一种pH和氧化还原双响应型纳米容器及其制备方法与流程

本发明涉及一种ph和氧化还原双响应型纳米容器及其制备方法，属于材料科学技术领域。

背景技术：

随着现代科学技术的飞速发展，纳米材料作为一类新兴的研究热点逐渐得到了科学界广泛的关注，由于其特点鲜明，出现了许多奇异崭新的物理化学性能，已显示出广阔的应用前景。而近些年关于纳米容器的研究更是吸引了许多科研工作者的兴趣。纳米容器，即在纳米或者亚微米尺度上形成具有空腔结构的聚合物微囊或微球，其中空结构能够容纳大量的客体分子或者大体积的客体分子，它是一种具有纳米尺度的能储存与释放所需物质的中空材料。正是这一概念的出现，许多新兴的课题及研究，越发地受到人们的关注。纳米容器的表面涂层，则是其中重要的研究方向之一，通过负载缓蚀剂实现可控释放，能够对材料表面进行长期有效的保护。介孔二氧化硅纳米颗粒具有密度小、包裹量大、表面易修饰及生物相容性好等优点，已经作为理想的纳米容器应用于生化领域的研究。随着超分子化学的日益发展，通过在二氧化硅纳米微球表面的修饰，以及纳米容器的自组装，就可以实现对负载在介孔中的分子进行可控释放，这就使其变成了智能纳米容器。stoddart教授在2004年提出超分子纳米阀门概念，他们在介孔硅材料的孔口处修饰轮烷、准轮烷或者索烃分子，形成了一类分子机器的超分子体系，实现了介孔纳米容器对客体分子的装载与刺激响应释放，而外界刺激主要包括有ph、温度、光、酶和氧化还原反应等。这一过程对生理条件下药物释放、高效纳米催化以及智能防腐涂层等领域有着重要意义。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种ph和氧化还原双响应型纳米容器及其制备方法，通过在二氧化硅表面的修饰，使其对吸附在纳米球介孔中的客体分子在ph和氧化还原刺激下均具有可控释放性能。

为了实现上述目的，本发明的技术方案是：

一种ph和氧化还原双响应型纳米容器，其分子结构如下：

如上式所示，将2,2’-二硫代双[乙胺]-n-丁氨基苯通过硅烷偶联剂修饰在二氧化硅纳米球的表面，将客体分子通过扩散作用使其负载在介孔二氧化硅的内部，在通过水溶性柱[5]芳烃与2,2’-二硫代双[乙胺]-n-丁氨基苯结合成主客体结构体系，从而对客体分子进行封装加盖。

一种ph和氧化还原双响应型纳米容器的制备方法，按照如下步骤进行：

步骤1：合成制备介孔二氧化硅纳米微球，即mcm-41；

步骤2：将介孔二氧化硅与硅烷偶联剂溶于无水甲苯，在n2保护下回流反应，得到表面氯修饰的介孔二氧化硅；

步骤3：制备2,2’-二硫代双[乙胺]-n-丁氨基苯：称取适量的苯胺，加入4-氯-1-丁醇，95℃下回流反应，生成4-苯胺基-1-丁醇；将4-苯胺基-1-丁醇溶于四氢呋喃中，并加入水，氢氧化钠，并在冰浴下加入对甲苯磺酰氯的四氢呋喃溶液，室温反应2h，得到将胱胺二盐酸盐与二羰基二叔丁酯在甲醇中反应1.5h，得到将与在乙腈中50℃回流反应，得到将在苯酚和47％氢溴酸的水溶液的体系下，70℃反应2h，脱去ts基团以及boc基团，得到目标产物；

步骤4：将步骤2得到的产物碾碎，干燥后，通n2保护，加入步骤3的产物，在无水乙腈中回流反应；

步骤5：将步骤4得到的产物碾碎，干燥后，超声分散在荧光染料的乙醇溶液中，室温下搅拌反应，而后离心，干燥；

步骤6：将步骤5得到的产物分散在含有荧光染料和大环分子水溶性柱[5]芳烃的缓冲液中，室温下搅拌反应，而后用缓冲液充分清洗，得到ph和氧化还原双响应型纳米容器。

步骤1中，制备mcm-41时，要充分用甲醇清洗，以彻底除去介孔剂。

步骤2中，选取的硅烷偶联剂为氯甲基三乙氧基硅烷，回流温度为80～100℃，回流时间为12～24h。

步骤3中，回流反应时间为5～12h。

步骤4中，回流时间为12～24h。

步骤5中，选取的荧光染料为罗丹明b，其溶度为50～80mg/ml。搅拌反应的时间为24～48h。

步骤6中，搅拌反应时间为24～48h。所用的缓冲液为ph＝7.4的由磷酸二氢钠和磷酸氢二钠配制而成的pbs缓冲液。荧光染料的缓冲液中，荧光染料的浓度为10～50mg/ml，大环分子柱[5]芳烃的浓度为10～50mg/ml。

本发明与现有技术相比，其优势在于：(1)具有高灵敏度，响应速度快；(2)具有ph和氧化还原两种响应方式，可调节性强；(3)载药量大，提高了可控释放的效果；(4)无毒无害，具有良好的生物相容性。

附图说明

图1为wp5与胱胺在中性下的等温量热滴定效果示意图。

图2为wp5与1-((4-丁氨基)苯基)胺在中性下的等温量热滴定效果示意图。

图3为wp5与胱胺在碱性下的等温量热滴定效果示意图。

图4为罗丹明在酸性下的释放曲线图。

图5为罗丹明在碱性下的释放曲线图。

图6为罗丹明在氧化还原电压刺激下的动力学曲线图。

图7为ph和氧化还原双响应型纳米容器效果示意图。

具体实施方式

下面结合附图及实施例对本发明做进一步说明

本发明的原理是：由于柱[5]芳烃容易通过静电作用以及π作用而形成络合作用，因此，我们将柱芳烃设计成纳米容器的“阀门”，并设计了主链上具有两个结合位点的客体分子2,2’-二硫代双[乙胺]-n-丁氨基苯，而柱芳烃与其由于络合作用而形成准轮烷结构，这时随着ph以及电压的刺激，使得柱芳烃可以在客体分子的两个结合位点上移动，从而实现纳米容器的“阀门”的开与关，以此控制吸附在纳米球内部的客体分子的释放。

主体大环分子wp5在功能客体分子链2,2’-二硫代双[乙胺]-n-丁氨基苯上有两个结合位点即胱胺(下面称第一识别位点)和1-((4-丁氨基)苯基)胺(下面称第二识别位点)。中性时，水溶性柱[5]芳烃(wp5)的端基以coo^-形式存在，仲胺nh被质子化形成nh2⁺，wp5与客体分子链中质子化的第一识别位点键合，此时阀门关闭，客体分子无法释放出来。

当缓冲溶液ph值的减小，溶液由中性转变为酸性，此时wp5的端基以-cooh的形式存在，不存在负电，不与任何结合位点结合，而脱落，从而介孔内贮存的金属缓蚀剂释放出来。

当缓冲溶液ph值的增加，溶液由中性转变为碱性，nh2⁺去质子化变为nh，主体分子(wp5)与客体分子链中的第一识别位点的离子-离子作用消失，键合能减小，此时，wp5与第二识别位点结合，纳米阀门打开，从而介孔内贮存的金属缓蚀剂释放出来。

我们通过等温量热滴定(itc)实验来检测在中性和碱性下wp5与客体链上的胱胺以及1-((4-丁氨基)苯基)胺两个识别位点的结合力。图1为ph＝7时，wp5与胱胺的滴定效果示意图，计算机拟合的ka1＝4.298×10⁵m^-1；图2为ph＝7时，wp5与1-((4-丁氨基)苯基)胺的滴定效果示意图，计算机拟合的ka2＝1.729×10⁵m^-1；图3为ph＝10时，wp5与胱胺的滴定效果示意图，计算机拟合的ka3＝2.676×10⁴m^-1。由此我们不难发现，由于ka1＞ka2，所以中性条件下，wp5与胱胺的结合能力大于与1-((4-丁氨基)苯基)胺的结合能力，因此，wp5更倾向于与胱胺相结合，从而堵住了介孔，阻止释放。而由于ka2＞ka3，所以在碱性条件下，wp5与1-((4-丁氨基)苯基)胺的结合能力明显竞争过其与胱胺的结合能力，因此，碱性下，wp5更倾向于与1-((4-丁氨基)苯基)胺识别位点结合，使得“阀门”打开，完成释放。其中，wp5&中性下胱胺的itc示意图，wp5浓度为2.0mm，胱胺浓度为0.2mm；wp5&中性下1-((4-丁氨基)苯基)胺的itc示意图，wp5浓度为2.0mm，1-((4-丁氨基)苯基)胺浓度为0.2mm；wp5&碱性下胱胺的itc示意图，wp5浓度为2.0mm，胱胺浓度为0.2mm。

本发明按照如下步骤进行二氧化硅纳米球的制备：

称取0.2g的naoh溶于2.5ml的去离子水中，配制成2m的naoh的水溶液。称取0.5g十六烷基三甲基溴化铵，加入到500ml三口烧瓶中，而后加入240ml去离子水，使其分散均匀，而后逐滴加入1.75ml新配制的2m的naoh水溶液，加热至80℃，活化30min，搅拌速度为500r/min。然后缓慢加入2.5ml硅酸四乙酯，反应2h。反应完成后，趁热过滤，并充分水洗。将滤饼加入到于50ml甲醇和3ml浓hcl中，超声15min使其充分分散，80℃下回流反应24h，离心(10000r/min，3min)分离收集固体，并再用甲醇洗涤6次，以便除尽ctab。最后将固体在80℃真空干燥，得到白色固体mcm-41。

下面结合具体实施例对本发明做进一步详细说明。

实施例1

1.客体分子的合成

向苯胺5.4ml，55mmol中加入4-氯-1-丁醇1.9g，18mmol，反应液在90℃反应5h。反应结束后，待其冷却，而后用50ml乙醚萃取，再用20ml氢氧化钠溶液1m清洗，最后用无水硫酸钠干燥。真空旋转蒸发除去溶剂，柱层析提纯，最终得到红褐色液体4-苯胺基-1-丁醇，80℃真空干燥得到最终产物。

将氢氧化钠0.3g，7.5mmol和4-苯胺基-1-丁醇0.6g，3.64mmol分散于10ml水中，此为a液，将对甲苯磺酰氯1g，5.5mmol溶于10ml四氢呋喃，此为b液。在冰浴条件下，将b液在20min内逐滴加入a液中，滴加完毕后，在室温下继续反应2h。反应结束后，混合液用二氯甲烷萃取，并用无水硫酸钠干燥。真空旋转蒸发除去溶剂，柱层析提纯硅胶，正己烷：乙酸乙酯＝4:1to1:1，得到白色固体，80℃真空干燥得到最终产物

将胱胺二盐酸盐3.38g分散于300ml甲醇中，此为a液，将二羰基二叔丁酯3.27g和三乙胺6.3ml溶于25ml甲醇中，此为b液，将b液在45min内逐滴加入到a液中，滴加完毕后，常温下继续搅拌反应60min。反应结束后，50℃真空旋转蒸发除去溶剂，向其中加入35ml磷酸二氢钠溶液1m，用45ml乙醚清洗三次，用氢氧化钠溶液1m调节溶液至碱性ph＝9，然后用45ml乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，60℃旋转蒸发除溶剂得到淡黄色液体，50℃真空干燥得到最终产物

将280mg，1.09mmol溶于5ml乙腈中，此为a液。将0.25g，0.029mmol溶于5ml乙腈中，此为b液，将b液缓慢逐滴加入a液中，滴加完毕后，50℃下反应18h。反应结束后，柱层析提纯硅胶，乙酸乙酯，得到淡黄色粘稠液体，50℃真空干燥得到最终产物

将236mg，0.42mmol溶于苯酚3.28g，35mmol中，并向其中逐滴加入3.28ml47％氢溴酸的水溶液，滴加完毕后，混合液在70℃油浴中搅拌反应2h。反应结束后，向混合液中加入65ml水，然后用200ml乙醚清洗，用氢氧化钠1m调节溶液的ph至11，再用30ml二氯甲烷萃取三次。合并有相机，分别用5％氢氧化钠溶液15ml和饱和氯化钠溶液15ml清洗，最后用无水硫酸钠干燥。真空旋转蒸发除去溶剂，得到黄色粘稠液体，真空干燥得到最终产物2,2’-二硫代双[乙胺]-n-丁氨基苯cys-nab。

2.二氧化硅纳米微球的表面改性

(a)将mcm-41200mg加入到20ml无水甲苯中，并超声15min使其充分分散，通n2以排尽瓶烧中的空气，并在n2流下，逐滴加入氯甲基三乙氧基硅烷200ul，0.961mmol，用油泵抽真空数次，待系统稳定后，将油浴加热至80℃，回流反应18h。待反应结束后，离心分离，得到白色固体，再分别用甲苯和甲醇各洗涤3次，最后在80℃真空烘箱中干燥过夜，得到白色固体，即mcm-cl。

(b)称取干燥过的mcm-cl100mg加入烧瓶中，并加入15ml无水乙腈，密封超声20min，使其充分分散，通n2排尽空气。将cys-nab溶于5ml无水乙腈中，并将其缓慢加入到烧瓶中，油泵抽真空数次，待体系稳定后，油浴50℃反应18h。待反应完成后，离心分离，得到固体，再分别用乙腈和甲醇各洗涤3次，最后在50℃真空烘箱中干燥过夜，得到mcm-cys-nab。

(c)称取250mg的罗丹明rhb溶于5ml乙醇中，配制成50mg/ml的rhb的乙醇溶液。称取50mg的mcm-cys-nab加入到乙醇溶液中，并超声分散，而后在室温下搅拌24h。结束后，离心收集固体，真空干燥过夜，得到吸附了rhb的mcm-cl。将其碾碎，并加入到5ml的ph＝7.4的pbs缓冲液(提前用na2hpo4和nah2po4以及去离子水配制，并用naoh和hcl调节ph至7.4)中，并继续加入50mgwp5，再补加50mgrhb客体分子，在室温下搅拌24h。结束后，离心收集固体，并用ph＝7.4的pbs缓冲液洗涤数次，最后在50℃真空干燥，得到吸附了rhb的mcm-cys-nab。罗丹明在酸性下、碱性下在的释放曲线如图4、5所示；氧化还原电压刺激下的动力学曲线如图6所示。

3.吸附分子的酸碱刺激释放

称取2mg的样品于透析袋中，测试时，向比色皿中加入对应的ph的pbs缓冲液，而后将装有样品的透析袋置于比色皿中(样品能够完全浸没在缓冲液中即可)，将比色皿置于紫外可见光光度仪中，选择动力学测试，检测波长设置为554nm，每过3s检测一次紫外吸光度，根据标准曲线，计算出对应的浓度。

4.吸附分子的氧化还原刺激释放

称取1mg样品固定在电解池的pt电极，然后将三电极体系置于10ml缓冲液(ph＝7.4)中，反复施加氧化还原电压来研究其释放效果，即对样品施加-2v电压30min，检测吸光度，而后施加+2v电压30min，检测其吸光度。如此反复至吸光度不再变化。

ph和氧化还原双响应型纳米容器效果如图7所示。

实施例2

1.客体分子的合成

向苯胺10.8ml，110mmol中加入4-氯-1-丁醇308g，36mmol，反应液在95℃反应6h。反应结束后，待其冷却，而后用100ml乙醚萃取，再用40ml氢氧化钠溶液1m清洗，最后用无水硫酸钠干燥。真空旋转蒸发除去溶剂，柱层析提纯)，最终得到红褐色液体4-苯胺基-1-丁醇，75℃真空干燥得到最终产物。

将氢氧化钠0.6g，15mmol和4-苯胺基-1-丁醇1.2g，7.28mmol分散于10ml水中，此为a液，将对甲苯磺酰氯2g，10.5mmol溶于10ml四氢呋喃，此为b液。在冰浴条件下，将b液在20min内逐滴加入a液中，滴加完毕后，在室温下继续反应2h。反应结束后，混合液用二氯甲烷萃取，并用无水硫酸钠干燥。真空旋转蒸发除去溶剂，柱层析提纯(硅胶，正己烷：乙酸乙酯＝4:1to1:1)，得到白色固体，80℃真空干燥得到最终产物

将胱胺二盐酸盐6.75g分散于300ml甲醇中，此为a液，将二羰基二叔丁酯6.54g和三乙胺12.6ml溶于45ml甲醇中，此为b液，将b液在90min内逐滴加入到a液中，滴加完毕后，常温下继续搅拌反应90min。反应结束后，50℃真空旋转蒸发除去溶剂，向其中加入75ml磷酸二氢钠溶液1m，用90ml乙醚清洗三次，用氢氧化钠溶液1m调节溶液至碱性(ph＝9)，然后用45ml乙酸乙酯萃取6次，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，60℃旋转蒸发除溶剂得到淡黄色液体，50℃真空干燥得到最终产物

将0.55g，2.18mmol溶于10ml乙腈中，此为a液。将0.5g，1.057mmol溶于10ml乙腈中，此为b液，将b液缓慢逐滴加入a液中，滴加完毕后，50℃下反应24h。反应结束后，柱层析提纯(硅胶，乙酸乙酯)，得到淡黄色粘稠液体，50℃真空干燥得到最终产物

将473mg，0.85mmol溶于苯酚6.57g，69.9mmol中，并向其中逐滴加入6.57ml47％氢溴酸的水溶液，滴加完毕后，混合液在85℃油浴中搅拌反应1h。反应结束后，向混合液中加入130ml水，然后用200ml乙醚清洗，用氢氧化钠1m调节溶液的ph至11，再用65ml二氯甲烷萃取三次。合并有相机，分别用5％氢氧化钠溶液30ml和饱和氯化钠溶液30ml清洗，最后用无水硫酸钠干燥。真空旋转蒸发除去溶剂，得到黄色粘稠液体，真空干燥得到最终产物2,2’-二硫代双[乙胺]-n-丁氨基苯(cys-nab)。

2.二氧化硅纳米微球的表面改性

(a)将mcm-41200mg加入到20ml无水甲苯中，并超声15min使其充分分散，通n2以排尽烧瓶中的空气，并在n2流下，逐滴加入氯甲基三乙氧基硅烷200ul，0.961mmol，用油泵抽真空数次，待系统稳定后，将油浴加热至90℃，回流反应24h。待反应结束后，离心分离，得到白色固体，再分别用甲苯和甲醇各洗涤3次，最后在80℃真空烘箱中干燥过夜，得到白色固体，即mcm-cl。

(b)称取干燥过的mcm-cl200mg加入烧瓶中，并加入30ml无水乙腈，密封超声20min，使其充分分散，通n2排尽空气。将cys-nab溶于10ml无水乙腈中，并将其缓慢加入到烧瓶中，油泵抽真空数次，待体系稳定后，油浴50℃反应24h。待反应完成后，离心分离，得到固体，再分别用乙腈和甲醇各洗涤3次，最后在50℃真空烘箱中干燥过夜，得到mcm-cys-nab。

(c)称取300mg的罗丹明(rhb)溶于5ml乙醇中，配制成60mg/ml的rhb的乙醇溶液。称取50mg的mcm-cys-nab加入到乙醇溶液中，并超声分散，而后在室温下搅拌36h。结束后，离心收集固体，真空干燥过夜，得到吸附了rhb的mcm-cl。将其碾碎，并加入到5ml的ph＝7.4的pbs缓冲液(提前用na2hpo4和nah2po4以及去离子水配制，并用naoh和hcl调节ph至7.4)中，并继续加入50mgwp5，再补加50mgrhb客体分子，在室温下搅拌36h。结束后，离心收集固体，并用ph＝7.4的pbs缓冲液洗涤数次，最后在50℃真空干燥，得到吸附了rhb的mcm-cys-nab。

3.吸附分子的酸碱刺激释放

称取2mg的样品于透析袋中，测试时，向比色皿中加入对应的ph的pbs缓冲液，而后将装有样品的透析袋置于比色皿中(样品能够完全浸没在缓冲液中即可)，将比色皿置于紫外可见光光度仪中，选择动力学测试，检测波长设置为554nm，每过2s检测一次紫外吸光度，根据标准曲线，计算出对应的浓度。

4.吸附分子的氧化还原刺激释放

称取1mg样品固定在电解池的pt电极，然后将三电极体系置于10ml缓冲液(ph＝7.4)中，反复施加氧化还原电压来研究其释放效果，即对样品施加-2v电压30min，检测吸光度，而后施加+2v电压30min，检测其吸光度。如此反复至吸光度不再变化。

实施例3

1.客体分子的合成

向苯胺16.2ml，165mmol中加入4-氯-1-丁醇5.7g，54mmol，反应液在95℃反应5h。反应结束后，待其冷却，而后用150ml乙醚萃取，再用60ml氢氧化钠溶液1m清洗，最后用无水硫酸钠干燥。真空旋转蒸发除去溶剂，柱层析提纯，最终得到红褐色液体4-苯胺基-1-丁醇，80℃真空干燥得到最终产物。

将氢氧化钠1.2g，30mmol和4-苯胺基-1-丁醇2.4g，14.56mmol分散于20ml水中，此为a液，将对甲苯磺酰氯4g，21mmol溶于20ml四氢呋喃，此为b液。在冰浴条件下，将b液在20min内逐滴加入a液中，滴加完毕后，在室温下继续反应3h。反应结束后，混合液用二氯甲烷萃取，并用无水硫酸钠干燥。真空旋转蒸发除去溶剂，柱层析提纯硅胶，正己烷：乙酸乙酯＝4:1to1:1，得到白色固体，80℃真空干燥得到最终产物

将胱胺二盐酸盐6.75g分散于300ml甲醇中，此为a液，将二羰基二叔丁酯6.54g和三乙胺12.6ml溶于45ml甲醇中，此为b液，将b液在90min内逐滴加入到a液中，滴加完毕后，常温下继续搅拌反应90min。反应结束后，50℃真空旋转蒸发除去溶剂，向其中加入75ml磷酸二氢钠溶液1m，用90ml乙醚清洗三次，用氢氧化钠溶液1m调节溶液至碱性ph＝9，然后用45ml乙酸乙酯萃取6次，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，60℃旋转蒸发除溶剂得到淡黄色液体，50℃真空干燥得到最终产物

将0.55mg，2.18mmol溶于10ml乙腈中，此为a液。将0.5g，1.057mmol溶于10ml乙腈中，此为b液，将b液缓慢逐滴加入a液中，滴加完毕后，50℃下反应24h。反应结束后，柱层析提纯硅胶，乙酸乙酯，得到淡黄色粘稠液体，50℃真空干燥得到最终产物

将710mg，1.28mmol溶于苯酚9.86g，104.9mmol中，并向其中逐滴加入9.86ml47％氢溴酸的水溶液，滴加完毕后，混合液在80℃油浴中搅拌反应1.5h。反应结束后，向混合液中加入195ml水，然后用300ml乙醚清洗，用氢氧化钠1m调节溶液的ph至11，再用97.5ml二氯甲烷萃取三次。合并有相机，分别用5％氢氧化钠溶液45ml和饱和氯化钠溶液45ml清洗，最后用无水硫酸钠干燥。真空旋转蒸发除去溶剂，得到黄色粘稠液体，真空干燥得到最终产物2,2’-二硫代双[乙胺]-n-丁氨基苯(cys-nab)。

2.二氧化硅纳米微球的表面改性

(a)将mcm-41200mg加入到20ml无水甲苯中，并超声15min使其充分分散，通n2以排尽烧瓶中的空气，并在n2流下，逐滴加入氯甲基三乙氧基硅烷200ul，0.961mmol，用油泵抽真空数次，待系统稳定后，将油浴加热至90℃，回流反应30h。待反应结束后，离心分离，得到白色固体，再分别用甲苯和甲醇各洗涤3次，最后在80℃真空烘箱中干燥过夜，得到白色固体，即mcm-cl。

(b)称取干燥过的mcm-cl150mg加入烧瓶中，并加入22ml无水乙腈，密封超声20min，使其充分分散，通n2排尽空气。将cys-nab溶于8ml无水乙腈中，并将其缓慢加入到烧瓶中，油泵抽真空数次，待体系稳定后，油浴50℃反应30h。待反应完成后，离心分离，得到固体，再分别用乙腈和甲醇各洗涤3次，最后在50℃真空烘箱中干燥过夜，得到mcm-cys-nab。

(c)称取400mg的罗丹明(rhb)溶于5ml乙醇中，配制成80mg/ml的rhb的乙醇溶液。称取50mg的mcm-cys-nab加入到乙醇溶液中，并超声分散，而后在室温下搅拌48h。结束后，离心收集固体，真空干燥过夜，得到吸附了rhb的mcm-cl。将其碾碎，并加入到5ml的ph＝7.4的pbs缓冲液(提前用na2hpo4和nah2po4以及去离子水配制，并用naoh和hcl调节ph至7.4)中，并继续加入50mgwp5，再补加50mgrhb客体分子，在室温下搅拌48h。结束后，离心收集固体，并用ph＝7.4的pbs缓冲液洗涤数次，最后在50℃真空干燥，得到吸附了rhb的mcm-cys-nab。

3.吸附分子的酸碱刺激释放

称取2mg的样品于透析袋中，测试时，向比色皿中加入对应的ph的pbs缓冲液，而后将装有样品的透析袋置于比色皿中(样品能够完全浸没在缓冲液中即可)，将比色皿置于紫外可见光光度仪中，选择动力学测试，检测波长设置为554nm，每过3s检测一次紫外吸光度，根据标准曲线，计算出对应的浓度。

4.吸附分子的氧化还原刺激释放

称取1mg样品固定在电解池的pt电极，然后将三电极体系置于10ml缓冲液(ph＝7.4)中，反复施加氧化还原电压来研究其释放效果，即对样品施加-2v电压30min，检测吸光度，而后施加+2v电压30min，检测其吸光度。如此反复至吸光度不再变化。