川芎总生物碱在制备治疗头痛的药物中的用途的制作方法

本发明涉及川芎总生物碱的新用途，具体地，是在制备治疗头痛的药物中的用途。

背景技术：

偏头痛是临床最常见的原发性头痛，临床以发作性中重度、搏动样头痛为主要表现，头痛多为偏侧，一般持续4-72小时，可伴有恶心、呕吐，光、声刺激或日常活动均可加重头痛，安静环境、休息可缓解头痛。偏头痛是一种常见的慢性神经血管性疾患，多起病于儿童和青春期，中青年期达发病高峰，女性多见，男女患者比例约为1：2-3，人群中患病率为5％-10％，常有遗传背景。

目前，偏头痛的发病机制尚不十分清楚，因而缺乏有效的根治方法，临床上以减轻或终止头痛发作，缓解伴发症状，预防头痛复发为治疗目的。西医治疗偏头痛的药物主要包括：麦角类制剂、曲普坦类药物、阿片类制剂、奋乃静、氯丙嗪等。虽然，这些药物短期内具有一定疗效，但面临远期疗效不肯定、毒副作用、复发率高等问题。

川芎系伞形科藁本属多年生草本植物川芎的干燥根茎，《神农本草经》将其列为上品，具有活血行气、祛风止痛、疏肝解郁的功效，在古今中药制剂中广泛使用。

迄今为止，已报道的川芎化学成分有260余个，其主要类型为生物碱、挥发油、内酯类、酚酸类、多糖类及无机元素等。川芎生物碱作为川芎的一个主要有效成分群，具有治疗冠心病、心绞痛、减轻脑损伤的作用。暂无文献报道川芎生物碱具有防治头痛的作用。

技术实现要素：

本发明的技术方案是提供了川芎总生物碱的新用途。

本发明提供了川芎总生物碱在制备治疗头痛的药物中的用途。

其中，所述的头痛为偏头痛。

其中，所述的药物为升高头痛患者的血浆和脑组织中的5-ht、5-hiaa、et、na、da含量，降低血浆和脑组织中cgrp水平的药物。

其中，所述川芎总生物碱是按照如下方法制备：

(1)取川芎药材，乙醇提取，浓缩提取液，得乙醇浸膏；

(2)将乙醇浸膏，用酸溶解，过滤，滤液用碱调节ph值为9-10后，用有机溶剂萃取至无色，将有机溶剂萃取液，浓缩蒸干，得总生物碱粗品；

(3)将上述粗品经大孔吸附树脂色谱柱纯化，用乙醇洗脱，即得川芎总生物碱。

其中，步骤(1)中，所述的乙醇提取为取川芎药材粗粉，用15倍川芎重量的80％v/v乙醇，100℃回流提取2次，每次2.5h，合并提取液；

步骤(2)中，所述酸为1mol/l盐酸，碱为浓氨水，有机溶剂为三氯甲烷；

步骤(3)中，所述的大孔吸附树脂色谱柱为ab-8大孔吸附树脂色谱柱，所述的纯化工艺为调节粗品溶液的ph值至8.0，质量浓度至4.4799mg/ml，上样量8bv，用13bv去离子水除杂后，再用14bv体积分数85％的乙醇进行洗脱。

其中，所述的药物是以川芎总生物碱为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的制剂。

其中，所述的制剂为口服制剂。

本发明最后提供了一种制备川芎总生物碱的方法，它包含如下步骤：

(1)取川芎药材，乙醇提取，浓缩提取液，得乙醇浸膏；

(2)将乙醇浸膏，用酸溶解，过滤，滤液用碱调节ph值为9-10后，用有机溶剂萃取至无色，将有机溶剂萃取液，浓缩蒸干，得总生物碱粗品；

(3)将上述粗品经大孔吸附树脂色谱柱纯化，用乙醇洗脱，即得川芎总生物碱。

其中，步骤(1)中，所述的乙醇提取为取川芎药材粗粉，用15倍川芎重量的80％v/v乙醇，100℃回流提取2次，每次2.5h，合并提取液；

步骤(2)中，所述酸为1mol/l盐酸，碱为浓氨水，有机溶剂为三氯甲烷；

步骤(3)中，所述的大孔吸附树脂色谱柱为ab-8大孔吸附树脂色谱柱，所述的纯化工艺为调节粗品溶液的ph值至8.0，质量浓度至4.4799mg/ml，上样量8bv，用13bv去离子水除杂后，再用14bv体积分数85％的乙醇进行洗脱。

本发明川芎总生物碱能升高头痛患者的血浆和脑组织中的5-ht、5-hiaa、et、na、da含量，降低血浆和脑组织中cgrp水平，能有效治疗头痛，临床应用前景良好。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

下面通过具体实施方式对本发明做进一步详细说明，但是并不是对本发明的限制，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

附图说明

图1为实验例2中川芎总生物碱对硝酸甘油致偏头痛大鼠血浆中5-羟色胺(5-ht)含量的影响；

图2为实验例2中川芎总生物碱对硝酸甘油致偏头痛大鼠血浆中5-羟吲哚乙酸(5-hiaa)含量的影响；

图3为实验例2中川芎总生物碱对硝酸甘油致偏头痛大鼠血浆中去甲肾上腺素(na)含量的影响；

图4为实验例2中川芎总生物碱对硝酸甘油致偏头痛大鼠血浆中降钙素基因相关肽(cgrp)含量的影响；

图5为实验例2中川芎总生物碱对硝酸甘油致偏头痛大鼠血浆中内皮素1(et-1)含量的影响；

图6为实验例2中川芎总生物碱对硝酸甘油致偏头痛大鼠血浆中多巴胺(da)含量的影响。

图7为实验例2中川芎总生物碱对硝酸甘油致偏头痛大鼠脑组织中5-羟色胺(5-ht)含量的影响；

图8为实验例2中川芎总生物碱对硝酸甘油致偏头痛大鼠脑组织中5-羟吲哚乙酸(5-hiaa)含量的影响；

图9为实验例2中川芎总生物碱对硝酸甘油致偏头痛大鼠脑组织中去甲肾上腺素(na)含量的影响；

图10为实验例2中川芎总生物碱对硝酸甘油致偏头痛大鼠脑组织中降钙素基因相关肽(cgrp)含量的影响；

图11为实验例2中川芎总生物碱对硝酸甘油致偏头痛大鼠脑组织中内皮素1(et-1)含量的影响；

图12为实验例2中川芎总生物碱对硝酸甘油致偏头痛大鼠脑组织中多巴胺(da)含量的影响。

具体实施方式

实施例1本发明川芎总生物碱的制备方法

(1)取川芎粗粉，用15倍川芎重量的80％乙醇，100℃回流提取2次，每次2.5h，浓缩提取液得乙醇浸膏。

(2)将乙醇浸膏用1mol/l盐酸溶解，滤过，滤液用浓氨水调ph为9～10后，三氯甲烷萃取至无色，合并三氯甲烷萃取液，浓缩蒸干，得总生物碱粗品a。

(3)将粗品a经ab-8大孔吸附树脂富集纯化，纯化工艺为上样液ph8.0，上样质量浓度4.4799mg/ml，上样量8bv，用13bv去离子水除杂后，再用14bv体积分数85％的乙醇进行洗脱，得到本发明川芎总生物碱。

经含量测定得本发明川芎总生物碱每克浸膏中含量为137.28mg/g。

以下通过具体药效学实验证明本发明的有益效果：

试验例1川芎总生物碱对硝酸甘油致大鼠偏头痛实验

1、材料

1.1药品、试剂

川芎饮片：四川新绿色药业科技发展股份有限公司提供，经鉴定为伞形科多年生草本植物川芎ligusticumchuanxionghort.的根茎；

川芎总生物碱由实施例1的方法制备，用1‰的cmcna分别配成100mg/ml、50mg/ml、25mg/ml、12.5mg/ml，备用；

阳性药物：佐米曲普坦片(万特制药海南有限公司，批号：20161101)；规格2.5mg/片，实验前用1‰的cmcna配成0.167mg/·ml-1，备用。

造模药物：硝酸甘油注射液(河南润弘制药股份有限公司，批号：

1612121)；

大鼠5-羟色胺(5-ht)酶联免疫分析elisa试剂盒，批号：ak0017may13024；

大鼠5-羟吲哚乙酸(5-hiaa)酶联免疫分析elisa试剂盒，批号：ak0017may13001；

大鼠降钙素基因相关肽(cgrp)酶联免疫分析elisa试剂盒，批号：ak0017may13026；

大鼠内皮素1(et-1)酶联免疫分析elisa试剂盒，批号：ak0017may13003；

大鼠去甲肾上腺素(na)酶联免疫分析elisa试剂盒，批号：ak0017may13002；

大鼠多巴胺(da)酶联免疫分析elisa试剂盒，批号ak0017may13025；

以上试剂盒均购买于伊莱瑞特生物科技有限公司，所用其它试剂均为市售分析纯。

1.2动物

sd大鼠，雌雄各半，体重180～220g，由四川省人民医院实验动物研究中心提供，生产许可证号：scxk(川)2013-15，检疫后用。

1.3实验仪器

varioskan型多功能酶标仪：美国thermo公司；

allegrax-30r型冷冻离心机：美国beckman公司；

fcd-3000型恒温鼓风干燥箱：上海琅玕实验设备有限公司；

fr2004b型分析天平：上海越平科学仪器有限公司；

电子分析天平：auw220dshimadzucorporation。

2、实验方法

2.1分组与给药

待大鼠适应环境3～5天后，按体重随机分为7组，每组10只，分别为对照组、模型组、佐米曲普坦组(0.167mg/kg)、川芎总生物碱高(100mg/kg)、中(50mg/kg)、低(25mg/kg)、极低(12.5mg/kg)剂量组。对照组和模型组给予蒸馏水灌胃，给药容积均为10ml/kg，每天1次，连续灌胃7d，药物均用1‰的cmc-na溶解。

2.2造模

除对照组外，各组在第7天灌胃前1h皮下注射硝酸甘油注射液，剂量10mg/kg，对照组皮下注射等体积生理盐水。造模30min左右后，动物出现双耳发红，前肢频繁搔头，爬笼次数增多，头部磨蹭鼠笼，烦躁不安等症状。此现象持续约3h，继而出现蜷卧，活动减少状态，表明偏头痛动物模型复制成功。

2.3标本的采集与处理

于第7d大鼠造模4h后，10％水合氯醛(3ml/kg)腹腔注射麻醉，分别采用腹主动脉取大鼠动静脉混合血5ml于抗凝剂为10％edta-k2的采血管和抗凝剂中。4℃下3000rpm离心10min，分离血浆，于低温冰箱中-20℃储存备用。取血后，断头取脑，去除脑膜和血管，在冰浴环境中分离含脑干、丘脑、下丘脑区域的脑组织约300mg，称重，放入预先编号的锡箔纸中，置于-20℃低温冰箱储存，备用。按照试剂盒要求，分别测定血浆和脑组织中5-ht、5-hiaa、na、cgrp、et-1、da含量。

2.4统计学处理

以表示各指标的平均值和分散程度，采用spss19.0统计软件，符合正态性和方差齐性时，多组间均数比较时采用单因素方差分析(one-wayanova)；不符合正态性和方差齐性时，行秩和检验。

3、实验结果

3.1对血浆中活性物质含量的影响

硝酸甘油造模后，模型组大鼠血浆中5-ht、5-hiaa、na、da含量明显降低，与对照组比较有显著的统计学意义(p<0.01，p<0.05)，佐米曲普坦组与川芎生物碱各剂量组大鼠血浆中5-ht、na含量明显升高，与模型组比较，除极低剂量组外，其余各组均有显著性差异(p<0.01，p<0.05)，佐米曲普坦组与川芎生物碱中、低剂量组可明显升高5-hiaa含量(p<0.01)，佐米曲普坦组与川芎生物碱高剂量组可升高da含量(p<0.05)；模型组大鼠血浆中cgrp含量明显升高，与对照组比较差异显著(p<0.01)，川芎生物碱高、中、低各剂量组大鼠血中cgrp含量明显降低，与模型组比较有显著性差异(p<0.01，p<0.05)；与对照组比较，模型组大鼠血浆内et-1含量差异虽无统计学意义，但降低趋势明显，且川芎生物碱各剂量组能升高其含量，其中高、中、低剂量与模型组比较有统计学意义(p<0.05)。如表1、表2和图1～6所示。

表1川芎总生物碱对硝酸甘油致偏头痛大鼠血浆中活性物质含量的影响

注：与对照组比较，^#p<0.05，^##p<0.01；与模型组比较，*p<0.05，**p<0.01。

表2川芎总生物碱对硝酸甘油致偏头痛大鼠血浆中活性物质含量的影响

注：与对照组比较，^#p<0.05，^##p<0.01；与模型组比较，*p<0.05，**p<0.01。

3.2对脑组织中活性物质含量的影响

与对照组比较，模型组大鼠脑组织中5-ht、5-hiaa、na浓度明显降低(p<0.01，p<0.05)。与模型组比较，川芎生物碱中、低、极低剂量组大鼠脑组织中5-ht含量明显升高(p＜0.01)，低剂量和极低剂量组大鼠脑组织中5-hiaa含量明显升高(p＜0.01)，极低剂量组大鼠脑组织中na含量明显升高(p＜0.05)。与对照组比较，模型组大鼠脑组织中cgrp含量明显升高、da含量明显降低(p＜0.05)。与模型组比较，川芎生物碱中剂量组大鼠脑组织中cgrp含量明显降低，da含量明显升高，均有显著性差异(p<0.05)；与对照组比较，模型组大鼠脑组织内et-1含量差异虽无统计学意义，但降低趋势明显。与模型组比较，川芎生物碱高、中、低各剂量组均能升高其含量，但无显著性意义(p>0.05)。详见表3、表4和图7～12所示。

表3川芎总生物碱对硝酸甘油致偏头痛大鼠脑组织中活性物质含量的影响

注：与对照组比较，^#p<0.05，^##p<0.01；与模型组比较，*p<0.05，**p<0.01。

表4川芎总生物碱对硝酸甘油致偏头痛大鼠脑组织中活性物质含量的影响

注：与对照组比较，^#p<0.05，^##p<0.01；与模型组比较，*p<0.05，**p<0.01。

由上述结果可知，川芎生物碱对硝酸甘油致偏头痛大鼠有治疗作用，其机制与调节模型大鼠血浆及脑组织内单胺类神经递质5-ht、5-hiaa、cgrp、na、da含量有关。

川芎总生物碱可通过升高硝酸甘油致偏头痛大鼠血浆和脑组织中的5-ht、5-hiaa、et、na、da含量、降低血浆和脑组织中cgrp水平，从而发挥治疗偏头痛的药效作用。

综上，本发明川芎总生物碱能升高头痛患者的血浆和脑组织中的5-ht、5-hiaa、et、na、da含量，降低血浆和脑组织中cgrp水平，能有效治疗头痛，临床应用前景良好。