何局部表面冲洗制剂，或者通过从意外污染衣物上冲洗产品而容易去除。这些优点改善了用户的使用体验并改善了患者的依从性。优选地，组合物的ph为3.5至6，更优选为4至5.5，还更优选为4.5至5.25，最优选为4.5至5。本发明人发现将组合物的ph控制在这些限度内提高了他克莫司和整个组合物的稳定性。这是令人惊讶的，因为在现有技术中常规使用较低的ph(参见，例如，us2011/0201639和us8574562)。应该理解，可使用任何合适的酸或碱将ph调节至适当的值或ph范围。有利地且优选地，可通过将合适的缓冲液掺入连续水相中来稳定组合物的ph。ph在指定范围内的合适缓冲系统对于本领域技术人员而言是熟悉的。优选地，如在60％rh±5％下测量的，组合物在5℃±3℃下物理稳定至少12个月。稳定性在密封的琥珀色玻璃罐中储存后测量。将罐密封在空气中。“物理稳定”是指组合物呈现为均匀的霜剂，从t＝0开始没有明显的流变或外观变化。优选地，如在60％rh±5％下测量的，组合物在25℃±2℃下物理稳定至少12个月。稳定性在密封的琥珀色玻璃罐中储存后测量。将罐密封在空气中。同样，“物理稳定”是指组合物呈现为均匀的霜剂，从t＝0开始没有明显的流变或外观变化。优选地，如在60％rh±5％下测量的，组合物在40℃±3℃下物理稳定至少6个月。稳定性在密封的琥珀色玻璃罐中储存后测量。将罐密封在空气中。“物理稳定”采用上述相同的含义。优选地，本发明的组合物还包含胶凝剂和/或流变改性剂，例如粘度调节剂。胶凝剂可以例如选自藻酸盐胶或其盐、瓜尔胶、刺槐豆胶、黄原胶、阿拉伯胶、明胶、羟甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羧甲基纤维素或其盐、膨润土、硅酸铝镁、“卡波姆“(丙烯酸的交联聚合物的盐)，或聚甲基丙烯酸甘油酯或它们在二醇中的分散体。应该理解，可以使用其他合适的胶凝剂。另外，已经发现一些胶凝剂(例如卡波姆)也可以起化学缓冲剂的作用，从而防止在储存和使用过程中组合物的ph发生不希望的变化。在使用粘度调节剂的情况下，其优选为聚合纤维素增稠剂。包含胶凝剂和/或流变改性剂提供了额外的抗乳化液分层稳定性并确保活性剂浓度在整个组合物中是均匀的。wo97/32559中描述了这些组分的用途。对胶凝/增稠剂的选择还允许将制剂粘度控制为从易于倾倒的稀洗剂(thinlotion)至具有显着流动阻力的浓稠霜剂。优选地，本发明的组合物包含所述组合物重量的0.05重量％-5.0重量％的胶凝剂，优选0.1重量％-2.0重量％，更优选0.2重量％-1.0重量％。在本发明的一个实施方式中，组合物具有凝胶的稠度。本发明的组合物还可以含有其它添加剂，例如防腐剂(例如用于防止微生物腐败)、缓冲剂(用于控制ph并避免不稳定和对皮肤酸性外壳的损害)和抗氧化剂。当使用防腐剂时，其存在量优选是组合物重量的0.5重量％至1重量％，更优选0.6重量％至0.8重量％。防腐剂优选选自由苄醇、苯氧基乙醇、苯甲酸钠及其两种以上的组合的组。更优选地，防腐剂是苯氧基乙醇。这些添加剂可以包含在多微泡分散体的连续或不连续相中。应该理解的是，包含的这些添加剂将与发现有效和有用的材料的含量和类型相同。需要注意这些添加剂的选择和用量，以防止损害本发明的其它性能优点。在特别优选的实施方式中，本发明的组合物包括：包含己二酸二异丙酯和他克莫司的第一不连续相；包含矿物油的第二不连续相；和连续水相；优选的是，其中所述他克莫司基本上存在于第一不连续相中；其中组合物包含所述组合物重量的小于1重量％的表面活性剂；其中组合物包含所述组合物重量的小于5重量％的c1-c4醇、聚乙二醇、乙二醇、丙二醇、丁二醇、戊二醇、甘油、二乙二醇单乙醚、碳酸亚丙酯及其两种以上混合物；并且其中组合物是洗剂或霜剂的形式。在进一步特别优选的实施方式中，本发明的组合物包括：包含己二酸二异丙酯和他克莫司的第一不连续相；包含矿物油的第二不连续相；和连续水相；优选的是，其中所述他克莫司基本上存在于第一不连续相中；其中组合物包含所述组合物重量的小于1重量％的表面活性剂；其中组合物包含所述组合物重量的小于1重量％的c1-c4醇、聚乙二醇、乙二醇、丙二醇、丁二醇、戊二醇、甘油、二乙二醇单乙醚、碳酸亚丙酯及其两种以上混合物；并且其中组合物是洗剂或霜剂的形式。根据第二方面，提供了如本文所述的组合物，其用于治疗银屑病或特应性皮炎。根据第三方面，提供了如本文所述的组合物，其用于制造用于治疗银屑病或特应性皮炎的药物。根据第四方面，提供了如本文所述的组合物，其用于通过疗法治疗人体或动物体的方法。根据第五方面，提供了治疗人或动物患者的银屑病或特应性皮炎的方法，所述方法包括向有此需要的患者施用有效量的如本文所述的组合物。如本文所述的组合物可通过毛发施用于头皮或其他皮肤表面。优选地，在该实施方式中，将头发润湿(例如通过使用具有或不具有香波的水，然后用毛巾擦干)。然后可以将产品以合适的量施用于头皮，然后通过头发按摩到头皮中。接着可使头发自然干燥或使用吹风机干燥。有利地，该水性可分散形式的制剂能够使用该方法使活性剂均匀分布在皮肤上。作为选择或作为补充，可将组合物通过干发按摩到头皮中并等待适当的时间(可为8至12小时)，之后可用具有或不具有香波的水冲洗过量或残留物。优选地，组合物以单位剂型应用于人或动物。根据第六方面，本发明提供包含本文公开的组合物的包装。优选地，包装是管或无气泵。例如，可挤压管以局部应用组合物。根据第七方面，本发明提供一种制造用于局部应用的组合物的方法，所述方法包括：(i)提供包含他克莫司的第一油；(ii)提供第二油；(iii)提供水性组分；和(iv)将所述第一油和所述第二油分散在所述水性组分中以形成用于局部应用的组合物，所述组合物包括：包含第一油和他克莫司的第一不连续相；包含第二油的第二不连续相；和连续水相；其中所述第一油与所述第二油不同。优选地，通过该方法制备的组合物是如上所述的组合物。制备这种水包油分散体的方法是本领域已知的，例如g.godwin,harry’scosmeticology，第7版，1982。本领域技术人员将理解，可以视情况使用其他制造方法。如上所述，该组合物可以是多微泡分散体。制备多微泡分散体的合适方法描述于us-a-44863333中。本领域技术人员将理解，可以视情况使用其他制造方法。优选地，该方法还包括包装所述组合物。前述方面可以与本文公开的任何前述方面自由组合。现在将结合以下非限制性附图描述本发明：图1是描述根据本发明的组合物的结构的简单示意图。较浅的圆圈表示第一不连续相(包含第一油和他克莫司)，较深的圆圈表示第二不连续相(包含第二油)，背景表示连续水相。图2是用于实施例1的t＝0的他克莫司标准品的hplc色谱图。观测到他克莫司(19.863分钟)、他克莫司19-差向异构体(16.803分钟)和子囊霉素(18.976分钟)的峰。hplc条件是：柱：lunac18(2)，3μm粒径，4.6x150mm柱(waters)，流速：1.5ml/分钟。柱温：25℃。图3是实施例1的样品1在t＝0时的hplc色谱图。hplc条件是：柱：lunac18(2)，3μm粒径，4.6x150mm柱(waters)，流速：1.5ml/分钟。柱温：25℃。图4是实施例1的样品1在40℃下t＝6个月时的hplc色谱图。hplc条件是：柱：lunac18(2)，3μm粒径，4.6x150mm柱(waters)，流速：1.5ml/分钟。柱温：25℃。图5是实施例1的样品9在t＝0时的hplc色谱图。hplc条件是：柱：lunac18(2)，3μm粒径，4.6x150mm柱(waters)，流速：1.5ml/分钟。柱温：25℃。图6是实施例1的样品9在40℃下在t＝6个月时的hplc色谱图。hplc条件是：柱：lunac18(2)，3μm粒径，4.6x150mm柱(waters)，流速：1.5ml/分钟。柱温：25℃。图7是显示样品1、2、3和6的组合物在初始应用组合物后48小时对红斑评分的影响的柱状图。误差棒表示平均值的标准误差。图8是显示样品1、13、14和15的体外扩散的柱状图，单位为μg/cm2。y轴指示扩散的平均累积他克莫司，单位为μg/cm2。误差棒表示标准偏差。图9是在过敏性接触性皮炎长白猪(landraceswine)模型中样品1、22、23和24(他克莫司浓度分别为0.1％、0.03％、0.01％和0.003％)与他克莫司软膏的相应变化物相比较的剂量响应图。黑色圆圈：他克莫司软膏的变化物；灰色圆圈：样品1他克莫司变化物；虚线：样品21(对照载剂)。x轴表示他克莫司浓度，y轴表示第10天(激发后24小时)的红斑评分。误差棒表示标准偏差。现在将结合以下非限制性实例描述本发明。实施例1制备以下组合物，并在初始测定和40℃下6个月后测量他克莫司的稳定性：组分的关键：1)分散水相2)api非溶剂油相3)api溶剂油相4)凝胶/增稠剂5)ph/水调节各组分分别制备，之后在进行适当搅拌的同时依次添加。组合中的组分1-3在每种情况下形成最终制剂的50重量％，组分4形成48重量％，组分5形成2重量％。根据相的相对大小，*物质在两相之间按比例分配。例如，如果两种油相具有相同的质量，则向每种油相中加入等质量的表面活性剂。如果第一油相的质量是第二油相的两倍，则表面活性剂在两相之间以2：1的质量比分配。将每个样品储存在封闭的气密玻璃容器中，顶部空间包含不超过容器总可用体积的5％体积。将含有样品的每个容器在标准实验室培养箱(例如，memmertif260plus培养箱)中在40℃的恒定温度下储存。每个样品的储存期为六个月，然后测量化学稳定性。100±5％测定的稳定性表明他克莫司在40℃下化学稳定6个月。100±2％测定的稳定性表明他克莫司的化学稳定性特别高。通过hplc方法测量储存期后各样品中他克莫司的化学稳定性。hplc方法如下：流动相制备：溶液a：通过将0.4ml加入1000ml纯化水中制备6mm正磷酸在水中的溶液(通常制备3l)。溶液b：以分别81：19％的比例制备乙腈和叔丁基甲基醚的混合物(通常制备3l)。流动相a和b以上表中详述的比例制备为溶液a和b的混合物。样品制备使用乙腈作为样品稀释剂。准备琥珀色玻璃器皿中的溶液。步骤：1.将约1.0g样品准确称入10ml容量瓶中，使容量瓶颈部上的样品最小化。2.将约5ml样品稀释剂加入容量瓶中并涡旋混合2分钟。3.使其平衡至室温，然后用样品稀释剂使容量瓶达到体积。通过搅拌彻底混合1小时。4.将等分试样的溶液转移到2ml离心管中，并以13,000rpm离心10分钟。5.通过0.45μmptfe注射器过滤器过滤。标准品制备:制备浓度为100μg/ml的他克莫司在乙腈中的溶液。使用该方法的他克莫司标准品的hplc色谱图显示在图2中。样品1的hplc色谱图显示在图3(t＝0)和图4(t＝6个月，40℃)中。样品9的hplc色谱图显示在图5(t＝0)和图6(t＝6个月，40℃)中。大约的保留时间：稳定性结果的讨论从稳定性数据可以看出，在他克莫司的稳定性方面，样品1(对于第一不连续相其使用己二酸二异丙酯、肉豆蔻酸异丙酯和辛酸癸酸甘油三酯，并且不含极性水混溶性液体)是最稳定的制剂。在样品2、3、4、5和9中，他克莫司较不稳定。这些制剂含有12重量％-30重量％的各种极性水混溶性液体(丙二醇、transcutolptm、己二醇或戊二醇)。据认为这种较低的稳定性归因于极性非水溶剂影响了他克莫司在油相和水相之间的分配。特别地，据认为在样品2、3、4、5和9中他克莫司的水性暴露比在实施例1中大，导致他克莫司的降解增加。样品1相对于样品9的增强的化学稳定性可以在图3-6中看出。样品10与样品1相同，不同之处在于它具有增加的表面活性剂laureth4的水平(9.4重量％)。测得的他克莫司稳定性显著低于样品1。再次，据认为这归因于表面活性剂影响了他克莫司在油相和水相之间的分配。特别地，认为在样品10中他克莫司的水性暴露比样品1中大，导致他克莫司的降解增加。样品1、7和8的比较表明，在第一不连续相中使用己二酸二异丙酯(实施例1)比在第一不连续相中使用癸二酸二乙酯或己二酸二丁酯(分别为样品7和样品8)产生更大的他克莫司稳定性。这是令人惊讶的，因为所有三种油对于他克莫司具有相似的溶解度曲线(参见实施例2中的讨论)。观察到所有样品在40℃下6个月后物理稳定，即每个样品显示为均匀的霜剂，从t＝0开始没有明显的流变或外观变化。实施例2在该实施例中，通过hplc测量了他克莫司在各种油溶剂中的溶解度。称量约40mg的他克莫司，加入已知量(1-2g)的油并在室温下搅拌5小时。如果通过视觉检查，他克莫司未能溶解，则加入最多10g的油。如果他克莫司似乎完全溶解在10克油下，则将样品置于4℃过夜。如果冷却后，他克莫司沉淀出来，则加入另外的油并重复上述步骤直至溶解或加入10g油。然后将所有样品离心以确保除去任何未溶解的他克莫司，并如实施例1中所述通过hplc分析上清液。如果最终制剂经受冷藏或暴露于低温，则油溶剂的冷冻提供了他克莫司将保持在溶液中的信心。商业产品经历这样的条件并不是不合理的。重要的是，他克莫司不会从溶液中沉淀出来。这种沉淀可能导致产品物理或化学不稳定，或者使得他克莫司不均匀分布。结果:根据上述方法测量，他克莫司在油溶剂中的溶解度数据如下：溶剂溶解度(％wt)癸二酸二乙酯3.26*己二酸二丁酯3.24*己二酸二异丙酯3.08*蓖麻油1.44癸酸辛酸甘油三酯0.44棕榈酸异丙酯0.26肉豆蔻酸异丙酯0.25异硬脂酸异丙酯0.19庚基甲基壬烷0.006环二甲基硅氧烷0.004聚二甲基硅氧烷0.004矿物油0.003*hplc测定在理论实验最大值的95％以内。可能的最大溶解度大于所述值。基于上述数据，油可分为三类：良溶剂(>1％溶解能力)，中等(0.15-1％溶解能力)和有效非溶剂(<0.1％)。虽然他克莫司在癸二酸二乙酯、己二酸二异丙酯和己二酸二丁酯中具有相似的溶解度，但是令人惊讶的是，己二酸二异丙酯在稳定他克莫司方面比癸二酸二乙酯或己二酸二丁酯显著更有效(参见实施例1)。不希望受理论限制，据认为在所有三种油中存在的两种酯键在己二酸二异丙酯中受到靠近键的甲基接近/构象所引起的空间位阻的保护更多。据认为，该键的降解可能随后影响活性剂的稳定性，因此解释了实施例1的稳定性增加。实施例3在长白猪(五头猪)中使用过敏性接触性皮炎模型的体内实验比较了protopictm(0.1％他克莫司)、凡士林对照以及样品1-3和6。该方法包括将二硝基氟苯(dnfb)和二硝基氯苯(dncb)施用至皮肤区块以诱导接触性超敏，然后用protopictm(0.1％他克莫司)、凡士林对照和样品1-3和6之一进行治疗。该方法基于mollison等，jinvestdermatol.1999may；112(5):729-38:“amacrolactaminhibitorofthelpertype1andthelpertype2cytokinebiosynthesisfortopicaltreatmentofinflammatoryskindiseases”描述的方案。方法：第0天：将100μl在丙酮/dmso/橄榄油(45/5/50v/v/v)中的10％二硝基氟苯(dnfb)应用于两只整个耳朵的外侧和下腹部双侧部位≈20cm2中的每一个。第3天：将100μl在丙酮/dmso/橄榄油(45/5/50v/v/v)中的5％二硝基氟苯(dnfb)应用于两只耳部区块(earspatches)的内耳廓和应用于下胸廓的双侧部位≈20cm2。第9天：将61μl在丙酮/橄榄油(95/5v/v)中的0.6％二硝基氯苯(dncb)应用于18个矩形测试区域-猪每侧各9个(3.5x3.5cm,12.25cm2)。第9天+30分钟：将61μl的测试制剂应用于测试区域(3.5x3.5cm,12.25cm2)。在初始应用测试制剂后24和30小时后进行评分/评估，然后重新应用测试制剂。48小时后进一步评分。区块的评分如下：0–无红斑0.5–可疑的红斑1–微弱或散在的红斑2–中度红斑，无硬结3–强烈的红斑，具有水肿的局灶性区域或硬结4–极度红斑，具有均匀硬结或水肿结果：将在凡士林对照的24小时评分中评定为3以上的猪用于比较目的。对敏化没有强烈反应的猪将不允许在确定活性制剂的功效方面进行充分的区分。48小时的结果也显示在图7中(误差棒表示平均值的标准误差)。如从图7和上表中显而易见的，样品1-3和6的48小时的红斑评分相似。这些红斑评分显著低于凡士林对照载剂和protopictm。因此，本发明的制剂比诸如protopictm等现有的软膏制剂具有更高的体内功效。实施例4使用不同的表面活性剂体系制备另外的组合物。为了比较，样品1的组合物成包括在表中。组分(1-5)的编号和比例与实施例1中的相同。根据相的相对大小，*物质在两相之间按比例分配。例如，如果两种油相具有相同的质量，则向每个油相中加入等质量的表面活性剂。如果第一油相的质量是第二油相的两倍，则表面活性剂在两相之间以2：1的质量比分配。对于实施例11和12，在组合之前将组分加热至70℃。在实施例12的情况下，以7000rpm使用高剪切旋转器(silverson)装置。实施例5制备组合物，其中第二油及其量是变化的。为了比较，样品1的组合物包括在表中。样品13：矿物油替换为聚二甲基硅氧烷样品14：额外的矿物油样品15：无第二不连续相(比较性的)根据相的相对大小，*物质在两相之间按比例分配。例如，如果两种油相具有相同的质量，则向每个油相中加入等质量的表面活性剂。如果第一油相的质量是第二油相的两倍，则表面活性剂在两相之间以2：1的质量比分配。通过人工膜在franz小室体外扩散实验中对制剂进行测试。使用的膜是来自merckmillipore的strat-m膜，并且被描述为用于透皮扩散测试的合成的非动物类模型，所述扩散测试预测人皮肤中的扩散。使用具有5％牛血清白蛋白和5％异丙醇的磷酸盐缓冲盐水溶液作为受体相。使用表面积为0.64cm2的细胞和约2cm3的受体体积。在0、24和48小时时应用约40mg的制剂，搅拌细胞并在37℃温育。对受体相进行取样并在24、48和72小时更换。根据上述方法通过hplc测定他克莫司浓度，并调节个体小室受体体积。然后对每个样品绘制每平方厘米膜的平均累积他克莫司(参见图8)。从数据可以清楚地看出，样品1和样品13在体外扩散性质方面是优异的。它们是第二不连续相和第一不连续相之比相同(但具有矿物油或聚二甲基硅氧烷)的制剂。样品15(没有第二不连续相)明显不如样品1和样品13，表明第二油相的存在产生渗透的显著改善。然而，样品14显示过量的第二不连续相在体外扩散方面可能具有不利影响。因此，存在使制剂的体外扩散最大化的第二不连续相的最佳水平。此外，值得注意的是，样品1和13的结果之间没有统计学上的显著差异。聚二甲基硅氧烷在应用时与api油相混合的可能性要小得多，因为已知聚二甲基硅氧烷与矿物油相比具有较低的与其他油的混溶性。因此，样品1与13之间缺乏统计学上的显著差异表明，相对于单一api油相系统(样品15)的渗透性改善主要不是由于油在施用时的混合(导致了他克莫司在所得混合物中的饱和度的改变)引起的。实施例6使用在水相中不同水平的水混溶性液体(transcutolptm)制备各种简化的制剂。成分％wt/wt油相他克莫司0.13癸酸/辛酸甘油三酯12.73己二酸二异丙酯6.36肉豆蔻酸异丙酯6.36丁基化羟基甲苯0.13水相苯氧基乙醇0.89柠檬酸钠0.209柠檬酸0.121transcutolptmx水适量(至100)(transcutolptm＝二乙二醇单乙醚)没有掺入表面活性剂。这确保了油相和水相可以剧烈混合，但是在静置过夜时容易分离，使得取样和分析更直接。此外，不包括矿物油相或胶凝剂，再次使取样和分析更直接。通过手动剧烈摇动混合两相来制备制剂。然后将它们静置过夜，然后移去油相。将两相离心并使用本文所述的hplc方法分析他克莫司。准备的样品及其相关的他克莫司(api)回收水平如下表所示：从该表可以看出，掺入水相的极性非水性溶剂的水平越高，他克莫司分配到水相的程度越大。据认为这种增加的水性暴露部分地解释了实施例1中观察到的化学稳定性趋势。实施例7使用苯甲酸钠作为防腐剂代替苯氧基乙醇制备另一种组合物。组分的关键：1)分散水相2)api非溶剂油相3)api溶剂油相4)凝胶/增稠剂5)防腐剂6)ph/水调节各组分单独制备，然后在进行适当搅拌的同时依次加入组分。在每种情况下组分1-3组合形成最终制剂的50重量％，组分4形成43重量％，组分5形成5重量％，并且组分6形成2重量％。根据相的相对大小，*物质在两相之间按比例分配。例如，如果两种油相具有相同的质量，则向每个油相中加入等质量的表面活性剂。如果第一油相的质量是第二油相的两倍，则表面活性剂在两相之间以2：1的质量比分配。实施例8在小型猪中进行局部耐受性研究以评估根据本发明的两种局部他克莫司霜剂和市售软膏的局部耐受性，并确定通过皮肤应用每日两次施用至小型猪4周后，皮肤中的他克莫司的量。方法：在研究中使用四(4)只雄性小型猪。在每只动物的背部纹身每个测量为2.5×2.5cm的八(8)个应用部位，并且将每个制剂，即样品1载剂、具有0.03％他克莫司的样品1、具有0.1％他克莫司的样品1和0.1％他克莫司软膏，施用于每只动物的两个不同应用部位。根据以下时间表对动物给药。评估以下内容：死亡率、临床体征、体重和尸检，用肉眼观察治疗和未治疗的皮肤和组织病理学。在第28天，第一次给药后4小时和尸检时收集用于生物分析的皮肤活组织检查。此外，检查应用部位对治疗的反应，并对红斑、水肿和其他皮肤反应进行评分。在给药的最后一天(第28天)第一次给药后4小时+/-10分钟和在尸检时，对所有应用部位进行活组织检查以进行生物分析。在每个取样时间，从每个应用部位取两个(一个用于备用目的)活组织检查。在每个取样时间，每只动物共进行16次活组织检查。从应用部位的边缘取约5mm的活组织检查。在收集皮肤样品之前，使用商业胶带，通过每两次活组织检查40次剥离，在应用部位的采样活组织检查的部分将角质层与皮肤分离。使用直径为5mm的冲头收集活组织检查。从活组织检查中，使用解剖刀以最佳的可能方式将表皮与真皮分离。然后，使用解剖刀从真皮中取出皮下组织，然后丢弃。将活组织检查称重并立即用液氮快速冷冻并储存在-80℃以下直至分析。使用经验证的生物分析测定法分析组织样品的他克莫司水平。结果：对小型猪四个周每天两次皮肤应用局部他克莫司霜剂，使用三种不同制剂：样品21(载剂)，样品22(0.03％他克莫司)，样品1(0.1％他克莫司)和0.1％软膏具有良好的耐受性，未观察到与皮肤反应或组织病理学变化相关的测试事件。生物分析的分析表明，测试项目主要位于表皮，真皮中只有较少的含量。用样品0.1％他克莫司霜剂治疗后，他克莫司的水平比用样品10.03％他克莫司霜剂治疗后高约3倍，表明剂量-响应关系。0.1％他克莫司软膏处理导致的暴露水平比样品10.1％他克莫司霜剂处理低约30％。因此可以得出结论，在给定的他克莫司加载下，本发明的组合物在体内表现出比现有软膏制剂(例如protopictm)改善的皮肤渗透性。数据总结在下表中。表：在每天两次应用测试产品28天后，在小型猪皮肤活组织检查中可测量的他克莫司水平。实施例9在长白猪(8只雌性猪)中使用过敏性接触性皮炎模型进行体内实验以比较市售他克莫司软膏与含有不同强度他克莫司的本发明的组合物的剂量响应。比较以下测试制剂：protopictm(0.1％他克莫司软膏)、protopictm(0.03％他克莫司软膏)，0.01％他克莫司软膏，0.003％他克莫司软膏，样品1(含有0.1％他克莫司)，样品21和22(与样品1相同但分别不含他克莫司和含有0.03％他克莫司)和样品23(与样品1相同但含有0.01％他克莫司)和样品24(与样品1相同，但含有0.003％的他克莫司)。根据ep1093371b1的实施例1(使用ep-a-0474126的实施例1中公开的方法)制备0.01％和0.003％的他克莫司软膏，其中适当地减少了他克莫司的量。该方法包括将二硝基氟苯(dnfb)和二硝基氯苯(dncb)施用至皮肤区块(skinpatches)以诱导接触性超敏反应，然后用测试制剂之一处理。该方法基于mollison等，jinvestdermatol.1999年5月；112(5):729-38：“amacrolactaminhibitorofthelpertype1andthelpertype2cytokinebiosynthesisfortopicaltreatmentofinflammatoryskindiseases”所述的方案。方法：第0天：将100μl在丙酮/dmso/橄榄油(45/5/50v/v/v)中的10％二硝基氟苯(dnfb)应用于整个2只耳朵的外侧和下腹部双侧部位≈20cm2中的每一个。第3天：将100μl在丙酮/dmso/橄榄油(45/5/50v/v/v)中的5％二硝基氟苯(dnfb)应用于两个耳部区块的内耳廓和应用于下胸廓的双侧部位≈20cm2。第9天：将60μl在丙酮/橄榄油(95/5v/v)中的0.6％二硝基氯苯(dncb)应用于18个矩形测试区域-猪每侧各9个区域(3.5x3.5cm,12.25cm2)。第9天+30分钟和6小时：将60μl的测试制剂应用于测试区域(3.5x3.5cm,12.25cm2)。在初始应用测试制剂后24和30小时后进行评分，然后重新应用测试制剂。24和48小时后进行红斑评分。对测试区域进行过敏性接触性皮炎引起的红斑评分，如下：0–无红斑0.5–可疑的红斑1–微弱或散在的红斑2–中度红斑，无硬结3–强烈的红斑，具有水肿的局灶性区域或硬结4–极度红斑，具有均匀硬结或水肿结果：24小时的结果也显示在图9中(误差棒表示标准偏差)。对于样品1和他克莫司软膏的研究得出以下结论：1.显然，无论在霜剂样品还是软膏变体中，最低的他克莫司浓度(0.003％和0.01％)都没有效果。2.根据本发明的霜剂样品的基线低于软膏，表明与软膏相比，霜剂载剂可能对炎症具有独立的有益作用。3.在所要求保护的本发明的组合物中观察到他克莫司的抗炎作用的剂量响应趋势，并且其与软膏变体中的他克莫司相当。已经通过解释和说明的方式提供了前述具体描述，并且其不旨在限制所附权利要求的范围。本文所示的目前优选实施方式的许多变化对于本领域普通技术人员而言是显而易见的，并且仍然在所附权利要求及其等同物的范围内。当前第1页12