本发明属于医学领域，具体涉及一种芳基硫酸酯酶和葡萄糖苷醛酸酶抑制剂及其制备方法和应用。
背景技术：
：芳基硫酸酯酶(arylsulfatase)和葡萄糖苷醛酸酶(β-glucuronidase)广泛存在于人类和动物的各个器官，它们的重要作用是将天然激素，例如天然雌激素硫酸酯结合体或者葡萄糖苷醛酸结合体转化为对应的天然雌激素，在动物体内，芳基硫酸酯酶和葡萄糖苷醛酸酶与人体的正常生理功能密切相关。譬如，在乳腺癌，直肠癌，以及胰腺癌等患者的尿液和血液中，含有比正常人更高活性的芳基硫酸酯酶和葡萄糖苷醛酸酶。因此已开发了不少抑制芳基硫酸酯酶和葡萄糖苷醛酸的药物。目前stx64和d-sacchuricacid,1,4-lactone是两种常用的抑制剂，分别用来抑制芳基硫酸酯酶和葡萄糖苷醛酸酶，但抑制剂存在价格贵和半抑制浓度偏高等不足。技术实现要素：针对以上不足之处，本发明的目的在于提供了一种芳基硫酸酯酶和葡萄糖苷醛酸酶抑制剂。本发明的另一目的在于提供上述芳基硫酸酯酶和葡萄糖苷醛酸酶抑制剂的制备方法。本发明的再一目的在于提供上述芳基硫酸酯酶和葡萄糖苷醛酸酶抑制剂的应用。本发明的目的通过以下技术方案实现：一种芳基硫酸酯酶和葡萄糖苷醛酸酶抑制剂的制备方法，包括如下步骤：将no或能够产生no的化学物质加入到溶剂中，得到溶液，即制备得到所述芳基硫酸酯酶和葡萄糖苷醛酸酶抑制剂。优选的，所述溶液中no的浓度为25μg/l～4mg/l，更有选的为2mg～4mg/l。优选的，所述能够产生no的化学反应物质为铜和稀硝酸、亚硝酸钠和稀硫酸中的一种。优选的，所述稀硝酸的浓度为5μmol/l-0.1mol/l。优选的，所述稀硫酸的浓度为5μmol/l-0.1mol/l。优选的，所述能够产生no的化学物质为在人或动物体内能够产生no的化学物质。优选的，所述在人或动物体内能够产生no的化学物质为硝酸甘油、硝酸异山梨酯、戊四硝酸酯和硝苯地平中的一种或两种以上。优选的，所述溶剂为生理盐水和tris-hcl缓冲液中的一种或两种。优选的，所述tris-hcl缓冲液的ph为5～6，更有选的为5.8。上述一种芳基硫酸酯酶和葡萄糖苷醛酸酶抑制剂的制备方法制备得到的芳基硫酸酯酶和葡萄糖苷醛酸酶抑制剂。上述芳基硫酸酯酶和葡萄糖苷醛酸酶抑制剂在制备癌症药物中的应用。与现有技术相比，本发明具有以下优点和有益效果：(1)与常规的抑制剂如stx64和d-sacchuricacid,1,4-lactone几毫克就需要上千元相比，本发明的最大优点是经济。(2)与常规的抑制剂如stx64和d-sacchuricacid,1,4-lactone的50％抑制浓度需要几十毫克相比，本发明中的no抑制浓度仅需260μg/l。(3)本发明具有操作简单，效果好，价格低廉等优点，在医学癌症治疗领域具有广泛的应用前景。具体实施方式下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。实施例所述芳基硫酸酯酶购买于sigmaaldrich(型号ec3.1.6.1，来自蜗牛提取液)；所述葡萄糖苷醛酸酶购买于sigmaaldrich(型号ec3.2.1.31，来自蜗牛提取液)；对硝基苯酚硫酸结合体(纯度>98％)购买于sigmaaldrich公司；所述对硝基苯酚葡萄糖苷醛酸结合体(纯度>98％)购买于sigmaaldrich公司。实施例1取两份3ml的tris-hcl缓冲液(ph＝5.8)于两个玻璃试管中，记作试管1和试管2。对试管1和试管2进行如下操作：试管1：试管1中加入0.212u的芳基硫酸酯酶，然后通入no，使得tris-hcl缓冲液中no的浓度为250μg/l，再按800μmol/l的标准加入对硝基苯酚硫酸结合体，将玻璃试管放置于37℃水浴锅中反应1小时，然后用加入2ml0.5mol/l的氢氧化钠终止反应，用标准方法(参考tabatabaiandbremner，soilsciencesocietyofamericajournal,1970,34:225-229)测定芳基硫酸酯酶的活性。试管2：试管2中加入0.045u的葡萄糖苷醛酸酶，然后通入no，使得tris-hcl缓冲液中no的浓度为250μg/l，再按800μmol/l的标准加入对硝基苯酚葡萄糖苷醛酸结合体，将玻璃试管放置于37℃水浴锅中反应1小时，然后用2ml0.5mol/l的氢氧化钠终止反应，用标准方法(参考tabatabaiandbremner，soilsciencesocietyofamericajournal,1970,34:225-229)测定葡萄糖苷醛酸酶的活性。实施例2取两份3ml的tris-hcl缓冲液(ph＝5.8)于两个玻璃试管中，记作试管1和试管2。对试管1和试管2进行如下操作：试管1：试管1中加入0.212u的芳基硫酸酯酶，然后通入no，使得tris-hcl缓冲液中no的浓度为250μg/l，再按800μmol/l的标准加入对硝基苯酚硫酸结合体，将玻璃试管放置于37℃水浴锅中反应1小时，然后用2ml0.5mol/l的氢氧化钠终止反应，用标准方法(参考tabatabaiandbremner，soilsciencesocietyofamericajournal,1970,34:225-229)测定芳基硫酸酯酶的活性。试管2：试管2中加入0.045u的葡萄糖苷醛酸酶，然后通入no，使得tris-hcl缓冲液中no的浓度为250μg/l，再按800μmol/l的标准加入对硝基苯酚葡萄糖苷醛酸结合体，将玻璃试管放置于37℃水浴锅中反应1小时，然后用然后用2ml0.5mol/l的氢氧化钠终止反应，用标准方法(参考tabatabaiandbremner，soilsciencesocietyofamericajournal,1970,34:225-229)测定葡萄糖苷醛酸酶的活性。实施例3取两份3ml的tris-hcl缓冲液(ph＝5.8)于两个玻璃试管中，记作试管1和试管2。对试管1和试管2进行如下操作：试管1：试管1中加入0.212u的芳基硫酸酯酶，然后通入no，使得tris-hcl缓冲液中no的浓度为500μg/l，再按800μmol/l的标准加入对硝基苯酚硫酸结合体，将玻璃试管放置于37℃水浴锅中反应1小时，然后用2ml0.5mol/l的氢氧化钠终止反应，用标准方法(参考tabatabaiandbremner，soilsciencesocietyofamericajournal,1970,34:225-229)测定芳基硫酸酯酶的活性。试管2：试管2中加入0.045u的葡萄糖苷醛酸酶，然后通入no，使得tris-hcl缓冲液中no的浓度为500μg/l，再按800μmol/l的标准加入对硝基苯酚葡萄糖苷醛酸结合体，将玻璃试管放置于37℃水浴锅中反应1小时，然后用2ml0.5mol/l的氢氧化钠终止反应，用标准方法(参考tabatabaiandbremner，soilsciencesocietyofamericajournal,1970,34:225-229)测定葡萄糖苷醛酸酶的活性。实施例4取两份3ml的tris-hcl缓冲液(ph＝5.8)于两个玻璃试管中，记作试管1和试管2。对试管1和试管2进行如下操作：试管1：试管1中加入0.212u的芳基硫酸酯酶，然后通入no，使得tris-hcl缓冲液中no的浓度为1000μg/l，再按800μmol/l的标准加入对硝基苯酚硫酸结合体，将玻璃试管放置于37℃水浴锅中反应1小时，然后用2ml0.5mol/l的氢氧化钠终止反应，用标准方法(参考tabatabaiandbremner，soilsciencesocietyofamericajournal,1970,34:225-229)测定芳基硫酸酯酶的活性。试管2：试管2中加入0.045u的葡萄糖苷醛酸酶，然后通入no，使得tris-hcl缓冲液中no的浓度为1000μg/l，再按800μmol/l的标准加入对硝基苯酚葡萄糖苷醛酸结合体，将玻璃试管放置于37℃水浴锅中反应1小时，然后用2ml0.5mol/l的氢氧化钠终止反应，用标准方法(参考tabatabaiandbremner，soilsciencesocietyofamericajournal,1970,34:225-229)测定葡萄糖苷醛酸酶的活性。实施例5取两份3ml的tris-hcl缓冲液(ph＝5.8)于两个玻璃试管中，记作试管1和试管2。对试管1和试管2进行如下操作：试管1：试管1中加入0.212u的芳基硫酸酯酶，然后通入no，使得tris-hcl缓冲液中no的浓度为2000μg/l，再按800μmol/l的标准加入对硝基苯酚硫酸结合体，将玻璃试管放置于37℃水浴锅中反应1小时，然后用2ml0.5mol/l的氢氧化钠终止反应，用标准方法(参考tabatabaiandbremner，soilsciencesocietyofamericajournal,1970,34:225-229)测定芳基硫酸酯酶的活性。试管2：试管2中加入0.045u的葡萄糖苷醛酸酶，然后通入no，使得tris-hcl缓冲液中no的浓度为2000μg/l，再按800μmol/l的标准加入对硝基苯酚葡萄糖苷醛酸结合体，将玻璃试管放置于37℃水浴锅中反应1小时，然后用2ml0.5mol/l的氢氧化钠终止反应，用标准方法(参考tabatabaiandbremner，soilsciencesocietyofamericajournal,1970,34:225-229)测定葡萄糖苷醛酸酶的活性。实施例6取两份3ml的tris-hcl缓冲液(ph＝5.8)于两个玻璃试管中，记作试管1和试管2。对试管1和试管2进行如下操作：试管1：试管1中加入0.212u的芳基硫酸酯酶，然后通入no，使得tris-hcl缓冲液中no的浓度为4000μg/l，再按800μmol/l的标准加入对硝基苯酚硫酸结合体，将玻璃试管放置于37℃水浴锅中反应1小时，然后用2ml0.5mol/l的氢氧化钠终止反应，用标准方法(参考tabatabaiandbremner，soilsciencesocietyofamericajournal,1970,34:225-229)测定芳基硫酸酯酶的活性。试管2：试管2中加入0.045u的葡萄糖苷醛酸酶，然后通入no，使得tris-hcl缓冲液中no的浓度为4000μg/l，再按800μmol/l的标准加入对硝基苯酚葡萄糖苷醛酸结合体，将玻璃试管放置于37℃水浴锅中反应1小时，然后用2ml0.5mol/l的氢氧化钠终止反应，用标准方法(参考tabatabaiandbremner，soilsciencesocietyofamericajournal,1970,34:225-229)测定葡萄糖苷醛酸酶的活性。对比例取两份3ml的tris-hcl缓冲液(ph＝5.8)于两个玻璃试管中，记作试管1和试管2。对试管1和试管2进行如下操作：试管1：试管1中加入0.212u的芳基硫酸酯酶，再按800μmol/l的标准加入对硝基苯酚硫酸结合体，将玻璃试管放置于37℃水浴锅中反应1小时，然后用2ml0.5mol/l的氢氧化钠终止反应，用标准方法(参考tabatabaiandbremner，soilsciencesocietyofamericajournal,1970,34:225-229)测定芳基硫酸酯酶的活性。试管2：试管2中加入0.045u的葡萄糖苷醛酸酶，再按800μmol/l的标准加入对硝基苯酚葡萄糖苷醛酸结合体，将玻璃试管放置于37℃水浴锅中反应1小时，然后用2ml0.5mol/l的氢氧化钠终止反应，用标准方法(参考tabatabaiandbremner，soilsciencesocietyofamericajournal,1970,34:225-229)测定葡萄糖苷醛酸酶的活性。实施例1～6和对比例的测试结果如表1所示。表1测试结果一览表no浓度(μg/l)芳基硫酸酯酶活性(u)抑制率(％)葡萄糖苷醛酸酶活性(u)抑制率(％)00.21200.0450250.19010.50.0426.72500.11247.10.02545.25000.00299.20.00785.310000.0001000.00491.720000.0001000.00010040000.0001000.000100*1u定义为每小时产生1μmol的对硝基苯酚由表1可知，当no浓度为0μg/l时，即当为对比例时，其对芳基硫酸酯酶和葡萄糖苷醛酸酶没有抑制作用。与此同时，随着no浓度的增加，其对芳基硫酸酯酶和葡萄糖苷醛酸酶的抑制作用也越来强。将本发明实施例中的tris-hcl缓冲液(ph＝5.8)换为生理盐水(ph＝5.8)，其同样对芳基硫酸酯酶和葡萄糖苷醛酸酶具有良好的抑制作用。不受上述实施例的限制，其它的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。当前第1页12